一类来源于地骨皮的化合物，其制法及在降糖方面的应用的制作方法

本发明属于医药领域，具体涉及一系列从中药地骨皮中分离得到的结构新颖的c21甾体及其苷类化合物及其在防治糖尿病中的应用。

背景技术：

糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的终身性代谢性疾病，严重危害人类健康。在发达国家，糖尿病已成为仅次于心血管疾病，恶性肿瘤的第三位致死病因疾病，近年来我国糖尿病患病率的上升趋势有所加剧。各种原因造成胰岛素供应不足或胰岛素在靶细胞不能发挥正常生理作用，使体内糖、蛋白质及脂肪代谢发生紊乱，就发生了糖尿病。

胰岛β细胞破坏致胰岛功能不足、丧失是1型和2型糖尿病共同的核心病机。在正常的生理条件下胰岛是一个完整的独立的功能单位，能够敏感地响应血糖浓度变化，分泌激素维持血糖浓度平衡。i型糖尿病的病因是由于胰岛β细胞受到破坏，自身不能合成和分泌足够胰岛素、产生准确的胰岛素应答。ii型糖尿病以外周组织胰岛素抵抗为特征，同时伴有胰腺β细胞分泌模式异常的现象。长期的研究观察到，β细胞的功能在ii型糖尿病早期即有损害。胎儿期营养不良可损害β细胞的功能并导致胰腺生长缓慢。针对这一发病机理，临床上也出现了一些胰岛素制剂及胰岛素增敏剂，但是至今尚无任何一种药物和方法可用于糖尿病胰岛β细胞直接的保护和再生。

2型糖尿病的脂毒性及糖毒性已经是目前公认的导致β-细胞受损的主要病理机制，机体内高血糖本身可引起胰岛β-细胞功能损伤，从而无法代偿体内胰岛素抵抗，而当机体内进入胰岛β-细胞的游离脂肪酸(ffa)超过了其对脂肪酸氧化的能力时，可导致β-细胞内脂质的过多堆积，从而加速细胞凋亡。因此，保护β-细胞功能，抑制β-细胞凋亡可在糖尿病发展初期改善高糖血症的恶性循环，从而防止糖尿病的进一步发展。

地骨皮(lyciicortex)是我国传统中药材，为《中国药典》2005年版和2010年版收载品种。本品为茄科落叶灌木枸杞lyciumchinensemill.或宁夏枸杞lyciumbarbaruml.的干燥根皮。其味甘，性寒，归肺、肝、肾经。主治内热消渴等方面。现代药理学研究表明地骨皮及其提取物具有降血糖、免疫调节、抗自由基等多种作用，并在治疗糖尿病及其并发症、骨质疏松、高血脂、高血压等方面有很好的临床应用前景，有很大的开发潜力。近年来国内外学者对地骨皮的化学成分做了大量研究，目前已经发现的化学成分有一百余种，其中包括生物碱类、环肽类、木脂素类、蒽醌类、香豆素类、黄酮类、萜类、甾醇类、有机酸及其酯类等。本课题从地骨皮中发现一系列母核上具有8羟基的c21甾体化合物，也属于在茄科植物中首次报道c21甾类化学成分。c21甾体类化合物具有抗炎、抗肿瘤、抗生育等多方面的生物活性，常见分布于玄参科、夹竹桃科、毛茛科、萝藦科等植物中。在植物中除游离方式存在外，也和糖缩合成苷类存在，糖链多连接在甾体母核的c3位。目前由植物中分离出的c21甾类成分以孕甾烷或其异构体为基本骨架，母核上具有8羟基的c21甾体较为少见。

申请者从地骨皮中分离得到了一类结构新颖的化合物—lyciiumsteroidsa-k(dgp-1～11)，化学结构如下图所示。此次在茄科植物中发现这种母核上有8个羟基，且12或20位上连接苯戊二烯酸酯的c21甾体在自然界中首次发现。经药理学实验证明该类化合物在pa诱导的胰岛β细胞损伤模型中，能够明显的促进胰岛细胞增殖，显示了一定的胰岛细胞保护作用。目前，尚未发现从中药地骨皮分离得到8羟基c21甾体类化合物的报道，也未见具有该类型c21甾体类化合物胰岛细胞保护作用的报道，以及该类型单体的制备方法专利文献。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种新结构类型的化合物及其药学上可接受的盐、其药物组合物以及其在制备预防或治疗糖尿病药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供一类来源于地骨皮的化合物lyciiumsteroidsa-k(dgp-1～11)及其药学上可接受的盐，其结构如下：

本发明技术方案的第二方面是提供了地骨皮新化合物c21甾体类的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：地骨皮药材80％乙醇回流提取，浓缩后浸膏通过有机溶剂萃取、大孔吸附树脂层析、凝胶柱层析、反相硅胶柱层析及制备型hplc分离纯化，得到上述化合物，lyciiumsteroidsa-k(dgp-1～11)，经uv、ir、nmr、ms及cd等谱学手段分析鉴定其结构，为一类母核为多羟基的c21甾体类，甾体母核上共有8个羟基；其12位或20位分别连有一个苯戊二烯酸酰基；3位连有0-4个不同数目的2，6-二去氧糖，目前未有该类物质报道。

