专利名称：普拉克索作为神经保护剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明领域本发明涉及普拉克索(pramipexole)或2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑，或其(+)-或(-)-对映体，及其可药用盐作为神经保护剂的用途。
本发明背景大量神经系统疾病引起神经性损伤。可导致神经损伤的疾病包括原发性神经变性疾病；亨廷顿舞蹈病；中风和其它缺氧或局部缺血性疾病；神经外伤；代谢引起的神经性损伤；脑病发作引起的后遗症；出血性中风；继发性神经变性病(代谢性或毒性疾病)；帕金森氏病；阿尔茨海默病，阿尔茨海默型老年痴呆(SDAT)；与年龄有关的识别性机能障碍；或血管性痴呆，多梗塞性痴呆，Lowy body痴呆，或神经变性性痴呆。
普拉克索是多巴胺-D3/D2激动剂，其合成描述于欧洲专利186087及其相应部分，美国专利4,886,812中。已知，它主要用于治疗精神分裂症和帕金森氏病。从德国专利申请DE3843227中已知，Pramipexole降低催乳激素的血浆水平。该欧洲专利申请中也公开了Pramipexole用来治疗药物依赖的用途。此外，从德国专利申请DE3933738中已知，Pramipexole可用于降低甲状腺刺激激素(TSH)的异常高水平。美国专利5,112,842公开了透皮给予本发明化合物和包含这些活性化合物的透皮系统。WO专利申请PCT/EP 93/03389中描述了普拉克索作为抗抑郁剂的用途。
到目前为止，还没有可通过商业渠道购买到的具有明显治疗中风功效的药物。
意外地发现，普拉克索及其(+)-对映体也具有神经保护作用。
资料公开据报道，与众多受体包括多巴胺受体结合的血管扩张剂-吡贝地尔在球脑局部缺血的沙土鼠模型中，具有对功能和生化参数的作用。例如，见Society for Neuroscience Abstracts，19673(1993)；id.，at1645。
欧纳(Lisuride)与几种不同的受体包括多巴胺D2和5-HT1a受体结合。据报道，在脑梗塞性鼠模型中，当在发病前给药时，欧纳减轻脑水肿并延长存活时间。Miya Zawa，等人Nippon-Yakurigaku-Zasshi98(6)449-561，(1991)。
本发明摘要本发明主要提供预防患神经性损伤或对神经性损伤敏感的病人神经损伤的方法，它包括给予有效量2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑，或其(+)-或(-)-对映体，及其可药用盐，特别是有效量的普拉克索，即2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑(-)-对映体的二盐酸盐或有效量的2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑(+)-对映体的二盐酸盐。
对于一般熟练的神经病医生或类似的医生来说，可引起神经损伤的疾病是公知的并且包括原发性神经变性疾病；亨廷顿舞蹈病；中风和其它缺氧或局部缺血性疾病；神经外伤；代谢引起的神经性损伤；脑病发作引起的后遗症；出血性中风；继发性神经变性病(代谢性或毒性疾病)；帕金森氏病；阿尔茨海默病，其它记忆性疾病；或血管性痴呆，多梗塞性痴呆，Lowy body痴呆，或神经变性性痴呆。
本发明优选的普拉克索适应症为帕金森氏病，该病的特点由进行性变性的nigrostriatal多巴胺神经元来确定。在此意义上说，名词“帕金森氏病”也包括名词“帕金森氏症”。除了普拉克索的治标作用(即，代替损失的多巴胺的神经传导功能)外，该化合物也延缓存活多巴胺神经元的变性并因此延缓疾病的进程。
本发明化合物的预防性用途包括早期或帕金森氏病症状出现前期的单一治疗和局部缺血引起的神经变性性疾病的预防。
普拉克索的合成，制备和给予描述于美国专利4,843,086；4,886,812；和5,112,842；本文引入供参考。
