本发明属于天然产物化学领域，具体涉及了一种从迷送香中提取分离抗氧化物，其主要活性成分迷迭香精油、迷迭香酸、熊果酸和鼠尾草酸的方法。
背景技术：
抗氧化剂是用于阻止或延缓动植物油脂、含油食品、方便面、肉类制品和饮料等产品的氧化，延长产品储存期，或达到保鲜目的而加入食品中的添加剂抗氧化剂主要分为天然抗氧化剂和合成抗氧化剂两类。研究者曾对人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂进行高剂量动物试验，结果表明合成抗氧化剂不仅会明显引起肝肿大，还会增加肝和肺微粒体酶的活性，从而使人体摄取的其他物质转变成有毒物质或致癌物美国已从普遍公认安全(gras)的产品中取消对合成抗氧化剂的使用，日本已经禁止合成抗氧化剂的使用，许多国家也相继对合成抗氧化剂的使用进行了限制。因此，从自然界中寻求天然抗氧化剂的研究引起了各国科学家的高度重视。
迷迭香，别名艾菊，属唇形科亚灌木或多年生草本香料植物，原产于地中海地区作为香辛料。迷迭香已经被广泛应用于食品工研究显示，迷迭香提取物是一种高效、理想的天然抗氧化剂，其有效成分为双酚类二萜(鼠尾草酸和鼠尾草酚是主要的活性成分)，可用于油类制品、肉禽制品、海产品、休闲食品以及香幸料等产品中。迷迭香味辛辣、微苦，常被使用在烹饪上，也可用来泡花草茶喝。古代认为迷迭香能增强记忆，目前公认的最具各有抗氧化作用的植物迷迭香中的抗氧化成分主要为鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、熊果酸、迷迭香酸等成分。
迷迭香提取物具有安全、高效、耐热、广谱的抗氧化性能，己成为近年来食品抗氧化剂研究开发的重点之一。除此之外，迷迭香精油成分在医药保健方面的功能，如消炎、抗肿瘤、抗癌、治疗心血管疾病、保肝降酶等方面也受到了国内外广大科研工作者的极大关注。国内文献资料表明，迷迭香抗氧化成分主要为萜类、酚类和酸类物质。从迷迭香中分离出的迷迭香精油是欧洲传统香料。此外，迷迭香精油还具有杀菌、杀虫等功效，广泛用于香水、浴液、化妆品、洗发水、空气清新剂、驱蚁剂等日用化工品。作为香料，迷迭香己经广泛地应用于食品工业，国内外对其提取物在食品保鲜、护色、稳定油脂以及稳定肉制品风味等方面做了大量的较为深入的研究，结果均显示了迷迭香抗氧化剂无可比拟的优越性能。
中国发明专利说明书cn102031116a中公开了一种迷迭香天然抗氧化剂的制备新方法，首先将迷迭香干草粉碎过80～100目筛，室温下于水中浸润6～10小时，蒸馏法回收迷迭香精油，然后对蒸馏后的残渣和水溶液用ph4～5的丙酮溶液于50～70℃动态提取1～2小时，丙酮的体积百分浓度≥50％，分离得到提取液，提取液中和后脱溶、浓缩得到含水的浸膏提取物，最后对浸膏提取物用超临界co2萃取分离，压力15～24mpa，温度45～60℃，卸压后自分离釜中得到纯度80％以上的高纯的迷迭香抗氧化剂。
中国发明专利说明书cn102115442a中公开了一种从迷迭香叶提取物中分离鼠尾草酸的方法，该方法具体步骤为：将柱层析硅胶分散在磷酸-乙醇溶液中，抽真空，再超声浸润，然后回收乙醇，烘干得磷酸-硅胶固定相；磷酸-硅胶固定相装填至已通入高纯氮气保护的层析柱管中，得到磷酸-硅胶层析柱；将迷迭香叶提取物溶于乙酸乙酯中，加入磷酸-硅胶固定相，充分搅拌后回收乙酸乙酯，得到吸附迷迭香叶提取物的固定相，将吸附迷迭香叶提取物的固定相加入到磷酸-硅胶层析柱中，洗脱，收集馏分并真空干燥后得到鼠尾草酸。该发明只需一次过柱就将鼠尾草酸单独分离出来，过柱时间短，纯度可达92％，有利于产品在市场中的应用。
中国发明专利说明书cn102604640a介绍了迷迭香的提取与利用。该发明所述的迷迭香的综合提取与制备脂溶性速溶抗氧化剂的方法，具体包括如下步骤：采用荫干的迷迭香嫩茎或叶片为原料，切碎，水蒸气蒸馏，得到迷迭香精油和蒸馏残留物；对蒸馏残留物用乙醇渗漉提取，对提取液进行回收乙醇处理，水相得水溶性抗氧化剂，沉淀用低沸点溶剂溶解，脱色后按将鼠尾草酸转溶到食用油中；浓缩，回收溶剂，得到鼠尾草酸含量占5～20％的脂溶性速溶抗氧化剂产品。该发明所述方法具有得率高、原料利用充分、生产成本低等优点，同时大幅改善了迷迭香抗氧化剂产品的应用性能，使迷迭香抗氧化剂的使用更方便、高效。
