用于预防或治疗心血管疾病的新型N-酰基脲衍生物和包含其的组合物的制作方法

本发明涉及新型n-酰基脲衍生物及其用于预防或治疗心血管疾病的用途，并且更具体地涉及新型n-酰基脲衍生物、含有所述n-酰基脲衍生物作为活性成分的用于预防或治疗心血管疾病的药物组合物、以及制备所述n-酰基脲衍生物的方法

发明背景

作为细胞骨架组分之一的踝蛋白分子是细胞质蛋白。已知的是，踝蛋白分子通过与粘着斑蛋白和α-辅肌动蛋白的相互作用而直接或间接地将整联蛋白与细胞骨架连接(aland.michelson,platelets,第二版,2006)。

在关于踝蛋白分子网络异常的报告中，据报道，敲除踝蛋白分子使得受精后不可能发育成正常个体并且导致在受精后8天内死亡，表明踝蛋白分子是发育上重要的分子(devdyn.,219:560,2000)。

对踝蛋白分子与血小板之间关系的研究表明，整联蛋白和踝蛋白分子的活性在血小板的粘附和聚集中起着重要作用。血小板的粘附和聚集由于血管内皮创伤而发生，并且发生踝蛋白分子对整联蛋白的激活。相反，已知的是，有踝蛋白缺陷的血小板不诱导整联蛋白的激活，并且因此减少血栓形成(jexp.med.,204(13):3113,2007)。此外，据报道，作为血小板前体的巨核细胞中的踝蛋白分子的敲除导致抑制踝蛋白诱导的整联蛋白激活，导致连续出血(jexp.med,204(13):3103,2007)。因此，调节踝蛋白分子活性可以导致血小板聚集的抑制和血栓形成和出血的减少。

因此，诸位发明人已经进行了大量努力以开发能够通过降低踝蛋白表达来治疗和预防与踝蛋白相关的疾病的物质，并且因此已经合成了新型n-酰基脲衍生物，并且已经发现这些新型n-酰基脲衍生物展现出通过抑制踝蛋白的活性来抑制血小板聚集和有效调节细胞形态变化和生长的作用，从而完成本发明。

发明概述

本发明的一个目的是提供一种新型n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗心血管疾病的药物组合物，所述药物组合物包含n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本发明的再另一个目的是提供一种用于制备n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐的方法。

为实现以上目的，本发明提供一种新型n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐，所述n-酰基脲衍生物是由下式1表示的化合物：

[式1]

其中

r1是氢，卤素，羟基，c1-6烷基，c1-6卤烷基，c6-12芳基，c1-12杂芳基，c1-12杂环基，通过杂原子连接的c1-6烷基，或通过杂原子连接的c6-12芳基、c1-12杂芳基或c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或取代的，并且杂原子选自n、o和s；

r2是氢、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c6-12芳基、c1-12杂芳基、c1-12杂环基、c2-20亚烷基-c6-12芳基、c2-20亚烷基-c1-12杂芳基、或c2-20亚烷基-c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或取代的，并且杂原子选自n、o和s；并且

r3和r4各自独立地是氢、c1-6烷基或c1-6卤烷基。

本发明还提供了一种用于预防或治疗心血管疾病的药物组合物，所述药物组合物含有所述新型n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本发明还提供了一种制备由上式1表示的新型n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：(a)通过将2-氯乙酰胺、n,n-二甲基甲酰胺、碳酸钾和亲核试剂在反应器中混合并且反应，通过添加水使反应终止，随后浓缩，获得乙酰胺；(b)通过向获得的乙酰胺中添加草酰氯，添加二氯乙烷，并且加热和搅拌，随后浓缩，获得乙酰基异氰酸酯；并且(c)通过向获得的乙酰基异氰酸酯中添加二氯甲烷，添加亲核试剂并且使所述亲核试剂反应，随后浓缩，获得化合物。

本发明还提供了一种制备由上式1的n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：(a)通过将2-氯乙酰胺和草酰氯在反应器中混合，添加二氯乙烷，并且加热和搅拌，随后浓缩，获得2-氯乙酰基异氰酸酯；(b)通过向获得的2-氯乙酰基异氰酸酯中添加二氯甲烷，并且然后添加亲核试剂并且反应，随后浓缩，获得氨基甲酰基2-氯乙酰氨；并且(c)通过向得到的氨基甲酰基2-氯乙酰胺中添加甲醇，在搅拌下添加亲核试剂并且使所述亲核试剂反应，使用有机溶剂萃取n-酰基脲衍生物，获得n-酰基脲衍生物。

