本发明属于生物医药领域，涉及盐酸洛非西定的新用途，具体涉及一种盐酸洛非西定的药物组合物及其医药用途。
背景技术：
：盐酸洛非西定临床用于减轻或解除阿片类药物的戒断综合症。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种盐酸洛非西定的药物组合物，该药物组合物中含有盐酸洛非西定和一种天然产物，盐酸洛非西定和该天然产物可以协同治疗便秘。本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，一种盐酸洛非西定的药物组合物，包括盐酸洛非西定、如权利要求1所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。上述化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将玉竹粉碎，用75～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱10个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集10～15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，步骤(a)用80％乙醇热回流提取，合并提取液。进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃取，得到二氯甲烷萃取物。上述化合物(Ⅰ)在制备治疗便秘的药物中的应用。上述盐酸洛非西定的药物组合物在制备治疗便秘的药物中的应用。本发明的优点：本发明提供的盐酸洛非西定的药物组合物中含有盐酸洛非西定和一种结构新颖的天然产物，盐酸洛非西定、化合物(Ⅰ)单独作用时，对大鼠便秘具有治疗作用；盐酸洛非西定和化合物(Ⅰ)联合作用时，对大鼠便秘的治疗效果进一步提高，可开发成治疗便秘的药物。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。分离方法：(a)将玉竹(2kg)粉碎，用80％乙醇热回流提取(15L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用10％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱10个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为60:1(10个柱体积)、30:1(8个柱体积)、15:1(10个柱体积)和5:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(10个柱体积)、4:1(8个柱体积)和2:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集10～15个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(纯度大于98％)。结构确证：HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z237.1769，结合核磁特征可得分子式为C15H24O2，不饱和度为4。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-2α(1.79，m)，H-2β(2.01，m)，H-3α(1.69，m)，H-3α(2.22，m)，H-5(2.24，br，t，J＝7.8Hz)，H-6α(2.16，br，d，J＝12.6Hz)，H-6β(2.26，ddd，J＝12.6，7.8，1.8Hz)，H-8α(1.89，m)，H-8β(1.76，m)，H-9α(2.03，dd，J＝7.5，4.6Hz)，H-9β(2.15，m)，H-12(1.17，s)，H-13(1.24，s)，H-14(1.87，s)，H-15(1.34，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CDCl3，125MHz)：123.6(C，1-C)，32.2(CH2，2-C)，39.9(CH2，3-C)，93.3(C，4-C)，55.7(CH，5-C)，33.8(CH2，6-C)，94.6(C，7-C)，29.9(CH2，8-C)，34.8(CH2，9-C)，120.8(C，10-C)，74.2(C，11-C)，24.1(CH3，12-C)，25.2(CH3，13-C)，33.7(CH3，14-C)，29.8(CH3，15-C)。红外光谱(3374cm-1)表明该化合物含有羟基基团。化合物的氢谱中显示该化合物有四个单峰甲基信号(δH1.17，1.24，1.87和1.34)。该化合物的碳谱显示15个碳信号，其中有一组双键碳信号，以及三个连氧碳信号。综合高分辨质谱以及核磁数据，该化合物可能为一个倍半萜类化合物。查阅文献可以看出该化合物和已知化合物4α,7α-Epoxyguaiane-10α,11-diol具有相似的结构。比较两者的核磁数据发现，新化合物中相较于4α,7α-Epoxyguaiane-10α,11-diol唯一的区别是多出了一组双键碳信号。在新化合物的HMBC谱中，H-9/C-10，H-9/C-14以及H-14/C-1的相关性说明C-10和C-1位之间为双键。因此，该化合物仍然是一个C-4、C-7位形成氧桥的愈创木烷型倍半萜。ROESY谱中H-5与H-15，H-6β与H-12的相关性表明H-5和H-15为β构型，C-4和C-7的氧桥为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：实施例2：药理作用本实施例用盐酸吗啡制备大鼠便秘模型，探讨药物对便秘大鼠模型血清及结肠组织中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)水平影响。1、材料与方法1.1动物7周龄SD大鼠60只，SPF级，雌雄各半，购自北京实验动物中心。饲养条件：雌雄分开饲养，每笼6只，室温(20±2)℃，相对湿度(60±10)％。所有大鼠自由进食进水。1.2试剂与样品盐酸洛非西定购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。NO、SOD、MDA、GSH试剂盒均购自上海荣盛生物制品研究所，盐酸吗啡购自东北制药有限公司，粉末活性炭购自天津药业有限公司。