生物提取法生产药用垂体后叶素工艺的制作方法

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及生物提取法生产药用垂体后叶素工艺。

背景技术：

1920年从后叶分离并部分提纯了两种激素，垂体后叶素和加压素。它们都是由丘脑下部特殊的神经细胞分泌的，沿丘脑下部垂体束到达后叶并贮存于后叶。

垂体后叶素为缩宫素和加压素的混合体，其有效成分效价比值为0.9～1.7；主要用于肺、支气管出血(如咯血)消化道出血(呕血、便血)。并适用于妇科催产以及产后收缩子宫、止血等。对于腹腔手术后肠道麻痹等亦有功效。垂体后叶素尚对尿崩症有减少排尿量之作用。垂体后叶注射液对平滑肌有强烈收缩作用，尤以对血管及子宫之基层作用更强，由于剂量不同，可引起子宫节律收缩至强直收缩。对于肠道及膀胱亦能增加张力而使其收缩。此外，垂体后叶素尚能抑制排尿。

在pH值在3.0～4.0之间最稳定，90℃加热半小时或50℃以下较长时间加热均不失活。在pH＝5.0时，加热会引起效价的损失；pH＝6.0时，即在正常温度下也能损失较多的活力。在冰醋酸中室温放置24小时，检查不出变化。

而现有的垂体后叶素生产工艺往往采用存在垂体后叶素内蛋白质杂质含量高；提取效率低；现有技术垂体后叶素通常采用不灭菌或半无菌罐封后流动蒸汽灭菌，导致垂体后叶素澄明度较低，且容易变质、失效。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供生物提取法生产药用垂体后叶素工艺。

生物提取法生产药用垂体后叶素工艺，包括以下步骤：

1)初脱丙酮、分离

取出浸泡于丙酮中的猪小脑，置于盘内进行点数，去除破碎的猪小脑，整粒猪小脑用镊子迅速分离成前叶和后叶，并将后叶置于丙酮溶液中浸泡；

2)后叶粗粉制备

从丙酮溶液中取出后叶，并用纱布在漏斗上滤干，待丙酮挥发尽后，放入干燥箱中，干燥5～7天，干燥后的干后叶送入粉碎装置粉碎成后叶粉，后叶粉过40～60目筛，收集后叶粗粉并称重；

3)乙醚后叶粉制备

向后叶粗粉中加入3倍后叶粗粉量的冷丙酮，室温搅拌1.5小时，静置6～12小时，倾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法处理三次，最后一次抽干，沉淀物为丙酮后叶粉，向丙酮后叶粉中加入3倍丙酮后叶粉量的冷乙醚，室温搅拌1小时，静置30分钟后过滤，挥发尽乙醚，得到乙醚后叶粉；

4)垂体后叶粉制备

乙醚后叶粉放入干燥箱中，干燥5～7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂体后叶粉，垂体后叶粉用消毒、洁净的薄膜包扎密封，贴上状态标识放置5℃以下的低温箱保存；

5)提取液制备

称取垂体后叶粉3000g，进行一次提取，一次提取的步骤为：向垂体后叶粉中加入浓度为0.25％醋酸溶液150000mL，在60～65℃温度条件下搅拌、提取15分钟，垂体后叶粉的提取液冷处静置6～12小时，静置后的提取液用布氏漏斗冷滤，得到第一次提取液和滤渣，滤渣中加入浓度为0.25％醋酸溶液60000mL，进行二次提取，二次提取的时间、温度和过滤方式与一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液；

6)脱蛋白

向提取液中加入万分之一的活性炭，迅速加热至100℃保温30分钟，取出放置于-5℃以下的温度条件下放置6～12小时，取出冷却液，先用纸浆漏斗抽滤，再经30kD超滤膜过滤滤器抽滤至澄明，得到垂体后叶溶液，对垂体后叶溶液进行取样检验；