本发明技术方案的第三方面是提供了一种药物组合物，其含有有效剂量的第一方面所述化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。通常本发明药物组合物含有0.1～95％重量的本发明化合物。在单元剂型中本发明化合物一般含量为0.1～100mg，优选的单元剂型含有4～50mg。

本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油脂、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂、肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、ph调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明的化合物的用量为0.001～100mg/kg体重，优选为0.1～60mg/kg体重，更优选为1～30mg/kg体重，最优选为2～15mg/kg体重。成人患者服用的本发明化合物每日为10～500mg，优选为20～100mg，可一次服用或分2～3次服用；儿童服用的剂量按照每kg体重5～30mg，优选为10～20mg/kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这受限于给药医生的临床经验以及治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。

本发明技术方案的第四方面是提供第一方面所述化合物或其药学上可接受盐以及第三方面所述药物组合物在制备预防或治疗糖尿病药物中的用途。体外抗糖尿病药理实验结果显示该类化合物能够在棕榈酸诱导的min6细胞损伤模型中有效的促进胰岛细胞的增值。与正常对照con组比较，棕榈酸(0.4mm)使模型对照moddel组细胞增殖明显受损，其细胞培养液经cck-8染色后的平均仅为con组的60％。在样品终浓度为1×10^-5m作用模型细胞24h后，与model组比较，dgp-7，dgp-2，dgp-3处理组细胞的相对od值分别增加了21.3％，18.1％，13.6％，显示明显的胰岛细胞保护作用。不同浓度的dgp-7，dgp-2，dgp-3作用24h后，对棕榈酸钠诱导的胰岛细胞损伤模型呈现剂量依赖性的保护作用；其中dgp-7的作用效果最好，在5μm水平就有显著的保护效果。因此具有良好的抗糖尿病的作用。

有益技术效果：

1、本发明的一类地骨皮新化合物具有明显的防治糖尿病的作用，能够显著促进胰岛细胞增值，其中dgp-7的作用效果最好，在5μm水平就有显著的保护效果。

2、本发明的一类地骨皮中的新化合物结构新颖，未有文献报道，具有进一步开发成降糖类药物的潜力。

附图说明

图1为dgp-2，dgp-3，dgp-7保护min6胰岛细胞的剂量相关性分析；分别对dgp-2，dgp-3，dgp-7的活性进行3个剂量水平(1，5，10μm)考察，发现各化合物保护min6胰岛细胞均呈现剂量依赖性，其中dgp-7在5μm水平已有显著的保护活性。###,p<0.001vscon；**,***p<0.01,0.001vsmodel

具体实施方式

下面的实施例及药理活性实验用于进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

下述实施例中，部分物质的全称或相应的中文名称如下：

cho：中国仓鼠卵巢细胞

dmem：一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基

gfp：greenfluorescenceprotein，绿色荧光蛋白

lc3:微管相关轻链蛋白3

实施例1、地骨皮单体化合物lyciiumsteroidsa-k(dgp-1～11)的制备和检测

100kg地骨皮药材经积浓度为80％乙醇溶剂回流提取3次，每次2小时，提取液浓缩后得浸膏8.0kg，使用热水溶散然后用乙酸乙酯进行萃取3次，乙酸乙酯部位回收溶剂，得浸膏1.5kg，分别用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇进行索氏提取，得到收集乙酸乙酯部位220g，然后对该部位进行硅胶柱中压分离，以石油醚-乙酸乙酯不梯度比例进行洗脱，共得到54瓶样品。回收溶剂后经sephadexlh-20凝胶柱层析、ods反相硅胶柱层析反复纯化得到上述化合物lyciiumsteroida～k(dgp-1～11)，经uv、ir、nmr、ms及cd等谱学手段分析鉴定其结构，为一类8羟基的c21甾体类，其12位或20位分别连有一个苯戊二烯酸酰基，3位连有不同数目的2，6-二去氧糖。

上述新化合物的波谱信息及核磁信号归属如下：

dgp-1

lyciumsteroida(dgp-1):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:308；(c0.05meoh)；cdλmaxnm(δε):300(+2.76),256(–0.26),218(+1.09)；；ir(kbr)νmax:3418,2943,1692,1624,1382,1246,1055,1002,978,694cm^-1,hresims:m/z573.3057[m+h]⁺(calcdforc32h44o9,573.3058).

