本发明属于生物制药领域,具体地说是采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品的方法。
背景技术：
绒促性素是从健康孕妇尿中提取、精制而成的一种天然促性腺激素，具有类似黄体生成素的功能。对女性可促进卵泡的成熟及排卵，并维持黄体的功能。对男性，能刺激睾丸间质细胞的发育，增加雄激素分泌，促使睾丸下降和男性第二性征发育。与尿促性素合用，可模拟生理性的促黄体生成素高峰，而触发排卵。临床上绒促性素至今仍是治疗月经失调、无排卵性不孕症、先兆流产和习惯性流产、隐睾症、男性性功能低下等的首选药物。
国际上从20年代就开始研究，1927年Zondek和Ascbheim首先发现妊娠妇女尿中存在着促性腺激素，1936年Brown和Venning找到在妊娠第60-80天，尿中绒促性素分泌达到最高峰。
1928年Zondek和Ascbheim 首先用乙醇沉淀法，从孕妇尿中取得了活性物质，其它研究者则进行应用吸附剂从尿中直接吸附绒促性素的研究，这包括1932年Katzman和Doisy用苯甲酸吸附法，1943年Katzman等人用人造沸石层析吸附法，1954年Loraine和Brown用高岭土吸附法，1959年难波修一等人用离子交换树脂吸附法等，用这些方法所取得的绒促性素再用各种纯化方法进行纯化。
技术实现要素：
本发明公开了采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品的技术方法，它包括以下步骤：溶解、预过滤、超滤、纳滤、冻干。
1、溶解：温度8-12℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，用pH值7.0的0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液溶解绒促性素粗品，比例为每kg绒促性素粗品加入15-25L pH值7.0的 0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌20-40分钟，得到绒促性素料液。
2、预过滤：将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。
3、超滤：将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的15%-20%，得到绒促性素超滤液。
4、纳滤：将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。
5、冻干：将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷2-3小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至30-35℃时即得绒促性素精品。
所述制得的绒促性素精品：收率≥80%，效价≥6000IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低≤5%。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：
采用磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液制造绒促性素精品, 制造过程在低温条件下进行，能有效减少长期高温条件对绒促性素活性的影响；通过一系列过滤方式，显著降低杂质含量；制造的绒促性素精品，收率≥80%，效价≥6000IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低≤5%，外观、理化、微生物限度等指标均达到或超过国内外相关药品标准；方法工艺简单，生产成本低，产量高，可工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
（1）温度8℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，1kg绒促性素粗品加入18L pH值7.0的0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌20分钟，得到绒促性素料液。
（2）将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。
（3）将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的15%，得到绒促性素超滤液。
（4）将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。
（5）将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷2小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至30℃时即得绒促性素精品。
检测制得的绒促性素精品：收率86%，效价6470IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低2%。
实施例2
（1）温度10℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，1kg绒促性素粗品加入20L pH值7.0的 0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌30分钟，得到绒促性素料液。
（2）将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。
（3）将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的18%，得到绒促性素超滤液。
（4）将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。
（5）将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷2.5小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至32℃时即得绒促性素精品。
检测制得的绒促性素精品：收率89%，效价6395IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低3%。
实施例3
（1）温度12℃条件下，并且在此后的预过滤、超滤、纳滤步骤维持这个温度，1kg绒促性素粗品加入24L pH值7.0的 0.1mol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，搅拌40分钟，得到绒促性素料液。
（2）将绒促性素料液用0.22μm滤芯预过滤，压力不超过0.2MPa，得到绒促性素过滤液。
（3）将绒促性素过滤液用10KD超滤膜进行超滤浓缩，压力不超过0.1MPa，浓缩体积至原体积的20%，得到绒促性素超滤液。
（4）将绒促性素超滤液用20nm的滤芯进行纳滤，压力不超过0.3MPa，得到绒促性素纳滤液。
（5）将绒促性素纳滤液放入真空冷冻干燥机速冻至温度为-50℃，开始抽真空至真空度为-0.1MPa，继续维持制冷3小时，然后将制冷变为加热，缓慢加热使纳滤液温度上升至34℃时即得绒促性素精品。
检测制得的绒促性素精品：收率87%，效价6428IU/mg，25℃温度条件下存放6个月效价降低3%。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。