可给予2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑，特别是(-)-对映体，及其可药用盐来预防神经性损伤。常规盖仑派医学制剂的形式基本上由惰性药物载体和有效量的活性物质组成；例如，普通的或包衣的片剂，胶囊剂，锭剂，粉剂，溶液剂，悬浮液，乳剂，糖浆剂，栓剂等等。
在培养基中表明，L-多巴对小脑颗粒细胞具有毒性。普拉克索及(+)对映体阻断L-多巴的毒性。二者的EC50在0.3-1uM之间并且10uM提供生存力的测定，它对应于未暴露在L-多巴中的对照细胞。保护机理没有显示出包含产生受体激活，(+)对映体在单胺受体结合测定中活性是低的。2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑，其(+)和(-)对映体和其与可药用酸加成的盐，特别是普拉克索及其(+)对映体作为已知由L-多巴培养产生的反应性氧的抗氧剂而起作用，这种可能性是存在的。
有效剂量范围为0.01-2.0mg/kg。更优选的口服剂量范围为1-2mg/kg。优选的神经保护总剂量为口服0.5-20mg/kg/天。优选的人的总剂量为0.1-6.0mg/天，分2或3次使用。除了口服或静脉内途径之外，普拉克索可透皮给药。
优选实施方案的描述通过下文实施例使本发明更清楚。实施例1我们通过组织学方法检查沙土鼠28天多巴胺能nigrostriatal(NS)束的退行性变性，该沙土鼠通过双侧颈动脉闭合而导致10分钟的前脑局部缺血。在这段时间内，对照动物在致密区有39％的NS细胞体损失(通过tyroxine羟化酶免疫细胞化学判断)。局部缺血后每日口服普拉克索(损伤后1小时开始每日两次口服1mg/kg)在局部缺血后28天NS多巴胺神经元损失减少为36％(与用赋形剂治疗的相比，D＜0.01)。实施例2我们成功地重复了实施例1的发现；即，普拉克索能够保护双侧颈动脉闭合而导致10分钟的前脑局部缺血并且局部缺血后28天仍然存活的沙土鼠模型中的多巴胺神经元。在局部缺血后60分钟以1mg/kgPO起始剂量给予普拉克索并且在第一天结束后再次给药，然后，在接下来的26天，每天给药两次。每天两次，每次0.3mg/kg产生阈效应(与赋形剂相比，nigrostriatal多巴胺神经元增加14％)。每天两次，每次1mg/kg，在局部缺血后28天，多巴胺神经元存活得到38％的明显改善(与赋形剂治疗相比，p＜0.0001)。该作用表明对多巴胺神经元是特异的，因为在海马CA1区中，局部缺血后非多巴胺能神经元的损失不受明显影响。实施例3小脑粒细胞的第一代培养物如上所述，用8天大小的Sprague Dawley鼠(Charles River，Portage，MI)来制备小脑粒细胞的第一代培养物(1)。在6孔，35mm培养皿(Nunc，Denmark)中，以2ml/孔，1×106个细胞/ml的密度使神经元生长8-9天。通过制板后19小时，以10uM的最终浓度加入阿拉伯呋喃糖胞苷一磷酸盐来抑制神经胶质细胞的生长。通过该方法产生的培养物已定性并显示含有超过90％的粒细胞(2)。细胞毒性模型细胞在体外8天后(8DIV)开始试验。用2ml不含血清的生长介质(serum free growth medium)来洗涤细胞。制备100×PPX储备液和(+)对映体的无血清生长介质浓溶液。通过每孔细胞生长介质液中加入20ul来将浓溶液分配到细胞中。药物的最终浓度范围为1nM-10uM。5分钟后，将20ul在无血清生长介质中的L-多巴10×储备液加到各个孔中，使得最终浓度为100uM。在上述条件下，将细胞培养24小时。然后将用于成活率测定的细胞洗涤两次并在复方氯化钠糖液中，用1uCi/ml的α-(甲基)-14C)氨基异丁酸(New England Nuclear)脉冲1小时。细胞溶解，然后用0.5％Triton X-100冲洗。然后，将溶解的细胞在闪烁计数器上计数放射性。以每一点上的三次平均值±S.D.来表示数据。