1.3大鼠分组及模型制备大鼠随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、盐酸洛非西定组(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(80mg·kg-1)、盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组【40mg·kg-1盐酸洛非西定+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。适应性喂养7d后，除正常组每天皮下注射3.0mg/kg蒸馏水外，其余组每天皮下注射盐酸吗啡3.0mg/kg，连续注射40d，1次/d，制作大鼠便秘模型。造模成功后，正常组、模型组蒸馏水10mL/kg灌胃，盐酸洛非西定组、化合物(Ⅰ)组、盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组按上述剂量灌胃给药。1.4血清NO、MDA、SOD、GSH水平检测大鼠灌胃4周，禁食不禁水12h，乙醚麻醉，毛细玻璃管从眼底静脉丛采血，分离血清，4℃保存。根据试剂盒说明书方法，对大鼠血清中NO、MDA、SOD、GSH水平进行测定。1.5结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平检测处死大鼠后，解剖分离出大肠，生理盐水冲洗干净，称取结肠组织0.3g，以生理盐水研磨成10％的匀浆液。离心后提取上清液，-20℃保存。根据试剂盒说明书中的方法对大鼠结肠组织匀浆液中NO、MDA、SOD、GSH水平进行测定。1.6统计学方法实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差分析和t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。2、实验结果2.1对便秘模型大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平的影响与正常组相比，模型组大鼠血清中NO、MDA水平均上升，SOD、GSH水平均下降(P＜0.05)，表明大鼠便秘模型造模成功。与模型组相比，盐酸洛非西定组和化合物(Ⅰ)组NO、MDA水平降低，SOD、GSH水平升高(P＜0.05)，盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组NO、MDA水平显著降低(P＜0.01)，SOD、GSH水平显著升高(P＜0.01)。见表1。表1各组大鼠血清NO、MDA、SOD、GSH水平比较(μmol/L)组别NOSODMDAGSH正常对照组12.67±3.944.12±0.982.66±0.7512.69±2.15模型对照组20.69±5.972.69±0.844.49±0.855.67±1.06盐酸洛非西定组16.68±7.613.16±0.753.07±0.879.68±2.11化合物(Ⅰ)组16.34±5.813.64±0.842.95±0.999.96±2.10盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组13.36±7.514.18±0.942.56±0.7812.04±3.012.2对便秘模型大鼠结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平的影响与正常组相比，模型组血清中NO、MDA水平上升，SOD、GSH水平下降(P＜0.05)。与模型组相比，盐酸洛非西定组和化合物(Ⅰ)组NO、MDA水平降低，SOD、GSH水平升高(P＜0.05)，盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组NO、MDA水平显著降低，SOD、GSH水平显著升高(P＜0.01)。结果见表2。表2对便秘模型大鼠结肠组织NO、MDA、SOD、GSH水平的影响(μmol/L)组别NOSODMDAGSH正常对照组3.18±0.842.17±0.411.68±0.5110.65±1.67模型对照组5.63±0.740.89±0.153.03±0.785.92±1.06盐酸洛非西定组4.04±0.881.48±0.432.65±0.477.96±2.67化合物(Ⅰ)组3.96±0.711.62±0.272.06±0.597.63±1.61盐酸洛非西定与化合物(Ⅰ)组合物组2.77±0.462.23±0.411.58±0.4810.81±2.68便秘是临床上以排便次数减少、排便困难、粪便过硬等为主要表现的一种常见慢性消化道症状。由于硬粪的长期滞留和刺激，结肠黏膜常有不同程度的炎性改变，从而引发一系列的氧自由基反应和脂质过氧化反应；便秘引起的炎症反应会产生大量的氧自由基，从而导致细胞膜不饱和脂肪酸脂质过氧化程度的加重。NO是一种由血管内皮细胞释放的新型信号分子，有强烈扩张血管的作用，从而广泛参与机体生理病理机能的调节。过高的NO水平会使肠管平滑肌松弛，大肠传导减慢，从而引起肠道运动的异常，引起便秘。NO在生成时产生了大量的氧自由基，这些自由基使脂质氧化，并影响线粒体电子传递功能，造成组织细胞损伤。调节NO在体内的浓度从而恢复大肠生理机能和传导功能，对肛肠疾病的治疗具有重要的临床意义。NO在体内可分解为羟自由基和NO2-自由基。这两种自由基具有很强的氧化性，可加剧SOD、GSH的分子结构损伤，促使其合成和再生减少，显著减弱了SOD、GSH等抗氧化酶清除自由基的能力，从而对机体产生更大的细胞毒性。SOD、GSH能有效地清除细胞代谢过程中产生的氧自由基，终止自由基连锁反应。SOD活性随着机体的老化而降低，故测定该酶活性可作为检测机体抗氧化能力和衰老的一个定量指标。机体内另一类具有清除氧自由基抗衰老作用的酶系是GSH，它对防止机体内氧自由基引起脂质过氧化反应特别重要。SOD、GSH等酶系在机体内发挥协同作用，具有减轻和阻断脂质过氧化反应、保护机体免受各类氧自由基的侵害、延缓衰老等作用，是评价细胞受损与否的重要指标。所以，测定SOD、GSH等酶系是衡量药物抗氧化作用的重要方法之一。本实验便秘模型组大鼠血清与结肠组织中NO、MDA水平高于正常组，SOD、GSH水平低于正常组，表明过氧化反应是便秘产生的重要机制之一。结果表明，盐酸洛非西定、化合物(Ⅰ)单独作用时，对大鼠便秘具有治疗作用；盐酸洛非西定和化合物(Ⅰ)联合作用时，对大鼠便秘的治疗效果进一步提高，可开发成治疗便秘的药物。上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。当前第1页1 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