中和人呼吸道合胞病毒的抗体的制作方法

本发明涉及具有高抗rsv中和滴度的人单克隆抗体，以及这些抗体作为婴儿和老年人中的被动免疫治疗剂的用途。发明背景副粘病毒是包膜负链rna病毒，其为重要的人和动物病原体。人呼吸道合胞病毒（hrsv，rsv）属于副粘病毒科（paramyxoviridae），肺炎病毒亚科（pneumovirinae）。两种亚型a型和b型已得到鉴定，并且是小于6个月的儿童中严重且有时甚至致命的呼吸道感染的主要原因。患有基础疾病（如copd、哮喘、癌症、免疫受损状态包括hiv或移植后免疫受损状态）的成人也处于发展严重rsv感染的风险中。超过50岁的成人中由于急性呼吸道感染的每年住院的15%由rsv引起。在美国，rsv每年导致超过100,000次住院，并且估计其每年引起全球约160,000例死亡。目前不存在用于的rsv疫苗，并且用福尔马林灭活病毒的试验与婴儿中由rsv感染时增加的疾病严重性相关。其他科成员包括人偏肺病毒（hmpv）和人副流感病毒（hpiv），其同样导致与hrsv相似的急性呼吸道疾病。hrsv基因组是编码11种蛋白质的大约15kb的单链负义rna分子。其中两种蛋白质是病毒体的主要表面糖蛋白。这些是（i）附着（g）蛋白，其介导病毒与细胞的结合，和（ii）融合（f）蛋白，其在感染周期的初始阶段促进病毒和细胞膜的融合、以及受感染细胞的膜与相邻细胞的膜的融合，以形成特征性合胞体。附着蛋白g结合细胞表面受体并与f相互作用。这种相互作用触发f的构象变化以诱导膜融合，从而将病毒核糖核蛋白复合物释放到宿主细胞的细胞质内。针对f蛋白或g蛋白的单克隆抗体已显示具有体外中和效应和体内预防效应。参见例如beeler和coelingh1989，j.virol.63:2941-50；garcia-barreno等人，1989，j.virol.63:925-32；taylor等人，1984，immunology52:137-142；walsh等人，1984，infectionandimmunity43:756-758；以及美国专利号5,842,307和6,818,216。f糖蛋白上的中和表位最初通过鉴定在抗体逃逸变体中改变的氨基酸，并且通过评价抗体与rsvf衍生肽的结合来绘制。这些研究证实中和抗体通常靶向两个不同的线性表位。关于融合前和融合后f形式的抗原位点的综述，参见graham等人，2015，curropinimmunol35:30-38。抗原位点ii（也称为位点a）包括残基255至275，并且是帕利珠单抗（synagis®，astrazeneca）的靶标。该表位预测为构象依赖性的，并且与该表位复合的帕利珠单抗的更有效衍生物的结构揭示线性表位采用螺旋-环-螺旋构象。抗原位点iv（也称为位点c）包括残基422至438，并且是抗体mab19和101f的靶标。该表位对于富含半胱氨酸区域是c-末端并且是结构域ii的部分，其在同源副粘病毒f糖蛋白中在融合前和融合后构象之间保持结构上不变。5c4、am22和d25描绘了指定为位点0的表位，其仅存在于融合前f蛋白上并且是帕利珠单抗功效的50倍。参见mclellan等人，2013，science340:1113–1117；国际专利申请号wo2008/147196和美国专利号8,568,726。其他hrsv抗体在国际专利申请号wo94/06448和wo92/04381以及美国专利号8,221,759中描述。用于主动免疫接种的rsv疫苗（如果可用的话）不能用于治疗具有不成熟免疫系统的新生儿或免疫抑制的患者。在其中需要预防性被动免疫治疗的患者中，由于更慢性的疾病形式，目前的治疗经由定期静脉接种从合并血浆制备的人igg介导。由于中和性抗rsv抗体的低滴度，这类治疗涉及大量的球蛋白（例如0.75gm/kg），并且因而需要在诊所或医院中、经过长时期（2至4小时）、在高风险月份（秋季、冬季和早春）期间在每月基础上的静脉内施用。发明概述本发明提供了包含下述结构和功能特点的抗rsvf蛋白抗体及其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明提供了结合人rsvf蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包括：包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-6m至约1x10-9m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在另一个实施方案中，本发明提供了结合人rsvf蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包括：包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，轻链或轻链可变区不包含seqidno：8的氨基酸序列。在某些实施方案中，轻链不与包含seqidno：9的氨基酸序列的重链结合。在某些实施方案中，轻链与包含seqidno：7的氨基酸序列的重链结合。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在另一个实施方案中，本发明提供了结合人rsvf蛋白的抗体或其抗原结合片段，其包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；和（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（iii）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，轻链或轻链可变区不包含seqidno：8的氨基酸序列。在某些实施方案中，轻链不与包含seqidno：9的氨基酸序列的重链结合。在某些实施方案中，轻链与包含seqidno：7的氨基酸序列的重链结合。在一个实施方案中，抗体或其抗体片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在另一个实施方案中，本发明提供了结合人rsvf蛋白的抗体或抗原结合片段，其包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3；其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区与由seqidno：7组成的重链可变区包含至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性，所述轻链可变区与由seqidno：8组成的轻链可变区包含至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。在某些实施方案中，重链或重链可变区区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在这些前述实施方案中，序列变异在构架区中发生。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在另一个实施方案中，本发明还提供了结合人rsv的抗体或其抗原结合片段，其包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含在重链cdr（seqidno：1-3）和/或轻链cdr（seqidno：4-6）中的1、2或3个氨基酸取代。seqidno：7的vh序列具有seqidno：1-3的cdr；并且seqidno：8的vl序列具有seqidno：4-6的cdr。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在一个实施方案中，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，其包括：包含seqidno：7的氨基酸序列的可变重链和/或包含seqidno：8的氨基酸序列的可变轻链，其中所述抗体或其抗原结合片段结合人rsvf蛋白。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包括包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成的重链，以及包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成的轻链，其中所述抗体或其抗原结合片段结合人rsvf蛋白。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段任选地具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在另一个实施方案中，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，其与包含seqidno：23的重链和seqidno：25的轻链的抗体结合人rsvf蛋白的相同表位，其中所述抗体或其抗原结合片段具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在一个实施方案中，抗体分别包含与seqidno：7和8的重链可变区和/或轻链可变区至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含在seqidno：7的重链可变区和/或seqidno：8的轻链可变区的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸取代。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在另一个实施方案中，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，其交叉阻断（或与之竞争）包含seqidno：23的重链和seqidno：25的轻链的抗体与人rsv的结合，其中所述抗体或其抗原结合片段具有下述特征中的至少一个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含与seqidno：7的重链可变区或seqidno：8的轻链可变区至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%99%的序列同一性。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含在seqidno：7的重链可变区或seqidno：8的轻链可变区中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸取代。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含在重链cdr（seqidnos：1-3）和/或轻链cdr（seqidno：4-6）中的1、2或3个氨基酸取代。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，本发明涉及结合人rsvf蛋白的分离的抗体或抗原结合片段，其包括：包含seqidno：7的氨基酸序列或其包含至多30个氨基酸取代的变体的重链，和/或包含含有至多12个氨基酸取代的seqidno：8的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明涉及结合人rsvf蛋白的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体通过下述相互作用中的一种或多种或者下述相互作用中的全部结合人rsvf蛋白：1）轻链cdr3环通过残基phe91和leu92，通过在cdr3环中的phe91和leu92的羰基氧和人rsvf蛋白的arg429的胍基氮之间形成的两个氢键，与人rsvf蛋白的arg429的侧链相互作用；2）轻链cdr2环通过残基asp50和glu55与人rsvf蛋白的asn426和lys445形成氢键；3）重链cdr3环通过残基tyr104和tyr110形成用于与人rsvf蛋白上的ile432的范德华相互作用的表面；4）重链cdr3环通过asn107与人rsvf蛋白的lys433形成氢键；和5）轻链针对rsv融合前三聚体的邻近单体的glu161和ser182包装。在上述实施方案中任一的某些方面，分离抗体或其抗原结合片段。在上述实施方案中任一的某些方面，抗体或其抗原结合片段是重组抗体。在上述实施方案中任一的某些方面，抗体或其抗原结合片段是全长抗体。在上述实施方案中任一的某些方面，本发明的抗体或其抗原结合片段可以包含由以下组成的重区可变区：（a）上述可变重链中的任一和（b）前导肽（例如seqidno：10的前导肽）。在上述实施方案中任一的某些方面，本发明的抗体或其抗原结合片段可以包含由以下组成的轻链可变区：（a）上述可变轻链中的任一和（b）前导肽（例如seqidno：10的前导肽）。在上述实施方案中任一的某些方面，本发明的抗体或其抗原结合片段是包含任何上述可变重链和任何人重链恒定结构域的抗体。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段是igg同种型，并且包含人igg1、igg2、igg3或igg4人重链恒定结构域。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含人重链igg1恒定结构域，其中igg1恒定结构域是去岩藻糖基化的。在上述实施方案中任一的某些方面，本发明的抗体或其抗原结合片段可包含上述可变轻链和人轻链恒定结构域中的任一。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含人κ轻链恒定结构域或其变体，其中所述变体包含至多20、10、5、3、2或1个经修饰的氨基酸取代。在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含人λ轻链恒定结构域或其变体，其中所述变体包含至多20、10、5、3、2或1个经修饰的氨基酸取代。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包括包含seqidno：14的氨基酸序列的人κ轻链恒定结构域。在一个实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体包含具有两条轻链和两条重链的完整四聚体结构，其中每条轻链包括：包含seqidno：8的可变区和人κ轻链恒定结构域（seqidno：14）；并且每条重链包括：包含seqidno：7的可变区和人igg1恒定结构域（seqidno：13）。在上述实施方案中任一的某些方面，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段可以缀合至至少一种预防或治疗剂。在一个实施方案中，治疗剂包含第二抗体或其片段、免疫调节剂、激素、细胞毒素剂、酶、放射性核素、与至少一种免疫调节剂缀合的第二抗体、酶、放射性标记、激素、反义寡核苷酸或细胞毒素剂、或其组合。本发明还提供了分离的多肽，其包含seqidno：1-8、23或25中的任何一个的氨基酸序列或者任何所述序列的片段。在某些实施方案中，包含重链氨基酸序列的多肽不包含seqidno：9的氨基酸序列。本发明还提供了编码本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段中的任何一种的分离的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了编码seqidno：1-8、23或25的任何一种多肽的分离的核酸，其中所述多肽可以任选地包含前导序列。在某些实施方案中，包含重链氨基酸序列的多肽不包含seqidno：9的氨基酸序列。本发明还提供了包含编码seqidno：1-8、23或25的任何一种多肽（其中所述多肽可以任选地包含前导序列）的核酸的表达载体。在某些实施方案中，包含重链氨基酸序列的多肽不包含seqidno：9的氨基酸序列。这些分离的核酸和包含其的表达载体可以用于在重组宿主细胞中表达本发明的抗体或其抗原结合片段。因此，本发明还提供了包含编码seqidno：1-8、23或25的任何一种多肽（其中所述多肽可以任选地包含前导序列）的分离的核酸的宿主细胞。在某些实施方案中，包含重链氨基酸序列的多肽不包含seqidno：9的氨基酸序列。在一个实施方案中，宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。在一个实施方案中，宿主细胞是酵母细胞，例如毕赤酵母属（pichia）细胞或巴斯德毕赤酵母（pichiapastoris）宿主细胞。本发明还提供了包含本发明的抗体或抗原结合片段和药学可接受的载体或稀释剂的药物组合物。在一个实施方案中，药学可接受的载体或稀释剂是l-组氨酸。在该实施方案的一个方面，抗体或抗原结合片段在10mml-组氨酸、7%（w/v）蔗糖和0.02%（w/v）聚山梨醇酯-80，ph6.0中配制。抗体或抗原结合片段通常以约100mg/ml存在于这种制剂中。在一个实施方案中，本发明提供了包含本发明的抗体或其抗原结合片段并且包含进一步的预防或治疗剂的组合物。在一个实施方案中，进一步的预防或治疗剂选自：第二抗hrsv抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明的第二抗hrsv抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。本发明还提供了包含本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段中的任何一种的容器或注射装置。在一个实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。本发明还提供了产生本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段的方法，其包括：在有利于多核苷酸表达的条件下，培养包含编码本发明抗体（或其抗原结合片段）的重链和/或轻链的多核苷酸的宿主细胞；并且任选地从宿主细胞和/或培养基中回收抗体或抗原结合片段。在一个实施方案中，编码重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸在单个载体中。在另一个实施方案中，编码重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸在不同的载体中。在一个实施方案中，编码重链的多核苷酸和编码轻链的多核苷酸编码抗体或抗原结合片段，其包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。本发明还提供了预防或治疗有此需要的个体中的hrsv感染的方法，其包括向个体施用有效量的本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段，任选与进一步的预防或治疗剂或治疗程序结合。在一个实施方案中，待治疗的个体是人个体。在一个实施方案中，进一步的预防或治疗剂选自：第二抗hrsv抗体或其抗原结合片段、编码抗rsvf抗体或抗原结合片段的核酸、或抗体缀合物。在一个实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。本发明还提供了预防或治疗有此需要的个体中的hrsv感染的方法，其包括向个体施用有效量的本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段，其任选与进一步的预防或治疗剂或治疗程序组合。在一个实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。本发明还提供了包含本发明的抗体或抗原结合片段的疫苗或免疫原性组合物。在一个实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在一个实施方案中，疫苗或免疫原性组合物进一步包含选自rsvf蛋白和rsvg蛋白及其片段的抗原。本发明还提供了用于检测样品中的rsv存在的方法（通过检测f蛋白或其片段），该方法包括使样品与本发明的抗体或其抗原结合片段接触，并且检测抗体或片段和肽之间的复合物的存在；其中所述复合物的检测指示rsvf蛋白的存在。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段包括：（i）包含seqidno：1的氨基酸序列的重链可变区cdr1；（ii）包含seqidno：2的氨基酸序列的重链可变区cdr2；（iii）包含seqidno：3的氨基酸序列的重链可变区cdr3；（iv）包含seqidno：4的氨基酸序列的轻链可变区cdr1；（v）包含seqidno：5的氨基酸序列的轻链可变区cdr2；和（vi）包含seqidno：6的氨基酸序列的轻链可变区cdr3。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。本发明还提供了增加抗hrsvf蛋白抗体的抗hrsv活性的方法，其包括：获得亲本抗hrsvf蛋白抗体，并且增加亲本抗hrsvf蛋白抗体的效应子功能；其中与亲本抗hrsvf蛋白抗体相比，所得到的抗hrsvf蛋白抗体的活性增加。如本文使用的，“亲本抗-抗体”指具有野生型fc区和/或野生型糖基化（即，起因于多肽在未工程改造的哺乳动物宿主细胞中的表达的糖基化模式）的抗体。亲本抗体的效应子功能可以通过使其fc区突变或通过改变其糖基化，例如通过使抗体去岩藻糖基化（如下文进一步详细讨论的）得到增加。在一个实施方案中，亲本抗hrsvf蛋白抗体的效应子功能通过在亲本抗hrsvf蛋白抗体的fc区中进行突变而得到增加。在另一个实施方案中，亲本抗hrsvf蛋白抗体的效应子功能通过从抗体去除岩藻糖残基，或在已遗传工程改造的宿主细胞中表达抗体而得到增加，所述遗传工程改造去除对糖蛋白添加岩藻糖的酶活性。附图简述图1a-b显示了人rsv抗体d25、帕利珠单抗和rb1与人rsv-f融合前（a）和融合后（b）蛋白的结合曲线（来自elisa）。图2a-b显示了关于人rsv抗体在rsvalong毒株（a）和rsvbwashington毒株（b）中的中和曲线。图3a-b显示了通过融合f蛋白（a）的丙氨酸扫描诱变和融合前f晶体结构（b）上的表位作图残基的rb1的表位作图。图4a-d显示了在针对抗体浓度标绘的rsva（a）和针对抗体浓度标绘的rsvb攻击（b）的棉鼠攻击模型的肺中与d25相比的rb1功效，或在针对rsva攻击（c）和rsvb攻击（d）的抗体剂量标绘的组织中存在的病毒颗粒（pfu/g）。图5a-d显示了在针对抗体浓度标绘的rsva（a）和针对抗体浓度标绘的rsvb攻击（b）的棉鼠攻击模型的鼻中与d25相比的rb1功效，或在针对rsva攻击（c）和rsvb攻击（d）的抗体剂量标绘的组织中存在的病毒颗粒（pfu/g）。图6显示了人rsv抗体rb1+yte与人rsvaf蛋白的结合曲线（来自elisa）。图7显示了rb1-yte（rb1+yte）相对于具有yte突变组的莫维珠单抗在恒河猴中的药代动力学性质。