附图简述

图1示出了为证实本发明化合物(制备实施例30的化合物或制备实施例31的化合物)对hek293细胞中β-连环蛋白表达的抑制的作用而进行的蛋白质印迹分析的结果，其中wnt/β-连环蛋白途径通过用wnt-3acm处理来激活。图1是示出了在本发明的实施例38中用于高通量筛选血栓形成抑制候选物的实验方法的示意图。

图2示出了根据本发明的实施例38筛选血栓形成抑制候选物的结果。将表达血小板整联蛋白αiibβ3的细胞与0.2mm候选物一起孵育，并且根据图1所示的实验方法验证细胞与纤维蛋白原之间的结合。在图2中，0％是阴性对照并且表示细胞粘附于涂覆有牛血清白蛋白(bsa)而不是纤维蛋白原的表面的程度，并且100％是阳性对照并且表示在没有任何候选物的存在下细胞粘附于纤维蛋白原的程度。候选物抑制纤维蛋白原结合的能力归一化为100％，并且图示出三次实验的平均值和标准误差。

图3示出了在本发明的实施例38中测试有效代表性血栓形成抑制候选物的浓度依赖性抑制活性的结果。

图4示出了在本发明的实施例39中通过表面等离子体共振光谱法测量踝蛋白拮抗剂候选物对踝蛋白的结合亲和力的结果。

图5示出了在本发明的实施例40中分析kch-1513和kch-1521的血小板聚集抑制作用的结果。

图6描绘了示出在本发明的实施例41中通过以下方式获得的结果的图：用血小板聚集激动剂(trap、adp和花生四烯酸)处理人外周血，并且然后用本发明的化合物再次处理所述血，并且比较并量化血小板聚集的抑制，以便比较各种化合物在人外周血中的血小板聚集抑制活性。

图7示意性地示出了本发明的新型n-酰基脲衍生物作用的机理。

图8描绘了示出在本发明的实施例42中通过以下方式获得的结果的图：用血小板聚集激动剂(trap、adp和花生四烯酸)处理人外周血(已给予常规血小板抑制剂)，并且然后用本发明的化合物再次处理所述血，并且比较并量化血小板聚集的抑制，以便比较各种化合物在人外周血中的血小板聚集抑制活性。

发明详述

在一个方面，本发明涉及一种由下式1表示的n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐：

[式1]

其中

r1是氢，卤素，羟基，c1-6烷基，c1-6卤烷基，c6-12芳基，c1-12杂芳基，c1-12杂环基，通过杂原子连接的c1-6烷基，或通过杂原子连接的c6-12芳基、c1-12杂芳基或c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或取代的，并且杂原子选自n、o和s；

r2是氢、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c6-12芳基、c1-12杂芳基、c1-12杂环基、c2-20亚烷基-c6-12芳基、c2-20亚烷基-c1-12杂芳基、或c2-20亚烷基-c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或取代的，并且杂原子选自n、o和s；并且

r3和r4各自独立地是氢、c1-6烷基或c1-6卤烷基。

如本文所用，术语“c1-6烷基”是指单价直链或支链饱和烃基(或部分)，其仅由碳和氢原子组成，具有一至六个碳原子。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、正己基等。“支链烷基”的例子包括异丙基、异丁基、叔丁基等。

术语“c1-6卤烷基”意指如本文定义的c1-6烷基，其中所述烷基的氢原子中的至少一个已被相同或不同的卤原子取代。卤烷基的例子包括-ch2cl、-ch2cf3、-ch2ccl3、全氟烷基(例如，-cf3)等。

术语“c2-20亚烷基”意指具有2至20个碳原子的直链饱和二价烃基，或具有3至20个碳原子的支链饱和二价烃基，例如，亚甲基、亚乙基、2,2-二甲基亚乙基、亚丙基、2-甲基亚丙基、亚丁基、亚戊基等。

术语“c1-6烷氧基”意指具有式-o-c1-6烷基的部分。c1-6烷氧基部分的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。

术语“c6-12芳基”意指具有6至12个碳原子并且由单、二或三环芳香族环组成的单价环状芳香族烃基。所述芳基可以是取代的或未取代的，如本文所定义。在一个实施方案中，所述芳基可以是取代的或未取代的苯基、或取代的或未取代的萘基。特别地，在一个实施方案中，所述芳基是取代的或未取代的苯基。