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dgp-2

lyciumsteroida(dgp-2):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:312；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):308(+1.62),216(–0.76)；ir(kbr)νmax:3429,2937,1694,1627,1241,1131,1051,1000,877,691cm^-1；hresims:m/z595.2876[m+na]⁺(calcdforc32h44nao9,572.2878)；

¹hnmr(500mhz,dmso-d6),δh:1.71(1h,m,h-1a),1.58(1h,m,h-1b),1.59(1h,m,h-2a),1.36(1h,m,h-2b),3.86(1h,m,h-3),1.91(1h,t,j＝12.5hz,h-4a),1.42(1h,m,h-4b),3.46(1h,m,h-6),1.99(1h,dd,j＝3.5,14.5hz,h-7a),1.71(1h,m,h-7b),1.80(1h,m,h-9),1.81(1h,m,h-11a),1.47(1h,m,h-11b),4.52(1h,m,h-12),1.70(1h,m,h-15a),1.12(1h,m,h-15b),1.80(1h,m,h-16a),1.12(1h,m,h-16b),1.40(3h,s,h-18),1.16(3h,s,h-19),3.28(1h,q,h-20),0.97(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.56(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.38(2h,dd,j＝7.5,7.5hz,h-3',5'),7.45(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),7.03(1h,d,j＝16.0hz,h-7'),7.11(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.42(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-9'),6.09(1h,d,j＝16.0hz,h-10').

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dgp-3

lyciumsteroidc(dgp-3):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:313；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):311(+3.29),218(–0.91)；ir(kbr)νmax:3441,2938,1700,1623,1594,1453,1421,1238,1077,702cm^-1,hresims:m/z701.3518[m-h]^-(calcdforc38h54o12,701.3543).

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¹³cnmr(125mhz,dmso-d6),δc:32.7(c-1),27.8(c-2),73.3(c-3),36.9(c-4),73.8(c-5),75.5c-6),33.2(c-7),76.7(c-8),38.2(c-9),37.6(c-10),23.5(c-11),73.6(c-12),56.0(c-13),87.4(c-14),32.0(c-15),32.8(c-16),87.1(c-17),11.1(c-18),17.2(c-19),69.6(c-20),18.9(c-21),135.9(c-1′),127.2(c-2′,6′),128.8(c-3′,5′),129.0(c-4′),140.1(c-7′),126.6(c-8′),144.6(c-9′),121.9(c-10'),165.7(c-11′),.95.4(c-1”),38.8(c-2”),67.1(c-3”),72.8(c-4”),68.8(c-5”),18.4(c-6”).

dgp-4

lyciumsteroidd(dgp-4):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:313；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):304(+2.04),220(–0.64)；ir(kbr)νmax:3426,2933,1701,1623,1369,1241,1133,1073,997,875cm^-1.hresims:m/z725.3505[m+na]⁺(calcdforc38h54nao12,725.3507).

¹hnmr(500mhz,dmso-d6),δh:1.60(1h,m,h-1a),1.52(1h,m,h-1b),1.60(1h,m,h-2a),1.59(1h,m,h-2b),4.07(1h,m,h-3),1.87(1h,m,h-4a),1.54(1h,m,h-4b),3.78(1h,m,h-6),1.80(1h,m,h-7a),1.55(1h,m,h-7b),1.67(1h,m,h-9),1.75(1h,m,h-11a),1.44(1h,m,h-11b),4.58(1h,m,h-12),1.98(1h,m,h-15a),1.67(1h,m),(h-15b),1.68(1h,m,h-16a),1.13(1h,m,h-16b),1.41(3h,s,h-18),0.93(3h,s,h-19),3.60(br1h,s,h-20),0.97(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.56(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.39(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.34(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),7.04(1h,d,j＝16.5hz,h-7'),7.11(1h,dd,j＝16.5,16.5hz,,h-8'),7.43(1h,dd,j＝16.5,16.5hz,h-9'),6.08(1h,d,j＝16.5hz,h-10'),4.81(1h,dd,j＝9.5,1.5hz,h-1”),1.80(1h,m,h-2a”),1.54(1h,m,h-2b”),3.83(1h,m,h-3”),3.01(1h,m,h-4”),3.61(1h,m,h-5”),1.12(3h,d,j＝6.5hz,h-6”).

¹³cnmr(125mhz,dmso-d6),δc:27.2(c-1),25.5(c-2),73.5(c-3),27.3(c-4),76.3(c-5),67.3c-6),37.9(c-7),75.2(c-8),35.0(c-9),40.5(c-10),23.9(c-11),73.6(c-12),55.9(c-13),87.5(c-14),32.8(c-15),32.2(c-16),87.4(c-17),11.3(c-18),19.3(c-19),69.5(c-20),18.7(c-21),135.9(c-1′),127.2(c-2′,6′),128.8(c-3′,5′),129.1(c-4′),140.1(c-7′),126.6(c-8′),144.6(c-9′),121.9(c-10′),165.7(c-11′),96.2(c-1”),38.5(c-2”),67.0(c-3”),72.6(c-4”),69.1(c-5”),18.3(c-6”).

dgp-5

lyciumsteroide(dgp-5):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:308；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):307(+4.08),240(–0.47),219(+0.99)；ir(kbr)νmax:3432,2969,2935,1697,1626,1450,1362,1087,1002,869cm^-1；hresims:m/z845.4306[m-h]^-(calcdforc45h66o15,845.4329).