7)包装、储存

检验合格后的垂体后叶溶液分装于洁净的不锈钢桶中，桶口用洁净的塑料膜包扎密封，桶外贴标签，置于-5℃以下存放。

进一步的，所述冷丙酮的比重为0.820～0.830，冷丙酮的温度为15℃。

进一步的，所述粉碎机为陶瓷粉碎机或球磨坛。

进一步的，所述干燥箱均采用干石灰作为干燥剂。

本发明技术方案生物提取法生产药用垂体后叶素工艺，取出浸泡于丙酮中的猪小脑，置于盘内进行点数，去除破碎的猪小脑，整粒猪小脑用镊子迅速分离成前叶和后叶，并将后叶置于丙酮溶液中浸泡，将破碎的猪小脑和前叶去除以提高垂体后叶素成品的品质；制备后叶粗粉以便于后续无药效组分的析出；向后叶粗粉中加入3倍后叶粗粉量的冷丙酮，室温搅拌1.5小时，静置6～12小时，倾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法处理三次，最后一次抽干，沉淀物为丙酮后叶粉，向丙酮后叶粉中加入3倍丙酮后叶粉量的冷乙醚，室温搅拌1小时，静置30分钟后过滤，挥发尽乙醚，得到乙醚后叶粉，让后叶粗粉中无药效的组分析出，提高垂体后叶素的品质和产率；通过浓度为0.25％醋酸溶液对垂体后叶粉进行提取，提高了提取的效率；向提取液中加入万分之一的活性炭，迅速加热至100℃保温30分钟，取出放置于-5℃以下的温度条件下放置6～12小时，取出冷却液，先用纸浆漏斗抽滤，再经30kD超滤膜过滤滤器抽滤至澄明，得到垂体后叶溶液，通过活性炭对提取液中蛋白质和杂质进行吸附，再通过纸浆漏斗抽滤、30kD超滤膜过滤滤器抽滤，提高垂体后叶素的澄明度和品质；检验合格后的垂体后叶溶液分装于洁净的不锈钢桶中，桶口用洁净的塑料膜包扎密封，桶外贴标签，置于-5℃以下存放，以延长垂体后叶素保质期。

本发明的有益效果是：

本发明提供的生物提取法生产药用垂体后叶素工艺，通过冷丙酮和冷乙醚对后叶粉进行处理，垂体后叶素的产率高；通过活性炭对提取液中蛋白质和杂质进行吸附，再通过纸浆漏斗抽滤、30kD超滤膜过滤滤器抽滤，垂体后叶素的澄明度高、品质好；制备好的垂体后叶素在-5℃以下存放，垂体后叶素保质期长。

附图说明

图1为本发明中生物提取法生产药用垂体后叶素工艺的生产工艺图。

图2为本发明中生物提取法生产药用垂体后叶素工艺的提取液制备的工艺图。

具体实施方式

参见图1、图2，生物提取法生产药用垂体后叶素工艺，包括以下步骤：

1)初脱丙酮、分离

取出浸泡于丙酮中的猪小脑，置于盘内进行点数，去除破碎的猪小脑，整粒猪小脑用镊子迅速分离成前叶和后叶，并将后叶置于丙酮溶液中浸泡。

2)后叶粗粉制备

从丙酮溶液中取出后叶，并用纱布在漏斗上滤干，待丙酮挥发尽后，放入干燥箱中，干燥5～7天，干燥后的干后叶送入粉碎装置粉碎成后叶粉，后叶粉过40～60目筛，收集后叶粗粉并称重。

3)乙醚后叶粉制备

向后叶粗粉中加入3倍后叶粗粉量的冷丙酮，室温搅拌1.5小时，静置6～12小时，倾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法处理三次，最后一次抽干，沉淀物为丙酮后叶粉，向丙酮后叶粉中加入3倍丙酮后叶粉量的冷乙醚，室温搅拌1小时，静置30分钟后过滤，挥发尽乙醚，得到乙醚后叶粉。

4)垂体后叶粉制备

乙醚后叶粉放入干燥箱中，干燥5～7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂体后叶粉，垂体后叶粉用消毒、洁净的薄膜包扎密封，贴上状态标识放置5℃以下的低温箱保存。

5)提取液制备

称取垂体后叶粉3000g，进行一次提取，一次提取的步骤为：向垂体后叶粉中加入浓度为0.25％醋酸溶液150000mL，在60～65℃温度条件下搅拌、提取15分钟，垂体后叶粉的提取液冷处静置6～12小时，静置后的提取液用布氏漏斗冷滤，得到第一次提取液和滤渣，滤渣中加入浓度为0.25％醋酸溶液60000mL，进行二次提取，二次提取的时间、温度和过滤方式与一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液。

6)脱蛋白

向提取液中加入万分之一的活性炭，迅速加热至100℃保温30分钟，取出放置于-5℃以下的温度条件下放置6～12小时，取出冷却液，先用纸浆漏斗抽滤，再经30kD超滤膜过滤滤器抽滤至澄明，得到垂体后叶溶液，对垂体后叶溶液进行取样检验。

