技术领域：
本发明涉及用藤茶制备杨梅素的方法和焦亚硫酸盐的应用，属于天然产物活性成分的提取与富集制备领域。
背景技术：
葡萄科蛇葡萄属的植物中均含有黄酮成分杨梅素和二氢杨梅素，其中以显齿蛇葡萄中含量最高，显齿蛇葡萄茎叶的加工品俗称藤茶，藤茶中富含多种活性成分，如二氢杨梅素，杨梅素，儿茶素，没食子酸，氨基酸，多糖等，其中以二氢杨梅素含量最高，杨梅素较低。据已有的文献及专利报道，多数研究着重于对藤茶中含量高的二氢杨梅素的提取与纯化，而对杨梅素的研究较少，相关的专利文献有：一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法CN200510032918.5，藤茶中二氢杨梅素的制备方法CN201110093346.7，非专利文献则较多（覃洁萍等，中国新药杂志，2004，NO.10；李卫等，食品科学，2004，NO.11，等）。然而目前，美国FDA（美国食品药物管理局（U.S.FoodandDrugAdministration））已将杨梅素广泛应用于医药、食品、保健品和化妆品，并有望将其进一步开发为特殊人群的消炎用药，从而减轻西药抗生素对人体的毒副作用。杨梅素的来源—杨梅树，是我国的特有资源，但是，由于提取工艺等原因，目前对杨梅素的研究主要来源于藤茶，而对杨梅树的研究非常少。从一些科研人员的研究结果中，我们可以看出：藤茶中主要成分是二氢杨梅素，其含量占25%左右，而杨梅素只占2%左右，甚至更低（广东农业科学，2012，NO.15，张明生等人通过超声提取得到二氢杨梅素和杨梅素的混合物，其中前者占25%左右，后者不到1%；中草药，2003，NO.34，李瑛琦等人利用高效液相色谱法同时测定了藤茶中的二氢杨梅素和杨梅素的含量分别是25%，2%），这使得杨梅素的开发和利用存在一定的局限性。参见国内外文献，迄今为止只有极少数的研究者对藤茶中二氢杨梅素进行改性从而实现杨梅素的富集制备，相关的专利文献有：一种杨梅素的制备方法CN200610019693.4中提到了一种提取杨梅素的方法，纯度提高到95%，但是产率很低，只有5%，杨梅素的制备新方法CN200810050893.5提到了一种通过碱性转化剂对二氢杨梅素进行机构的转化，取得了纯度较高的杨梅素，但是其中杨梅素的收率最高达8%左右。
技术实现要素：
本发明针对杨梅素资源缺乏，现有技术对杨梅素的提取和制备产率低，最高达到8%，难于应对工业化生产的问题，目的在于是在于提供一种成本低用藤茶制备高产率、高纯度杨梅素的方法；该方法原料廉价易得、方法简单、无污染、对设备要求低，可以广泛工业化生产。
本发明的另一个目的提供了焦亚硫酸盐作为脱氢氧化剂的应用，将焦亚硫酸盐作为脱氢氧化剂可以将藤茶类植物中二氢杨梅素几乎全部脱氢转化成杨梅素，获得高产率、高纯度的杨梅素。
本发明提供了用藤茶制备杨梅素的方法，该方法是将粉碎过的藤茶用90～100℃热水浸提，趁热过滤后，将滤液浓缩后置于0～5℃下冷却析出沉淀；抽滤，沉淀滤渣用无水乙醇溶解，再过滤除去不溶物，过滤所得的乙醇溶液经浓缩后得到乙醇浸膏；将乙醇浸膏加入到焦亚硫酸盐溶液中，在80～100℃下反应，反应完成后将反应液倒入冰水混合物中，经析晶、过滤、洗涤、干燥后，即得；所述的焦亚硫酸盐加入量为藤茶质量的1～3倍，其中，焦亚硫酸盐溶液中焦亚硫酸盐的质量含量为10～40%。
所述的焦亚硫酸盐包括焦亚硫酸钾、焦亚硫酸钠或焦亚硫酸铵中一种或几种。
所述的焦亚硫酸盐溶液为焦亚硫酸盐的水溶液。
上述方法中将乙醇浸膏加入到焦亚硫酸盐溶液中，在80～100℃下反应的时间为4～8h。
上述方法中藤茶粉末:热水的料液比为1:20～40，单位为g/mL。
上述方法中浸提次数为2～4次，每次提取时间为0.5～2h。
上述方法中数次浸提后，合并提取液，再进行浓缩操作。
上述方法中滤液浓缩到原滤液体积的1/4～2/5。
上述方法中乙醇溶液经浓缩后浓缩至原乙醇溶液体积的1/4～2/5。
上述方法中析晶后所得的杨梅素晶体过滤分离出来后用冰水反复洗涤；将未反应完的焦亚硫酸盐洗涤干净。
上述方法中藤茶粉末：无水乙醇的料液比（g:mL）为1:5～15。
上述方法中通过多次重结晶可以进一步提高纯度。
本发明的方法适用于含有二氢杨梅素的任何植物原材料。
