本发明属于天然产物制备技术领域，特别涉及一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法。
背景技术：
毛喉鞘蕊花[Coleus forskohlii（Wild.）Briq.]系唇形科（Labiatae）鞘蕊花属（Coleus Lour）植物，主要分布在印度、马来西亚、菲律宾、巴西等国家，目前我国云南东川和湖北通州两地也引进种植了该种植物。毛喉鞘蕊花中的活性成分倍半菇类化合物具有强降压和强心作用，可用于治疗心血管疾病、感冒、咳嗽和呼吸紊乱等疾病。福斯高林（forskolin）是从毛喉鞘蕊花根部提取的活性成分，是唯一已知源自植物的能直接激活腺苷酸环化酶的纯天然活性成分。腺苷酸环化酶被激活后，可升高环磷酸腺苷的浓度，进而提高激素敏感酯酶的活性，加快脂肪分解。因此，福斯高林作为化妆品中的功效活性物，可起到通过外用涂抹减少局部脂肪堆积的作用，在瘦身类化妆品中具有良好的应用前景。
然而，现有研究表明，福斯高林在原植物中含量极低，其中根部0.14%，叶0.07%，茎0.04%，并且野生资源有限，栽培方法及条件尚有不少困难。另一方面，应用传统的化学全合成法获得的福斯高林价格十分昂贵，使得其在未来市场化生产和的推广中障碍重重，进而难以惠及普通大众，同时化学全合成法还存在高污染、高消耗、多副反应和收率低等缺点，故而难为有效的获取高纯度福斯高林的方法。因此，提高毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的得率和纯度是十分有必要的。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是，提供一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，该方法提取得率高，所制备的福斯高林纯度高、成本低，便于工业化生产。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案具体如下：一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，其特征在于采用以下步骤：
1）选择毛喉鞘蕊花根部切片作为外植体，消毒后接种于MS培养基（购于Sigma，M 5524）进行无菌萌发，2～8d后萌发长出无菌苗；
2）取无菌苗胚根为外植体，接入愈伤组织诱导培养基中黑暗培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，愈伤组织诱导培养基pH 6.0；所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5~8 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（CAS 94-75-7）、0.1~1 mg/L 6-糠基氨基嘌呤（CAS 208-382-2）、0.8~4%琼脂的MS基础培养基（购于Sigma）；
3）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，取干燥后的愈伤组织1~10 g于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇（CAS 64-17-5，分析纯，购于国药集团）作为夹带剂，控制乙醇添加量为5~20 mg/L，CO2流量为10~50 kg/h，萃取压力10～100 MPa，萃取温度25～45 ℃，萃取时间30～180 min，得到福斯高林初提液；
4）将福斯高林初提液通过膜孔径20～100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜（陶氏DowTM SFP系列）过滤，控制过滤压力0.2～0.5 MPa，过滤温度25～40℃；
5）上述过滤液经真空浓缩（miVac Duo 真空离心浓缩仪，英国GeneVac）得到福斯高林提取物。真空浓缩的条件：真空度30~80 KPa，浓缩温度35~65℃，离心转速1000~3000 rpm，浓缩时间10~90 min。
本发明应用植物细胞工程技术，对毛喉鞘蕊花根部进行愈伤组织培养，利用植物组织的形态分化加强次生产物的形成和积累，提高活性物含量，使得愈伤组织中福斯高林含量高于1.16%，是原植物根部（0.14%）含量的8倍多；采用超临界CO2萃取法，对毛喉鞘蕊花愈伤组织进行萃取，超滤膜对提取液进行过滤，提高提取率和产物纯度，获得福斯高林的纯度大于90%，提取率高于1%。
综上所述，本发明具有提取得率高，所制备的福斯高林纯度高、成本低，便于工业化生产等有益效果。
具体实施方式
以下举出的实施例是对本发明进行进一步详细说明，但本发明不仅限于这些实施例。
实施例1：
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：
1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，5 d后萌发长出无菌苗；
2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0 lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH 6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有2.5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、2%琼脂的MS基础培养基；
2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取10 g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为15 mg/L，CO2流量为30 kg/h，萃取压力60 MPa，萃取温度45 ℃，萃取时间120 min，得到福斯高林初提液；
3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为50 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.45 MPa，过滤温度为25℃；
4）过滤后真空浓缩得到福斯高林样品，真空度30 KPa，浓缩温度50℃，离心转速1000 rpm，浓缩时间30 min；
实施例1所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.22%，提取产物福斯高林纯度为99.2%，提取率1.21%。
实施例2：
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：
1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，8 d后萌发长出无菌苗；