表中的结果表明，普拉克索对于L-多巴引起的毒性具有神经保护作用(64.8％)。10uM的普拉克索时，用L-多巴处理的细胞与对照没有区别。表明普拉克索轻微但明显地降低小脑粒细胞中cAMP水平(3)。这提示在神经保护机制中可能涉及多巴胺受体(D2族)。为了检验这种假设，在普拉克索的平行试验中，试验(+)对映体。已表明在涉及肾上腺素能和血清素激活受体的一组结合测定中，(+)对映体是非活性的，并且在多巴胺能受体中是低活性的。该试验结果表明，作为本发明神经保护剂，(+)对映体的能力和有效性与普拉克索是相同的。
在L-多巴胺介导的小脑粒细胞毒性中，普拉克索的神经保护作用未显示涉及多巴胺受体的激活。
尽管显示与单胺受体小的结合能力，但普拉克索的(+)对映体具有作为神经保护剂的实用性。
普拉克索及其(+)对映体存在有作为L-多巴毒性的抗氧剂的可能性，已知L-多巴毒性中涉及活性氧的产生。
表1100uML-多巴的毒性(64.8％)普拉克索和(+)对映体的作用剂量(nM) 普拉克索(对照的％(+)对映体(对照*) 的％*)0 35.2+/-8.5 35.2+/-8.51 30.0+/-6.5 51.3+/-5.810 39.2+/-9.4 57.8+/-4.9100 64.8+/-4.7 58.3+/-10.3300 76.2+/-7.3 81.0+/-18.3100065.5+/-14.8 86.9+/-7.0300084.9+/-0.6 95.2+/-2.510000 90.0+/-11.5 99.8+/-8.9*将对照定义为与细胞相关的放射活性，该细胞被暴露于赋形剂缓冲液中而不是100um的L-多巴。对照值等于三次计数的129547CPM的平均值。
权利要求
1.预防抑制患神经损伤或对神经损伤敏感的病人神经损伤的方法，它包括给予有效量的化合物，2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑及其可药用酸加成盐。
2.权利要求1的方法，其中疾病选自帕金森氏病，原发性神经变性疾病，亨廷顿舞蹈病，中风和其它缺氧或局部缺血性疾病，神经外伤，代谢引起的神经性损伤，脑病发作引起的后遗症，出血性中风，继发性神经变性病(代谢性或毒性疾病)，阿尔茨海默病，其它记忆障碍性疾病，或血管性痴呆，多梗塞性痴呆，Lowy body痴呆，或神经变性性痴呆。
3.权利要求2的方法，其中疾病为帕金森氏病。
4.权利要求3的方法，其中化合物的总剂量大约为0.1-6mg/天。
5.权利要求1-4的方法，其中化合物为(+)对映体的形式。
6.权利要求1-4的方法，其中化合物为(-)对映体的形式。
7.权利要求1-6的方法，其中化合物为二盐酸盐。
8.选自2-氨基-6-正丙基氨基-4，5，6，7-四氢苯并-噻唑及其可药用酸加成盐的化合物用来制备抑制神经损伤或神经损伤进展的药物的用途。
9.权利要求8的用途，其中神经损伤源于帕金森氏病，原发性神经变性疾病，亨廷顿舞蹈病，中风和其它缺氧或局部缺血性疾病，神经外伤，代谢引起的神经性损伤，脑病发作引起的后遗症，出血性中风，继发性神经变性病(代谢性或毒性疾病)，阿尔茨海默病，其它记忆障碍性疾病，或血管性痴呆，多梗塞性痴呆，Lowy body痴呆，或神经变性性痴呆。
10.权利要求8的用途，其中神经损伤源于帕金森氏病。
11.权利要求8-10的用途，其中剂量为0.1-6mg/天。
12.权利要求8-11的用途，其中化合物为(+)对映体的形式。
13.权利要求8-12的用途，其中化合物为(-)对映体的形式。
14.权利要求8-13的用途，其中化合物为二盐酸盐。
全文摘要
本发明涉及普拉克索作为神经保护剂的用途。
文档编号C07D277/82GK1169677SQ95196769
公开日1998年1月7日 申请日期1995年12月12日 优先权日1994年12月15日
发明者E·D·哈尔, P·F·冯沃特兰德, F·A·罗德 申请人:法玛西雅厄普约翰美国公司, 波林格英格尔海姆两合公司