本发明还提供了焦亚硫酸盐的应用，该应用是将焦亚硫酸盐作为脱氢氧化剂应用于藤茶类植物中二氢杨梅素向杨梅素的脱氢转化。
所述的焦亚硫酸盐包括焦亚硫酸钾、焦亚硫酸钠或焦亚硫酸铵中一种或几种。
本发明的藤茶制备杨梅素的方法包括以下步骤：
（1）将藤茶成品于真空干燥箱中干燥后粉碎，用90～100℃热水提取2～4次，合并提取液，趁热抽滤，滤液经过减压蒸馏，浓缩至原滤液体积的1/4～2/5，在0～5℃静置析出沉淀；抽滤，沉淀滤渣用无水乙醇溶解，静置抽滤以除去不溶成分，滤液减压浓缩至原乙醇溶液体积的1/4～2/5，得到乙醇浸膏；
（2）将上述所得乙醇浸膏加入到焦亚硫酸盐的水溶液中，于80～100℃条件下，反应4～8h后，将反应液倒入冰水混合物中，析出晶体，抽滤，冰水反复洗涤，真空干燥，即得杨梅素晶体；
所述的焦亚硫酸盐加入量为藤茶质量的1～3倍，其中，焦亚硫酸盐溶液中焦亚硫酸盐的质量含量为10～40%。
本发明的有益效果：本发明克服了现有技术中杨梅素的提取和制备产率低的缺陷，文献报道藤茶中二氢杨梅素含量占25wt%左右，而杨梅素2wt%，现有技术从植物原材料中提取或制备杨梅素的最高收率在8%；本发明经过发明人大量实验研究发现，焦亚硫酸可以作为脱氢氧化剂能使二氢杨梅素进行结构的转化一步生成杨梅素，转化反应在80～100℃的温度条件下反应时转化效率突出，温度过低产率降低，温度过高产物会被进一步氧化，特别是在95～100℃转化效率最好（从图3可以看出，二氢杨梅素几乎全部转化为杨梅素）；本发明采用提取和脱氢结构转化一体化的连续工艺方法，将含有二氢杨梅素的藤茶等廉价的植物原料通过简单方法进行提取，再脱氢转化一步直接获得高产率、高纯度的杨梅素；本发明方法产率达到了21%，纯度达到了96%以上；该方法无污染、对设备要求低，可以广泛工业化生产。
附图说明
【图1】为二氢杨梅素和杨梅素对照品的高效液相色谱谱图：1为二氢杨梅素,2为杨梅素。
【图2】为实施例2脱氢反应前粗提取物的高效液相色谱谱图：1为二氢杨梅素,2为杨梅素。
【图3】为实施例2杨梅素产物的高效液相色谱谱图：1为二氢杨梅素,2为杨梅素。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是限制本发明。
色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱（250mm×4.6mm,5μm），流动相：甲醇：水：冰醋酸=50:50:1；检测波长：292nm，375nm；检测柱温：30℃；进样量：20μL；流速：1.0mL·min–1；
实施例1
1、藤茶的提取
称取干燥的藤茶粉20g，加入约200mL水，加热至95℃浸提1h，趁热过滤，滤渣重复上述操作两次，合并三次滤液，浓缩至200mL，后于0～5℃静置析出浅黄色沉淀，抽滤，滤沉淀用300mL无水乙醇溶解，静置抽滤，滤液减压浓缩至100mL，得到提取物的乙醇浸膏，备用；
2、二氢杨梅素的脱氢反应
将上述100mL浓缩提取物加入到250mL20%的Na2S2O5水溶液中，在100℃下反应4h；结束反应，将混合液倒入冰水混合物中，静置析出沉淀，抽滤，冰水多次洗涤沉淀，后于真空40℃进行干燥，得黄绿色固体，即杨梅素，产品得率为21%。
上述操作中得到的黄绿色物质由薄层色谱初步鉴定为杨梅素；经高效液相色谱进行定性、定量检测，证实所得物质为杨梅素，且纯度高达96%。
实施例2
1.藤茶的提取：
称取干燥的藤茶粉20g，加入200mL水，加热至95℃浸提1h，趁热过滤，滤渣重复上述操作两次，合并三次滤液，浓缩至200mL；后于0～5℃静置析出浅黄色沉淀，抽滤，滤沉淀用300mL无水乙醇溶解，静置抽滤，滤液减压浓缩至100mL，得到提取物的乙醇浸膏，备用。
2.二氢杨梅素的脱氢反应：
将上述100mL浓缩提取物加入到250mL20%的K2S2O5水溶液中，在100℃下反应4h；结束反应，将混合液倒入冰水混合物中，静置析出沉淀，抽滤，冰水多次洗涤沉淀，后于真空40℃进行干燥，得黄绿色固体，即杨梅素，产品得率为21%。
上述操作中得到的黄绿色物质由薄层色谱初步鉴定为杨梅素；经高效液相色谱进行定性、定量检测，证实所得物质为杨梅素，且纯度高达96%。