一种检测遗传性血管疾病致病基因的DNA文库及其应用的制作方法

文档序号:12743909阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于诊断遗传性血管疾病的DNA文库,其特征在于,所述DNA文库包括序号为1-103的至少一个基因。

2.如权利要求1所述的DNA文库,其特征在于,所述DNA文库包括下列任意一组或者多组基因:序号为1-16的基因,序号为17-33的基因,序号为34-39的基因,和/或序号为40-103的基因,优选的,所述DNA文库包括序号为1-103的基因。

3.如权利要求1或者2的DNA文库,其特征在于,所述DNA文库还包括序号为104-151的至少一个基因,优选的,所述DNA文库还包括下列任意一组或者多组基因:序号为104-105的基因,序号为106-109的基因,序号为110的基因,序号为111的基因,序号为112-114的基因,序号为115的基因,序号为116的基因,序号为117的基因,序号为118-123的基因,序号为124的基因,序号为125-133的基因,序号为134-147的基因,序号为148-150的基因和/或序号为151的基因。

4.如权利要求3的DNA文库,其特征在于,所述DNA文库包括下列任意一组或者多组基因:序号为1-16,112-114的基因,序号为17-33,125-133的基因,序号为34-39,134-147的基因,序号为40-103,148-150的基因,序号为104-105的基因,序号为106-109的基因,序号为110的基因,序号为111的基因,序号为115的基因,序号为116的基因,序号为117的基因,序号为118-123的基因,序号为124的基因,和/或序号为151的基因,优选的,所述DNA文库包括序号为1-151的基因。

5.一种权利要求1-4任意的DNA文库的检测试剂,优选的,所述试剂是能扩增上述DNA文库的引物,更优选的,所述引物为,根据上述DNA文库,设计能覆盖上述基因外显子及毗邻调控区域的适用于超多重PCR的引物池,从而能对样本基因组DNA进行超多重PCR扩增。

6.权利要求1-4任意所述的DNA文库或者权利要求5的检测试剂在制备诊断试剂盒中的应用,其特征在于,所述试剂盒用于诊断遗传性血管疾病。

7.权利要求1-4任意所述的DNA文库或者权利要求5的检测试剂在制备诊断装置中的应用,其特征在于,所述诊断装置用于诊断遗传性血管疾病,优选的,所述诊断装置是基因芯片。

8.如权利要求6-7任意权利要求所述的应用,其特征在于,所述应用包括下列步骤:

(1)提供受试者样本的基因组DNA;

(2)从Ion TorrentTM高通量测序平台自动合成覆盖上述致病基因的扩增引物池,对目标区域进行超多重PCR扩增;

(3)对步骤(2)得到的扩增产物进行酶切;

(4)对步骤(3)得到的酶切产物加Barcode接头;

(5)对步骤(4)得到的连接产物进行纯化;

(6)对步骤(5)得到的纯化产物用通用引物进行二次扩增;

(7)对步骤(6)得到的二次扩增产物进行片段选择及浓度测定,即建成患者目标区域扩增文库;

(8)对步骤(7)所得到的文库经过油包水PCR扩增反应后,将待测序目的片段连接于ISP珠子,得到反应液;

(9)将步骤(8)得到的包含ISP珠子的反应液点入芯片,上Ion TorrentTM高通量测序进行测序;

(10)将步骤(9)得到的碱基序列信息进行生物信息学比对处理,得到与疾病相关的突变位点;

(11)对步骤(10)得到的突变位点进行Sanger测序法验证。

9.一种诊断试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1-4任意所述的DNA文库或者权利要求5的检测试剂。

10.一种诊断装置,其特征在于,所述装置包括权利要求1-4任意所述的DNA文库或者权利要求5的检测试剂,优选的,所述诊断装置是基因芯片。

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