发明详述缩写在本发明的详细描述和实施例自始至终，使用下述缩写：adcc抗体依赖性细胞毒性cdc补体依赖性细胞毒性cdr使用kabat编号系统定义的免疫球蛋白可变区中的互补决定区cho中国仓鼠卵巢elisa酶联免疫吸附测定fr抗体构架区：排除cdr区的免疫球蛋白可变区hrp辣根过氧化物酶ic50导致50%抑制的浓度igg免疫球蛋白gkabat由elvina.kabat（（1991）sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md.）开创的免疫球蛋白比对和编号系统mab或mab或mab单克隆抗体v区在不同抗体之间在序列中可变的igg链区段。它延伸至轻链中的kabat残基109和重链中的113。vh免疫球蛋白重链可变区vk免疫球蛋白κ轻链可变区。定义为了可以更容易理解本发明，下文具体定义了某些技术和科学术语。除非在本文件的其他地方具体定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。如本文包括所附权利要求使用的，单词的单数形式例如“一个”、“一种”和“该/所述”包括其相应的复数指示物，除非上下文另有明确说明。当应用于动物、人、实验个体、细胞、组织、器官或生物流体时，“施用”和“处理/治疗”指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、个体、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的处理涵盖试剂与细胞接触、以及试剂与流体接触，其中所述流体与细胞接触。“施用”和“处理/治疗”还意指通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一种细胞的细胞体外和离体处理。“rsv疾病”意指由呼吸道合胞病毒（rsv）感染直接或间接引起的任何疾病，以及使患者易患rsv感染的疾病或状况。落入前一范畴内的疾病的例子包括肺炎和细支气管炎。后一范畴中的疾病和状况（即将患者置于严重rsv感染的风险中的那些）包括囊性纤维化、先天性心脏病、癌症、年龄相关的免疫抑制、移植受体以及一般引起免疫抑制状态或免疫系统功能降低的任何状况，例如术后器官移植方案或早产。“治疗（treat）”或“治疗（treating）”意指对患有一种或多种疾病症状、或者怀疑患有试剂对于其具有治疗活性的疾病的个体或患者内部或外部施用治疗剂，例如含有本发明的任何抗体或抗原结合片段的组合物。通常，试剂以有效减轻治疗的个体或群体中的一种或多种疾病症状的量施用，无论是通过经由任何可临床测量的程度诱导这种症状消退还是抑制这种症状进展。有效减轻任何特定疾病症状的治疗剂的量可以根据因素例如患者的疾病状态、年龄和重量，以及药物在个体中引发所需应答的能力而变化。疾病症状是否已得到缓解可以通过任何临床测量来评价，所述临床测量通常由医生或其他熟练的医疗保健提供者用于评价该症状的严重性或进展状态。用抗rsv抗体的治疗也可以与其他干预措施（抗体、核酸、疫苗和小分子化合物）组合，以治疗其他呼吸道病原体。“预防（prevent）”或“预防（preventing）”意指对处于变得被hrsv（试剂对于其具有预防活性）感染的风险中的个体或患者内部或外部施用预防剂，例如含有本发明的任何抗体或抗原结合片段的组合物。预防包括降低后续rsv感染的可能性或严重性，改善rsv感染后与下呼吸道感染（lri）相关的症状，以及诱导使免于rsv感染的免疫。通常，试剂以有效中和肺和/或鼻中的rsv以便阻断感染的量施用。有效改善任何特定疾病症状的预防剂的量可以根据因素例如患者的年龄和重量、以及试剂在个体中引发所需应答的能力而变化。疾病症状是否已得到改善可以通过任何临床测量来评价，所述临床测量通常由医生或其他熟练的医疗保健提供者用于评价该症状的严重性或进展状态，或者在某些情况下改善住院需求。hrsvf蛋白人rsvf蛋白被合成为亚稳态三聚体前体（f0），其被蛋白酶解切割成共价结合的f1和f2亚基。对于副粘病毒科的piv5和rsv成员，已确定了融合前形式的f三聚体的原子结构。参见mclellan等人，2011，jvirol.85:7788–7796（rsv）和welch等人，2012，procnatlacadsci109:16672-16677（piv）。融合前f具有短的c末端胞质尾区、单个跨膜结构域、螺旋柄和球状头部结构域。以融合后形式的ndv、hpiv3和rsvf的原子结构揭示发生大的重折叠事件，以将融合前f转化为融合后f，其中球状头部结构域的部分重新排列以形成六个螺旋束。这些结构连同肽抑制数据一起提示了关于f介导的膜融合的模型，其中在激活后，f1/f2重排，以将来自f1的n末端的疏水性融合肽插入靶细胞膜内，形成前发夹中间产物。这种相对延伸的结构将病毒栓系至细胞膜，并且崩溃以形成融合后结构的稳定的六螺旋束。从亚稳态融合前到前发夹中间产物到融合后构象的转变以下降能量梯度进行，其中融合后形式代表最稳定的状态，并且f重折叠期间释放的能量与膜融合偶联。术语hrsvf蛋白包括人rsvf蛋白及其片段，例如其缺乏信号肽的成熟片段。在本发明的一个实施方案中，人rsvf蛋白的氨基酸序列包含genbank登录号aar14266（hrsvb毒株9320）中公开的氨基酸序列。抗hrsv抗体及其抗原结合片段本发明提供了结合人rsvf蛋白，优选来自rsva株和b株两者的抗体或其抗原结合片段，其融合前f蛋白和融合后f蛋白两者，以及这些抗体或片段的用途。在一些实施方案中，分离抗rsvf蛋白抗体。本文所述的抗体结合在f蛋白的位点iv处的表位。在本文所述的本发明的实施方案的任一中，在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列和/或轻链或轻链可变区不包含seqidno：8的氨基酸序列。在某些实施方案中，重链包含seqidno：23的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成，并且轻链包含seqidno：25的氨基酸序列、基本上由其组成或由其组成。在优选实施方案中，抗rsvf蛋白抗体是全人的。本发明的单克隆抗体的主要优点来自下述事实：它们包括人cdr3序列，并且在一些实施方案中，可以完全是人单克隆抗体。因此，本发明的全人单克隆抗体用于rsv疾病的免疫预防和免疫治疗的体内使用大大降低了对被动施用抗体的宿主免疫应答的问题。当利用现有技术的异种或嵌合衍生的单克隆抗体时，通常遇到这个问题。该优点的第二个重要方面是这些人单克隆抗体对于基因治疗应用的潜在安全性，其中含有非人序列的异种或嵌合蛋白质的表达无法终止。如本文使用的，抗rsvf蛋白抗体或其抗原结合片段指特异性结合人rsvf蛋白的抗体或其抗原结合片段。“特异性结合人rsv”的抗体或其抗原结合片段是这样的抗体或其抗原结合片段，其以约1nm或更高亲和力（例如1nm-2pm、1nm、100pm、10pm或2pm）的kd结合融合前或融合后人rsvf蛋白，但不结合缺乏rsvf蛋白序列的其他蛋白质。在一个实施方案中，特异性结合人rsvf蛋白的本发明抗体也与牛rsvf蛋白交叉反应。如本文使用的，“交叉反应性”指抗体与来自其他物种的同源蛋白质反应的能力。可以使用本领域已知的任何测定来确定抗体是否特异性结合人rsvf蛋白。本领域已知用于确定结合亲和力的测定的实例包括表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）。本发明包括抗hrsvf蛋白抗体及其使用方法。如本文使用的，术语“抗体”指显示出所需生物活性的任何形式的抗体。因此，它以最广泛的含义使用，并且具体涵盖但不限于单克隆抗体（包括包含两条轻链和两条重链的全长单克隆抗体）、多克隆抗体、多特异性抗体（例如双特异性抗体）、人源化抗体、全人抗体和嵌合抗体。本发明包括抗hrsvf蛋白抗原结合片段及其使用方法。如本文使用的，除非另有说明，否则“抗体片段”或“抗原结合片段”指抗体的抗原结合片段，即保留与由全长抗体结合的抗原特异性结合的能力的抗体片段，例如保留一个或多个cdr区的片段。抗原结合片段的实例包括但不限于fab、fab'、f（ab'）2和fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-fv；和由抗体片段形成的多特异性抗体。本发明包括抗rsvf蛋白fab片段及其使用方法。“fab片段”由一条轻链以及一条重链的ch1和可变区组成。fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“fab片段”可以是抗体的木瓜蛋白酶切割的产物。本发明包括包含fc区的抗rsvf蛋白抗体及其抗原结合片段以及其使用方法。“fc”区含有包含抗体的ch1和ch2结构域的两个重链片段。两个重链片段通过两个或更多个二硫键和通过ch3结构域的疏水相互作用结合在一起。本发明包括抗rsvf蛋白fab'片段及其使用方法。“fab'片段”含有一条轻链和一条重链的一部分或片段，所述一部分或片段含有vh结构域和ch1结构域以及ch1和ch2结构域之间的区域，使得链间二硫键可以在两个fab'片段的两条重链之间形成，以形成f（ab'）2分子。本发明包括抗rsvf蛋白f（ab'）2片段及其使用方法。“f（ab'）2片段”含有两条轻链和包含在ch1和ch2结构域之间的恒定区的一部分的两条重链，使得链间二硫键在两条重链之间形成。f（ab'）2片段因此由通过两条重链之间的二硫键结合在一起的两个fab'片段组成。“f（ab'）2片段”可以是抗体的胃蛋白酶切割的产物。本发明包括抗rsvf蛋白fv片段及其使用方法。“fv区”包含来自重链和轻链两者的可变区，但缺乏恒定区。本发明包括抗rsvf蛋白scfv片段及其使用方法。术语“单链fv”或“scfv”抗体指包含抗体的vh和vl结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。一般地，fv多肽进一步包含在vh和vl结构域之间的多肽接头，其使得scfv能够形成抗原结合所需的结构。关于scfv的综述，参见pluckthun（1994）thepharmacologyofmonoclonalantibodies，第113卷，rosenburg和moore编辑springer-verlag，newyork，第269-315页。还参见国际专利申请公开号wo88/01649以及美国专利号4,946,778和5,260,203。本发明包括抗rsvf蛋白结构域抗体及其使用方法。“结构域抗体”是仅含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在一些情况下，两个或更多个vh区与肽接头共价连接，以产生二价结构域抗体。二价结构域抗体的两个vh区可以靶向相同或不同的抗原。本发明包括抗rsvf蛋白二价抗体及其使用方法。“二价抗体”包含两个抗原结合位点。在一些情况下，两个结合位点具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体可能是双特异性的（参见下文）。本发明包括抗rsvf蛋白双抗体及其使用方法。如本文使用的，术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含在相同多肽链中与轻链可变结构域（vl）连接的重链可变结构域（vh）（vh-vl或vl-vh）。通过使用太短而不允许在同一链上的两个结构域之间配对的接头，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对，并且产生两个抗原结合位点。双抗体在例如ep404,097；wo93/11161；和holliger等人（1993）proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448中更全面地描述。关于经工程改造的抗体变体的综述，一般参见holliger和hudson（2005）nat.biotechnol.23:1126-1136。通常，以某种方式修饰的本发明的抗体或抗原结合片段保留其结合活性的至少10%（当与亲本抗体相比时），当该活性在摩尔基础上表达时。优选地，本发明的抗体或抗原结合片段保留与亲本抗体相比至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多的rsvf蛋白结合亲和力。还预期本发明的抗体或抗原结合片段可以包括基本上不改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代（称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”）。本发明包括分离的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段以及其使用方法。“分离的”抗体或其抗原结合片段至少部分不含来自它们在其中产生的细胞或细胞培养物的其他生物分子。此类生物分子包括核酸、蛋白质、脂质、碳水化合物或其他材料，例如细胞碎片和生长培养基，分离的抗体或抗原结合片段可以进一步至少部分不含表达系统组分，例如来自宿主细胞或其生长培养基的生物分子，一般地，术语“分离的”不预期指这样的生物分子的完全不存在，或者水、缓冲液或盐的不存在，或包括抗体或片段的药物制剂的组分。本发明包括单克隆抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段以及包含多种分离的单克隆抗体的单克隆抗体组合物。如本文使用的，术语“单克隆抗体”指基本上同质的抗体群体，即该群体包含的抗体分子在氨基酸序列中是相同的，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外。相比之下，常规（多克隆）抗体制剂通常包括在其可变结构域，特别是通常对于不同表位特异性的其cdr中具有不同氨基酸序列的许多不同抗体。修饰语“单克隆”指示如从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法的抗体产生。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可以通过重组dna方法制备（参见例如美国专利号4,816,567）。一般而言，基础（或“全长”）抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两对相同的多肽链，每对具有一条“轻”（约25kda）和一条“重”链（约50-70kda）。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110个或更多个氨基酸的可变区或结构域。重链的羧基末端部分可以限定主要负责效应子功能的恒定区或结构域。通常，人轻链分类为κ和λ轻链。此外，人重链通常分类为μ、δ、γ、α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为igm、igd、igg、iga和ige。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12个或更多个氨基酸的“j”区连接，其中重链也包括约10个或更多个氨基酸的“d”区。一般参见fundamentalimmunology第7章（paul，w.编辑，第2版ravenpress，n.y.（1989）。在抗体或其抗原结合片段的上下文中，术语结构域和区域在适当时可以互换使用。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，一般而言，完整抗体具有两个结合位点。除了在双功能或双特异性抗体中之外，两个结合位点一般而言是相同的。通常，重链和轻链两者的可变结构域包含位于相对保守的构架区（fr）内的三个高变区，也称为互补决定区（cdr）。cdr通常通过构架区进行比对，使得能够结合特异性表位。一般而言，从n末端到c末端，轻链和重链可变结构域两者均包含fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。一般地，氨基酸对每个结构域的指定根据下述定义：sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，kabat，等人；nationalinstitutesofhealth，bethesda，md.；第5版；nihpubl.no.91-3242（1991）；kabat，1978，adv.prot.chem.32:1-75；kabat等人，1977，j.biol.chem.252:6609-6616；chothia等人，1987，jmol.biol.196:901-917或chothia等人，1989，nature342:878-883。如本文使用的，术语“高变区”指负责抗原结合的抗体或其抗原结合片段的氨基酸残基。高变区包含来自“互补决定区”或“cdr”（即轻链可变结构域中的cdrl1、cdrl2和cdrl3以及重链可变结构域中的cdrh1、cdrh2和cdrh3）的氨基酸残基。参见kabat等人（1991）sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，第5版publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md.（通过序列定义抗体的cdr区）；还参见chothia和lesk，1987，j.mol.biol.196:901-917（通过结构定义抗体的cdr区）。如本文使用的，术语“构架”或“fr”残基指除本文定义为cdr残基的高变区残基外的那些可变结构域残基。“分离的核酸分子”或“分离的多核苷酸”意指基因组的dna或rna、mrna、cdna或合成来源或其一些组合，其不与其中在自然界中发现分离的多核苷酸的多核苷酸的全部或一部分结合，或者与它在自然界中不与之连接的多核苷酸连接。为了本公开内容的目的，应该理解“包含特定核苷酸序列的核酸分子”不涵盖完整的染色体。除指定的序列之外，“包含”指定的核酸序列的分离的核酸分子可以包括至多10个或甚至至多20个或更多个其他蛋白质或其一部分或片段的编码序列，或者可以包括可操作地连接的调节序列，其控制所述核酸序列的编码区的表达，和/或可以包括载体序列。短语“控制序列”指在特定宿主生物中表达可操作连接的编码序列所必需的dna序列。例如，适合于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵子序列和核糖体结合位点。真核细胞已知使用启动子、多聚腺苷酸化信号和增强子。当核酸或多核苷酸置于与另一种核酸序列的功能关系内之时，它是“可操作地连接的”。例如，如果前序列或分泌前导区的dna表达为参与多肽分泌的前蛋白，则它与多肽的dna可操作地连接；如果启动子或增强子影响序列的转录，则它与编码序列可操作地连接；或者如果核糖体结点被这样定位以便促进翻译，则它与编码序列可操作地连接。一般地但不一定，“可操作地连接”意指待连接的dna序列是邻接的，并且在分泌型前导区的情况下，是邻接的和在阅读相中。然而，增强子不必是邻接的。连接通过在方便的限制性位点处的连接来完成。如果不存在这样的位点，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。如本文使用的，表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这样的指名都包括后代。因此，单词“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和由其衍生的培养物，而不考虑转移数目。还应理解，由于有意或无意的突变，并非所有后代都具有确切相同的dna含量。包括具有与对于最初转化的细胞中筛选的相同功能或生物活性的突变后代。当预期明确指名时，它根据上下文将是明确的。如本文使用的，“种系序列”指未重排的免疫球蛋白dna序列的序列。可以使用任何合适的未重排的免疫球蛋白序列来源。人种系序列可以例如得自美国国立卫生研究院（unitedstatesnationalinstitutesofhealth）的美国国家关节炎和肌肉骨骼和皮肤疾病研究所（nationalinstituteofarthritisandmusculoskeletalandskindiseases）的网站上的joinsolver种系数据库。小鼠种系序列可以例如如giudicelli等人，2005，nucleicacidsres.33:d256-d261中所述获得。示例性抗rsvf蛋白抗体的物理和功能性质本发明提供了具有特定结构和功能特征的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段，以及该抗体或其抗原结合片段在治疗或预防与rsv感染有关的疾病/状况中的使用方法。本发明的“抗rsvf蛋白抗体或其抗原结合片段”包括：本文讨论的任何抗体或其抗原结合片段（例如rb1）或其变体（例如序列变体或功能变体）；包含表7中所示的任何一个或多个cdr的任何抗体或抗原结合片段；与本文讨论的抗体（例如rb1）结合人rsvf蛋白中的相同表位的任何抗体或抗原结合片段；以及由本文讨论的抗体（例如rb1）交叉阻断（cross-blocks）（部分或完全）或交叉阻断（cross-blocked）（部分或完全）rsv结合的任何抗体或抗原结合片段。交叉阻断抗体及其抗原结合片段可以基于其在标准结合测定（例如biacore、elisa、流式细胞术）中与本发明的抗体交叉竞争的能力来鉴定。例如，可以使用标准elisa测定，其中重组rsvf蛋白蛋白质固定在平板上，一个抗体是荧光标记的，并且评估未标记抗体竞争标记抗体结合的能力。另外或可替代地，biacore分析可以用于评价抗体交叉竞争的能力。测试抗体抑制另一抗体（例如抗体d25）与rsvf蛋白结合的能力证实测试抗体可以与另一种抗体（例如d25）竞争结合rsvf蛋白，并且因此在一些情况下，可以结合与抗体d25相同的在rsvf蛋白上的表位至重叠表位。如上所述，与本发明的任何抗rsvf蛋白抗体或其抗原结合片段结合相同表位的抗体及其片段也构成本发明的部分。此外，在某些实施方案中，结合与由本发明的任何抗rsvf蛋白抗体结合的表位重叠的表位的抗体也构成本发明的部分。存在可用于作图靶抗原上的抗体表位的几种方法，包括：h/d-ex质谱、x射线晶体学、pepscan分析和定点诱变。例如，与蛋白酶解和质谱法偶联的hdx（氢氘交换）可以用于确定抗体在特异性抗原y上的表位。hdx-ms依赖当单独和在其抗体的存在下在d2o中温育时，在不同的时间间隔通过抗原的氘掺入程度的准确测量和比较。氘与暴露区域中的蛋白质的酰胺主链上的氢交换，而与抗体结合的抗原区域将受到保护，并且在通过蛋白酶解片段的lc-ms/ms分析后，显示较少的交换或无交换。本发明的抗rsvf蛋白抗体的免疫球蛋白链以及其cdr的实例包括但不限于表7中公开的那些（seqidno：1-8、23和25）。本发明包括包含seqidno：1-8、23和25的氨基酸序列，基本上由其组成或由其组成的任何多肽，以及编码此类多肽的重组核苷酸。