¹hnmr(500mhz,dmso-d6),δh:1.80(1h,m,h-1a),1.55(1h,m,h-1b),1.64(1h,m,h-2a),1.40(1h,m,h-2b),3.99(1h,m,h-3),1.83(1h,m,h-4a),1.55(1h,m,h-4b),3.46(1h,m,h-6),1.93(1h,m,h-7a),1.70(1h,m,h-7b),1.71(1h,m,h-9),1.40(1h,m,h-11a),1.22(1h,m,h-11b),3.21(1h,m,h-12),1.75(1h,m,h-15a),1.63(1h,m,h-15b),1.80(1h,m,h-16a),1.14(1h,m,h-16b),1.18(3h,s,h-18),1.11(3h,s,h-19),5.08(1h,brs,h-20),1.13(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.55(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.37(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.32(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.99(1h,d,j＝16.0hz,h-7'),7.12(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.30(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,,h-9'),5.98(1h,d,j＝16.0hz,h-10'),4.78(1h,d,j＝9.5,1.5hz,h-1”),1.67(1h,m,h-2a”),1.50(1h,m,h-2b”),3.67(1h,m,h-3”),3.10(1h,m,h-4”),4.01(1h,m,h-5”),1.10(3h,d,j＝6.5hz,h-6”),4.68(1h,dd,j＝9.5,1.5hz,h-1”'),2.04(1h,m,h-2a”'),1.48(1h,m,h-2b”'),3.48(1h,m,h-3”'),3.06(1h,m,h-4”'),3.59(1h,m,h-5”'),1.09(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),3.48(3h,s,3”'-och3).

¹³cnmr(125mhz,dmso-d6),δc:32.8(c-1),27.8(c-2),73.5(c-3),36.9(c-4),73.7(c-5),75.7c-6),33.2(c-7),77.2(c-8),38.4(c-9),37.5(c-10),27.4(c-11),69.6(c-12),57.7(c-13),87.4(c-14),31.7(c-15),33.4(c-16),86.4(c-17),9.4(c-18),17.3(c-19),74.1(c-20),14.8(c-21),136.0(c-1′),127.1(c-2′,6′),128.8(c-3′,5′),129.0(c-4′),139.3(c-7′),126.8(c-8′),143.3(c-9′),122.9(c-10′),165.0(c-11′),.95.4(c-1”),38.5(c-2”),67.4(c-3”),81.7(c-4”),66.1(c-5”),18.0(c-6”),98.9(c-1”'),34.7(c-2”'),77.5(c-3”'),72.8(c-4”'),69.6(c-5”'),18.4(c-6”'),57.6(3”'-och3).

dgp-6

lyciumsteroidf(dgp-6):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:308；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):309(+4.74),238(–0.90)；ir(kbr)νmax:3433,2970,2937,1699,1626,1451,1313,1084,1002,871cm^-1；hresims:m/z845.4298[m-h]^-(calcdforc45h66o15,845.4329).

¹hnmr(500mhz,dmso-d6)δh:1.68(1h,m,h-1a),1.47(1h,m,h-1b),1.56(2h,m,h-2),4.06(1h,m,h-3),1.86(1h,m,h-4a),1.62(1h,m,h-4b),3.74(1h,m,h-6),1.79(1h,m,h-7a),1.55(1h,m,h-7b),1.54(1h,m,h-9),1.24(2h,m,h-11),3.24(1h,m,h-12),1.80(2h,m,h-15a),1.68(1h,m,h-15b),1.68(1h,m,h-16a),1.80(1h,m,h-16b),1.19(3h,s,h-18),0.91(3h,s,h-19),5.05(1h,brs,h-20),1.14(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.56(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.37(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.32(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.99(1h,d,j＝16.0hz,h-7'),7.12(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.39(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-9'),5.98(1h,d,j＝16.0hz,h-10'),4.81(1h,dd,j＝9.5,1.5hz,h-1”),1.78(1h,m,h-2a”),1.56(1h,m,h-2b”),3.69(1h,m,h-3”),3.15(1h,m,h-4”),4.04(1h,m,h-5”),1.09(3h,d,j＝6.5hz,h-6”),4.69(1h,d,j＝9.5,1.5hz,h-1”'),2.06(1h,m,h-2a”'),1.49(1h,m,h-2b”'),3.49(1h,m,h-3”'),3.05(1h,m,h-4”'),3.60(1h,m,h-5”'),1.10(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),3.33(3h,s,3”'-och3).