中国发明专利说明书cn103102384a介绍了一种从迷迭香中提取高纯度熊果酸的方法，主要包括以下步骤：a、将迷迭香叶粉碎提取鼠尾草酸后的下脚料，加入乙醇进行提取，过滤，得滤液，在滤液中加入活性炭脱色，过滤，浓缩，搅拌中加入2～5倍体积的水析出沉淀，过滤，得熊果酸粗提物；b、向步骤a中的熊果酸粗提物中加入有机溶剂溶解，加二乙胺或三乙胺回流反应成盐，冷却室温，过滤，得胺盐；c、将步骤b中的胺盐加入水中使之溶解，加入异丙醚，用稀酸调节ph值至2～5，维持20～40℃一小时，过滤，滤饼干燥；d、步骤c中干燥完成后的滤饼加入甲醇溶解，加中性氧化铝脱色，过滤，滤液浓缩，降温至-10～20℃结晶，离心，洗涤，干燥即得熊果酸成品。
中国发明专利说明书cn103772473a中公开了一种真空脉动式提取纯化熊果酸的方法，该方法主要包括以下步骤：(1)将原料药材迷迭香干燥并粉碎；(2)以20-90％的乙醇为溶剂对物料进行真空脉动式回流提取，提取液进行浓缩，备用；(3)将浓缩后的熊果酸提取液用d101大孔树脂吸附后超声解析，再经浓缩、两次结晶和干燥后即得90-98％的熊果酸产品。该发明的整个工艺过程在没有用乙醇以外的任何有机溶剂的情况下，做到了对熊果酸的高效、绿色提取，最终得到的熊果酸产品具有抑菌、抗肿瘤、消炎等活性，应用前景广阔。
上述方法虽各有优点，但是它们也存在一些不足，例如均无法在一个生产流程中同时实现迭香精油、迷迭香酸、熊果酸和鼠尾草酸的分类提取，且条件较为苛刻，常需在真空、有毒或酸碱条件下进行，流程较为复杂，成本较高，也会给操作人员的健康以及外界环境带来一些不良问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种从迷迭香中提取分离迷迭香精油、迷迭香酸、熊果酸和鼠尾草酸的方法,该提取方法工艺简单，操作方便，成本低，收率高，适合于工业化大规模从迷迭香中提取分离迭香精油、迷迭香酸、熊果酸和鼠尾草酸。
本发明的从迷迭香中提取分离迷迭香精油、迷迭香酸、熊果酸和鼠尾草酸的方法，包括如下步骤：
(1)将迷迭香干叶粉碎后，直接置于10倍体积的水溶液中，升温蒸馏0.5h，收集馏出物，获得迷迭香精油；
(2)蒸馏完毕后，在残留物中加入8倍体积的75％乙醇溶液，在60℃条件下提取2h，过滤得滤液a；再向滤渣中继续加入6倍体积的75％乙醇溶液，在60℃条件下提取1h，过滤得滤液b；
(3)合并滤液a和滤液b，浓缩至无醇味，离心，获得固体部分和水相部分；
(4)对水相部分进行浓缩喷雾处理，获得干燥物迷迭香酸；
(5)在固体部分中加入60％乙醇溶液，溶解后，继续离心，重复三次，获得固体干燥物熊果酸；对液体部分进行浓缩干燥处理，获得鼠尾草酸。
进一步地，所述步骤2中过滤过程均采用陶瓷膜过滤两次。
进一步地，所述步骤3和步骤5中离心机转速为3000r/min。
本发明相对于现有技术的有益效果为：
(1)提取工艺简单，且绿色环保，全程未使用对人体或环境有害的化学试剂，适于工业化生产。
(2)提取效率高，在一个生产流程中一次性同时提取分离出高含量的迷迭香精油、熊果酸、迷迭香酸和鼠尾草酸，大大地降低生产成本低，提高了其经济效益。
附图说明
图1是含量为99.30％的熊果酸标准品的hplc图谱,其中纵坐标表示峰面积,横坐标表示分离时间。
图2是含量为25.09％的熊果酸样品的hplc图谱，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
图3是含量为98.24％的迷迭香酸标准品的hplc图谱，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
图4是含量为5.13％的迷迭香酸样品的hplc图谱，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
图5是含量为98.46％的鼠尾草酸标准品的hplc图谱，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
图6是含量为30.21％的鼠尾草酸样品的hplc图谱，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