本发明的范围包括分离的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段，其包含本文所述的免疫球蛋白链的变体，例如seqidno：7、8中的任一个；其中所述变体显示出下述性质中的一个或多个：（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在某些实施方案中，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，其结合人hrsvf蛋白，并且具有与seqidno：8（vl）和7（vh）的序列同一性为至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%的vl结构域和vh结构域；其中所述变体显示出所需结合和性质，例如（i）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白；或（ii）如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的，以约1x10-9m至约1x10-11m的kd值结合人rsv融合后f蛋白。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。“保守修饰的变体”或“保守取代”指用具有相似特征（例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等）的其他氨基酸取代蛋白质中的氨基酸，使得经常可以做出变化而在不改变蛋白质的生物活性。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代基本上不改变生物活性（参见例如watson等人（1987）molecularbiologyofthegene，thebenjamin/cummingspub.co.，第224页（第4版））。另外，结构或功能上相似的氨基酸的取代不太可能破坏生物活性。示例性的保守取代在表1中阐述。表1.示例性的保守氨基酸取代原始残基保守取代ala（a）gly；serarg（r）lys；hisasn（n）gln；hisasp（d）glu；asncys（c）ser；alagln（q）asnglu（e）asp；glngly（g）alahis（h）asn；glnile（i）leu；valleu（l）ile；vallys（k）arg；hismet（m）leu；ile；tyrphe（f）tyr；met；leupro（p）alaser（s）thrthr（t）sertrp（w）tyr；phetyr（y）trp；pheval（v）ile；leu本发明还考虑了本发明抗体的功能保守变体。如本文使用的，“功能保守性变体”指这样的抗体或片段，其中一个或多个氨基酸残基已变化而不改变所需性质，例如抗原亲和力和/或特异性。此类变体包括但不限于用具有相似性质的氨基酸替换，例如表1的保守氨基酸取代。还提供了包含抗hrsvf蛋白抗体的vl结构域的分离的多肽（例如seqidno：8），以及包含本发明的抗hrsv抗体的vh结构域的分离的多肽（例如seqidno：7），其具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个氨基酸取代，其可以专一地存在于构架区中，或者其中一个或多个可以位于一个或多个cdr中。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。在另一个实施方案中，提供了抗体或其抗原结合片段，其结合hrsvf蛋白，并且具有与本文所述的一个或多个vl结构域或vh结构域的序列同一性为至少99%98%、97%、96%、95%、90%、85%、80%或75%的vl结构域和vh结构域，并且显示出与hrsvf蛋白的特异性结合。在另一个实施方案中，本发明的结合抗体或其抗原结合片段包含具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多个氨基酸取代的vl和vh结构域（含有和不含信号序列），所述氨基酸取代可以专一地存在于构架区中，或者其中一个或多个可位于一个或多个cdr中，并且显示出与hrsvf蛋白的特异性结合。在某些实施方案中，重链或重链可变区不包含seqidno：9的氨基酸序列。多核苷酸和多肽本发明进一步包括编码本发明的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段的任何多肽或免疫球蛋白链的多核苷酸。在一个实施方案中，分离的多核苷酸编码抗体或其抗原结合片段，其包含根据本发明的至少一个成熟免疫球蛋白轻链可变（vl）结构域和/或根据本发明的至少一个成熟免疫球蛋白重链可变（vh）结构域。在一些实施方案中，分离的多核苷酸编码在单个多核苷酸分子上的轻链和重链两者，并且在其他实施方案中，轻链和重链在分开的多核苷酸分子上编码。在另一个实施方案中，多核苷酸进一步编码信号序列。例如，本发明包括编码seqidno：1-8、23和25中所述的氨基酸的多核苷酸，以及与其杂交的多核苷酸，以及由这种杂交多核苷酸编码的任何多肽。在一个实施方案中，本发明包括包含seqidno：15（可变重链）或seqidno：16（可变轻链）、基本上由其组成或由其组成的核酸序列。在某些实施方案中，密码子优化可以用于增强核酸的性质，例如在某些宿主中的表达。在一个实施方案中，本发明包括包含seqidno：17（密码子优化的可变重链）或seqidno：18（密码子优化的可变轻链）、基本上由其组成或由其组成的核酸序列。在某些实施方案中，可以使用前导序列。在一个实施方案中，本发明包含核酸序列，所述核酸序列包含与重链或轻链连接的seqidno：19（前导序列和重链）或seqidno：20（前导序列和轻链）、基本上由其组成或由其组成，以分别给出seqidno：21或seqidno：22。一般而言，多核苷酸在低、中等或高度严格条件下杂交，并且编码维持与hrsvf蛋白结合的能力的抗体或其抗原结合片段。当单链形式的第一多核苷酸分子可以在温度和溶液离子强度的适当条件下与第二多核苷酸分子退火时，第一多核苷酸分子与第二多核苷酸分子是“可杂交的”（参见sambrook等人，同上）。温度和离子强度的条件决定了杂交的“严格性”。通常的低严格杂交条件包括55℃、5xssc、0.1%sds和无甲酰胺；或在42℃下30%甲酰胺、5xssc、0.5%sds。通常的中等严格杂交条件是在42℃下40%甲酰胺，具有5x或6xssc和0.1%sds。高度严格杂交条件是在42℃下或任选在更高温度（例如57℃、59℃、60℃、62℃、63℃、65℃或68℃）下50%甲酰胺、5x或6xssc。一般而言，ssc是0.15mnacl和0.015m柠檬酸钠。杂交要求两个多核苷酸含有互补序列，尽管取决于杂交的严格性，碱基之间的错配是可能的。用于杂交多核苷酸的合适严格性取决于多核苷酸的长度和互补程度，这是本领域众所周知的变量。两个核苷酸序列之间的相似性或同源性程度越大，核酸可以在其下杂交的严格性越高。对于长度大于100个核苷酸的杂合体，已推导了用于计算解链温度的等式（参见sambrook等人，同上，9.50-9.51）。关于与较短的多核苷酸例如寡核苷酸的杂交，错配的位置变得更重要，并且寡核苷酸的长度决定了其特异性（参见sambrook等人，同上，11.7-11.8）。在一个实施方案中，本发明包含分离的多核苷酸，其编码包含cdr-h1（seqidno：1）、cdr-h2（seqidno：2）和cdr-h3（seqidno：3）的抗体重链可变（vh）结构域或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明包含分离的多核苷酸，其编码包含cdr-l1（seqidno：4）、cdr-l2（seqidno：5）和cdr-l1cdr-l3（seqidno：6）的抗体轻链可变（vl）结构域或其抗原结合片段。在一个实施方案中，本发明包含分离的多核苷酸，其编码seqidno：7的免疫球蛋白重链可变（vh）结构域或seqidno：23的重链。在一个实施方案中，本发明包含分离的多核苷酸，其编码seqidno：8的免疫球蛋白重链可变（vl）结构域或seqidno：25的轻链。本发明还提供了包含本发明的分离的多核苷酸的载体，例如表达载体如质粒，其中当宿主细胞用载体转染时，多核苷酸可操作地连接至由宿主细胞识别的控制序列。还提供了包含本发明载体的宿主细胞、以及用于产生本文公开的抗体或其抗原结合片段或多肽的方法，其包括培养具有表达载体或者编码抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白链的核酸的宿主细胞，并且从宿主细胞或培养基中分离抗原或其抗原结合片段。本发明还包括多肽，例如免疫球蛋白多肽，当通过blast算法执行比较时，其包含的氨基酸序列与本文提供的抗体的氨基酸序列至少约75%相同、80%相同、更优选至少约90%相同且最优选至少约95%相同（例如95%、96%、97%、98%、99%、100%），其中所述算法的参数选择为给出在分别的参考序列的整个长度上在分别序列之间的最大匹配（例如期望阈值：10；字大小：3；在查询范围内的最大匹配：0；blosum62矩阵；缺口成本：存在11，延伸1；条件组合得分矩阵调整）。序列同一性指在两个序列最佳比对时，两个多肽的氨基酸在等价位置处相同的程度。下述参考文献涉及经常用于序列分析的blast算法：blastalgorithms:altschul等人（2005）febsj.272（20）:5101-5109；altschul，s.f.等人，（1990）j.mol.biol.215:403-410；gish，w.等人，（1993）naturegenet.3:266-272；madden，t.l.等人，（1996）meth.enzymol.266:131-141；altschul，s.f.等人，（1997）nucleicacidsres.25:3389-3402；zhang，j.等人，（1997）genomeres.7:649-656；wootton，j.c.等人，（1993）comput.chem.17:149-163；hancock，j.m.等人，（1994）comput.appl.biosci.10:67-70；alignmentscoringsystems:dayhoff，m.o.等人，"amodelofevolutionarychangeinproteins."inatlasofproteinsequenceandstructure,（1978）第5卷，suppl.3.m.o.dayhoff（编辑），第345-352页，natl.biomed.res.found.，washington，dc；schwartz，r.m.等人，"matricesfordetectingdistantrelationships."inatlasofproteinsequenceandstructure,（1978）第5卷，suppl.3."m.o.dayhoff（编辑），第353-358页，natl.biomed.res.found.，washington，dc；altschul，s.f.,（1991）j.mol.biol.219:555-565；states，d.j.等人，（1991）methods3:66-70；henikoff，s.等人，（1992）proc.natl.acad.sci.usa89:10915-10919；altschul，s.f.等人，（1993）j.mol.evol.36:290-300；alignmentstatistics:karlin，s.等人，（1990）proc.natl.acad.sci.usa87:2264-2268；karlin，s.等人，（1993）proc.natl.acad.sci.usa90:5873-5877；dembo，a.等人，（1994）ann.prob.22:2022-2039；以及altschul，s.f."evaluatingthestatisticalsignificanceofmultipledistinctlocalalignments."intheoreticalandcomputationalmethodsingenomeresearch（s.suhai，编辑）,（1997）第1-14页，plenum，newyork。结合亲和力例如且非限制性地，本文公开的抗体和抗原结合片段可以以至少约1x10-9m的kd值（即1x10-9m或更低的kd值）结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的。在一个实施方案中，本文公开的抗体和抗原结合片段可以以至少约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的。在一个实施方案中，本文公开的抗体和抗原结合片段可以以约1x10-9m至约1x10-12m的kd值结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过表面等离振子共振（例如biacore）或类似技术（例如kinexa或octet）测定的。在一个实施方案中，本文公开的抗体和抗原结合片段可以以至少约100pm的kd值（即，约100pm或更低的kd值）结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过biacore或类似技术测定的。在一个实施方案中，本文公开的抗体和抗原结合片段可以以至少约10pm的kd值（即，约10pm或更低的kd值）结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过biacore或类似技术测定的。在一个实施方案中，本发明的抗体和抗原结合片段可以以约1pm至约100pm的kd结合人rsv融合前f蛋白或融合后f蛋白，如通过biacore或类似技术测定的。制备抗体及其抗原结合片段的方法本发明包括用于制备本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在有利于这种表达的条件下培养表达抗体或片段的细胞系，并且任选地从细胞和/或生长培养基（例如细胞培养基）中分离抗体或片段。本文公开的抗hrsvf蛋白抗体也可以重组产生（例如在大肠杆菌（e.coli）/t7表达系统、哺乳动物细胞表达系统或低等真核生物表达系统中）。在该实施方案中，可以将编码本发明的抗体免疫球蛋白分子（例如vh或vl）的核酸插入基于pet的质粒内，并且在大肠杆菌/t7系统中表达。例如，本发明包括用于在宿主细胞（例如细菌宿主细胞，例如大肠杆菌，例如bl21或bl21de3）中表达抗体或其抗原结合片段或其免疫球蛋白链的方法，所述方法包括在细胞中表达t7rna聚合酶，所述细胞还包括编码与t7启动子可操作连接的免疫球蛋白链的多核苷酸。例如，在本发明的一个实施方案中，细菌宿主细胞例如大肠杆菌包括多核苷酸，所述多核苷酸编码可操作地连接至lac启动子的t7rna聚合酶基因并表达聚合酶，并且通过宿主细胞与iptg（异丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷）的温育诱导链。存在本领域已知的通过其产生重组抗体的几种方法。美国专利号4,816,567中公开了用于抗体重组生产的方法的一个例子。转化可以通过用于将多核苷酸引入宿主细胞内的任何已知方法。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞内的方法是本领域众所周知的，并且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸在脂质体中的包封、生物射弹注射和dna直接显微注射到核内。另外，可以通过病毒载体将核酸分子引入哺乳动物细胞内。转化细胞的方法是本领域众所周知的。参见例如美国专利号4,399,216；4912040；4,740,461和4,959,455。因此，本发明包括用于制备本发明的抗hrsv抗体或其抗原结合片段或其免疫球蛋白链的重组方法，其包括将编码抗体或片段的一条或多条免疫球蛋白链的多核苷酸（例如重和/或轻免疫球蛋白链）；在有利于这种表达的条件下培养宿主细胞（例如cho或毕赤酵母属或巴斯德毕赤酵母），并且任选地从宿主细胞和/或宿主细胞在其中生长的培养基中分离抗体或片段或链。抗hrsvf蛋白抗体也可以通过美国专利号6,331,415中阐述的任何方法合成。真核和原核宿主细胞，包括作为用于表达本文公开的抗体或片段或免疫球蛋白链的宿主的哺乳动物细胞是本领域众所周知的，并且包括可从美国典型培养物保藏中心（atcc）获得的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢（cho）细胞、nso、sp2细胞、hela细胞、幼仓鼠肾（bhk）细胞、猴肾细胞（cos）、人肝细胞癌细胞（例如hepg2）、a549细胞、3t3细胞、hek-293细胞和许多其他细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、犬、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过确定哪些细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。可以使用的其他细胞系是昆虫细胞系，例如sf9细胞、两栖细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。真菌细胞包括酵母和丝状真菌细胞，包括例如巴斯德毕赤酵母、芬兰毕赤酵母（pichiafinlandica）、喜海藻糖毕赤酵母（pichiatrehalophila）、pichiakoclamae、膜醭毕赤酵母（pichiamembranaefaciens）、微小毕赤酵母（pichiaminuta）（ogataeaminuta、pichialindneri）、（pichiaopuntiae）、耐热毕赤酵母（pichiathermotolerans）、柳毕赤酵母（pichiasalictaria）、pichiaguercuum、皮杰普毕赤酵母（pichiapijperi）、树干毕赤酵母（pichiastiptis）、甲醇毕赤酵母（pichiamethanolica）、毕赤酵母属种（pichiasp.）、酿酒酵母（saccharomycescerevisiae）、酵母属种（saccharomycessp.）、多形汉逊酵母（hansenulapolymorpha）、克鲁维酵母属种（kluyveromycessp.）、乳酸克鲁维酵母（kluyveromyceslactis）、白色念珠菌（candidaalbicans）、构巢曲霉（aspergillusnidulans）、黑曲霉（aspergillusniger）、米曲霉（aspergillusoryzae）、里氏木霉（trichodermareesei）、chrysosporiumlucknowense、镰刀菌属物种（fusariumsp.）、fusariumgramineum、金黄色镰孢（fusariumvenenatum）、小立碗藓（physcomitrellapatens）和粗糙脉孢菌（neurosporacrassa）、毕赤酵母属种、任何酵母属种、多形汉逊酵母、任何克鲁维酵母属种、白色念珠菌、任何曲霉属种（aspergillussp.）、里氏木霉、chrysosporiumlucknowense、任何镰刀菌属种、耶氏解脂酵母（yarrowialipolytica）和粗糙脉孢菌。当编码重链或其抗原结合部分或片段、轻链和/或其抗原结合片段的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞内之时，通过培养宿主细胞足够长的时间段来产生抗体，以允许在宿主细胞中表达抗体或片段或链或者分泌到宿主细胞在其中生长的培养基内。使用标准蛋白质纯化方法可以从培养基中回收抗体及其抗原结合片段和免疫球蛋白链。此外，使用多种已知技术可以增强来自生产细胞系的本发明的抗体及其抗原结合片段和免疫球蛋白链（或来自其的其他部分）的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统（gs系统）是在某些条件下用于增强表达的常用方法。gs系统整体或部分与欧洲专利0216846、0256055和0323997以及欧洲专利申请89303964.4结合进行讨论。因此，在本发明的一个实施方案中，哺乳动物宿主细胞（例如cho）缺乏谷氨酰胺合成酶基因，并且在培养基中不存在谷氨酰胺的情况下生长，然而，其中编码免疫球蛋白链的多核苷酸包含补充了宿主细胞中的基因缺失的谷氨酰胺合成酶基因。本发明包括用于纯化本发明的抗hrsv抗体或其抗原结合片段的方法，其包括将包含抗体或片段的样品引入纯化介质（例如阳离子交换介质，阴离子交换介质、疏水性交换介质、亲和纯化介质（例如蛋白a、蛋白g、蛋白a/g、蛋白l）），并且从不与培养基结合的所述样品的流通级分中收集纯化的抗体或片段；或者丢弃流通级分并且从介质中洗脱结合的抗体或片段并收集洗脱物。在本发明的一个实施方案中，介质在对其应用样品的柱中。在本发明的一个实施方案中，纯化方法在抗体或片段在宿主细胞中重组表达后进行，例如，其中首先裂解宿主细胞，并且任选地在介质上纯化之前，将裂解产物纯化掉不溶性材料。一般而言，在特定细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白将具有糖基化模式，所述糖基化模式是细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白的特征。因此，抗体的特定糖基化模式将取决于用于产生抗体的特定细胞系或转基因动物。然而，由本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体都包含本发明，与抗体可能具有的糖基化模式无关。类似地，在特定实施方案中，具有仅包含非岩藻糖基化的n-聚糖的糖基化模式的抗体可能是有利的，因为这些抗体已显示在体外和体内两者通常显示出比其岩藻糖基化配对物更有力的功效（参见例如，shinkawa等人，j.biol.chem.278:3466-3473（2003）；美国专利号6,946,292和7,214,775）。具有非岩藻糖基化的n-聚糖的这些抗体不太可能是免疫原性的，因为它们的碳水化合物结构是存在于人血清igg中的群体的正常组分。本发明包括对于hrsvf蛋白和另一种抗原例如hrsvg蛋白具有结合特异性的双特异性和双功能抗体和抗原结合片段、及其使用方法。双特异性或双功能抗体是具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点的人工杂合抗体。双特异性抗体可以通过多种方法产生，所述方法包括杂交瘤的融合或fab'片段的连接。参见例如songsivilai等人，（1990）clin.exp.immunol.79:315-321，kostelny等人，（1992）jimmunol.148:1547-1553。另外，双特异性抗体可以形成为“双抗体”（holliger等人，（1993）pnasusa90:6444-6448）或“janusins”（traunecker等人，（1991）emboj.10:3655-3659和traunecker等人，（1992）int.j.cancersuppl.7:51-52）。本发明进一步包括本文公开的抗hrsv抗体的抗hrsvf蛋白抗原结合片段。抗体片段包括f（ab）2片段，其可以通过igg经由例如胃蛋白酶的酶促切割来产生。fab片段可以通过例如用二硫苏糖醇或巯基乙胺还原f（ab）2来产生。取决于其重链的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可被分配到不同的类别。存在至少五个主要类别的免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，并且其中几个可以进一步分成亚类（同种型），例如，igg1、igg2、igg3和igg4；iga1和iga2。