专利名称：一种聚谷氨酸提取新方法
技术领域：
本发明属于聚谷氨酸生产技术领域，涉及一种聚谷氨酸提取新方法。
背景技术：
Y—聚谷氨酸(Y-PGA)是由多种杆菌产生的一种胞外多肽，它是 某些微生物荚膜的主要组分，是一种水溶性可生物降解物质，由D-型或L-型谷 氨酸通过Y酰胺键连接而成。20世纪90年代日本、美国等一些发达国家对它制 备和应用的研究十分活跃，开展了利用液体深层发酵生产Y-PGA的研究。曰本 的Y-PGA研究开发位于世界前列，味之素株式会社已成功地开发了 y-PGA的生 物生产方法，产品正逐步应用于农业、化工、医药领域，其它一些发达国家对 它制备和应用的研究也十分活跃。目前，通过微生物发酵得到高粘度的Y-PGA 发酵液，通常采用有机溶剂沉淀法、化学沉淀法或膜分离沉淀法提取Y-PGA， 但现有技术存在提取工艺复杂、生产成本高的技术问题
发明内容
本发明的目的是提供一种提取工艺简单、生产成本低的聚谷氨 酸提取新方法'
本发明按下述工艺步骤操作 (1)检测发酵液中聚谷氨酸含量、PH、菌体含量；
(2 )开搅拌用ly。-20y。的碱液调料液pH至6. 0-8. 0,开蒸汽升温使料液温度 保持在3(TC-5(TC;
(3) 根据发酵液菌体含量的重量比添加O. 05%-10%的溶菌酶、蛋白酶；
(4) 开搅拌保温作用5-7小时，使酶作用彻底；
(5) 搅拌缓慢流加60-90度的乙醇，在乙醇流加量为发酵液一倍体积时，用l-20y。的碱液调料液pH至8. 0-10. 0;
(6) 继续缓慢流加60-90度的乙醇提取，制得乳白色悬浊液并出现灰色或 灰黄色沉淀，停止流加乙醇；
(7) 抽取胶体悬浊液至离心机中，分离沉淀；沉淀烘干制做工业级聚谷氨
酸；
(8) 分离后的乳浊液转至提取罐中；
(9) 开搅拌慢慢加入适量食品级食盐，待絮凝完全，停搅拌使胶体沉淀；
(10) 待聚谷氨酸絮凝完全，乙醇变清，停止加入食盐；
(11) 停搅拌使胶体沉淀；
(12) 完全转移上部的乙醇，然后加入发酵液体积比为l: 0.8-1.2的清水；
(13) 开搅拌重新溶解胶体，并用l-15^稀酸调pH至2. 0-5.0;
(14) 调酸后的胶体溶液用超滤膜过滤透析浓缩，去除色素、盐类等小分 子杂质；
(15 )超滤浓缩液用ly。-20y。的碱液调pH至6. 0-8. 0，缓慢加入90-95度的乙
醇提取胶体，提取完全；
(16) 停搅拌静置l-5小时，转移上部乙醇；
(17) 开搅拌缓慢加入适量90-95度的乙醇，用1°/ -15%稀盐酸或碱液缓慢调 pH至1.0-3. 0或5. 0-7. 5，浸泡胶体2小时；
(18) 转至离心机，进行固液分离，固体胶体经真空低温干燥或冷冻干燥 得到钠型或氢型Y-PGA。
本发明Y—谷氨酸提取新工艺，有效去除料液杂质，提升产品质量，具有 以下突出优点1、 发酵液添加溶菌酶、蛋白酶去除菌体分解蛋白纯化了发酵液；
2、 发酵液酶解除渣复水后调酸去超滤透析浓缩，除去色素、盐类、其它水 解氨基酸等小分子杂质，并有效节省蒸汽、乙醇用量；
3、 添加低分子量钠盐配合乙醇提取胶体，节省乙醇用量；
4、 冷冻干燥或真空干燥，保证了产品质量；
具体实施例方式
实施例1以罐体容积IOOL发酵罐为例，釆用本发明方法提取Y-PGA,工 艺步骤如下
(1 )发酵液体积50L，测得y -pga含量4. 6g/100ml含菌体量1. 37g/100ml, pH6. 65;
(2 )开搅拌用10%的氢氧化钠碱液调料液pH至6. 8,开蒸汽升温使料液温 度保持在4(TC;
(3) 根据发酵液菌体含量添加60g的溶菌酶、蛋白酶；
(4) 开搅拌保温作用6小时，使酶作用彻底；
(5) 搅拌缓慢流加80度的乙醇，在乙醇流加量为发酵液一倍体积时用10% 的氢氧化钠溶液调料液pH至8. 0;
(6) 继续缓慢流加80度的乙醇提取，制的乳白色悬浊液并出现灰色或灰
黄色胶渣，停止流加乙醇；
(7) 抽取胶体悬浊液至离心机中，分离胶渣；胶渣去烘干制造工业级聚谷
氨酸；
(8) 分离后的乳浊液转至提取罐中；
(9) 开搅拌慢慢加入适量食品级食盐，絮凝聚谷氨酸；(10) 待聚谷氨酸絮凝完全，乙醇变清，停止加入食盐；
(11) 停搅拌使胶体沉淀；
(12) 完全转移上部的乙醇，然后加入60L清水；
(13) 开搅拌重新溶解胶体；并用10y。稀酸调pH至3. 0;
(14) 调酸后的胶体溶液用超滤膜过滤透析浓缩，去除色素、盐类等小分 子杂质，浓缩体积为45L;
(15 )超滤浓缩液用10%的碱液调料液pH至6. 0缓慢加入90度的乙醇提取
胶体，提取完全；
(16) 停搅拌静置l小时，转移上部乙醇；
