本发明涉及医药领域，尤其涉及一种制备替加环素的方法。
背景技术：
：替加环素，化学名为(4S，4aS，5aR，12aS)-9-(2-(叔丁基氨基)乙酰氨基)-4，7-双(二甲基氨基)-1，4，4a，5，5a，6，11，12a-八氢-3，10，12，12a-四羟基-1，11-二氧-2-萘并萘甲酰胺，俗称老虎素，对有抗药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、抗万古霉素肠球菌、耐多药肺炎链球菌、多重抗药性结核杆菌等均有效，已被批准用于18岁及18岁以上复杂皮肤和皮肤结构感染或者复杂腹内感染患者的治疗，包括复杂阑尾炎、烧伤感染、腹内脓肿、深部软组织感染及渍疡感染。目前，替加环素获批的剂型仅有冻干粉，作为注射剂，其对产品质量要求极高，尤其需要严控杂质。制备替加环素所用的原料主要是米诺环素，也有使用其他原料，如6-去甲金霉素的，但使用其他原料会导致工艺较长，所用试剂腐蚀性强、污染较大，不适合大规模生产。以米诺环素为原料时，通常先通过硝化、还原、盐转换制得9-氨基米诺环素盐酸盐，然后通过两步或一步反应接上N-叔丁基甘氨酰侧链，其中：两步反应通常是先与溴乙酰溴或O(COCH2Cl)进行酰化反应，再与叔丁胺反应制得替加环素；一步反应通常是与N-叔丁基甘氨酰氯缩合得到替加环素，也有通过N-叔丁基甘氨酸在缩合剂作用下得到替加环素，但有文章指出缩合剂会导致自身的聚合反应，CN104230744亦强调要避免使用缩合剂，使用缩合剂会导致副产物较难分离、产品质量差、C4异构体杂质含量大，CN104230744提供的工艺则是不用缩合剂，改通过与N-叔丁基甘氨酸的酸酐缩合制得替加环素。技术实现要素：本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种适合工业化应用的替加环素制备方法。本发明的制备方法包括：9-氨基山环素与N-叔丁基甘氨酸,在缩合剂作用下缩合，再经硝化、还原甲基化，制得替加环素。9-氨基山环素可直接购买或通过氨基化山环素制得；缩合反应中可加入缚酸剂，如吡啶、三乙胺(TEA)或二异丙基乙胺(DIPEA)，缚酸剂可预先处理N-叔丁基甘氨酸以使反应更快进行。优选地，所述缩合剂为1,1’-硫代碳酰基二咪唑和/或N,N’-羰基二咪唑。优选地，所述缩合剂与N-叔丁基甘氨酸的摩尔比为1:1～3，更优选为1:2。优选地，所述缩合反应的温度为10～30℃，更优选为20℃。优选地，所述9-氨基山环素与N-叔丁基甘氨酸的摩尔比为1:1.2～1.8，更优选为1:1.5。优选地，所述还原甲基化反应在Pd/C、甲醛和氢气存在下进行，所述还原甲基化反应的温度可为10～30℃，优选为20℃；氢气气压为1.5～2.5atm，优选为2atm。优选地，所述硝化反应在硝酸钾、浓硫酸作用下进行。优选地，所述还原甲基化反应后，是通过将所得反应液加入到甲醇与丙酮的混合液中析晶而制得替加环素：甲醇与丙酮的体积比可为1.2～1.8:1，优选为1.5:1；析晶温度可在0℃以下；析晶时间视固体析出速度而定，可为1h。本发明的有益效果包括：(1)另辟蹊径，采用9-氨基山环素为原料，反应步骤少，操作简便，大大提高了目标产物的收率；(2)克服了现有技术的偏见，使用N-叔丁基甘氨酸在缩合剂作用下缩合，并令人意外地发现，无需复杂的处理过程即得到高纯度的产品，收率、纯度比N-叔丁基甘氨酸的酸酐缩合工艺高，而使用1,1’-硫代碳酰基二咪唑作缩合剂时效果更好。具体实施方式为了更好地说明本发明及其所取得的效果，下面将结合具体实施例来做进一步说明，但本发明的范围并非局限于实施例的具体方案。实施例1:100mlDMF中加入15mmol的N-叔丁基甘氨酸，搅拌下加入5mmol的1,1’-硫代碳酰基二咪唑和5mmol的TEA，继续搅拌20min，接着加入10mmol的9-氨基山环素，20℃下搅拌反应，HPLC监测反应进度；缩合反应3h后，冰浴，然后加入50ml浓硫酸(硫酸摩尔量为90mmol)，分批缓慢分批加入KNO3(共计15mmol)，继续在冰浴条件下搅拌反应1h，滴加异丙醚至固体充分析出，氮气保护下过滤，得滤饼；将滤饼转移到200ml乙二醇甲醚溶液(溶液中水的体积分数为10％)中，加入1g担载量10％的Pd/C、30ml质量分数40％的甲醛水溶液，在20℃、2atm的氢气压力下搅拌反应10h，过滤，搅拌下将滤液缓慢加到150ml甲醇与100ml丙酮的混合液中，降温至0℃，继续搅拌1h使固体充分析出，过滤后用甲醇淋洗，干燥后得到橙色固体5.548g，检测确定为替加环素，纯度为95％，C4差向异构体含量为0.20％，替加环素摩尔收率为90％。LCMS(M+H+)：5861H-NMR(DMSO-d6+D2O)：δ1.0(s,9H),1.4(dd,1H),1.9-2.0(m,1H),2.2(t,1H),2.4-2.5(m,2H),2.7-2.9(m,1H),3.1-3.2(dd,1H),3.4(s,2H),3.6(s,12H),8.3(s,1H,8-H)。实施例2:将实施例1的1,1’-硫代碳酰基二咪唑替换为N,N’-羰基二咪唑，其他条件相应不变，最后制得固体5.857g，其核磁数据基本同实施例1，即产品亦为替加环素，经检测，其纯度为85％，C4差向异构体含量为0.40％，替加环素摩尔收率为85％。实施例3:将实施例1中1,1’-硫代碳酰基二咪唑的用量替换为7.5mol、15mol，其他条件相应不变，所得替加环素的结果对比如下：缩合剂用量收率纯度C4杂质含量7.5mmol95％98％0.05％15mmol93％95％0.10％对比例：将实施例1的N-叔丁基甘氨酸替换为其酸酐，同时不使用实施例1中的1,1’-硫代碳酰基二咪唑而直接进行缩合，结果发现缩合反应需要数十小时，最终所得替加环素产物的纯度不高于75％，C4杂质含量达2％，总收率经计算低于60％。当前第1页1 2 3