¹³cnmr(125mhz,dmso-d6),δc:27.2(c-1),25.5(c-2),73.5(c-3),27.4(c-4),76.4(c-5),67.7c-6),38.0(c-7),75.5(c-8),35.3(c-9),40.4(c-10),27.6(c-11),69.7(c-12),57.7(c-13),87.4(c-14),32.7(c-15),32.6(c-16),86.9(c-17),9.7(c-18),19.5(c-19),74.0(c-20),14.8(c-21),136.0(c-1′),127.1(c-2′,6′),128.8(c-3′,5′),128.8(c-4′),139.4(c-7′),126.8(c-8′),143.6(c-9′),122.7(c-10′),164.9(c-11′),.96.0(c-1”),38.0(c-2”),67.4(c-3”),81.4(c-4”),66.1(c-5”),17.9(c-6”),98.8(c-1”'),34.7(c-2”'),77.5(c-3”'),72.8(c-4”'),69.6(c-5”'),18.4(c-6”'),57.6(3”'-och3).

dgp-7

lyciumsteroidg(dgp-7):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:313；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):309(+3.30),209(–0.79)；ir(kbr)νmax:3441,2935,1702,1624,1450,1371,1166,1086,1001,977,871cm^-1.hresims:m/z869.4295[m+na]⁺(calcdforc45h66nao15,869.4294).

¹hnmr(500mhz,pyride-d5),δh:2.28(1h,m,h-1a),1.89(1h,m,h-1b),2.26(1h,m,h-2a),2.02(1h,m,h-2b),4.89(1h,m,h-3),2.70(1h,m,h-4a),2.29(1h,m,h-4b),4.19(br.1h,s,h-6),2.72(1h,m),h-7a),2.47(1h,m,h-7b),2.55(1h,m,h-9),2.46(1h,m,h-11a),2.15(1h,m,h-11b),5.24(1h,dd,j＝4.0,11.0hz,h-12),2.16(1h,m,h-15a),2.03(1h,m,h-15b),1.89(1h,m,h-16a),1.46(1h,m,h-16b),2.12(3h,s,h-18),1.68(3h,s,h-19),4.03(1h,m,h-20),1.34(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.47(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.33(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.28(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.94(1h,d,j＝16.5hz,h-7'),6.94(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.93(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-9'),6.42(1h,d,j＝16.5hz,h-10'),5.41(1h,d,j＝9.5hz,h-1”),2.04(1h,m),h-2a”),2.34(1h,m,h-2b”),4.60(1h,m,h-3”),3.46(1h,m,h-4”),4.07(1h,m,h-5”),1.33(3h,d,j＝6.5hz,h-6”),5.10(1h,d,j＝9.5hz,h-1”'),1.67(1h,m,h-2a”'),2.33(1h,m,h-2b”'),3.70(1h,m,h-3”'),3.47(1h,m,h-4”'),4.03(1h,m,h-5”'),1.43(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),3.43(3h,s,och3-3”').

¹³cnmr(125mhz,pyride-d5),δc:33.9(c-1),29.1(c-2),74.1(c-3),38.3(c-4),75.3(c-5),77.9c-6),34.5(c-7),78.6(c-8),39.6(c-9),39.1(c-10),24.9(c-11),75.1(c-12),57.4(c-13),88.6(c-14),33.0(c-15),33.6(c-16),88.4(c-17),12.1(c-18),18.2(c-19),71.0(c-20),19.6(c-21),136.7(c-1′),127.7(c-2′,6′),129.2(c-3′,5′),129.3(c-4′),140.6(c-7′),127.0(c-8′),145.3(c-9′),122.8(c-10′),167.0(c-11′),.96.0(c-1”),39.3(c-2”),67.5(c-3”),83.5(c-4”),68.4(c-5”),18.6(c-6”),99.8(c-1”'),35.6(c-2”'),78.8(c-3”'),74.1(c-4”'),71.0(c-5”'),18.9(c-6”'),58.1(3”'-och3).

dgp-8

lyciumsteroidh(dgp-8):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:313；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):309(+3.12),209(–0.79)；ir(kbr)νmax:3441,2934,1702,1624,1450,1370,1165,1086,999,874cm^-1；hresims:m/z989.5091[m-h]^-(calcdforc52h77o18,989.5115).

¹hnmr(500mhz,pyride-d5),δh:1.81(1h,m,h-1a),1.49(1h,m,h-1b),2.25(1h,m,h-2a),2.02(1h,m,h-2b),4.89(1h,m,h-3),2.69(1h,m,h-4a),2.28(1h,m,h-4b),4.18(1h,m,h-6),2.72(1h,m,h-7a),2.48(1h,m,h-7b),2.56(1h,m,h-9),2.46(1h,m,h-11a),2.15(1h,m,h-11b),5.24(d,j＝4.0,11.0hz,h-12),2.15(1h,m,h-15a),2.03(1h,m),(h-15b),1.88(1h,m,h-16a),2.28(1h,m,h-16b),2.13(3h,s,h-18),1.68(3h,s,h-19),4.18(1h,m,h-20),1.33(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.48(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.32(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.29(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.94(1h,d,j＝16.5hz,h-7'),6.93(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.92(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-9'),6.42(1h,d,j＝16.5hz,h-10'),5.41(1h,d,j＝9.5hz,h-1”),2.05(1h,m,h-2a”),2.36(1h,m,h-2b”),4.59(1h,m,h-3”),3.47(1h,m,h-4”),4.06(1h,m,h-5”),1.32(3h,d,j＝6.5hz,h-6”),5.15(1h,d,j＝9.5hz,h-1”'),2.29(1h,m,h-2a”'),1.75(1h,m,h-2b”'),4.03(1h,m,h-3”'),3.45(1h,m,h-4”'),4.19(1h,m,h-5”'),1.32(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),4.73(1h,d,j＝9.5hz,h-1””),2.52(1h,m,h-2a””),1.69(1h,m,h-2b””),3.47(1h,m,h-3””),3.47(1h,m,h-4””),3.56(1h,m,h-5””),1.55(3h,d,j＝6.5hz,h-6””),3.56(3h,s,3”'-och3),3.44(3h,s,3””-och3).

