专利名称：一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法
技术领域：
本发明涉及一种玻璃酸钠发酵液的处理方法，特别涉及一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法。
背景技术：
玻璃酸(Hyaluronic acid，简称HA)，是由(1 — 3) _2_乙酰氨基_2_脱氧-β _D_葡萄糖-(1 — 4) -0- β -D-葡糖醛酸双糖重复单位所组成的直链多聚糖，分子式为(C14H21NO11) ,依据组织来源不同，分子量变化范围为2 X IO5 7Χ 106，双糖单位数为300 11000对。
不同来源的玻璃酸结构一致，无种属差异，只存在相对分子量的区别。商品玻璃酸一般为钠盐形式，为白纤维状或粉末状固体，有较强的吸湿性，溶于水，不溶于有机溶剂。玻璃酸钠的大分子网状结构通过与H2O形成氢键结合大量的水，在体内具有构成多种基质、调节渗透压、调控大分子物质的转运、在细胞周围形成物理屏障以及调节细胞功能等作用。玻璃酸钠可作为眼科手术辅助用药及变形性膝关节病和肩关节周围炎的辅助治疗，还在组织生成、创伤愈合、肿瘤入侵和调节细胞功能诸方面具有重要的生理功能。目前国内的医用级玻璃酸钠生产大多是动物组织提取的生产工艺，原料成本较高，来源受限，且存在动物源性风险。而发酵法生产玻璃酸钠，通过基因技术，能够筛选出不含内毒素和外毒素且高产HA的变异菌株，较组织提取更加安全；发酵液与动物组织比较， 组成成分简单，更有利于提取与纯化，制备高纯度HA ；能够保证生产原料来源不受限制，且原料成本更加低廉。在以往的公开的文献中，玻璃酸钠发酵液的处理方式通常是直接用有机溶剂沉淀，然后再将沉淀溶解，进行络合等进一步的纯化。使用有机溶剂沉淀的方法，有机溶剂使用量大，成本高，而且有机溶剂的使用、储存都存在安全风险，有机溶剂的排放及处理存在污染的风险。因此这种方法在工业化生产中存在不足。
发明内容
本发明的目的是提供一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法，以克服上述玻璃酸钠发酵液处理方法的不足。
为实现本发明的目的，本发明所采用的技术方案是一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将玻璃酸钠发酵液加纯化水稀释，过滤除菌；(2)将步骤⑴所得的料液浓缩；(3)保持步骤( 所得的料液体积不变，流加纯化水对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加氯化钠溶液对料液进行洗滤。在本发明的一优选实施例中，步骤(1)中发酵液稀释至其体积的2-4倍。在本发明的一更优选实施例中，步骤(1)中发酵液稀释至其体积的3倍。在本发明的一优选实施例中，步骤O)中发酵液浓缩1 3倍。在本发明的一优选实施例中，所述步骤(3)中纯化水的用量为料液体积的1 6倍。在本发明的一优选实施例中，所述步骤⑶中氯化钠溶液的浓度为 0. 005-0. lmol/L，用量为料液体积的1 6倍。本发明的玻璃酸钠发酵液用超滤方法处理，该方法制备所得的玻璃酸钠发酵液安全、有效、低成本、低风险，可基本去除发酵液中的培养基成份，大幅减少核酸和蛋白等的含量，特别适合医用级玻璃酸钠的工业化生产。
具体实施例方式通过下面给出的本发明的具体实施例可以进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定。实施例1 取玻璃酸钠发酵液4L，加8L纯化水稀释，过滤除菌后进行超滤，超滤过程分为二个步骤首先将料液浓缩1倍，至6L ；然后保持料液体积不变，流加12L纯化水，即2倍料液体积，对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加12L浓度为0. 05mol/L氯化钠溶液，即2倍料液体积，继续对料液进行洗滤。最终获得能够直接进行络合沉淀的玻璃酸钠溶液。超滤完毕测得的各项数据如下平均通量27. 8L/m2h ；蛋白去除率93. 2% ；玻璃酸钠收率87. 1%。实施例2 取玻璃酸钠发酵液5L，加IOL纯化水稀释，过滤除菌后进行超滤，超滤过程分为二个步骤首先将料液浓缩2倍，至5L ；然后保持料液体积不变，流加IOL纯化水，即2倍料液体积，对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加20L浓度为0. 07mol/L氯化钠溶液，即4倍料液体积，继续对料液进行洗滤。最终获得能够直接进行络合沉淀的玻璃酸钠溶液。超滤完毕测得的各项数据如下平均通量31.3L/m2h ；蛋白去除率94.0% ；玻璃酸钠收率83. 1%。实施例3 取玻璃酸钠发酵液5L，加IOL纯化水稀释，过滤除菌后进行超滤，超滤过程分为二个步骤首先将料液浓缩2倍，至5L ；然后保持料液体积不变，流加20L纯化水，即4倍料液体积，对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加IOL浓度为0. lmol/L氯化钠溶液，即2倍料液体积，继续对料液进行洗滤。最终获得能够直接进行络合沉淀的玻璃酸钠溶液。超滤完毕测得的各项数据如下平均通量20. lL/m2h ；蛋白去除率96. 8% ；玻璃酸钠收率87. 9%。实施例4
4
取玻璃酸钠发酵液4L，加8L纯化水稀释，过滤除菌后进行超滤，超滤过程分为二个步骤首先将料液浓缩1倍，至6L ；然后保持料液体积不变，流加12L纯化水，即2倍料液体积，对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加24L浓度为0. 06mol/L氯化钠溶液，即4倍料液体积，继续对料液进行洗滤。最终获得能够直接进行络合沉淀的玻璃酸钠溶液。超滤完毕测得的各项数据如下平均通量30. 4L/m2h ；蛋白去除率94. 0% ；玻璃酸钠收率79. 8%。尽管对本发明已经作了详细的说明并引证了一些具体实施例，但对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化和修正是显然的。
权利要求
1.一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，包括以下步骤(1)将玻璃酸钠发酵液加纯化水稀释，过滤除菌；(2)将步骤(1)所得的料液浓缩；(3)保持步骤( 所得的料液体积不变，流加纯化水对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再流加氯化钠溶液对料液进行洗滤。
2.根据权利要求1所述的玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，步骤(1)中发酵液稀释至其体积的2-4倍。
3.根据权利要求2所述的玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，步骤(1)中发酵液稀释至其体积的3倍。
4.根据权利要求1所述的玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，步骤( 中发酵液浓缩1 3倍。
5.根据权利要求1所述的玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，所述步骤C3)中纯化水的用量为料液体积的1 6倍。
6.根据权利要求1所述的玻璃酸钠发酵液的超滤方法，其特征在于，所述步骤C3)中氯化钠溶液的浓度为0. 005-0. lmol/L，用量为料液体积的1 6倍。
全文摘要
本发明涉及一种玻璃酸钠发酵液的超滤方法，该方法包括以下步骤首先，将玻璃酸钠发酵液加纯化水稀释，过滤除菌；然后将所得的料液浓缩；最后，保持料液体积不变，加入纯化水对料液进行洗滤，纯化水洗滤完毕再加入氯化钠溶液对料液进行洗滤。该方法制备所得的玻璃酸钠发酵液安全、有效、低成本、低风险，可基本去除发酵液中的培养基成份，大幅减少核酸和蛋白等的含量，特别适合医用级玻璃酸钠的工业化生产。
文档编号C08B37/08GK102504047SQ201110389619
公开日2012年6月20日 申请日期2011年11月30日 优先权日2011年11月30日
发明者付爱玲, 张延良, 曾辉, 马贤鹏 申请人:上海景峰制药有限公司