本发明包含这些抗体类别或亚类中任一的抗体和抗原结合片段。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含重链恒定区，例如，例如人恒定区，如γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在另一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含轻链恒定区，例如，人轻链恒定区，如λ或κ人轻链区或其变体。例如且非限制性地，人重链恒定区可以是γ4，并且人轻链恒定区可以是κ。在另一个实施方案中，抗体的fc区是具有ser228pro突变的γ4（schuurman，j等人，2001，mol.immunol.38:1-8）。在一个实施方案中，抗体或抗原结合片段包含igg1亚型的重链恒定区。在一些实施方案中，不同的恒定结构域可以附加到衍生自本文提供的cdr的vl和vh区。例如，如果本发明的抗体（或片段）的特定预期用途要求改变的效应子功能，则可以使用除人igg1外的重链恒定结构域，或者可以利用杂合igg1/igg4。尽管人igg1抗体提供了较长的半衰期和效应子功能，如补体激活和抗体依赖性细胞毒性，但这种活性对于抗体的所有用途可能并不是期望的。在这种情况下，可以使用例如人igg4恒定结构域。本发明包括抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段，其包含igg4恒定结构域，例如拮抗剂、人源化抗hrsvf蛋白抗体和片段、及其使用方法。在一个实施方案中，igg4恒定结构域可以在与eu系统中的位置228和kabat系统中的位置241相对应的位置处不同于天然人igg4恒定结构域（swiss-prot登录号p01861.1），其中天然ser108由pro替换，以便防止cys106和cys109（对应于eu系统中的位置cys226和cys229以及kabat系统中的位置cys239和cys242）之间潜在的链间二硫键，其可以干扰适当的链内二硫键形成。参见angal等人（1993）mol.imunol.30:105。在其他情况下，可以使用经修饰的igg1恒定结构域，其已进行修饰以增加半衰期或减少效应子功能。抗体工程改造本发明的抗体可以经受构架突变以改善抗体的性质。一种这样的构架修饰包括使构架区内或甚至一个或多个cdr区内的一个或多个残基突变，以去除t细胞表位，从而降低抗体的潜在免疫原性。这种方法也被称为“脱免疫”，并且在美国专利号7,125,689进一步详细地描述。在特定实施方案中，期望将含有暴露的侧链的某些氨基酸改变为另一个氨基酸残基，以便提供最终抗体更大的化学稳定性，以便避免脱酰胺或异构化。天冬酰胺的脱酰胺可以在ng、dg、ng、ns、na、nt、qg或qs序列上发生，并且导致异天冬氨酸残基的产生，所述异天冬氨酸残基将扭结（kink）引入多肽链内，并且降低其稳定性（异天冬氨酸效应）。异构化可以在dg、ds、da或dt序列处发生。在某些实施方案中，本公开内容的抗体不含脱酰胺或天冬酰胺异构位点。例如，可以将天冬酰胺（asn）残基改变为gln或ala，以降低在任何asn-gly序列处，特别是在cdr内的异天冬氨酸形成的可能性。类似的问题可以在asp-gly序列处出现。reissner和aswad（2003）cell.mol.lifesci.60:1281。异天冬氨酸形成可以使抗体与其靶抗原的结合减弱或完全取消。参见presta（2005）j.allergyclin.immunol.116:731在734处。在一个实施方案中，天冬酰胺变为谷氨酰胺（gln）。也可能期望改变与天冬酰胺（asn）或谷氨酰胺（gln）残基相邻的氨基酸，以降低脱酰胺的可能性，当小氨基酸与天冬酰胺或谷氨酰胺相邻出现时，所述脱酰胺以更大的速率发生。参见bischoff&kolbe（1994）j.chromatog.662:261。另外，cdr中的任何甲硫氨酸残基（通常为溶剂暴露的met）可以改变为lys、leu、ala或phe或其他氨基酸，以便降低甲硫氨酸硫氧化的可能性，这可以降低抗原结合亲和力，并且也促成最终抗体制备中的分子异质性。同前。另外，为了防止或最小化潜在的易断裂的asn-pro肽键，可能期望将cdr中发现的任何asn-pro组合改变为gln-pro、ala-pro或asn-ala。随后筛选具有这种取代的抗体，以确保取代不将抗体对于hrsvf蛋白的亲和力或特异性或其他所需的生物活性降低至无法接受的水平。表2.示例性的稳定cdr变体fc区的抗体工程改造本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）也可以进行工程改造，以包括在fc区内的修饰，通常改变抗体的一种或多种性质，例如血清半衰期、补体固定、fc受体结合和/或效应功能（例如抗原依赖性细胞毒性）。此外，本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）可以进行化学修饰（例如一个或多个化学部分可以附着至抗体）或进行修饰以改变其糖基化，再次改变抗体或片段的一种或多种性质。下文更详细地描述这些实施方案中的每个。fc区中的残基编号是kabat的eu索引的那种。本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）还包括具有修饰（或阻断）的fc区的抗体和片段，以提供改变的效应子功能。参见例如，美国专利号5,624,821；wo2003/086310；wo2005/120571；wo2006/0057702。这种修饰可以用于增强或抑制免疫系统的各种反应，在诊断和治疗中具有可能有益的效应。fc区的改变包括氨基酸改变（取代、缺失和插入）、糖基化或去糖基化，并且添加多个fc区。fc的变化也可以改变在治疗性抗体中的抗体半衰期，允许更不频繁的施用和因此增加的便利性和减少的材料使用。参见presta，2005，j.allergyclin.immunol.116:731在734-35处。在本发明的一个实施方案中，ch1的铰链区进行修饰，使得铰链区中半胱氨酸残基的数目增加或减少。这种方法在美国专利号5,677,425中进一步描述。例如，改变ch1的铰链区中半胱氨酸残基的数目，以促进轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性。在另一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段（例如rb1）进行修饰，以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可以引入下述突变中的一个或多个：t252l、t254s、t256f，如美国专利号6,277,375中所述。可替代地，为了增加生物半衰期，抗体可以在ch1或cl区内改变，以含有取自igg的fc区的ch2结构域的两个环的补救受体结合表位，如美国专利号5,869,046和6,121,022中所述。在一个实施方案中，引入m252y/s254t/t256e（yte）突变。参见例如oganesyan等人，mol.immunol.2009，46:1750。在另外其他实施方案中，通过用不同的氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基来改变fc区，以改变抗体或抗原结合片段的效应子功能。例如，选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基替换，使得抗体对于效应子配体具有改变的亲和力，并且保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力对于其改变的效应子配体可以是例如fc受体或补体的c1组分。这种方法在美国专利号5,624,821和5,648,260中进一步详细地描述。在另一个实例中，选自氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸可以用不同的氨基酸残基替换，使得抗体具有改变的c1q结合和/或减少或消除的补体依赖性细胞毒性（cdc）。这种方法在美国专利6,194,551中进一步详细地描述。在另一个实例中，改变氨基酸位置231和239内的一个或多个氨基酸残基，从而改变抗体固定补体的能力。这种方法在国际专利申请公开号wo94/29351中进一步描述。在另外一个实例中，通过修饰在下述位置处的一个或多个氨基酸来修饰fc区，以降低本发明的抗体或抗原结合片段（例如rb1）介导抗体依赖性细胞毒性（adcc）和/或降低抗体或片段对于fcγ受体的亲和力：238、239、243、248、249、252、254、255、256、258、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。这种方法在国际专利申请公开号wo00/42072中进一步描述。此外，人igg1上关于fcγr1、fcγrii、fcγriii和fcrn的结合位点已得到描述，并且具有改善结合的变体已得到描述（参见shields等人（2001）j.biol.chem.276:6591-6604）。在本发明的一个实施方案中，通过修饰残基243和264来修饰fc区，以降低本发明抗体（例如rb1）介导效应子功能和/或增加抗炎性质的能力。在一个实施方案中，通过将在位置243和264处的残基改变为丙氨酸来修饰抗体或片段的fc区。在一个实施方案中，通过修饰残基243、264、267和328来修饰fc区，以降低抗体或片段介导效应子功能和/或增加抗炎性质的能力。效应子功能增强在一些实施方案中，修饰抗hrsv抗体的fc区，以增加抗体或抗原结合片段介导效应子功能和/或增加其与fcγ受体（fcγr）的结合的能力。如本文使用的，术语“效应子功能”意指抗体依赖性细胞介导的细胞毒性活性（adcc）、补体依赖性细胞毒性活性（cdc）介导的应答、fc介导的吞噬作用、或抗体依赖性细胞吞噬作用（adcp）和经由fcrn受体的抗体再循环中的一种或多种。抗原结合蛋白的恒定区与各种fc受体（fcr）包括fcγri（cd64）、fcγrii（cd32）和fcγriii（cd16）之间的相互作用被认为介导抗原结合蛋白的效应子功能，例如adcc和cdc。fc受体对于抗体交联也是重要的，这对于抗肿瘤免疫可能是重要的。可以用多种方式测量效应子功能，所述方式包括例如经由fcγriii与天然杀伤细胞的结合、或经由fcγri与单核细胞/巨噬细胞的结合，以测量adcc效应子功能。例如，可以在天然杀伤细胞测定中评价本发明的抗原结合蛋白的adcc效应子功能。此类测定的实例可以在shields等人，2001j.biol.chem.，第276卷，第6591-6604页；chappel等人，1993j.biol.chem.268:25124-25131；lazar等人，2006，procnatlacadsciusa103:4005-4010中找到。本发明抗体的adcc或cdc性质或其交联性质可以以多种方式得到增强。含有特定突变或残基asn297上改变的糖基化的人igg1恒定区已显示增强与fc受体的结合。在一些情况下，这些突变也已显示增强adcc和cdc（lazar等人，procnatlacadsciusa2006，103:4005-4010；shields等人，jbiolchem2001，276:6591-6604；nechansky等人，molimmunol2007，44:1815-1817）。在本发明的一个实施方案中，此类突变在选自239、332和330（igg1）的一个或多个位置中，或者其他igg同种型中的等价位置。合适突变的例子是s239d和i332e和a330l。在一个实施方案中，本文所述的本发明的抗原结合蛋白在位置239和332处突变，例如s239d和i332e，或者在一个进一步的实施方案中，它在选自239和332和330的三个或更多个位置处突变，例如s239d和i332e和a330l。（eu索引编号）。在本发明的一个可替代实施方案中，提供了包含具有改变的糖基化概况的重链恒定区的抗体，使得抗原结合蛋白具有增强的效应子功能。例如，其中抗体具有增强的adcc或增强的cdc，或其中它具有增强的adcc和cdc效应子功能。在国际专利申请公开号wo2003011878和wo2006014679以及欧洲专利申请号ep1229125中描述了产生具有改变的糖基化概况的抗原结合蛋白的合适方法的实例。在一个进一步方面，本发明提供了“非岩藻糖基化”或“去岩藻糖基化”的抗体。非岩藻糖基化抗体具有fc的复合型n-聚糖的三甘露糖基核心结构，而不含岩藻糖残基。由于fcγriiia结合能力的增强，缺乏来自fcn-聚糖的核心岩藻糖残基的这些糖工程改造的抗体可以显示出比岩藻糖基化等价物更强的adcc。本发明还提供了用于生产根据本发明的抗体的方法，其包括以下步骤：a）培养包括包含如本文所述的分离的核酸的表达载体的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞不包含α-1,6-岩藻糖基转移酶；和b）回收抗原结合蛋白。重组宿主细胞可能通常不含编码α-1,6-岩藻糖基转移酶的基因（例如酵母宿主细胞，例如毕赤酵母属种），或可能已进行遗传修饰以使α-1,6-岩藻糖基转移酶失活。已基因修饰以使编码α-1,6-岩藻糖基转移酶的fut8基因失活的重组宿主细胞是可得的。参见例如可得自biowa，inc.（princeton，n.j.）的potelligent™技术系统，其中缺乏fut8基因的功能性拷贝的chok1sv细胞产生具有增强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（adcc）活性的单克隆抗体，所述活性相对于在具有功能性fut8基因的细胞中产生的相同单克隆抗体是增加的。potelligent™技术系统的方面在美国专利号7,214,775；6,946,292；以及国际专利申请号wo0061739和wo0231240中描述。本领域的普通技术人员也将认识到其他适当的系统。对于本领域技术人员显而易见的是，这种修饰不仅可以单独使用，而且可以彼此组合使用，以便进一步增强效应子功能。具有经修饰的糖基化的抗体的生产在另外一个实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段（例如rb1）包含特定的糖基化模式。例如，可以制备去岩藻糖基化或去糖基化的抗体或片段（即，抗体分别缺乏岩藻糖或糖基化）。可以改变抗体或片段的糖基化模式，以例如增加抗体或片段对于hrsvf蛋白抗原的亲和力或亲合力。此类修饰可以通过例如改变抗体或片段序列内的一个或多个糖基化位点来完成。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，其导致去除一个或多个可变区构架糖基化位点，从而消除在该位点处的糖基化。这种去糖基化可以增加抗体或片段对于抗原的亲和力或亲合力。参见例如美国专利号5,714,350和6,350,861。本文公开的抗体和抗原结合片段（例如rb1）可以进一步包括在低等真核生物宿主细胞中产生的那些，特别地真菌宿主细胞如酵母和丝状真菌已遗传工程改造为产生具有哺乳动物或人样的糖基化模式的糖蛋白（参见例如choi等人，（2003）proc.natl.acad.sci.usa100:5022-5027；hamilton等人，（2003）science301:1244-1246；hamilton等人，（2006）science313:1441-1443；nett等人，（2011）yeast28（3）:237-52；hamilton等人，（2007）curropinbiotechnol.oct；18（5）:387-92）。这些遗传修饰的宿主细胞具有控制细胞中产生的糖蛋白的糖基化概况的能力，使得可以生产糖蛋白的组合物，其中特定的n-聚糖结构占优势（参见例如美国专利号7,029,872和美国专利号7,449,308）。这些遗传修饰的宿主细胞已用于产生具有占优势地特定n-聚糖结构的抗体（参见例如li等人，（2006）nat.biotechnol.24:210-215）。在特定实施方案中，本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）进一步包括在低等真核生物宿主细胞中产生的并且包含岩藻糖基化和非岩藻糖基化杂合和复合n-聚糖的那些，所述n-聚糖包括二分和多触角种类，包括但不限于n-聚糖如glcnac(1-4)man3glcnac2；gal(1-4)glcnac(1-4)man3glcnac2；nana(1-4)gal(1-4)glcnac(1-4)man3glcnac2。在特定实施方案中，本文提供的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）可以包含具有选自glcnacman5glcnac2；galglcnacman5glcnac2和nanagalglcnacman5glcnac2的至少一种杂合n-聚糖的抗体或片段。在特定方面，杂合n-聚糖是组合物中占优势的n-聚糖种类。在特定实施方案中，本文提供的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）包含具有选自以下的至少一种复合n-聚糖的抗体或片段：glcnacman3glcnac2；galglcnacman3glcnac2；nanagalglcnacman3glcnac2；glcnac2man3glcnac2；galglcnac2man3glcnac2；gal2glcnac2man3glcnac2；nanagal2glcnac2man3glcnac2；和nana2gal2glcnac2man3glcnac2。在特定方面，复合n-聚糖是组合物中占优势的n-聚糖种类。在进一步方面，复合n-聚糖是包含组合物中约30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100%的复合n-聚糖的特定n-聚糖种类。在一个实施方案中，本文提供的抗体及其抗原结合片段包含复合n-聚糖，其中复合n-聚糖中的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100%包含结构nana2gal2glcnac2man3glcnac2，其中此类结构是去岩藻糖基化的。此类结构可以例如在经工程改造的巴斯德毕赤酵母宿主细胞中生产。在特定实施方案中，n-聚糖是岩藻糖基化的。一般而言，岩藻糖与在n-聚糖的还原端处的glcnac处于α1,3-键，与在n-聚糖的还原端处的glcnac处于α1,6-键，与在n-聚糖的非还原端处的gal处于α1,2-键，与在n-聚糖的非还原端处的glcnac处于α1,3-键，或与在n-聚糖的非还原端处的glcnac处于α1,4-键。因此，在上述糖蛋白组合物的特定方面，糖型在α1,3-键或α1,6-键岩藻糖中，以产生选自以下的糖型：man5glcnac2(fuc)、glcnacman5glcnac2(fuc)、man3glcnac2(fuc)、glcnacman3glcnac2(fuc)、glcnac2man3glcnac2(fuc)、galglcnac2man3glcnac2(fuc)、gal2glcnac2man3glcnac2(fuc)、nanagal2glcnac2man3glcnac2(fuc)、和nana2gal2glcnac2man3glcnac2(fuc)；在α1,3-键或α1,4-键岩藻糖中，以产生选自以下的糖型：glcnac(fuc)man5glcnac2、glcnac(fuc)man3glcnac2、glcnac2(fuc1-2)man3glcnac2、galglcnac2(fuc1-2)man3glcnac2、gal2glcnac2(fuc1-2)man3glcnac2、nanagal2glcnac2(fuc1-2)man3glcnac2、和nana2gal2glcnac2(fuc1-2)man3glcnac2；或在α1,2-键岩藻糖中，以产生选自以下的糖型：gal(fuc)glcnac2man3glcnac2、gal2(fuc1-2)glcnac2man3glcnac2、nanagal2(fuc1-2)glcnac2man3glcnac2、和nana2gal2(fuc1-2)glcnac2man3glcnac2。在进一步的方面，抗体或其抗原结合片段包含高甘露糖n-聚糖，包括但不限于man8glcnac2、man7glcnac2、man6glcnac2、man5glcnac2、man4glcnac2、或由man3glcnac2n-聚糖结构组成的n-聚糖。在上述的进一步方面中，复合n-聚糖进一步包括岩藻糖基化和非岩藻糖基化的二分和多触角种类。如本文使用的，术语“n-聚糖”和“糖型”可互换使用，并且指n-联寡糖，例如通过天冬酰胺-n-乙酰葡糖胺键附着至多肽的天冬酰胺残基的那种。n-联糖蛋白含有与蛋白质中的天冬酰胺残基的酰胺氮连接的n-乙酰葡糖胺残基。在糖蛋白上发现的占优势糖是葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、n-乙酰半乳糖胺（galnac）、n-乙酰葡糖胺（glcnac）和唾液酸（例如n-乙酰神经氨酸（nana））。糖基团的加工在er腔中共翻译发生，并且对于n-联糖蛋白在高尔基体中翻译后继续。n-聚糖具有man3glcnac2（“man”指甘露糖；“glc”指葡萄糖；并且“nac”指n-乙酰基；glcnac指n-乙酰葡糖胺）的共同五糖核心。通常，n-聚糖结构存在于非还原端左侧和还原端右侧。n-聚糖的还原端是附着至包含蛋白质上的糖基化位点的asn残基的末端。n-聚糖就包含外周糖（例如glcnac、半乳糖、岩藻糖和唾液酸）的分支（触角）数目而言不同，所述分支加入man3glcnac2（“man3”）核心结构中，所述核心结构被称为“三甘露糖核心”、“五糖核心”或“寡甘露糖核心”。根据其分支组成成分将n-聚糖分类（例如高甘露糖、复合或杂合）。“高甘露糖”型n-聚糖具有五个或更多个甘露糖残基。“复合”型n-聚糖通常具有附着至1,3甘露糖臂的至少一个glcnac和附着至“三甘露糖”核心的1,6甘露糖臂的至少一个glcnac。复合n-聚糖也可以具有半乳糖（"gal"）或n-乙酰半乳糖胺（"galnac"）残基，其任选用唾液酸或衍生物（例如"nana"或"neuac"，其中"neu"指神经氨酸，并且"ac"指乙酰基）进行修饰。复合n-聚糖也可以具有包含“二分”glcnac和核心岩藻糖（"fuc"）的链内取代。复合n-聚糖也可以具有在“三甘露糖核心”上的多个触角，通常称为“多触角聚糖”。“杂合”n-聚糖具有在三甘露糖核心的1,3甘露糖臂的末端上的至少一个glcnac，以及在三甘露糖核心的1,6甘露糖臂上的零个或多个甘露糖。各种n-聚糖也被称为“糖型”。关于复合n-聚糖，术语"g-2"、"g-1"、"g0"、"g1"、"g2"、"a1"和"a2"意指下述。“g-2”指可以表征为man3glcnac2的n-聚糖结构；术语“g-1”指可以表征为glcnacman3glcnac2的n-聚糖结构；术语“g0”指可以表征为glcnac2man3glcnac2的n-聚糖结构；术语“g1”指可以表征为galglcnac2man3glcnac2的n-聚糖结构；术语“g2”指可以表征为gal2glcnac2man3glcnac2的n-聚糖结构；术语“a1”指可以表征为nanagal2glcnac2man3glcnac2的n-聚糖结构；并且术语“a2”指可以表征为nana2gal2glcnac2man3glcnac2的n-聚糖结构。