2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0 lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH 6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有5 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.8 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、4%琼脂的MS基础培养基；
2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取5 g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为5 mg/L，CO2流量为50 kg/h，萃取压力80 MPa，萃取温度25 ℃，萃取时间60 min，得到福斯高林初提液；
3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为20 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.20 MPa，过滤温度为35℃；
4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度60 KPa，浓缩温度35℃，离心转速3000 rpm，浓缩时间60 min；
实施例2所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.19%，提取所得福斯高林纯度为90.2%，提取率1.07%。
实施例3：
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：
1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，2 d后萌发长出无菌苗；
2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0 lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH 6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有3 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.1 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、0.8%琼脂的MS基础培养基；
2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取2 g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为20 mg/L，CO2流量为10 kg/h，萃取压力10 MPa，萃取温度35 ℃，萃取时间30 min，得到福斯高林初提液；
3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为100 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.30 MPa，过滤温度为30℃；
4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度80 KPa，浓缩温度60℃，离心转速2000 rpm，浓缩时间10 min；
实施例3所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.36%，进一步提取所得福斯高林纯度为94.7%，提取率1.29%。
实施例4：
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：
1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，4 d后萌发长出无菌苗；
2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0 lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH 6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有6 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.8 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、3%琼脂的MS基础培养基；
2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取1 g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为10 mg/L，CO2流量为50 kg/h，萃取压力100 MPa，萃取温度40 ℃，萃取时间180 min，得到福斯高林初提液；
3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为80 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.50 MPa，过滤温度为40℃；
4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度50 KPa，浓缩温度65℃，离心转速1800 rpm，浓缩时间90 min；
实施例4所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.19%，进一步提取所得福斯高林纯度为95.4%，提取率1.28%。
实施例5：
一种从毛喉鞘蕊花中提取福斯高林的制备方法，步骤如下：
1）取毛喉鞘蕊花根部切片，消毒后接种于MS培养基进行无菌萌发，6 d后萌发长出无菌苗；
2）切取无菌苗的胚根接入愈伤组织诱导培养基中黑暗（0 lx）培养7天，诱导出愈伤组织，培养温度25oC，培养基pH 6.0。所述愈伤组织诱导培养基为含有8 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、1 mg/L 6-糠基氨基嘌呤、1.5%琼脂的MS基础培养基；
2）将愈伤组织于50oC真空干燥箱中干燥至恒重，称取1 g干燥后的愈伤组织于超临界CO2萃取罐中，加入乙醇作为夹带剂，控制乙醇添加量为12 mg/L，CO2流量为25 kg/h，萃取压力75 MPa，萃取温度30 ℃，萃取时间90 min，得到福斯高林初提液；
3）上述过程中提取的福斯高林初提液通过膜孔径为60 nm的聚偏氟乙烯超滤膜过滤，控制过滤压力为0.35 MPa，过滤温度为30oC；
4）过滤液经真空浓缩得到福斯高林样品，真空度50 KPa，浓缩温度45℃，离心转速2500 rpm，浓缩时间45 min；
实施例5所得毛喉鞘蕊花愈伤组织中福斯高林含量为1.23%，进一步提取所得福斯高林纯度为93.7%，提取率1.35%。