称取100kg的干迷迭香，粉碎，置于1000l(v/v)水中，升温蒸馏半小时，收集馏出物，获得0.97kg迷迭香精油；蒸馏完后，在迷迭香叶残留物中加入800l(v/v)75％乙醇溶液，在60℃条件下提取2小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液a；在滤渣继续加入600l(v/v)75％乙醇溶液，60℃提取1小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液b；合并滤液a和滤液b，浓缩滤液至无醇味，以3000r/min的转速进行离心，获得水相部分和固体部分，将水相部分继续浓缩喷雾，获得干燥物迷迭香酸9.85kg；在固体部分加入60％乙醇溶液，溶解后，继续以相同转速离心，重复三次，将所得固体部分干燥后，获得7.56kg熊果酸；液体部分经浓缩干燥后，获得7.62kg鼠尾草酸。
检测设备为waters1525高效液相色谱仪，色谱柱为hypersilods(150mmx4.6mm，5μ)。检测条件：流动相为甲醇：(0.1％磷酸水(17.5％)：乙腈(82.5％))＝60：40(v/v)，检测波长为205nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl，检测干燥物熊果酸含量为25.09％，其hplc图谱如图2所示。
检测条件：流动相为甲醇：1％甲酸水溶液＝45:55(v/v)，检测波长为330nm，流速为0.8m1/min，柱温为30℃，进样量为10μl，检测迷迭香酸的含量为5.13％，其hplc图谱如图4所示。
检测条件：流动相为乙腈：0.1％磷酸＝60:40，检测波长为285nm，流速为1.0ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl，检测鼠尾草酸的含量为30.21％，其hplc图谱如图6所示。
实施例2
称取150kg的干迷迭香，粉碎，置于1500l(v/v)水中，升温蒸馏半小时，收集馏出物，获得1.52kg迷迭香精油；蒸馏完后，在迷迭香叶残留物中加入1200l(v/v)75％乙醇溶液，在60℃条件下提取2小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液a；在滤渣继续加入900l(v/v)75％乙醇溶液，在60℃条件下提取1小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液b；合并滤液a和滤液b，浓缩滤液至无醇味，以3000r/min的转速进行离心，获得水相部分和固体部分，将水相部分继续浓缩喷雾，获得干燥物迷迭香酸14.64kg；在固体部分加入60％乙醇溶液，溶解后，继续以相同转速离心，重复三次，将所得固体部分干燥后，获得11.04kg熊果酸；液体部分经浓缩干燥后，获得11.32kg鼠尾草酸。
按照实施例1的方法进行检测，接触结果显示：干燥物熊果酸含量为25.12％，迷迭香酸的含量为5.16％，鼠尾草酸的含量为30.07％。
实施例3
称取200kg的干迷迭香，粉碎，置于2000l(v/v)水中，升温蒸馏半小时，收集馏出物，获得1.92kg迷迭香精油；蒸馏完后，在迷迭香叶残留物中加入1600l(v/v)75％乙醇溶液，在60℃条件下提取2小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液a；在滤渣继续加入1200l(v/v)75％乙醇溶液，60℃提取1小时，陶瓷膜过滤2次，获得滤液b；合并滤液a和滤液b，浓缩滤液至无醇味，以3000r/min的转速进行离心，获得水相部分和固体部分，将水相部分继续浓缩喷雾，获得干燥物迷迭香酸20.11kg；在固体部分加入60％乙醇溶液，溶解后，继续以相同转速离心，重复三次，将所得固体部分干燥后，获得15.74kg熊果酸；液体部分经浓缩干燥后，获得14.32kg鼠尾草酸。
按照实施例1的方法进行检测，接触结果显示：干燥物熊果酸含量为25.24％，迷迭香酸的含量为5.06％，鼠尾草酸的含量为30.26％。