除非另有说明，否则术语g-2"、"g-1"、"g0"、"g1"、"g2"、"a1"和"a2"指缺乏与在n-聚糖种类的还原端处的glcnac残基附着的岩藻糖。当该术语包括“f”时，“f”指示n-聚糖种类含有在n-聚糖的还原端处的glcnac残基上的岩藻糖残基。例如，g0f、g1f、g2f、a1f和a2f都指示n-聚糖进一步包括与在n-聚糖的还原端处的glcnac残基附着的岩藻糖残基。低等真核生物例如酵母和丝状真菌通常不产生其产生岩藻糖的n-聚糖。对于多触角n-聚糖，术语“多触角n-聚糖”指这样的n-聚糖，其进一步包含在包含n-聚糖的1,6臂或1,3臂的非还原端的甘露糖残基上的glcnac残基、或在包含n-聚糖的1,6臂和1,3臂的非还原端的每个甘露糖残基上的glcnac残基。因此，多触角n-聚糖可以通过式glcnac(2-4)man3glcnac2、gal(1-4)glcnac(2-4)man3glcnac2、或nana(1-4)gal(1-4)glcnac(2-4)man3glcnac2进行表征。术语“1-4”指1、2、3或4个残基。就二分n-聚糖而言，术语“二分n-聚糖”指其中glcnac残基与n-聚糖的还原端的甘露糖残基连接的n-聚糖。二分n-聚糖可以通过式glcnac3man3glcnac2进行表征，其中每个甘露糖残基在其非还原端处连接到glcnac残基。相比之下，当多触角n-聚糖表征为glcnac3man3glcnac2时，该式指示两个glcnac残基连接至n-聚糖的两个臂之一的非还原端处的甘露糖残基，并且一个glcnac残基连接至n-聚糖的另一个臂的非还原端处的甘露糖残基。抗体物理性质本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）可以进一步含有在轻链或重链免疫球蛋白可变区中的一个或多个糖基化位点。某些糖基化位点可以导致抗体或片段的免疫原性降低、或者由于改变的抗原结合的抗体pk改变（marshall等人，1972，annurevbiochem41:673-702；gala和morrison，2004，jimmunol172:5489-94；wallick等人，1988，jexpmed168:1099-109；spiro，2002，glycobiology12:43r-56r；parekh等人，1985，nature316:452-7；mimura等人，2000，molimmunol37:697-706）。已知糖基化在含有n-x-s/t序列的基序处发生。每种抗体或抗原结合片段（例如rb1）将具有独特的等电点（pi），其一般落入6至9.5之间的ph范围内。igg1抗体的pi通常落入7-9.5的ph范围内，并且igg4抗体的pi通常落入6-8的ph范围内。每种抗体或抗原结合片段（例如rb1）将具有特征性解链温度，其中较高的解链温度指示体内更大的整体稳定性（krishnamurthyr和manningmc（2002）currpharmbiotechnol3:361-71）。一般而言，tm1（初始解折叠的温度）可以高于60℃、高于65℃或高于70℃。可以使用差示扫描量热法（chen等人，（2003）pharmres20:1952-60；ghirlando等人，（1999）immunollett68:47-52）或圆二色性（murray等人，（2002）j.chromatogrsci40:343-9），来测量抗体或片段的解链温度。在进一步的实施方案中，选择不会快速降解的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）。使用毛细管电泳（ce）和maldi-ms（alexanderaj和hughesde（1995）analchem67:3626-32），可以测量抗体或片段的降解。在进一步的实施方案中，选择具有最小聚集效应的抗体（例如rb1）及其抗原结合片段，其可以导致不需要的免疫应答和/或改变的或不利的药代动力学性质的触发。一般地，抗体和片段对于25%或更少、20%或更少、15%或更少、10%或更少、或者5%或更少的聚集是可接受的。聚集可以通过几种技术进行测量，所述技术包括尺寸排阻柱（sec）、高效液相层析（hplc）和光散射。抗体缀合物本文公开的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段（例如rb1）也可以缀合至化学部分。化学部分可以尤其是聚合物、放射性核素或细胞毒素因子。在特定实施方案中，化学部分是增加个体体内的抗体或片段的半衰期的聚合物。合适的聚合物包括但不限于亲水聚合物，其包括但不限于聚乙二醇（peg）（例如具有2kda、5kda、10kda、12kda、20kda、30kda或40kda的分子量的peg）、葡聚糖和单甲氧基聚乙二醇（mpeg）。lee等人，（1999）（bioconj.chem.10:973-981）公开了peg缀合的单链抗体。wen等人，（2001）（bioconj.chem.12:545-553）公开了具有peg的缀合抗体，其与射电金属螯合剂（二乙烯三氨基五乙酸（dtpa））附着。本文公开的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）也可以与标记缀合，所述标记例如99tc,90y、111in、32p、14c、125i、3h、131i、11c、15o、13n、18f、35s、51cr、57to、226ra、60co、59fe、57se、152eu、67cu、217ci、211at、212pb、47sc、109pd、234th和40k、157gd、55mn、52tr和56fe。本文公开的抗体和抗原结合片段（例如rb1）也可以是聚乙二醇化的，例如以增加其生物学（例如血清）半衰期。为了使抗体或片段聚乙二醇化，通常在其中一个或多个peg基团变得附着到抗体或抗体片段的条件下，使抗体或片段与反应形式的聚乙二醇（peg）例如peg的反应性酯或醛衍生物反应。在特定实施方案中，聚乙二醇化经由与反应性peg分子（或类似的反应性水溶性聚合物）的酰化反应或烷基化反应进行。如本文使用的，术语“聚乙二醇”预期涵盖已用于衍生其他蛋白质的任何形式的peg，例如单（c1-c10）烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体或片段是去糖基化的抗体或片段。用于聚乙二醇化蛋白质的方法是本领域已知的，并且可以应用于本发明的抗体。参见例如欧洲专利申请号ep0154316和ep0401384。本文公开的抗体和抗原结合片段（例如rb1）还可以与荧光或化学发光标记缀合，所述标记包括荧光团如稀土螯合物、荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、异硫氰酸酯、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛、荧光胺、152eu、丹磺酰、伞形酮、萤光素、鲁米那标记、异鲁米那标记、芳香吖啶酯标记、咪唑标记、吖啶鎓盐标记、草酸酯标记、水母发光蛋白标记、2,3-二氢酞嗪二酮、生物素/抗生物素蛋白、自旋标记和稳定的自由基。本发明的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）也可以与细胞毒素因子缀合，所述细胞毒素因子例如白喉毒素、铜绿假单胞菌（pseudomonasaeruginosa）外毒素a链、蓖麻毒蛋白a链、相思豆毒素a链、蒴莲根毒素a链、α-八叠球菌、油桐（aleuritesfordii）蛋白质和化合物（例如脂肪酸）、石竹素蛋白质、美州商陆（phytoiaccaamericana）蛋白质papi、papii和pap-s、苦瓜（momordicacharantia）抑制剂、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草（saponariaofficinalis）抑制剂、丝林霉素（mitogellin）、局限曲菌素、酚霉素和依诺霉素。可以采用本领域已知用于将本发明的抗体及其抗原结合片段（例如rb1）缀合至各种部分的任何方法，包括由hunter等人，1962，nature144:945；david等人，1974，biochemistry13:1014；pain等人，1981，j.immunol.meth.40:219；和nygren，1982，histochem.andcytochem.30:407描述的那些方法。用于缀合抗体和片段的方法是常规的，并且是本领域众所周知的。抗hrsv抗体的预防和治疗用途进一步提供了在需要用本文公开的分离的抗体或其抗原结合片段（例如rb1）的此类预防、治疗或改善的个体（包括人个体）中，用于预防、治疗或改善rsv感染症状的方法。在本发明的一个实施方案中，这样的个体患有rsv感染。在本发明的一个实施方案中，这样的个体处于rsv感染的风险中。在一个具体实施方案中，给哺乳动物优选人施用包含本发明的一种或多种抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物，用于治疗、预防或改善与rsv感染相关的一种或多种症状，其量有效降低rsv滴度。根据该实施方案，如例如通过痰样品或来自哺乳动物的肺灌洗液中的rsv浓度测量的，有效量的抗体或抗体片段降低肺中的rsv滴度。在另一个实施方案中，给哺乳动物优选人施用包含本发明的一种或多种抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物，用于治疗、预防或缓解与rsv感染相关的症状，其量有效用于中和哺乳动物中的rsv和/或阻断rsv感染。单克隆抗体或其抗原结合片段也可以在免疫治疗上用于人和其他动物两者中的rsv疾病。如本文中与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段结合使用的术语“免疫治疗”或“免疫疗法”表示预防性施用以及治疗性施用两者，以及用基本上纯化的多肽产物的被动免疫接种，以及通过转移编码产物的多核苷酸序列或其部分的基因治疗。被动免疫接种包括主动体液免疫的转移或对有此需要的个体提供抗体。相应地，在本发明的某些实施方案中，本发明提供了用于主动体液免疫的转移的方法，以及对处于rsv感染的风险中的患者提供rsv抗体或其抗原结合片段如igg抗体的方法。因此，可以将单克隆抗体或其抗原结合片段施用于高风险个体，以便减轻rsv疾病的可能性和/或严重性或施用于已证明活跃rsv感染的个体。本发明还提供了用于调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种成人或儿科rsv相关疾病的方法，所述疾病包括但不限于下呼吸道感染、肺炎、气管支气管炎、细支气管炎、支气管炎以及任何相关感染或炎性病症，例如但不限于以下中的至少一种或与以下相关的至少一种炎症：全身炎症反应综合征、脓毒症综合征、革兰氏阳性脓毒症、革兰氏阴性脓毒症、培养物阴性脓毒症、真菌脓毒症、中性粒细胞减少性发热、尿脓毒症、脑膜炎球菌血症、成人呼吸窘迫综合征、变应性鼻炎、常年性鼻炎、哮喘、全身性过敏反应、受体超敏反应、慢性阻塞性肺疾病（copd）、超敏性肺炎、用于细胞内生物的肉芽肿、药物敏感性、恶病质、囊性纤维化、新生儿慢性肺病；细胞、组织、器官、动物或患者中的至少一种传染病，包括但不限于以下中的至少一种：急性或慢性细菌感染、急性和慢性寄生或感染过程，包括细菌、病毒和真菌感染、hiv感染、hiv神经病、脑膜炎、肝炎（a、b或c等等）、脓毒性关节炎、腹膜炎、肺炎、会厌炎、大肠杆菌0157:h7、溶血尿毒症综合征、血栓溶解性血小板减少性紫癜、疟疾、登革出血热、利什曼病、麻风病、中毒性休克综合征、链球菌性肌炎、气性坏疽、结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌、卡氏肺囊虫肺炎、盆腔炎性疾病、睾丸炎、附睾炎、军团菌、莱姆病、甲型流感、eb病毒、病毒相关的血细胞减少症综合征、病毒性脑炎、无菌性脑膜炎等等。这种方法可以任选地包括将有效量的包含至少一种rsv抗体或其抗原片段的组合物或药物组合物施用于需要这种调节、治疗或疗法的细胞、组织、器官、动物或患者。在一个实施方案中，将包含本发明抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物施用于哺乳动物优选人，以治疗、预防或改善与rsv感染相关的一种或多种症状。在另一个实施方案中，将包含本发明抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物施用于患有囊性纤维化、支气管肺发育不良、先天性心脏病、先天性免疫缺陷或获得性免疫缺陷的人，或者已具有移植（例如骨髓、肺或造血干细胞移植（hsct））的人，以治疗、预防或改善与rsv感染相关的一种或多种症状。在另一个实施方案中，将包含本发明的抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物施用于人婴儿，优选早产人婴儿或处于用于rsv感染的住院风险中的人婴儿，以治疗、预防或改善与rsv感染相关的一种或多种症状。在另外一个实施方案中，将包含本发明的抗体或其片段的预防、治疗或药物组合物施用于老年人或群体家庭（例如养老院或康复中心）中的人或免疫受损个体。优选使用免疫特异性结合rsv抗原的高亲和力和/或有力的体内抑制性抗体和/或中和性抗体或其抗原结合片段，用于预防rsv感染和治疗rsv感染。还优选使用编码免疫特异性结合rsv抗原的高亲和力和/或有力的体内抑制性抗体和/或中和性抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，用于预防rsv感染和治疗rsv感染。此类抗体或其片段优选对于rsvf糖蛋白和/或f糖蛋白的片段具有亲和力。根据本发明的抗体和功能等价物（例如其抗原结合片段）识别rsvf蛋白内的表位。特异性识别所述表位的抗体或其功能等价物可以与rsv特异性抗体组合，所述rsv特异性抗体结合已知的不同表位，如帕利珠单抗、d25、am14、am16和am23。通过将特异性识别所述表位的根据本发明的抗体或功能等价物与已知的rsv特异性抗体组合，在相同疗法期间识别rsv的两个或更多个不同表位。这样，可以达到对rsv更强的免疫原性应答和/或针对rsv更高的抗体特异性。具有对rsv更强的免疫原性应答和针对rsv更高的特异性，这种组合可以导致rsv相关病症的更有效治疗和/或预防。免疫特异性结合一种或多种rsv抗原的本发明的一种或多种抗体或者其片段可以作为预防剂在体内局部或系统地使用。本发明的抗体或其片段还可以有利地与其他单克隆或嵌合抗体、或者淋巴因子或造血生长因子（例如il-2、il-3、il-7和il-15）组合利用，其例如作用于增加与抗体相互作用的效应细胞的数目或活性。本发明的抗体或其片段还可以有利地与其他单克隆或嵌合抗体、或者淋巴因子或造血生长因子（例如il-2、il-3和il-7）组合利用，其例如作用于增加免疫应答。本发明的抗体或其片段还可以有利地与用于治疗rsv感染的一种或多种药物（例如抗病毒剂）组合利用。本发明的抗体或片段可与下述药物中的一种或多种组合使用：nih-351（geminitechnologies）、重组rsv疫苗（aviron）、rsvf-2（intracel）、f-50042（pierrefabre）、t-786（trimeris）、vp-36676（viropharma）、rfi-641（americanhomeproducts）、vp-14637（viropharma）、pfp-1和pfp-2（americanhomeproducts）、rsv疫苗（avantimmunotherapeutics）和f-50077（pierrefabre）。本发明的抗体或其抗原结合片段可以单独施用或与其他类型的治疗（例如激素疗法、免疫疗法和抗炎剂）组合施用。一般地，优选施用与患者为相同物种的物种起源或物种反应性（在抗体的情况下）的产物。因此，在一个优选实施方案中，将人或人源化抗体、片段衍生物、类似物或核酸施用于人患者用于治疗或预防。“个体”可以是哺乳动物，例如人、犬、猫、马、牛、小鼠、大鼠、猴（例如食蟹猕猴，例如食蟹猴（macacafascicularis））或兔。在本发明的优选实施方案中，个体是人个体。在特定实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以单独使用或与抗病毒疗法结合使用。在特定实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以单独使用或与另一种rsv单克隆抗体结合使用。在特定实施方案中，本文公开的抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以单独使用或与另一种rsv疫苗结合使用。术语“与……结合”指示在本发明的方法中施用的组分（例如抗hrsv抗体或其抗原结合片段（例如rb1）连同例如帕利珠单抗一起）可以配制成用于同时递送的单一组合物，或者分开配制成两种或更多种组合物（例如试剂盒）。每种组分可以在与另一种组分施用时不同的时间施用于个体；例如，每次施用可以经过给定时间段以几个间隔非同时（例如分开或序贯地）给予。此外，分开的组分可以通过相同或不同的途径施用于个体。实验和诊断用途本文公开的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段（例如rb1）可以用作亲和纯化试剂。在该过程中，使用本领域众所周知的方法，将抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段固定在固相如sephadex®、玻璃或琼脂糖树脂或滤纸上。将固定的抗体或片段与含有待纯化的hrsvf蛋白（或其片段）的样品接触，并且其后用合适的溶剂洗涤支持物，所述溶剂去除样品中除了hrsvf蛋白之外的基本上所有材料，其与固定的抗体或片段结合。最后，用洗脱结合的hrsvf蛋白（例如蛋白a）的溶剂洗涤支持物。这种固定的抗体和片段构成本发明的部分。还提供了用于生成次级抗体的抗原，其可用于例如执行本文讨论的蛋白质印迹和其他免疫测定。特别地，公开了这样的多肽，其包含本文公开的治疗性抗体（例如rb1）的可变区和/或cdr序列，并且可以用于生成抗独特型抗体用于特异性检测抗体存在，例如在治疗背景下。抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段也可用于hrsvf蛋白的诊断测定中，例如检测其在特定细胞、组织或血清中的表达。这种诊断方法可用于各种疾病诊断。本发明包括掺入本文公开的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段（例如rb1）的使用的elisa测定（酶联免疫吸附测定）。例如，这种方法包括下述步骤：（a）用抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段包被基质（例如微量滴定板孔的表面，例如塑料平板）；（b）将待测试rsvf蛋白的存在的样品应用于基质；（c）洗涤平板，使得去除样品中未结合的材料；（d）应用对于rsvf蛋白抗原也是特异性的可检测标记的抗体（例如酶联抗体）；（e）洗涤基质，以便去除未结合的标记抗体；（f）如果标记的抗体是酶连接的，则应用由该酶转化成荧光信号的化学物质；和（g）检测标记抗体的存在。与底物相关的标记的检测指示hrsvf蛋白的存在。在一个进一步的实施方案中，标记的抗体或其抗原结合片段用过氧化物酶标记，所述过氧化物酶与abts（例如2,2'-连氮基-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸））或3,3'5,5'-四甲基联苯胺反应，以产生可检测的颜色变化。可替代地，标记的抗体或片段用可检测的放射性同位素（例如3h）标记，其可以在闪烁体的存在下通过闪烁计数器检测。本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以用于蛋白质印迹或免疫蛋白印迹程序。这样的程序构成本发明的部分，并且包括例如：（1）任选地使用本领域已知的方法（例如半干印迹或槽印迹），将来自待测试hrsvf蛋白的存在的样品的蛋白质（例如来自样品中的蛋白质的page或sds-page电泳分离）转移到膜或其他固体基质上；使待测试结合的hrsvf蛋白或其片段的存在的膜或其他固体基质与本发明的抗hrsv抗体或其抗原结合片段接触。这样的膜可以采取基于硝酸纤维素或乙烯（例如聚偏二氟乙烯（pvdf））的膜的形式，待在非变性page（聚丙烯酰胺凝胶电泳）凝胶或sds-page（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）凝胶中测试hrsv的存在的蛋白质已转移至所述膜（例如在凝胶中的电泳分离后）。在使膜与抗hrsv抗体或片段接触之前，任选地例如用脱脂奶粉等等将膜封闭，以便结合膜上的非特异性蛋白质结合位点。（2）将膜洗涤一次或多次，以去除未结合的抗hrsvf蛋白抗体或片段和其他未结合的物质；和（3）检测结合的抗hrsvf蛋白抗体或片段。结合的抗体或片段的检测指示hrsv蛋白存在于膜或基质上和样品中。结合的抗体或片段的检测可以通过使抗体或片段与可检测标记的次级抗体（抗免疫球蛋白抗体）结合，然后检测次级抗体的存在。本文公开的抗hrsvf蛋白抗体及其抗原结合片段（例如rb1）也可以用于免疫组织化学。这种方法构成本发明的部分，并且包括例如，（1）使待测试hrsvf蛋白的存在的细胞与本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段接触；和（2）检测在细胞上或细胞中的抗体或片段。如果抗体或片段本身是可检测地标记的，则它可以直接检测。可替代地，抗体或片段可以由检测的可检测标记的次级抗体结合。药物组合物和施用为了制备本发明的抗hrsvf蛋白抗体和抗原结合片段（例如rb1）的药物或无菌组合物，将抗体或其抗原结合片段与药学可接受的载体或赋形剂混合。参见例如remington'spharmaceuticalsciences和u.s.pharmacopeia:nationalformulary，mackpublishingcompany，easton，pa（1984）。治疗和诊断剂的制剂可以通过与可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合，以例如冻干粉末、浆料、水溶液或悬浮液的形式制备（参见例如hardman等人（2001）goodmanandgilman’sthepharmacologicalbasisoftherapeutics，mcgraw-hill，newyork，ny；gennaro（2000）remington:thescienceandpracticeofpharmacy，lippincott，williams，andwilkins，newyork，ny；avis等人（编辑）（1993）pharmaceuticaldosageforms:parenteralmedications，marceldekker，ny；lieberman等人（编辑）（1990）pharmaceuticaldosageforms:tablets，marceldekker，ny；lieberman等人（编辑）（1990）pharmaceuticaldosageforms:dispersesystems，marceldekker，ny；weiner和kotkoskie（2000）excipienttoxicityandsafety，marceldekker，inc.