进行数字PCR的方法与流程

文档序号:15274461发布日期:2018-08-28 22:49阅读:来源:国知局

技术特征:

1.靶核酸的检测方法,包括:

将样品分级分离成多个样品体积,其中超过50%的级分在每个样品体积中含有不超过1个靶核酸分子;

使所述多个样品体积经受用于扩增的条件;

检测在其中存在靶核酸的样品体积中离子浓度的变化;

对带有扩增的靶核酸的级分的数量进行计数;

确定所述样品中靶核酸的量;以及

其中所述方法是dPCR方法。

2.如权利要求1所述的方法,还包括将样品与用于扩增的引物和探针组合。

3.如权利要求1所述的方法,其中所述离子浓度的变化是离子浓度的增加。

4.如权利要求1所述的方法,还包括将样品与珠组合。

5.如权利要求1所述的方法,还包括将样品上样至基板上,其中所述基板包括至少一个孔。

6.如权利要求5所述的方法,还包括用不混溶的流体层将所述至少一个孔密封。

7.如权利要求5所述的方法,其中所述至少一个孔包括涂层。

8.如权利要求7所述的方法,其中所述涂层是亲水性涂层。

9.如权利要求1所述的方法,还包括将多个样品的每一个置于多个分离的位置中,其中所述多个分离的位置的每一个与传感器进行化学通讯。

10.如权利要求1所述的方法,其中所述离子浓度的变化是氢离子的增加。

11.如权利要求1所述的方法,其中所述离子浓度的变化是pH的变化。

12.如权利要求1所述的方法,还包括对靶核酸的量进行定量。

13.对核酸进行绝对定量的方法,包括:

将含有初始量靶核酸的样品稀释成多个样品体积,其中含有一个或多个靶核酸分子的反应区的百分比大于50%并小于100%;

使多个样品体积经受至少一个扩增循环;

检测多个样品体积中至少一个样品体积的离子浓度变化作为至少一个扩增循环的结果;

定量靶核酸的初始量;以及

其中所述方法是dPCR方法。

14.如权利要求13所述的方法,其中所述离子浓度的变化是增加。

15.如权利要求13所述的方法,其中所述离子是阳离子。

16.如权利要求15所述的方法,其中所述阳离子是氢离子。

17.如权利要求13所述的方法,其中所述离子是阴离子。

18.进行dPCR的装置,包括

被配置为将样品分级分离成多个样品体积的样品支持器,其中超过50%的级分在每个样品体积中含有不超过1个靶核酸分子;

与所述多个样品体积进行化学通讯的传感层;以及

与所述传感层进行电通讯的至少一个传感器,其被配置为检测所述样品体积中电荷的升高。

19.如权利要求18所述的装置,其中所述样品支持装置是基质。

20.如权利要求19所述的装置,其中所述基质是细胞外基质。

21.如权利要求18所述的装置,其中所述样品支持装置是凝胶。

22.如权利要求21所述的装置,其中所述凝胶是水凝胶。

23.如权利要求18所述的装置,其中所述样品支持装置位于围绕所述传感器外周的至少一部分上。

24.如权利要求1所述的方法,其中所述离子浓度的变化是焦磷酸分子的增加。

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