¹³cnmr(125mhz,pyride-d5),δc:33.8(c-1),29.1(c-2),74.0(c-3),38.3(c-4),75.2(c-5),77.9c-6),34.5(c-7),78.6(c-8),39.6(c-9),39.1(c-10),24.9(c-11),75.1(c-12),57.4(c-13),88.6(c-14),33.0(c-15),33.6(c-16),88.4(c-17),12.0(c-18),18.2(c-19),71.0(c-20),18.6(c-21),136.7(c-1′),127.7(c-2′,6′),129.2(c-3′,5′),129.3(c-4′),140.6(c-7′),127.0(c-8′),145.3(c-9′),122.0(c-10′),167.0(c-11′),.96.0(c-1”),39.3(c-2”),67.5(c-3”),83.4(c-4”),68.4(c-5”),18.7(c-6”),99.8(c-1”'),36.7(c-2”'),77.7(c-3”'),83.2(c-4”'),69.1(c-5”'),19.6(c-6”'),102.2(c-1””),37.2(c-2””),81.4(c-3””),76.1(c-4””),72.9(c-5””),18.5(c-6””),58.8(3”'-och3),57.0(3””-och3).

dgp-9

lyciumsteroidi(dgp-9):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:313；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):309(+3.12),209(–0.79)；ir(kbr)νmax:3464,2934,1702,1624,1451,1380,1263,1165,1059,1001cm^-1；hresims:m/z1013.5100[m+na]⁺(calcdforc52h77nao18,1013.5080).

¹hnmr(500mhz,pyride-d5),δh:2.17(1h,m,h-1a),1.61(1h,m,h-1b),2.09(1h,m,h-2a),1.89(1h,m,h-2b),4.34(1h,m,h-3),2.68(1h,m,h-4a),2.09(1h,m,h-4b),4.76(1h,m,h-6),2.73(1h,m,h-7a),1.93(1h,m,h-7b),2.28(1h,m,h-9),2.50(1h,m,h-11a),2.16(1h,m,h-11b),5.29(1h,d,j＝4.0,11.0hz,h-12),1.97(1h,m,h-15a),1.97(1h,m,h-15b),2.37(1h,m,h-16a),2.20(1h,m,h-16b),2.15(3h,s,h-18),1.58(3h,s,h-19),4.09(1h,m,h-20),1.33(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.46(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.33(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.28(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.90(1h,d,j＝16.5hz,h-7'),6.91(1h,dd,j＝16.5,16.5hz,h-8'),7.86(1h,dd,j＝16.5,16.5hz,h-9'),6.36(1h,d,j＝16.5hz,h-10'),5.38(1h,d,j＝9.5hz,h-1”),2.33(1h,m,h-2a”),1.95(1h,m,h-2b”),4.59(1h,m,h-3”),3.47(1h,m,h-4”),4.22(1h,m,h-5”),1.40(3h,d,j＝6.5hz,h-6”),5.15(1h,d,j＝9.5hz,h-1”'),2.30(1h,m,h-2a”'),1.71(1h,m,h-2b”'),4.03(1h,m,h-3”'),3.43(1h,m,h-4”'),4.18(1h,m,h-5”'),1.33(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),4.73(1h,d,j＝9.5hz,h-1””),2.53(1h,m,h-2a””),1.70(1h,m,h-2b””),3.58(1h,m,h-3””),3.47(1h,m,h-4””),3.57(1h,m,h-5””),1.55(3h,d,j＝6.5hz,h-6””),3.55(3h,s,3″′-och3),3.44(3h,s,3″″-och3).