，newyork，ny）。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段在以1-20mm的组氨酸缓冲液ph5-7中稀释至合适的浓度，并且任选添加nacl或蔗糖（例如2-15%（w/v））用于张力。可以添加以0.01至0.10%（w/v）的另外试剂，例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，以增强稳定性。代表性制剂是10mml-组氨酸、7%（w/v）蔗糖和0.02%（w/v）聚山梨醇酯-80，ph6.0。单独或与另一种治疗剂组合施用的本发明的抗体或其抗原结合片段的毒性和治疗功效可以通过在细胞培养或实验动物中的标准药物程序来确定，例如用于测定ld50（对50%的群体致死的剂量）和ed50（在50%的群体中治疗有效的剂量）。毒性和治疗效应之间的剂量比是治疗指数（ld50/ed50）。从这些细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制用于人中的剂量范围。这些化合物的剂量优选位于包括ed50的循环浓度范围内，伴随很小的毒性或没有毒性。取决于采用的剂型和施用途径，剂量可以在此范围内变化。施用模式可以改变。施用途径包括经口、直肠、透粘膜、肠、肠胃外；肌内、皮下、皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、透皮或动脉内。优选的施用模式是肌内、静脉内和鼻内。在特定实施方案中，本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以通过侵入途径例如通过注射施用。在本发明的进一步实施方案中，静脉内、皮下、肌内、动脉内、瘤内或通过吸入、气雾剂递送施用抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段或其药物组合物。通过非侵入途径（例如经口，例如在丸剂、胶囊或片剂中）施用也在本发明的范围内。本发明提供了包含本发明的任何抗体或抗原结合片段（例如rb1）或其药物组合物的容器（例如塑料或玻璃瓶，例如具有盖，或层析柱、中空钻孔针或注射器筒）。本发明还提供了包含本发明的任何抗体或其抗原结合片段（例如rb1）或药物组合物的注射装置。注射装置是经由肠胃外途径（例如肌内、皮下或静脉内）将物质引入患者体内的装置。例如，注射装置可以是注射器（例如预填充有药物组合物，例如自动注射器），其例如包括用于容纳待注射流体（例如抗体或其片段或药物组合物）的圆柱体或筒体，用于刺穿皮肤和/或血管用于注射流体的针；以及用于将流体推出圆柱体并且穿过针孔的活塞。在本发明的一个实施方案中，包含本发明的抗体或其抗原结合片段或其药物组合物的注射装置是静脉内（iv）注射装置。这样的装置包括在插管或套管针/针中的抗体或其片段或药物组合物，所述插管或套管针/针可以附着到管，所述管可以附着到用于容纳流体（例如盐水；或包含nacl、乳酸钠、kcl、cacl2和任选包括葡萄糖的乳酸林格溶液）的袋或贮存器，所述流体通过插管或套管针/针引入患者体内。在本发明的一个实施方案中，一旦将套管针和插管插入个体的静脉，并且将套管针从插入的插管去除，就可以将抗体或其片段或药物组合物引入装置内。例如，iv装置可以插入周围静脉（例如手或手臂）内；上腔静脉或下腔静脉或心脏的右心房内（例如中心iv）；或者锁骨下、颈内静脉或股静脉内，并且例如朝着心脏前进直到它到达上腔静脉或右心房（例如中心静脉线）。在本发明的一个实施方案中，注射装置是自动注射器；喷射注射器或外部输液泵。喷射注射器使用穿透表皮的流体的高压狭窄射流，以将抗体或其片段或药物组合物引入患者体内。外部输液泵是将抗体或其片段或药物组合物以受控的量递送到患者体内的医疗装置。外部输液泵可以通过电力或机械方式供电。不同的泵以不同的方式操作，例如，注射泵将流体保持在注射器的贮存器中，并且可移动活塞控制流体递送，弹性体泵将流体保持在可伸展气囊贮存器中，并且来自气囊弹性壁的压力驱动液体递送。在蠕动泵中，一组滚轮在柔性管道长度上压紧，推动流体向前。在多通道泵中，流体可以以多种速率从多个贮存器中递送。本文公开的药物组合物还可以用无针皮下注射装置施用；如美国专利号6,620,135；6,096,002；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中公开的装置。包含药物组合物的这种无针装置也是本发明的部分。本文公开的药物组合物还可以通过输注施用。用于施用药物组合物的众所周知的植入物和模块的实例包括在以下专利中公开的那些：美国专利4,487,603，其公开了用于以受控速率分配药剂的可植入微输液泵；美国专利号4,447,233，其公开了用于以精确输注速率递送药剂的药剂输液泵；美国专利4,447,224，其公开了用于连续药物递送的可变流量可植入输注器；美国专利4,439,196，其公开了具有多室区室的渗透药物递送系统。许多其他此类植入物、递送系统和模块是本领域技术人员众所周知，并且包含本发明的药物组合物的那些在本发明的范围内。施用方案取决于几种因素，包括治疗性抗体或抗原结合片段的血清或组织周转率、症状水平、预防性/治疗性抗体的免疫原性、以及靶细胞在生物基质中的可接近性。优选地，施用方案递送足够的治疗性抗体或片段，以实现靶疾病状态中的改善，同时最小化不需要的副作用。相应地，递送的生物制品的量部分取决于特定的预防/治疗性抗体以及待治疗状况的严重性。选择治疗性抗体或片段的适当剂量中的指导是可获得的（wawrzynczak,（1996）antibodytherapy，biosscientificpub.ltd，oxfordshire，uk；kresina（编辑）（1991）monoclonalantibodies，cytokinesandarthritis，marceldekker，newyork，ny；bach（编辑）（1993）monoclonalantibodiesandpeptidetherapyinautoimmunediseases，marceldekker，newyork，ny；baert等人，2003，newengl.j.med.348:601-608；milgrom等人，1999，newengl.j.med.341:1966-1973；slamon等人，2001，newengl.j.med.344:783-792；beniaminovitz等人，2000，newengl.j.med.342:613-619；ghosh等人，2003，newengl.j.med.348:24-32；lipsky等人，2000，newengl.j.med.343:1594-1602）。适当剂量的确定由临床医生，例如使用本领域已知或怀疑影响预防或治疗的参数或因素来进行。一般地，剂量以略微小于最佳剂量的量开始，并且其后它以小增量增加，直到相对于任何负面副作用达到所需或最佳效应。重要的诊断度量包括例如所产生的炎症或炎性细胞因子水平的症状的那些。一般而言，待使用的生物制品衍生自与靶向用于治疗的动物相同的物种，从而最小化对该试剂的任何免疫应答。在人个体的情况下，例如，可能期望人源化和全人抗体。本文公开的抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以通过连续输注提供，或者通过例如每日、每周1-7次、每周、每两周、每月、每隔月、每季度、每半年、每年等施用的剂量提供。剂量可以例如静脉内、皮下、局部、经口、鼻内、直肠、肌内、大脑内、脊椎内、或通过吸入提供。总的每周剂量一般为至少0.05μg/kg体重，更一般为至少0.2μg/kg、0.5μg/kg、1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/ml、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg或更多（参见例如yang等人，2003，newengl.j.med.349:427-434；herold等人，2002，newengl.j.med.346:1692-1698；liu等人，1999，j.neurol.neurosurg.psych.67:451-456；portielji等人，2003，cancerimmunol.immunother.52:151-144）。剂量也可以提供为实现个体的血清中抗hrsv抗体的预先确定的靶浓度，例如0.1、0.3、1、3、10、30、100、300µg/ml或更多。在其他实施方案中，例如在每周、每两周、“每4周”、每月、每隔月或每季度基础上，以10、20、50、80、100、200、500、1000或2500mg/个体，皮下或静脉内施用本发明的抗hrsv抗体。如本文使用的，术语“有效量”指本发明的抗hrsv或其抗原结合片段（例如rb1）的量，当单独或与另外的治疗/预防剂组合施用于细胞、组织或个体时，所述量有效中和rsv和/或预防或引起与rsv感染相关的疾病或状况的一种或多种症状中可测量的改善。有效剂量进一步指足以导致症状的至少部分预防或改善的抗体或片段的量。当应用于单独施用的各个活性成分时，有效剂量指单独的该成分。当应用于组合时，有效剂量指导致预防或治疗效应的活性成分的组合量，无论是连续还是同时组合施用。在某些实施方案中，有效量是提供10µg/ml–30µg/ml的临床靶血清浓度共5个月的量。在一个实施方案中，有效量是提供10μg/ml–30μg/ml的c谷靶用于功效的人剂量，如在标准临床前棉鼠模型中测定的。试剂盒进一步提供了包含与一种或多种另外的组分组合的一种或多种组分的试剂盒，所述一种或多种组分包括但不限于如本文讨论的抗hrsvf蛋白抗体或抗原结合片段（例如rb1），所述一种或多种另外的组分包括但不限于不限于如本文讨论的药学可接受的载体和/或预防/治疗剂。抗体或片段和/或预防/治疗剂可以配制为纯组合物或药物组合物中与药学可接受的载体组合。在一个实施方案中，试剂盒包括在一个容器中（例如无菌玻璃或塑料小瓶中）的本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段（例如rb1）或其药物组合物、以及在另一个容器中（例如在无菌玻璃或塑料小瓶中）的其药物组合物和/或预防/治疗剂。在另一个实施方案中，试剂盒包含在单一的常见容器中的本发明的组合，其包括本发明的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段（例如rb1）连同药学可接受的载体，任选地与一起配制的一种或多种预防/治疗剂任选地在药物组合物中组合。如果试剂盒包括用于肠胃外施用于个体的药物组合物，则试剂盒可以包括用于执行这种施用的装置。例如，试剂盒可以包括如上文讨论的一个或多个皮下注射针或其他注射装置。试剂盒可以包括包装说明书，中包括关于试剂盒中的药物组合物和剂型的信息。一般地，这些信息帮助患者和医生有效和安全地使用所封闭的药物组合物和剂型。例如，可以在插页中提供关于本发明的组合的下述信息：药代动力学、药效学、临床研究、功效参数、适应症和用法、禁忌症、警告、预防措施、不良反应、过量、正确剂量和施用、如何供应、正确的贮存条件、参考资料、制造商/分销商信息和专利信息。检测试剂盒和预防/治疗试剂盒为了方便起见，本发明的抗hrsv抗体或其抗原结合片段（例如rb1）可以在试剂盒中提供，即以预定量的试剂的包装组合与用于执行诊断或检测测定的说明书。当抗体或片段用酶标记时，试剂盒将包括由酶所需的底物和辅因子（例如提供可检测生色团或荧光团的底物前体）。另外，可以包括其他添加剂，例如稳定剂、缓冲剂（例如封闭缓冲液或裂解缓冲液）等等。各种试剂的相对量可以广泛地改变，以提供基本上优化测定灵敏度的试剂溶液中的浓度。特别地，试剂可以作为干粉提供，通常是冻干的，包括在溶解时将提供具有适当浓度的试剂溶液的赋形剂。还提供了诊断或检测试剂和试剂盒，其包含用于各种检测测定中的一种或多种此类试剂，所述检测测定包括例如免疫测定如elisa（夹心型或竞争性形式）。试剂盒的组分可以预先附着至固体支持物，或者当使用该试剂盒时，可以应用于固体支持物的表面。在本发明的一些实施方案中，信号生成手段可以与本发明的抗体或片段预先结合，或者可能需要在使用之前与一种或多种组分例如缓冲液、抗体-酶缀合物、酶底物等等组合。试剂盒还可以包括另外的试剂，例如用于减少与固相表面的非特异性结合的封闭试剂、洗涤试剂、酶底物等等。固相表面可以是管、珠、微量滴定板、微球或适合于固定蛋白质、肽或多肽的其他材料的形式。在特定方面，催化化学发光或显色产物形成或者化学发光或显色底物还原的酶是信号生成手段的组分。这样的酶是本领域众所周知的。试剂盒可以包含本文所述的任何捕获试剂和检测试剂。任选地，试剂盒还可以包含用于进行本发明的方法的说明书。还提供了试剂盒，其包含包装在容器例如小瓶或瓶中的抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段，并且进一步包含附着至容器或与容器一起包装的标签，所述标签描述容器的内容物并且提供关于使用容器内容物以预防/治疗如本文所述的一种或多种疾病状态的指示和/或说明书。在一个方面，试剂盒用于预防或治疗与rsv感染有关的疾病/状况，并且包含抗hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段和进一步的预防/治疗剂或疫苗。试剂盒可以任选进一步包括用于肠胃外例如静脉内施用的注射器。在另一个方面，试剂盒包含抗-hrsvf蛋白抗体或其抗原结合片段以及附着至容器或与容器一起包装的标签，所述标签描述抗体或片段与疫苗或进一步的预防/治疗剂的用途。在另外一个方面，试剂盒包含疫苗或进一步的预防/治疗剂和附着至容器或与容器一起包装的标签，所述标签描述疫苗或进一步的预防/治疗剂与抗hrsvf蛋白抗体或片段的用途。在某些实施方案中，抗hrsvf蛋白抗体和疫苗或进一步的预防/治疗剂处于分开的小瓶中，或者在相同的药物组合物中组合在一起。对于组合预防或治疗，两种预防/治疗剂的同时施用不要求试剂在相同时间或通过相同途径施用，只要在试剂发挥其预防/治疗效应的时间段内存在重叠。考虑了同时或序贯施用，如在不同天或星期时施用一样。还可以制备本文公开的预防/治疗和检测试剂盒，其包含本文公开的抗体、肽、抗原结合片段或多核苷酸中的至少一种，以及关于使用该组合物作为检测试剂或预防/治疗剂的说明书。用于这种试剂盒中的容器通常可以包括至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶、注射器或其他合适的容器，在其内可以放置检测和/或预防/治疗组合物中一种或多种，并且优选合适地等分。在还提供第二预防/治疗剂的情况下，试剂盒还可以含有第二个不同的容器，在其内可以放置第二检测和/或预防/治疗组合物。可替代地，多种化合物可以在单一药物组合物中制备，并且可以包装在单个容器手段，例如小瓶、烧瓶、注射器、瓶或其他合适的单个容器中。本文公开的试剂盒通常还包括用于容纳在紧密约束中的小瓶用于商业销售的手段，例如注射成型或吹塑成型的塑料容器，所需小瓶保留在其内。当试剂盒内包括放射性标记、显色、发荧光或其他类型的可检测标记或检测手段时，标记试剂可以在与检测或预防/治疗组合物本身相同的容器中提供，或者可以可替代地放置在第二个不同的容器手段中，该第二组合物可以放置在其内并且合适地等分。可替代地，检测试剂和标记可以在单一容器手段中制备，并且在大多数情况下，试剂盒通常还包括用于包含在紧密约束中的小瓶用于商业销售和/或方便包装和递送的手段。还提供了用于进行本文描述的检测或监测方法的装置或仪器。此类仪器可以包括样品可以输入其内的腔室或管，流体处理系统任选地包括阀或泵以引导样品流过装置，任选的过滤器以从血液中分离血浆或血清，用于添加捕获试剂或检测试剂的混合腔室，以及任选的检测装置用于检测与捕获试剂免疫复合物结合的可检测标记的量。样品的流动可以是被动的（例如通过毛细管作用、流体静力学或一旦施加样品就不需要装置的进一步操纵的其他力生成的力）、或主动的（例如通过施加经由机械泵、电渗泵、离心力或增加的气压）、或主动和被动力的组合。在进一步的实施方案中，还提供了处理器、计算机可读存储器和例行程序，所述例行程序存储在计算机可读存储器上，并且适于在处理器上执行以执行本文描述的任何方法。合适的计算系统、环境和/或配置的例子包括个人计算机、服务器计算机、手持式或膝上型设备、多处理器系统、基于微处理器的系统、机顶盒、可编程消费电子产品、网络pc、小型计算机、大型计算机、包括上述系统或装置中任一的分布式计算环境、或本领域已知的任何其他系统。一般方法分子生物学中的标准方法在以下描述：sambrook、fritsch和maniatis（1982、1989第2版和2001第3版）molecularcloning，alaboratorymanual，coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，ny；sambrook和russell（2001）molecularcloning，第3版，coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，ny；wu（1993）recombinantdna，第217卷，academicpress，sandiego，ca）。标准方法也出现在ausbel等人（2001）currentprotocolsinmolecularbiology，第1-4卷，johnwileyandsons，inc.newyork，ny中，其描述了在细菌细胞中的克隆和dna诱变（第1卷）、在哺乳动物细胞和酵母中的克隆（第2卷）、糖缀合物和蛋白质表达（第3卷）和生物信息学（第4卷）。描述了用于蛋白质纯化的方法包括免疫沉淀、层析、电泳、离心和结晶（coligan等人（2000）currentprotocolsinproteinscience，第1卷，johnwileyandsons，inc.，newyork）。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生、蛋白质的糖基化（参见例如coligan等人（2000）currentprotocolsinproteinscience，第2卷，johnwileyandsons，inc.，newyork；ausubel等人（2001）currentprotocolsinmolecularbiology，第3卷，johnwileyandsons，inc.，ny，ny，第16.0.5-16.22.17页；sigma-aldrich，co.（2001）productsforlifescienceresearch，st.louis，mo；第45-89页；amershampharmaciabiotech（2001）biodirectory，piscataway，n.j.，第384-391页）。描述了多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化（coligan等人（2001）currentprotocolsinimmunology，第1卷，johnwileyandsons，inc.，newyork；harlow和lane（1999）usingantibodies，coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，ny；harlow和lane，同上）。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可得的（参见例如coligan等人（2001）currentprotocolsinimmunology，第4卷，johnwiley，inc.，newyork）。描述了单链抗体和双抗体（参见例如，malecki等人，2002，proc.natl.acad.sci.usa99:213-218；conrath等人，2001，j.biol.chem.276:7346-7350；desmyter等人，2001，j.biol.chem.276:26285-26290；hudson和kortt，1999，j.immunol.methods231:177-189；和美国专利号4,946,778）。提供了双功能抗体（参见例如mack等人（1995）proc.natl.acad.sci.usa92:7021-7025；carter（2001）j.immunol.methods248:7-15；volkel等人（2001）proteinengineering14:815-823；segal等人（2001）j.immunol.methods248:1-6；brennan等人（1985）science229:81-83；raso等人（1997）j.biol.chem.272:27623；morrison（1985）science229:1202-1207；traunecker等人（1991）emboj.10:3655-3659；以及美国专利号5,932,448、5,532,210和6,129,914）。还提供了双特异性抗体（参见例如azzoni等人（1998）j.immunol.161:3493；kita等人（1999）j.immunol.162:6901；merchant等人（2000）j.biol.chem.74:9115；pandey等人（2000）j.biol.chem.275:38633；zheng等人（2001）j.biolchem.276:12999；propst等人（2000）j.immunol.165:2214；long（1999）ann.rev.immunol.17:875）。可以将抗体缀合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇（peg）。抗体可用于治疗、诊断、试剂盒或其他目的，并且包括与例如染料、放射性同位素、酶或金属（例如胶体金）缀合的抗体（参见例如ledoussal等人（1991）j.immunol.146:169-175；gibellini等人（1998）j.immunol.160:3891-3898；hsing和bishop（1999）j.immunol.162:2804-2811；everts等人（2002）j.immunol.168:883-889）。用于流式细胞术的方法包括荧光激活细胞分选（facs）是可得的（参见例如owens等人（1994）flowcytometryprinciplesforclinicallaboratorypractice，johnwileyandsons，hoboken，nj；givan（2001）flowcytometry，第2版；wiley-liss，hoboken，nj；shapiro（2003）practicalflowcytometry，johnwileyandsons，hoboken，nj）。适合于修饰核酸的荧光试剂包括用于例如作为诊断试剂使用的核酸引物和探针、多肽和抗体是可得的（molecularprobes（2003）catalogue，molecularprobes，inc.