一种伽氏疏螺旋体多克隆抗体及应用的制作方法

文档序号:12242701阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种伽氏疏螺旋体多克隆抗体,其特征在于,所述伽氏疏螺旋体多克隆抗体通过以下方法制备得到:

(1)抗原制备:将伽氏疏螺旋体菌株接种至BSK-II培养基,在33-37℃、体积浓度为5%的CO2恒温培养箱培养至菌体浓度1-2×108cfu/ml,获得培养液;然后将培养液在4℃、3200rcf离心25min,收集沉淀并用NaCl水溶液重悬清洗两次;接着用含甲醛的NaCl水溶液重悬菌体后于60℃水浴中温育约1h,并不时摇动;4℃、3200rcf离心约25min,收集菌体沉淀,再用NaCl水溶液洗涤三次,获得伽氏疏螺旋体菌体抗原;所述NaCl水溶液中,NaCl的质量浓度为0.9%;所述含甲醛的NaCl水溶液中,甲醛的质量浓度为0.3%-0.5%;

(2)动物免疫:获得的伽氏疏螺旋体菌体抗原用质量浓度为0.9%的NaCl水溶液重悬,免疫注射用菌体抗原悬浮液浓度5×108-10×108cfu/ml;首次免疫,取500μl悬浮液与等量弗氏完全佐剂乳化混合,于新西兰大白兔背部多点皮内注射;第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫均取500μl悬浮液与等量弗氏不完全佐剂乳化混合,于新西兰大白兔背部多点皮内注射;首次免疫、第二次免疫、第三次免疫、第四次免疫注射时间间隔分别为21天、14天、7天;

(3)血清获取:第四次免疫完成后7天,用质量浓度为5%-15%的水合氯醛的水溶液,按照5-10ml/kg的剂量麻醉新西兰大白兔,用采血针进行颈动脉采集全血;全血室温凝固后,4℃放置过夜,3000rcf离心约10min,吸取上清,得伽氏疏螺旋体多克隆抗体,-80℃保存备用。

2.一种权利要求1所述伽氏疏螺旋体多克隆抗体在制备莱姆病螺旋体的检测试剂中的应用。

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