一种黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法与流程

文档序号:12412350阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)将愈伤组织转移到液体培养基中进行振荡培养;

(2)添加添加诱导因子,获得高产黄酮的细胞;

(3)将高产悬浮细胞进行增殖培养;

(4)愈伤组织或悬浮细胞的干燥和粉碎;

(5)黄酮测量对照品制备,进行光谱扫描,确定测量波长;

(6)愈伤组织或悬浮细胞中总黄酮的提取条件优化,液料比、乙醇浓度、水浴温度、超声波最优时间的确定;

(7)黄花倒水莲愈伤组织或悬浮细胞总黄酮含量测定。

2.如权利要求1所述黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于所述步骤(2)中高产黄酮细胞的筛选包括以下步骤:

将步骤(1)中获得的愈伤组织接种于液体培养基中,所述的培养基为:MS+0.5mg·L-1 2,4-二氯苯氧乙酸+0.1mg·L-1苄氨基嘌呤+蔗糖30g·L-1,pH为5.8-6.0,黑暗条件下振荡培养,培养条件为温度25±1℃,摇床的转速110-130转/分钟,3周继代一次,继代3-5次,得到液体悬浮培养细胞。

3.如权利要求2所述黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于:在液体培养基中加入适量的诱导因子,所述的诱导因子为50-100mg·L-1柠檬酸+20-60mg·L-1苯丙氨酸+ 100-200mg·L-1乙酸钠。

4.如权利要求1所述黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于所述步骤(4)包括以下步骤:

将收获的黄花倒水莲愈伤组织或悬浮细胞置于50-60℃的恒温烘箱中干燥至恒重后,用粉碎机打碎,过80-100目筛,收集粉末备用。

5.如权利要求1所述黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于所述步骤(6)包括以下步骤:

称取黄花倒水莲愈伤组织或悬浮细胞粉末,分别放入圆底烧瓶中,加入乙醇,设置不同液料比,在50-90℃的恒温水浴中回流1-3 h后,用离心机离心后过滤,将滤液收集起来,在滤渣中加入10-25mL乙醇,振荡20-50min,然后用离心机离心后过滤,将滤液收集起来,滤渣再重复上述步骤1-2次,最后合并所有滤液,用漩涡蒸发仪浓缩并烘干,并进行超声波提取,将提取液进行蒸发,蒸发所得沉淀用乙醇溶解后,用乙醇定容。

6.如权利要求1所述黄花倒水莲细胞培养法制备黄酮类化合物的方法,其特征在于:所述的黄花倒水莲愈伤组织或悬浮细胞其总黄酮含量为25.0-33.3 mg·g-1

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