，eugene，or；sigma-aldrich（2003）catalogue，st.louis，mo）。描述了免疫系统组织学的标准方法（参见例如muller-harmelink（编辑）（1986）humanthymus:histopathologyandpathology，springerverlag，newyork，ny；hiatt等人（2000）coloratlasofhistology，lippincott，williams，andwilkins，phila，pa；louis等人（2002）basichistology:textandatlas，mcgraw-hill，newyork，ny）。用于确定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库是可得的（参见例如genbank，vectornti®suite（informax，inc，bethesda，md）；gcgwisconsinpackage（accelrys，inc.，sandiego，ca）；decypher®（timelogiccorp.，crystalbay，nevada）；menne等人（2000）bioinformatics16:741-742；menne等人（2000）bioinformaticsapplicationsnote16:741-742；wren等人（2002）comput.methodsprogramsbiomed.68:177-181；vonheijne（1983）eur.j.biochem.133:17-21；vonheijne（1986）nucleicacidsres.14:4683-4690）。实施例实施例1：全人rsv中和抗体的鉴定为了鉴定有力的hrsv中和抗体，在知情同意下从供体获得血清，并且测定在体外中和hrsv疾病毒的能力。对于中和测定，首先连续稀释血清样品，然后与600pfu表达增强型绿色荧光蛋白的hrsv-a毒株（rsv-gfp）一起温育。将rsv-gfp与血清稀释物1:1在96孔u形底部平板中在每孔200μl的总体积中在37℃下混合1小时。然后将每孔100μl混合物转移至hep-2细胞接种瓶板（每孔15,000个细胞）。平板在acumen®cellista（ttplabtech，cambridge，ma）上扫描，并且数据输出为每孔的gfp事件数量和总荧光强度。通过四参数曲线拟合，使用graphpadprism6（graphpadsoftware，inc.，lajolla，ca）计算nt50值。按照下述执行与rsv前-f和后-f蛋白的elisa结合滴度。nuncc96maxisorp®nunc-immuno™平板（thermoscientific，inc.）用每孔50μl的在pbs中以1μg/ml的hrsv前-f（参见mclellan等人，2013，science342:592）或后-f蛋白（融合后flzf21蛋白由不含融合肽的wtf胞外域组成（参见mclellen等人，2011，j.virol85:7788））在4℃下包被过夜。平板用pbs/tween20洗涤，然后用在pbs中的3%脱脂牛奶封闭。其后，每孔加入50μl连续稀释的血清样品并且在室温下温育90分钟。洗涤平板并且以1:2,000稀释度加入hrp缀合的山羊抗人igg（southernbiotech，birmingham，al）。一小时后，将平板洗涤并且用superbluturbotmb溶液（virolabs，inc.，sterling，va）显色。使用wallac1420victor2™multilabelcounter（perkinelmer，waltham，ma）获得od450nm读数。使用graphpadprism6通过四参数曲线拟合计算ec50值。证实高hrsv中和和结合滴度的供体子集被召回，以获得更大的血液量用于pbmc生成。由商业供应商进行pbmc制备，并且购买的pbmc贮存于液氮中直至进一步使用。来自一个个体的pbmc证实良好的中和滴度，并且在针对融合后f蛋白的elisa结合测定中也具有最高滴度，并且是与融合前f蛋白的最高结合剂之一（数据未显示）。因此，选择该供体的pbmc，以通过facs分选来分离后-f特异性记忆b细胞。根据制造商的说明书，使用e-zlink™sulfo-nhs-lc生物素化试剂盒（lifetechnologies，grandisland，ny），通过生物素化lzf21（mclellen等人，2011，j.virol85:7788）制备生物素化的三聚体融合后f蛋白（lzf21）。lzf21蛋白由不含融合肽的野生型f蛋白胞外域组成（mclellen等人，2011，j.virol85:7788）。融合f蛋白特异性鼠杂交瘤4d7（4d7是通过用rsva2病毒免疫balb/c小鼠生成的小鼠杂交瘤）。balb/c小鼠用rsva2病毒腹膜内免疫接种两次，并且在融合前三天加强，使用20μg纯化的rsva2（advancedbiotechnologies，inc.，columbia，md），通过静脉内注射。收获脾，并且使用聚乙二醇将脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合。将细胞加入mediumd（stemcelltechnologiesinc.，vancouver，bc）中，在245mmx245mm正方形培养皿中铺平板，并且在37℃、5%co2下温育2周。使用clonepix（genetix）挑取个别菌落，转移到96孔板中并且如上温育1周。然后通过elisa针对纯化的rsva2筛选上清液的抗rsv活性。将阳性克隆包括4d7扩增，并且通过有限稀释进一步亚克隆。如上所述筛选亚克隆，并且鉴定4d7-8并且通过facs用于优化lzf21-生物素对记忆b细胞的染色（数据未显示）。通过这些优化实验，确定1.5μg/ml的lzf21-生物素是用于后-f特异性记忆b细胞的染色的最佳浓度。通过使用不相关的鼠杂交瘤作为阴性对照，并且与100-1000x过量的未标记的lzf21竞争结合，来证实染色反应的特异性。抗原特异性记忆b细胞描绘为cd3-cd19+igg+lzf21+。将这些细胞分选到96孔板（一个细胞/孔）内，所述96孔板含有表达cd40配体的hek293细胞系（使用标准分子生物学技术制备）和il-21（sinobiologicalinc.，northwales，pa）。在30个分选的样品中，来自6个孔的上清液在elisa测定中（如上所述执行）证实与后-f蛋白的结合。这些样品还与前-f蛋白结合（数据未显示）。然后如上所述在中和测定中测试这六个样品，而无需稀释。基于gfp事件的减少来确定中和活性的存在。在六个样品中，其中两个（指定为rb1和rb11）显示hrsv-a毒株的完全中和（参见表3）。用于单一分选的记忆b细胞培养的rna提取和rt-pcr。部分1：按照制造商的手册，使用rneasy®microkit（qiagen，inc.，valencia，ca），提取来自从rb1命中裂解产物的来自96孔板的rna。使用nanodrop™2000c（thermofisherscientificinc.，wilmington，de）在uv260nm下测定rna浓度。使用来自前导序列（正向）和iggjh的c'末端、κ恒定区或λ恒定区（反向）的序列，使用引物序列，将来自rb1孔的提取的rna用作抗体重链和轻链基因的rt-pcr扩增中的模板。根据制造商的说明书使用onesteprt-pcr试剂盒（qiageninc，valencia，ca）以扩增抗体序列。pcr条件如下：50℃30分钟，95℃15分钟，[94℃30秒、55℃30秒、72℃1分钟]x40，72℃10分钟和4℃保持。rt-pcr产物直接用作巢式pcr的模板。部分2：巢式pcr将rt-pcr产物用作巢式pcr中的模板，以用pfx50dna聚合酶（invitrogen，目录号：12355-012）扩增抗体可变区。关于巢式pcr引物的设计基于人igg重链和轻链可变区的构架1区的种系序列。将1μlrt-pcr产物与2.5μl10xpcr缓冲液、2.5μl10xpcrxenhancer（invitrogen）、0.5μldntp混合物、0.5μl正向引物库（各10μl）、0.5μl反向引物（10μm）、0.5μlpfx50dna聚合酶和17μl水混合。巢式pcr条件为：在94℃下2分钟，94℃30秒、50℃30秒、68℃1分钟的10个循环，随后为94℃30秒、60℃30秒、68℃1分钟的30个循环，然后68℃下的7分钟延伸，随后为4℃保持用于短期贮存。将vh和vk或vh和vl扩增的pcr产物的rb1巢式pcr产物用作重叠pcr中的模板，用特异性接头将抗体轻链和重链基因一起退火，以促进下一步输注克隆。部分3.重叠pcr和输注克隆在该反应中使用pfx50dna聚合酶（invitrogen）。正向和反向引物设计为促进将重叠pcr产物输注克隆到克隆载体内。1μl重链巢式pcr产物、1μl轻链巢式pcr产物和1μl接头与5μl10xpcr缓冲液、5μl10xpcrx增强剂、1μldntp混合物、1μl正向引物（10μm）、1μl反向引物（10μm）、1μlpfx50dna聚合酶和33μl水混合。pcr条件如下：94℃2分钟，[94℃30秒、60℃30秒、68℃2分钟]x10，[94℃30秒、65℃30秒、68℃2分钟]x30，68℃7分钟，4℃保持。将重叠pcr产物进行琼脂糖凝胶纯化，用于输注克隆（获得约1.2kb的rb1vh+vk重叠pcr产物）。应用输注克隆将rb1vh+vk重叠pcr产物克隆到pmab11exp2（具有用于轻链表达的ompa前导序列，用于重链表达的pelb前导序列）载体内。使用infusionhd®克隆试剂盒（clontechlaboratories，inc.，mountainview，ca），并且遵循制造商的说明书。挑选转化体并且运送至genewiz，inc.（southplainfield，nj）用于测序。用sequencher（genecodescorporation，annarbor，mi）分析测序结果。表7中描述了rb1的核苷酸和氨基酸序列（患者分离的rb1可变重链和可变轻链氨基酸序列分别由seqidno：9和seqidno：8表示）。由于具有核苷酸变化的jh反向引物的设计，在位置125处在天然序列中存在的异亮氨酸改变为表达的蛋白质中的苏氨酸（所得到的rb1可变重链由seqidno：7表示）。将rb1抗体重链和轻链可变结构域基因的氨基酸序列运送至genscriptusa，inc.（piscataway，nj），用于密码子优化和人igg1转化以及cho瞬时表达和产生。将合成的dna亚克隆到ptt5载体内，用于cho-3e7细胞表达。编码每种抗体的重链和轻链的重组质粒瞬时共转染到cho‐3e7细胞培养物内。在第6天时收集的细胞培养上清液用于通过蛋白a柱的纯化。如实施例2中所述，纯化的rb1人igg1用于中和测定和其他表征实验中。实施例2：抗hrsv抗体的表征如实施例1中所述，rb1在elisa测定中与前f和融合后f蛋白两者结合，其ec50范围为1-10ng/ml，而d25抗体（参见kwakkenbos等人，2010，naturemedicine16:123–128）优先结合融合前f。参见图1a-b。关于rb1、rb11和文献中报道的一些基准抗体（d25，帕利珠单抗，全长[d25抗体基于公布的序列内部制备和synagis®（帕利珠单抗）购自myoderm，norristown，pa]）的中和，在rsvalong毒株（atcc编号vr-26™）和rsvbwashington毒株18537毒株（atcc编号vr-1580™）中进行比较。测试样品在补充有2%热灭活fbs的emem中三倍连续稀释，共11个稀释点。然后将连续稀释的样品与等体积的补充有2%热灭活fbs的emem（含有100pfu/孔rsva或b毒株）混合。在37℃下温育1小时后，将浓度为1.5x105细胞/ml的100μlhep-2细胞转移至含有病毒/抗体混合物的96孔板中。在感染后3天时，将细胞用pbs洗涤一次，然后在室温下在80%丙酮中固定10分钟。将rsvf（mab143-f3-b138）和rsvn（34c9）特异性小鼠mab（内部获得）的混合物加入平板中，并且在室温下温育1小时。用pbs/0.05%tween20洗涤平板，并且将生物素化的马抗小鼠igg加入平板，并且在室温下温育1小时。用pbs/0.05%tween洗涤平板。红外染料-链霉抗生物素蛋白用于检测rsv特异性信号，并且将用于测定标准化的两种细胞染色剂加入96孔板中，并且在黑暗中温育1小时。1小时温育后，洗涤平板，在黑暗中风干20分钟，并且在licoraerius®automatedimagingsystem上读数，利用700通道激光用于细胞标准化和800通道激光用于检测rsv特异性信号。计算800/700比率和中和百分比，并且通过graphpad中的四参数曲线拟合确定ic50值。rb1能够以相等效力中和rsv-a和rsv-b毒株（ic50为1-5ng/ml）。与基准抗体相比，rb1也证实优异的抗rsv中和作用。参见图2a-b和表4。表4：与基准抗体相比，rb1的结合和中和效力用于融合前和融合后f蛋白的rb1结合的亲和力测定：使用biacoret200系统（biacore，gehealthcare，piscataway，nj），通过表面等离振子共振测量抗人rsvf蛋白抗体rb1（如实施例1中所述制备）的动力学结合活性。大约5000ru的抗小鼠igg，gehealthcare目录号br-1008-38或约13,000ru的山羊抗大鼠iggfcγ，片段特异性，jacksonimmunoresearch目录号112-006-071经由胺偶联化学固定在s系列cm5传感器芯片，目录号br-1005-30上。背景扣除结合传感图用于分析结合（ka）和解离（kd）速率常数、以及平衡解离常数kd。所得到的数据集使用biacoret200评估软件（版本2.0）与1:1兰米尔结合模型拟合。表5概括了关于抗人rsvf蛋白抗体对rsvf蛋白的融合前和融合后形式的亲和力。表5：使用biacore测量rb1对rsv融合前f和融合后f的亲和力蛋白质kon（m-1s-1）k0ff（s-1）kd（nm）融合前f4.4x1061.4x10-40.031融合后f2.2x1069x10-40.41rb1是非常有力的融合前f蛋白结合剂，具有~31pm的kd。用于融合后结合的kd在0.41nm时为更低量级。如国际专利申请公开号wo2014121021a1中报道的关于d25的kd是57pm。另外，与融合后f蛋白相比，抗体rb1在融合前f上比在融合后f上停留更长，如1.4x10-4的较慢解离速率可见的。实施例3：rb1抗体的表位作图通过进行丙氨酸扫描诱变实验作图融合f蛋白上的rb1结合表位。如所述的，通过在integralmolecular的鸟枪法诱变执行表位作图。（davidson和doranz，2014，immunology143（1）：13-20）。为了构建鸟枪诱变文库，使rsv-f蛋白表达载体诱变以产生克隆文库，各自代表个别点突变体并且累积覆盖蛋白质中的所有残基。使用丙氨酸扫描诱变构建文库，其提供了限定每个残基的侧链贡献的更受控的方法。使用半自动化机器人方案，将每个突变质粒单独克隆、测序、微量制备并排列在384孔微板形式中，用于人细胞中的重复转染、表达和抗体结合测定。就抗体结合的损失针对rb1筛选丙氨酸扫描突变体文库。两个残基精氨酸-429和异亮氨酸-432被鉴定为rb1结合的关键。参见下文和图3a。rb1看起来是位点ivmab（101f样），并且文献中的位点iv结合抗体据报道结合融合前和融合后f两者。我们进一步使rb1fab与融合前f蛋白共结晶，以更好地了解结合表位。从以3.4-3.5ao的晶体收集衍射数据。rb1抗体通过与重链和轻链两者的cdr环相互作用而与融合前f蛋白结合。轻链cdr3环通过在phe91和leu92的羰基氧与arg429的胍基氮之间形成两个氢键而与arg429的侧链相互作用。另外在轻链上，在cdr2环上的asp50和glu55定位成与rsv的asn426和lys445形成氢键。通过rb1重链的cdr3环进行广泛的相互作用，其中tyr104和tyr110与rsv上的ile432形成用于范德华相互作用的表面。rsv的lys433与cdr3环的asn107形成氢键。根据晶体结构，rb1的轻链也针对glu161和ser182或rsv融合前三聚体的邻近单体包装。对于鉴定rb1的结合表位在文献中报道的946个f蛋白序列的944个中是高度保守的。这提示针对该区域的抗体的抗性预期很低。实施例4：动物模型中rsv抗体的抗rsv活性就在棉鼠攻击模型中提供保护，比较rb1抗体与d25和帕利珠单抗。该研究包括以2.5mg/k给予的帕利珠单抗、d25和rb1抗体，并且连续稀释10倍至0.25mg/mk。在这种被动免疫治疗模型中，棉鼠在d0时给予以不同浓度的rb1、d25或帕利珠单抗，并且在一天后用105pfu的rsv攻击。受攻击rsv疾病毒的鼻和肺滴度是在攻击后四天，并且用于经由噬斑测定确定病毒脱落。棉鼠：从sagelabs（boyertown，pa）获得至少五只棉鼠（刚毛棉鼠（sigmodonhispidus）），3-7周龄，具有大约100克的平均体重。随意提供常规啮齿类动物食物和水。抗体试剂：100mg冻干的帕利珠单抗（myoderm，norristown，pa）以100mg/ml的浓度在水中配制。其他抗体内部表达且纯化。抗体试剂制剂：配制缓冲液对于每种抗体都是特异性的，以稳定蛋白质并防止沉淀。配制如下：将rb1和d25在1x磷酸盐缓冲盐水ph7.2中稀释。按照制造商的建议，通过溶解于蒸馏h2o中配制帕利珠单抗，所述蒸馏h2o有效缓冲25mm组氨酸和1.3mm甘氨酸ph6.0中的蛋白质。剂量溶液的制备、施用和分析：随机称重五只动物以确定所使用群组的平均重量。在施用到动物内之前约1小时制备制剂。将冷冻的抗体库存在湿冰上解冻用于单次解冻。将每种抗体稀释至适当的剂量浓度以递送至每个组。在第0天（研究开始）时，将随机分配到每个组的动物用1-4%异氟烷麻醉轻度镇静，并且用26g注射器和针将0.1ml肌内注射到右四头肌内。动物在两分钟内从镇静作用中恢复。约24小时后（+/-2小时），棉鼠用1-4%异氟醚镇静，经由眶后丛放血，然后立即用0.1ml在williamse培养基中的1x105.5pfu的rsva2或rsvbwashington野生型病毒通过鼻孔给药。接种四天后，通过co2吸入处死动物并且取出肺（左叶）和鼻甲，并且在湿冰上在10体积含有蔗糖磷酸谷氨酰胺缓冲液（spg）的hanks平衡盐溶液（lonza）中匀浆化。通过以2000rpm离心10分钟使样品澄清，等分，快速冷冻，并且立即在-70℃下冷冻贮存，直至在噬斑测定中测试。如图4a-d和图5a-d中所示，rb1能够在2.5mpk剂量的剂量下实现在肺和鼻中的rsva和rsvb两者的病毒滴度中的2-3对数降低，类似于d25，但优于不能影响鼻中的病毒滴度的帕利珠单抗。实施例5：rb1的fc工程改造igg的新生儿fc受体（fcrn）已在从母体到其胎儿的被动体液免疫传递中得到充分表征。另外，在生命自始至终，fcrn保护igg免于降解，从而解释了这类抗体在血清中的长半衰期。参见例如israel等人，1996，immunology89:573-8。fcrn在不同于经典fcγr或补体的c1q组分的结合位点的位点处与igg的fc部分结合。fcrn-fc共晶体结构揭示fcrn结合igg抗体的ch2-ch3铰链区。igg-fcrn途径的区别特征是专性ph依赖性。igg-fcrn结合由溶酶体中的酸性ph（6.0）驱动，而解离在细胞外环境的中性ph（7.4）下发生。溶酶体中的酸化（ph6.0-6.5）使得fcrn能够以低微摩尔亲和力与igg的fc区结合，并且使其免于分解代谢。随后将受保护的fcrn结合的igg穿梭至细胞表面，并且释放到细胞外环境内。该过程通过降低其对细胞外降解的暴露来保护抗体。rb1抗体在改善半衰期的努力中经受fc工程改造。rb1+yte是rb1的衍生物，其中三重突变（m252y/s254t/t256e（yte）引入rb1的fc部分内。该yte突变组改善抗体与新生儿fc受体的结合，导致在人中更长的半衰期。参见例如dall'acqua等人，2006，jbiolchem.281:23514-24。在莫维珠单抗的fc区内的3个氨基酸（yte：m252y/s254t/t256e）中的突变已导致对于人和猴两者在ph6.0下在体外fcrn结合中的10倍增加，因而导致在猴中的体内血清半衰期的4倍增加。参见robbie等人，2013，antimicrobagentschemother.57:6147-53。将rb1+yte抗体重链和轻链可变结构域的氨基酸序列送至genscriptusa，inc.（piscataway，nj），用于密码子优化和人igg1转化以及cho瞬时表达和产生。表7中描述了rb1+yte的核苷酸和氨基酸序列。将合成的dna亚克隆到ptt5载体内，用于cho-3e7细胞表达。编码每种抗体的重链和轻链的重组质粒瞬时共转染到cho‐3e7细胞培养物内。在第6天时收集的细胞培养上清液用于通过蛋白a柱的纯化。纯化的rb1+yte人igg1用于中和测定和其他表征实验中。实施例6：rb1+yte的表征rb-1+yte在如实施例1中所述执行的elisa测定中结合f蛋白，其ec50范围为1.97至2.457ng/ml。参见图6。关于rb1+yte和基于公布的序列内部制备的在文献中报道的基准抗体（莫维珠单抗，medimmune，gaithersburg，md；参见美国专利申请公开号us20110158985）的中和，在rsvalong毒株（atcc编号vr-26™）和rsvbwashington毒株18537毒株（atcc编号vr-1580™）中进行比较。测试样品在补充有2%热灭活fbs的emem中三倍连续稀释，共11个稀释点。然后将连续稀释的样品与等体积的补充有2%热灭活fbs的emem（含有100pfu/孔rsva或b毒株）混合。在37℃下温育1小时后，将浓度为1.5x105细胞/ml的100μlhep-2细胞转移至含有病毒/抗体混合物的96孔板中。在感染后3天时，将细胞用pbs洗涤一次，然后在室温下在80%丙酮中固定10分钟。rsvf（mab143-f3-b138）和rsvn（34c9）特异性小鼠mab的混合物（mab143-f3-b138和34c9是通过用分别的抗原免疫接种小鼠和使用杂交瘤使b细胞永生化，而衍生的内部抗体）加入平板中，并且在室温下温育1小时。用pbs/0.05%tween20洗涤平板，并且将生物素化的马抗小鼠igg加入平板，并且在室温下温育1小时。用pbs/0.05%tween洗涤平板。红外染料-链霉抗生物素蛋白用于检测rsv特异性信号，并且将用于测定标准化的两种细胞染色剂加入96孔板中，并且在黑暗中温育1小时。1小时温育后，洗涤平板，在黑暗中风干20分钟，并且在licoraerius®automatedimagingsystem上读数，利用700通道激光用于细胞标准化和800通道激光用于检测rsv特异性信号。计算800/700比率和中和百分比，并且通过graphpad中的四参数曲线拟合确定ic50值。rb-1+yte能够以相等效力中和rsv-a和rsv-b毒株（ic50为5-10ng/ml）。参见表6。表6：关于rb1+yte与rsv融合前f和融合后f的中和和亲和力的测量在rb1的fc部分中引入yte突变不改变抗体中和rsva和b毒株的体外效力。关于rsva的体外中和效力对于rb1和rb1+yte分别为3和3.6ng/ml。关于rsvb的体外中和效力对于rb1和rb1+yte分别为1.7和3.49ng/m。