本发明涉及农作物深加工领域，尤其涉及一种水葫芦叶蛋白的提取的方法。
背景技术：
水葫芦是单子叶植物，雨久花科凤眼兰属。原产南美洲，在气温13℃开始繁殖，气温39℃时仍能繁殖，是世界上生长、繁殖最快的水草之一。水葫芦已在我国南方17 个省( 市、自治区) 泛滥成灾，是目前世界上危害最严重的多年生水生杂草之一。据报道，我国每年人工打捞水葫芦花费至少超过1 亿元。
水葫芦的生长相当迅速，其倍增长周期为7天左右，据报道其最高产量可达到日产1800kg/公顷(干重)左右，一般情况下，水肥充足时，其年亩产干物质量达5000一7500kg，水肥不足时，亦有1000一200 kg ，甚至可达到亩年产量60吨以上，而且水葫芦的蛋白质含量高，粗蛋白质含量一般占其鲜重的1.2%左右，是其主要的有机营养成分以亩产5万公斤的新鲜水葫芦计算，能生产出600公斤的叶蛋白，如果能开发利用，其产生的经济效益非常高，一般农作物包括大豆难以与之匹敌。
水葫芦所含的有机营养成分中，蛋白质的含量高，为19%一26%，它最具开发潜力，在水葫芦的开发利用研究中应该将其作为重点。然而，目前有关如何利用水葫芦为原料生产蛋白的研究尚少见报道。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种水葫芦叶蛋白的提取的方法。
为实现上述发明目的，本发明采用如下的技术方案：
一种水葫芦叶蛋白的提取的方法，其特征在于，操作步骤如下：
（1）原料预处理
将新鲜水葫芦叶用自来水清洗数次，捞去杂物，沥去水分;在4℃冰箱中预冷lh将95%乙醇放在-20℃冰箱中预冷至-20℃；
（2）粗蛋白的制取
将预冷的水葫芦叶片放入打浆机中，迅速加入4倍重量的已预冷至-20℃的95%的食用乙醇，打浆30min，后将己打成浆状的水葫芦乙醇溶液过100目筛，除去粗纤维，得到的蛋白质乙醇混合物，再经滤纸过滤，滤纸上得到的便是水葫芦叶粗蛋白，再将其反复醇洗至无绿色为止；
整个制取过程在-5℃的冰箱中进行，得到的粗蛋白放在5℃的冰箱中自然挥发干燥，测粗蛋白中各组分的含量。
（3）蛋白的纯化
精确称取经低温醇洗过的水葫芦叶粗蛋白粉，按液料比25:l(V/W)分散于食盐水中，用NaOH溶液调pH至12.0，于40℃下搅拌30min，在3500r/min下离心20min，残渣用上法再提取一次，合并两次提取的上清液，取上清液加入硫酸铵至质量分数为30%，用HCl溶液调pH至5.5，有大量蛋白质析出，过滤，将滤纸上的蛋白质重新用pH12.0的NaoH溶液溶解，将此溶液装入透析袋，置于蒸馏水中，于5℃下透析，每6h换水一次，透析三天后，将透析液倒出，加入-20℃的乙醇至乙醇含量为80%，置于-5℃下沉淀lh，后经滤纸过滤，收集沉淀；
（4）干燥：将收集的沉淀采用低温真空干燥，得水葫芦分离叶蛋白。
步骤（3）中的食盐水是0.4mol/L的NaCl溶液。
步骤（3）中的NaOH溶液是0.5mol/L的NaOH溶液。
步骤（3）中的HCl溶液是0.5mol/L的HCl溶液。
本发明的制备工艺得到的水葫芦叶蛋白含量高达91.4%，属于优质的植物蛋白源。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的实质性内容作进一步详细的描述。
实施例1
（1）原料预处理
将新鲜水葫芦叶用自来水清洗数次，捞去杂物，沥去水分;在4℃冰箱中预冷lh将95%乙醇放在-20℃冰箱中预冷至-20℃；
（2）粗蛋白的制取
将预冷的水葫芦叶片200g放入打浆机中，迅速加入4倍重量的已预冷至-20℃的95%的食用乙醇，打浆30min，后将己打成浆状的水葫芦乙醇溶液过100目筛，除去粗纤维，得到的蛋白质乙醇混合物，再经滤纸过滤，滤纸上得到的便是水葫芦叶粗蛋白，再将其反复醇洗至无绿色为止；
整个制取过程在-5℃的冰箱中进行，得到的粗蛋白放在5℃的冰箱中自然挥发干燥，得4.98g水葫芦粗蛋白，经检测蛋白含量为41.61%，蛋白质的得率为82.1%。
（3）蛋白的纯化
精确2.00g称取经低温醇洗过的水葫芦叶粗蛋白粉，按液料比25:l(V/W)分散于0.4mol/L食盐水中，用0.5mol/L NaOH溶液调pH至12.0，于40℃下搅拌30min，在3500r/min下离心20min，残渣用上法再提取一次，合并两次提取的上清液，取上清液加入硫酸铵至质量分数为30%，用0.5mol/L HCl溶液调pH至5.5，有大量蛋白质析出，过滤，将滤纸上的蛋白质重新用pH12.0的NaoH溶液溶解，将此溶液装入透析袋，置于蒸馏水中，于5℃下透析，每6h换水一次，透析三天后，将透析液倒出，加入-20℃的乙醇至乙醇含量为80%，置于-5℃下沉淀lh，后经滤纸过滤，收集沉淀；
（4）干燥：将收集的沉淀采用低温真空干燥，得水葫芦分离叶蛋白0.5893g。
经检测蛋白质纯度为91.2%(干基)。