7)包装、储存

检验合格后的垂体后叶溶液分装于洁净的不锈钢桶中，桶口用洁净的塑料膜包扎密封，桶外贴标签，置于-5℃以下存放。

所述冷丙酮的比重为0.820～0.830，冷丙酮的温度为15℃。

所述粉碎机为陶瓷粉碎机或球磨坛。

所述干燥箱均采用干石灰作为干燥剂。

实施例1

取出浸泡于丙酮中的猪小脑，置于盘内进行点数，去除破碎的猪小脑，整粒猪小脑用镊子迅速分离成前叶和后叶，并将后叶置于丙酮溶液中浸泡；从丙酮溶液中取出后叶，并用纱布在漏斗上滤干，待丙酮挥发尽后，放入采用干石灰作为干燥剂的干燥箱中，干燥5天，干燥后的干后叶送入陶瓷粉碎粉碎成后叶粉，后叶粉过40目筛，收集后叶粗粉并称重；向后叶粗粉中加入3倍后叶粗粉量的比重为0.820、温度为15℃的冷丙酮，室温搅拌1.5小时，静置6小时，倾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法处理三次，最后一次抽干，沉淀物为丙酮后叶粉，向丙酮后叶粉中加入3倍丙酮后叶粉量的冷乙醚，室温搅拌1小时，静置30分钟后过滤，挥发尽乙醚，得到乙醚后叶粉；乙醚后叶粉放入干燥箱中，干燥5天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂体后叶粉，垂体后叶粉用消毒、洁净的薄膜包扎密封，贴上状态标识放置5℃以下的低温箱保存；称取垂体后叶粉3000g，进行一次提取，一次提取的步骤为：向垂体后叶粉中加入浓度为0.25％醋酸溶液150000mL，在60℃温度条件下搅拌、提取15分钟，垂体后叶粉的提取液冷处静置6小时，静置后的提取液用布氏漏斗冷滤，得到第一次提取液和滤渣，滤渣中加入浓度为0.25％醋酸溶液60000mL，进行二次提取，二次提取的时间、温度和过滤方式与一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液；向提取液中加入万分之一的活性炭，迅速加热至100℃保温30分钟，取出放置于-5℃以下的温度条件下放置6小时，取出冷却液，先用纸浆漏斗抽滤，再经30kD超滤膜过滤滤器抽滤至澄明，得到垂体后叶溶液，对垂体后叶溶液进行取样检验；检验合格后的垂体后叶溶液分装于洁净的不锈钢桶中，桶口用洁净的塑料膜包扎密封，桶外贴标签，置于-5℃以下存放。

实施例2

取出浸泡于丙酮中的猪小脑，置于盘内进行点数，去除破碎的猪小脑，整粒猪小脑用镊子迅速分离成前叶和后叶，并将后叶置于丙酮溶液中浸泡；从丙酮溶液中取出后叶，并用纱布在漏斗上滤干，待丙酮挥发尽后，放入采用干石灰作为干燥剂的干燥箱中，干燥7天，干燥后的干后叶送入球磨坛粉碎成后叶粉，后叶粉过60目筛，收集后叶粗粉并称重；向后叶粗粉中加入3倍后叶粗粉量的比重为0.830、温度为15℃的冷丙酮，室温搅拌1.5小时，静置12小时，倾出上清液，沉淀物再加1倍沉淀物量的冷丙酮，同法处理三次，最后一次抽干，沉淀物为丙酮后叶粉，向丙酮后叶粉中加入3倍丙酮后叶粉量的冷乙醚，室温搅拌1小时，静置30分钟后过滤，挥发尽乙醚，得到乙醚后叶粉；乙醚后叶粉放入干燥箱中，干燥7天，待水分降低至6％以下后取出，得到垂体后叶粉，垂体后叶粉用消毒、洁净的薄膜包扎密封，贴上状态标识放置5℃以下的低温箱保存；称取垂体后叶粉3000g，进行一次提取，一次提取的步骤为：向垂体后叶粉中加入浓度为0.25％醋酸溶液150000mL，在65℃温度条件下搅拌、提取15分钟，垂体后叶粉的提取液冷处静置12小时，静置后的提取液用布氏漏斗冷滤，得到第一次提取液和滤渣，滤渣中加入浓度为0.25％醋酸溶液60000mL，进行二次提取，二次提取的时间、温度和过滤方式与一次提取相同，得到第二次提取液，第二次提取液与第一次提取液混合得到提取液；向提取液中加入万分之一的活性炭，迅速加热至100℃保温30分钟，取出放置于-5℃以下的温度条件下放置12小时，取出冷却液，先用纸浆漏斗抽滤，再经30kD超滤膜过滤滤器抽滤至澄明，得到垂体后叶溶液，对垂体后叶溶液进行取样检验；检验合格后的垂体后叶溶液分装于洁净的不锈钢桶中，桶口用洁净的塑料膜包扎密封，桶外贴标签，置于-5℃以下存放。

本发明技术方案在上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性改进，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。