(17) 开搅拌缓慢加入适量95度的乙醇，用1(T/。稀碱液缓慢调pH至6. 0， 浸泡胶体2小时，充分吸收胶体内部多余的水分，胶体内外pH—致；
(18) 转至离心机进行固液分离，固体胶体经真空低温干燥或冷冻干燥 1.8Kg钠型Y-PGA。
实施例2以罐体容积IOOL发酵罐为例，釆用本发明提取Y-PGA工艺，步 骤如下
(l)发酵液体积62L，测得Y-PGA含量4. 3g/100ml， pH6. 57、 1. 45g/100ml; (2 )开搅拌用10%的氢氧化钠碱液调料液pH至6. 8，开蒸汽升温使料液温 度保持在4(TC;
(3) 根据发酵液菌体含量添加70g的溶菌酶、蛋白酶；
(4) 开搅拌保温作用6小时，使酶作用彻底；
(5) 搅拌缓慢流加80度的乙醇，在乙醇流加量为发酵液一倍体积时用10% 的氢氧化钠溶液调料液PH至8. 0;(6) 继续缓慢流加80度的乙醇提取，制的乳白色悬浊液并出现灰色或灰
黄色胶渣，停止流加乙醇；
(7) 抽取胶体悬浊液至离心机中，分离胶渣；胶渣去烘干制造工业级聚谷
氨酸；
(8) 分离后的乳浊液转至提取罐中；
(9) 开搅拌慢慢加入适量食品级食盐，絮凝聚谷氨酸；
(10) 待聚谷氨酸絮凝完全，乙醇变清，停止加入食盐；
(11) 停搅拌使胶体沉淀；
(12) 完全转移上部的乙醇，然后加入80L清水；
(13 )开搅拌重新溶解胶体；并用10%稀酸调pH至3. 0; (14)调酸后的胶体溶液用超滤膜过滤透析浓缩，去除色素、盐类等小分 子杂质，浓缩体积为40L;
(15 )超滤浓缩液用10%的碱液调料液pH至6. 0缓慢加入90度的乙醇提取
胶体，提取完全；
(16) 停搅拌静置2小时，转移上部乙醇；
(17) 开搅拌缓慢加入95度的乙醇，用10%稀碱液或盐酸缓慢调pH 2.5， 浸泡胶体2小时，充分吸收胶体内部多余的水分，胶体内外PH—致；
(18) 转至离心机进行固液分离，得到氢型胶体，固体胶体经真空低温干 燥或冷冻干燥得到1. 6Kg氢型y -pga 。
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权利要求
1、一种聚谷氨酸提取新方法，其特征是按下述工艺步骤操作(1)检测发酵液中聚谷氨酸胶体含量、PH、菌体含量；(2)开搅拌用1-20％的碱液调料液PH至6.0-8.0，开蒸汽升温使发酵液温度保持在30℃-50℃之间；(3)根据发酵液中菌体含量的重量比添加0.05％-10％的溶菌酶、蛋白酶；(4)开搅拌保温作用5-7小时，使酶作用彻底；(5)搅拌缓慢流加60-90度的乙醇，在乙醇流加量为发酵液一倍体积时用1-20％的碱液调料液PH至8.0-10.0；(6)继续缓慢流加60-90度的乙醇提取，制的乳白色悬浊液并出现灰色或灰黄色胶渣，停止流加乙醇；(7)抽取胶体悬浊液至离心机中，分离胶渣；胶渣去烘干制造工业级聚谷氨酸；(8)分离后的乳浊液转至提取罐中；(9)开搅拌慢慢加入适量食品级食盐，絮凝聚谷氨酸；(10)待聚谷氨酸絮凝完全，乙醇变清，停止加入钠盐；(11)停搅拌使胶体沉淀；(12)完全转移上部的乙醇，然后加入发酵液体积比为1∶0.8-1.2的清水；(13)开搅拌重新溶解胶体，并用1-15％稀酸调PH至2.0-5.0；(14)调酸后的胶体溶液用超滤膜过滤透析浓缩，去除色素、盐类等小分子杂质；(15)超滤浓缩液用1-20％的碱液调料液PH至6.0-8.0，缓慢加入90-95度的乙醇提取胶体，提取完全；(16)停搅拌静置1-5小时，转移上部乙醇；(17)缓慢加入90-95度的乙醇开搅拌，用1-15％稀盐酸或碱液缓慢调PH至1.0-3.0或5.0-7.5，浸泡胶体2小时，充分吸收胶体内部多余的水分，使胶体内外PH一致；(18)转至离心机，进行固液分离，固体胶体经真空低温干燥或冷冻干燥得到钠型或氢型胶体γ-PGA。
全文摘要
本发明公开了一种聚谷氨酸提取新方法，即在一定pH、温度的发酵液中按比例添加溶菌酶、蛋白酶，作用一定时间除去发酵液中的菌体，然后加入适量的乙醇制成乳浊液并沉淀出胶渣，离心除去胶渣，再加入适量钠盐沉淀胶体同时分离色素、盐类等杂质，胶体再复水溶解，经超滤浓缩进一步脱盐、色素等小分子杂质，超滤浓缩液再加入乙醇析出胶体，多次置换高度乙醇降低胶体粘度，经离心分离乙醇后，真空烘干或冷冻烘干制的产品γ-PGA。本发明提取工艺简单、生产成本低、产品质量好。
文档编号C08G69/00GK101580586SQ20091002022
公开日2009年11月18日 申请日期2009年3月30日 优先权日2009年3月30日
发明者庄会华, 徐国华, 林永贤, 贾龙千 申请人:山东阜丰生物科技开发有限公司