¹³cnmr(125mhz,pyride-d5),δc:28.2(c-1),26.7(c-2),75.8(c-3),29.0(c-4),78.0(c-5),69.1c-6),39.0(c-7),76.6(c-8),36.7(c-9),41.9(c-10),25.2(c-11),75.2(c-12),57.3(c-13),88.9(c-14),32.9(c-15),34.1(c-16),88.5(c-17),12.3(c-18),18.6(c-19),70.8(c-20),20.3(c-21),136.6(c-1′),127.7(c-2′,6′),129.2(c-3′,5′),129.4(c-4′),140.7(c-7′),126.9(c-8′),145.4(c-9′),122.7(c-10′),167.0(c-11′)。,97.9(c-1”),38.9(c-2”),67.5(c-3”),83.1(c-4”),68.7(c-5”),18.7(c-6”),99.8(c-1”'),36.7(c-2”'),77.7(c-3”'),83.0(c-4”'),68.9(c-5”'),19.4(c-6”'),102.2(c-1””),37.2(c-2””),81.4(c-3””),76.1(c-4””),72.9(c-5””),18.5(c-6””),58.8(3″′-och3),57.0(3″″-och3).

dgp-10

lyciumsteroidj(dgp-10):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:307；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):302(+3.17),250(–0.30),222(+1.65)；ir(kbr)νmax:3456,2935,1702,1625,1450,1366,1087,1002,869,696cm^-1；hresims:m/z1157.5853[m+na]⁺(calcdforc59h90nao21,1157.5867).

¹hnmr(500mhz,pyride-d5),δh:1.64(1h,m,h-1a),2.28(1h,m,h-1b),2.00(1h,m,h-2a),2.54(1h,m,h-2b)4.87(1h,m,h-3),2.72(1h,m,h-4a),2.27(1h,m,h-4b),4.07(1h,m,h-6),2.74(1h,m,h-7a),2.49(1h,m,h-7b),2.44(1h,m,h-9),2.40(1h,m,h-11a),1.90(1h,m,h-11b),3.81(1h,m,h-12),2.09(1h,m,h-15a),2.17(1h,m,h-15b),1.94(1h,m,h-16a),2.02(1h,m,h-16b),2.06(3h,s,h-18),1.71(3h,s,h-19),5.83(1h,m,h-20),1.63(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.42(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.35(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.25(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.71(1h,d,j＝16.0hz,h-7'),6.90(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-8'),7.62(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,h-9'),6.24(1h,d,j＝16.0hz,h-10'),5.32(1h,d,j＝9.5hz,h-1”),2.37(1h,m,h-2a”),2.03(1h,m,h-2b”),4.43(1h,m,h-3”),3.44(1h,m,h-4”),3.94(1h,m,h-5”),1.28(3h,d,j＝6.0hz,h-6”),5.09(1h,m,h-1”'),2.23(1h,m,h-2a”'),2.03(1h,m,h-2b”'),4.01(1h,m,h-3”'),3.69(1h,m,h-4”'),4.51(1h,m,h-5”'),1.24(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),5.11(1h,m,h-1””),2.36(1h,m,h-2a””),1.87(1h,m,h-2b””),4.08(1h,m,h-3””),3.51(1h,m,h-4””),4.17(1h,m,h-5””),1.41(3h,d,j＝6.5hz,h-6””),4.76(1h,m,h-1””'),1.76(1h,m,h-2a””'),2.56(1h,m,h-2b””'),3.45(1h,m,h-3””'),3.46(1h,m,h-4””'),3.57(1h,m,h-5””'),1.55(3h,d,j＝6.0hz,h-6””'),3.38(3h,s,3″′-och3),3.51(3h,s,3″″-och3),3.44(3h,s,3″″′-och3).

¹³cnmr(125mhz,pyride-d5)δc:33.9(c-1),29.2(c-2),74.2(c-3),38.4(c-4),75.3(c-5),78.0c-6),34.6(c-7),78.9(c-8),40.1(c-9),39.0(c-10),28.6(c-11),71.1(c-12),59.3(c-13),88.6(c-14),33.0(c-15),34.5(c-16),87.8(c-17),10.6(c-18),18.3(c-19),75.6(c-20),15.7(c-21),136.8(c-1′),128.6(c-2′,6′),129.2(c-3′,5′),129.6(c-4′),139.6(c-7′),127.2(c-8′),143.9(c-9′),122.1(c-10′),166.4(c-11′),.96.1(c-1”),39.1(c-2”),67.7(c-3”),81.1(c-4”),68.7(c-5”),18.6(c-6”),99.0(c-1”'),29.2(c-2”'),75.9(c-3”'),77.0(c-4”'),63.2(c-5”'),16.8(c-6”'),100.5(c-1””),36.6(c-2””),77.8(c-4””),83.3(c-4””),69.1(c-5””),18.6(c-6””),102.2(c-1””'),37.2(c-2””'),81.4(c-3””'),76.2(c-4””'),72.9(c-5””'),18.7(c-6””'),56.5(3″′-och3),58.8(3″″-och3),57.1(3″″′-och3).

dgp-11

lyciumsteroidk(dgp-11):whiteamorphouspowder,uvλmax(meoh)nm:312；(c0.10meoh)；cdλmaxnm(δε):308(+3.57),221(–0.96)；ir(kbr)νmax:3451,2934,1703,1624,1450,1367,1165,1087,1002,907,874cm^-1,hresims:m/z1157.5850[m+na]⁺⁽calcdforc59h90nao21,1157.5867).