如通过biocore测量的动力学常数对于rb1和rb1+yte是相似的，提示在抗体的fc区中引入yte不改变其抗原结合性质。在newiberiaresearchcenter（ullafayette，la）处进行非glp（良好实验室规范）药代动力学研究。八只生物学首次用于实验的雄性恒河猴被随机化且分配到两个研究组之一（n=4/组）。每只动物接受以10mg/kg的单次静脉内（i.v.）剂量的rb1+yte）或莫维珠单抗-yte。在第0天给药前，在给药后0.5、1、3、8和24小时，以及在给药后1、2、3、5、7和10天时抽取血样。基于ecl的免疫测定用于定量恒河猴血清中的rb1+yte（人x[rsv]mab（rb1-yte）igg1/κ（ce））和莫维珠单抗_yte（人源化x[rsv]mabigg1/κ）。该测定使用生物素化的小鼠抗人iggκ链（bdbiosciences，sanjose，ca）作为捕获试剂和磺基tag小鼠抗人iggfc作为检测试剂（southernbiotechbirmingham，al）。测定的定量下限（lloq）确定为1.37ng/ml，其最小需要稀释度（mrd）为20。rb1+yte和莫维珠单抗-yte的药代动力学在以10mg/kg静脉内给药的恒河猴中评估为至多10天，使用相同的免疫测定以定量rb1+yte和莫维珠单抗-yte。对于每只动物，使用phoenixwinnonlin6.3（certara，nj）对于每只动物的血清浓度数据拟合非区室模型，以估计曲线下面积（auc0-10天）。跨越每个治疗组的4只动物的auc0-10天求平均值，并且报告为平均值±标准差。对于rb1+yte，auc0-10天=1159±116μg/ml*天，并且对于莫维珠单抗-yte，auc0-10天=1381±63.0μg/ml*天。rb1+yte（在图例中描绘为rb1-yte）和莫维珠单抗-yte显示在恒河猴中相似的血清浓度分布和药代动力学。参见图7。还发现nhp中的rb1+ytepk与文献报道的食蟹猕猴中的莫维珠单抗-ytepk可比较。参见dall'acqua等人，2006，jbiolchem，281:23514-24。本文引用的所有参考文献通过引用并入，其程度与每个个别出版物、数据库条目（例如genbank序列或geneid条目）、专利申请或专利特别和个别地指示通过引用并入相同。根据37c.f.r.§1.57（b）（1），通过引用并入的这种声明由申请人预期涉及每个和每一个个别出版物、数据库条目（例如genbank序列或geneid条目）、专利申请或专利，其各自遵照37c.f.r.§1.57（b）（2）明确鉴定，即使这种引用并不直接与通过引用并入的专门声明相邻。在说明书内包括通过引用并入的专门声明（如果有的话）并不以任何方式弱化通过引用并入的这种一般声明。本文参考文献的引用并不预期作为参考文献是相关的现有技术的承认，它也不构成关于这些出版物或文献的内容或日期的任何承认。本发明在范围方面不受在此描述的具体实施例的限制。实际上，根据前文描述和附图，除了本文所述的那些之外的本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这些修改预期落入所附权利要求的范围内。表7：序列信息序列表<110>vora,kalpita.cox,karas.tang,aiminchen,zhifengdistefano,danielzhang,lansu,hua-poo<120>中和人呼吸道合胞病毒的单克隆抗体<130>24158-us-pct<140>us62/247,841<141>2015-10-29<140>us62/367,359<141>2016-07-27<160>22<170>patentinversion3.5<210>1<211>5<212>prt<213>智人<400>1aspseralametser15<210>2<211>19<212>prt<213>智人<400>2pheilelysserlysthrtyrglyglythrlysglutyralaalaser151015vallysgly<210>3<211>16<212>prt<213>智人<400>3glyalaprotyrglyglyasnserasptyrtyrtyrglyleuaspval151015<210>4<211>11<212>prt<213>智人<400>4argthrserglnaspvalargglyalaleuala1510<210>5<211>7<212>prt<213>智人<400>5aspalaserserleugluthr15<210>6<211>9<212>prt<213>智人<400>6glnglnpheleuasppheprophethr15<210>7<211>127<212>prt<213>人工序列<220><223>具有氨基酸取代的rb1重链<400>7gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalargproglyarg151015serleuargleusercysthrvalserglypheserpheaspaspser202530alametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile354045serpheilelysserlysthrtyrglyglythrlysglutyralaala505560servallysglyargphethrileserargaspaspserlysasnile65707580alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr859095tyrcysthrargglyalaprotyrglyglyasnserasptyrtyrtyr100105110glyleuaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserser115120125<210>8<211>109<212>prt<213>智人<400>8aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargthrserglnaspvalargglyala202530leualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045pheaspalaserserleugluthrglyvalproserargphesergly505560serglyserglythrvalphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealaalatyrtyrcysglnglnpheleuasppheprophe859095thrpheglyglnglythrargleugluilelysargthr100105<210>9<211>127<212>prt<213>智人<400>9gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalargproglyarg151015serleuargleusercysthrvalserglypheserpheaspaspser202530alametsertrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpile354045serpheilelysserlysthrtyrglyglythrlysglutyralaala505560servallysglyargphethrileserargaspaspserlysasnile65707580alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr859095tyrcysthrargglyalaprotyrglyglyasnserasptyrtyrtyr100105110glyleuaspvaltrpglyglnglythrthrvalilevalserser115120125<210>10<211>19<212>prt<213>人工序列<220><223>前导序列<400>10metglytrpsercysileileleupheleuvalalathralathrgly151015valhisser<210>11<211>146<212>prt<213>人工序列<220><223>由前导区取代的rb1vh氨基酸<400>11metglytrpsercysileileleupheleuvalalathralathrgly151015valhissergluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalarg202530proglyargserleuargleusercysthrvalserglypheserphe354045aspaspseralametsertrpvalargglnalaproglylysglyleu505560glutrpileserpheilelysserlysthrtyrglyglythrlysglu65707580tyralaalaservallysglyargphethrileserargaspaspser859095lysasnilealatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthr100105110alavaltyrtyrcysthrargglyalaprotyrglyglyasnserasp115120125tyrtyrtyrglyleuaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrval130135140serser145<210>12<211>128<212>prt<213>人工序列<220><223>rb1vl和前导区<400>12metglytrpsercysileileleupheleuvalalathralathrgly151015valhisseraspileglnmetthrglnserproserserleuserala202530servalglyaspargvalthrilethrcysargthrserglnaspval354045argglyalaleualatrptyrglnglnlysproglylysalaprolys505560leuleuilepheaspalaserserleugluthrglyvalproserarg65707580pheserglyserglyserglythrvalphethrleuthrileserser859095leuglnprogluaspphealaalatyrtyrcysglnglnpheleuasp100105110pheprophethrpheglyglnglythrargleugluilelysargthr115120125<210>13<211>330<212>prt<213>智人<400>13alaserthrlysglyproservalpheproleualaproserserlys151015serthrserglyglythralaalaleuglycysleuvallysasptyr202530pheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthrser354045glyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyrser505560leuserservalvalthrvalproserserserleuglythrglnthr65707580tyrilecysasnvalasnhislysproserasnthrlysvalasplys859095lysvalgluprolyssercysasplysthrhisthrcysproprocys100105110proalaprogluleuleuglyglyproservalpheleuphepropro115120125lysprolysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcys130135140valvalvalaspvalserhisgluaspprogluvallyspheasntrp145150155160tyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproargglu165170175gluglntyrasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleu180185190hisglnasptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasn195200205lysalaleuproalaproileglulysthrileserlysalalysgly210215220glnproarggluproglnvaltyrthrleuproproserargaspglu225230235240leuthrlysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyr245250255proseraspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasn260265270asntyrlysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphephe275280285leutyrserlysleuthrvalasplysserargtrpglnglnglyasn290295300valphesercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthr305310315320glnlysserleuserleuserproglylys325330<210>14<211>105<212>prt<213>智人<400>14valalaalaproservalpheilepheproproseraspgluglnleu151015lysserglythralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrpro202530argglualalysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnsergly354045asnserglngluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyr505560serleuserserthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshis65707580lysvaltyralacysgluvalthrhisglnglyleuserserproval859095thrlysserpheasnargglyglucys100105<210>15<211>381<212>dna<213>人工序列<220><223>具有氨基酸取代的rb1<400>15gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacggccagggcggtccctgagactc60tcctgcacagtttctggattcagctttgacgactctgctatgagctgggtccgccaggct120ccagggaaggggctggaatggataagtttcattaaaagtaaaacttatggtgggacaaaa180gaatacgccgcgtctgtgaaaggcaggttcaccatctcaagagatgattccaaaaacatc240gcctatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacagccgtgtattattgtactaga300ggggcgccttacggcggtaactccgattactactacggtttggacgtctggggccaaggg360accacggtcactgtctcctca381<210>16<211>327<212>dna<213>智人<400>16gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcacc60atcacttgccggacaagtcaggacgttagaggtgctttagcctggtatcaacagaaacca120gggaaagctcctaaactcctgatctttgatgcctccagtttggagactggggtcccatca180aggttcagcggcagtggatctgggacagttttcactctcaccatcagcagcctgcagcct240gaagattttgcagcttattactgtcagcagtttcttgatttccctttcaccttcggccag300gggacacgactggaaatcaaacgtacg327<210>17<211>381<212>dna<213>人工序列<220><223>密码子优化的rb1vh<400>17gaggtgcagctggtcgagagcgggggggggctggtgcggcctggcaggtctctgagactg60agctgcaccgtgagcggcttctcctttgacgattctgccatgagctgggtgcggcaggct120ccaggcaagggactggagtggatctccttcatcaagtctaagacctacggcggcacaaag180gagtacgccgcttccgtgaagggccggtttaccatcagcagggacgattccaagaacatc240gcctatctgcagatgaacagcctgaagaccgaggacacagccgtgtactattgcacaaga300ggagctccttacggaggcaacagcgactactattacggactggacgtgtggggacaggga360accacagtgaccgtgagctcc381<210>18<211>327<212>dna<213>人工序列<220><223>密码子优化的rb1vl<400>18gacattcagatgactcagtccccttcaagtctgagcgcctccgtgggcgacagagtgacc60atcacatgccggaccagccaggatgtgcggggcgccctggcttggtaccagcagaagcca120ggcaaggcccccaagctgctgatctttgacgctagctccctggagaccggcgtgccctcc180aggttttctggcagcggctccggcacagtgttcaccctgacaatctctagcctgcagcct240gaggactttgccgcttactattgccagcagttcctggatttccccttcaccttcggccaa300ggcacacggctggagatcaagaggacc327<210>19<211>57<212>dna<213>人工序列<220><223>前导序列重链<400>19atgggttggtcctgtattatcctgttcctggtcgccactgctactggggtccactca57<210>20<211>57<212>dna<213>人工序列<220><223>前导序列轻链<400>20atgggctggtcctgtattatcctgttcctggtggcaaccgcaactggtgtgcatagc57<210>21<211>990<212>dna<213>智人<400>21gcctctacaaagggccctagcgtgttcccactggctccctcttccaagtctaccagcgga60ggaacagccgctctgggatgtctggtgaaggattacttcccagagcccgtgaccgtgtcc120tggaactctggcgccctgaccagcggagtgcacacatttccagctgtgctgcagtcctct180ggcctgtattccctgagctccgtggtgaccgtgccctctagctccctgggcacccagaca240tacatctgtaacgtgaatcacaagccaagcaatacaaaggtggacaagaaggtcgagccc300aagtcctgtgataagacccacacatgccccccttgtcctgctccagagctgctgggagga360cctagcgtgttcctgtttccacccaagcctaaggacaccctgatgatctctaggaccccc420gaggtgacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaggatcctgaggtgaagtttaactgg480tacgtcgatggcgtggaggtgcacaatgccaagacaaagcccagagaggagcagtataac540tccacctaccgggtggtgtctgtgctgacagtgctgcaccaggactggctgaacggcaag600gagtacaagtgcaaggtgtccaataaggccctgcccgctcctatcgagaagaccatctct660aaggccaagggccagcctagggagccacaggtgtatacactgcctccatccagagacgag720ctgaccaagaaccaggtgtctctgacatgtctggtgaagggcttctacccttctgatatc780gccgtggagtgggagagcaatggccagccagagaacaattataagaccacaccccctgtg840ctggacagcgatggctccttctttctgtacagcaagctgaccgtggataagtcccggtgg900cagcagggcaacgtgttcagctgttctgtgatgcacgaagccctgcacaatcactacact960cagaagagcctgtccctgtcacctggtaaa990<210>22<211>315<212>dna<213>智人<400>22gtggccgctccctccgtgtttatcttccccccttctgacgagcagctgaagtctggcaca60gctagcgtggtgtgcctgctgaacaatttctaccctcgggaggccaaggtgcagtggaag120gtggataacgctctgcagtctggcaatagccaggagtccgtgaccgagcaggactctaag180gatagcacatattccctgtcctctaccctgacactgtctaaggccgattacgagaagcac240aaggtgtatgcttgtgaagtcacccaccaggggctgagttcaccagtcaccaagtcattc300aatcggggcgagtgc315当前第1页12当前第1页12