¹hnmr(500mhz,pyride-d5),δh:1.50(1h,m,h-1a),2.26(1h,m,h-1b),1.25(1h,m,h-2a),2.02(1h,m,h-2b),4.84(1h,m,h-3),2.27(1h,m,h-4a),2.69(1h,m,h-4b),4.18(1h,m,h-6),2.72(1h,m,h-7a),2.48(1h,m,h-7b),2.55(1h,m,h-9),2.45(1h,m,h-11a),2.14(1h,m,h-11b),5.24(1h,m,h-12),2.04(1h,m,h-15a),2.16(1h,m,h-15b),1.89(1h,m,h-16a),1.82(1h,m,h-16b),2.13(3h,s,h-18),1.68(3h,s,h-19),4.02(1h,m,h-20),1.32(3h,d,j＝6.0hz,h-21),7.48(2h,d,j＝7.5hz,h-2',6'),7.33(2h,t,j＝7.5hz,h-3',5'),7.27(1h,t,j＝7.5hz,h-4'),6.94(1h,d,j＝16.0hz,h-7'),6.94(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,,h-8'),7.92(1h,dd,j＝16.0,16.0hz,,h-9'),6.42(1h,d,j＝16.0hz,,h-10'),5.33(1h,d,j＝9.5hz,h-1”),2.37(1h,m,h-2a”),2.02(1h,m,h-2b”),4.44(1h,m,h-3”),3.43(1h,m,h-4”),3.92(1h,m,h-5”),1.26(3h,d,j＝6.0hz,h-6”),5.10(1h,m,h-1”'),2.24(1h,m,h-2a”'),2.09(1h,m,h-2b”'),4.02(1h,m,h-3”'),3.69(1h,m,h-4”'),4.52(1h,m,h-5”'),1.24(3h,d,j＝6.5hz,h-6”'),5.12(1h,m,h-1””),2.38(1h,m,h-2a””),1.88(1h,m,h-2b””),4.07(1h,m,h-3””),3.52(1h,m,h-4””),4.16(1h,m,h-5””),1.40(3h,d,j＝6.5hz,h-6””),4.75(1h,m,h-1””'),1.72(1h,m,h-2a””'),2.54(1h,m,h-2b””'),3.46(1h,m,h-3””'),3.45(1h,m,h-4””'),3.57(1h,m,h-5””'),1.54(3h,d,j＝6.0hz,h-6””'),3.38(3h,s,3″′-och3),3.55(3h,s,3″″-och3),3.44(3h,s,3″″′-och3).

¹³cnmr(125mhz,pyride-d5),δc:33.8(c-1),29.1(c-2),74.1(c-3),38.4(c-4),75.1(c-5),77.8c-6),34.5(c-7),78.6(c-8),39.6(c-9),39.0(c-10),28.6(c-11),75.3(c-12),57.4(c-13),88.4(c-14),33.0(c-15),33.6(c-16),88.6(c-17),12.0(c-18),18.2(c-19),71.0(c-20),19.6(c-21),136.7(c-1′),127.7(c-2′,6′),129.2(c-3′,5′),129.3(c-4′),140.6(c-7′),127.1(c-8′),145.3(c-9′),122.9(c-10′),167.0(c-11′),.96.0(c-1”),39.1(c-2”),67.7(c-3”),81.2(c-4”),68.7(c-5”),18.6(c-6”),98.9(c-1”'),24.9(c-2”'),75.9(c-3”'),77.044(c-4”'),63.2(c-5”'),16.8(c-6”'),100.5(c-1””),36.6(c-2””),77.9(c-3””),83.3(c-4””),69.1(c-5””),18.6(c-6””),102.2(c-1””'),37.2(c-2””'),81.4(c-3””'),76.2(c-4””'),72.9(c-5””'),18.6(c-6””'),56.5(3″′-och3),58.8(3″″-och3),57.0(3″″′-och3).

实验例1、地骨皮中c21甾体及其苷类单体化合物的药理活性实验

利用棕榈酸诱导min6小鼠胰岛细胞瘤细胞，形成胰岛细胞损伤模型(model)；应用cck-8法测定细胞存活率，并以con组的od值作为1，计算各细胞培养孔的相对od值，观察样品作用24h后对模型细胞的保护作用。

采用cck-8法筛选地骨皮c21甾体dgp-2，dgp-3，dgp-7对棕榈酸钠(0.4mm)所致胰岛细胞(min6)增殖受损的保护作用，以各组在检测波长(450nm)下与对照组的吸光度值比值为标准，获得活性较好的化合物。

结果显示，与正常对照con组比较，棕榈酸钠(0.4mm)使模型对照model组细胞增殖明显受损，其细胞培养液经cck-8染色后的平均仅为con组的60％。在样品终浓度为1×10^-5m作用模型细胞24h后，与model组比较，dgp-7，dgp-2，dgp-3组的相对od值分别增加了21.3％，18.1％，13.6％，显示明显的胰岛细胞保护作用。而且不同浓度的dgp-7，dgp-2，dgp-3作用24h后，对棕榈酸钠诱导的胰岛细胞损伤模型呈现剂量依赖性的保护作用(见图1)。