术语“c1-12杂芳基”意指5至12个、特别是6至10个环原子的单、二或三环基团，所述基团具有含有选自n、o和s的一个、两个或三个环杂原子且其余环原子是c的至少一个芳香族环，应理解的是所述杂芳基的附接点在芳香族环上。所述杂芳基环可以是含有选自n、o和s的一个、两个或三个环杂原子且其余环原子是c的5或6元单环。所述杂芳基环可以是取代的或未取代的，如本文所定义。杂芳基部分的例子包括但不限于吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、噻吩基(thienyl)(即，thiopenyl)、呋喃基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基(即，苯并呋喃基)、苯并噻吩基、苯并噻喃基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噁二唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并吡喃基、吲哚基、异吲哚基、三唑基、三嗪基、喹喔啉基、嘌呤基、喹唑啉基、喹嗪基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、氮杂卓基、二氮杂卓基、吖啶基等，它们可以各自是取代的或未取代的。优选的杂芳基部分的例子包括吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基和哒嗪基，它们可以各自是取代的或未取代的。在一个实施方案中，所述杂芳基部分是三唑基、四唑基、吡啶基或吲哚基，它们可以各自是取代的或未取代的，如本文所定义。

术语“c1-12杂环基”意指除碳原子外还含有一个、两个或三个选自n、o和s的环杂原子的4至9元饱和或部分不饱和碳环。这里，这两个环共享两个共用环原子。也就是说，将这两个环分开的桥是单键或1或2元链。所述杂环基环可以是取代的或未取代的，如本文所定义。杂环基部分的例子包括但不限于氮杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基、氧杂氮杂环庚烷基、二氢吲哚基、二氢呋喃基、二氢咪唑啉基、二氢噁唑基、四氢吡啶基、二氢吡喃基或苯并二氧杂环戊烯基。在一个实施方案中，杂环基是哌嗪基、吗啉基、苯并二氧杂环戊烯基或二氢吲哚基，它们可以各自是取代的或未取代的，如本文所定义。

术语“通过杂原子连接的芳基、杂芳基或杂环基”是指通过杂原子o、s或se连接的芳基、杂芳基或杂环基。在一个实施方案中，所述杂原子是o或s。

在上式1中，r1是氢，卤素，羟基，c1-6烷基，c1-6卤烷基，c6-12芳基，c1-12杂芳基，c1-12杂环基，通过杂原子连接的c1-6烷基，或通过杂原子连接的c6-12芳基、c1-12杂芳基或c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或被一个或三个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤烷氧基、-c1-6烷氧基-c1-6烷基、c1-6烷氧基羰基、-o-芳基、-o-杂芳基、以及-o-c2-20亚烷基-芳基。

在一个实施方案中，r1是四唑基、哌嗪基、吗啉基、通过o连接的苯基或通过o连接的苯并二氧杂环戊烯基，其中所述四唑基、哌嗪基、吗啉基或苯并二氧杂环戊烯基可以是未取代的或被1至3个选自以下的取代基取代：卤素、c1-6卤烷基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧基羰基、苯氧基和-o-c2-20亚烷基-苯基。具体地，所述四唑基、哌嗪基、吗啉基或苯并二氧杂环戊烯基可以被1至3个选自以下的取代基取代：f、br、cf3、甲氧基、叔丁氧羰基、苯氧基和-o-ch2-苯基。

在上式1中，r2是氢、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c6-12芳基、c1-12杂芳基、c1-12杂环基、c2-20亚烷基-c6-12芳基、c2-20亚烷基-c1-12杂芳基、或c2-20亚烷基-c1-12杂环基，其中所述芳基、杂芳基或杂环基可以是未取代的或被一个或三个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤烷氧基、-c1-6烷氧基-c1-6烷基、c1-6烷氧羰基、-o-芳基、-o-杂芳基和-o-c2-20亚烷基-c6-12芳基。

在一个实施方案中，r2是苯基、吡啶基、c2-20亚烷基-苯基、c2-20亚烷基-吲哚基、或c2-20亚烷基-二氢吲哚基，其中所述苯基、吡啶基、吲哚基或二氢吲哚基可以是未取代的或被一个或三个选自以下的取代基取代：卤素、羟基、c1-6烷基、c1-6卤烷基、c1-6烷氧基、c1-6卤烷氧基、-c1-6烷氧基-c1-6烷基、-o-苯基和-o-c2-20亚烷基-苯基。

在一个实施方案中，r2是苯基、吡啶基、c2-6亚烷基-苯基、c2-6亚烷基-吲哚基、或c2-6亚烷基-二氢吲哚基，并且所述苯基、吡啶基、吲哚基或二氢吲哚基可以是未取代的或被一个或三个选自以下的取代基取代：卤素、c1-6烷氧基、苯氧基和-o-c2-6亚烷基-苯基。具体地，所述苯基、吡啶基、吲哚基或二氢吲哚基可以被1至3个选自以下的取代基取代：f、br、甲氧基、苯氧基和-o-ch2-苯基。

在上式1中，r3和r4各自独立地是氢、c1-6烷基或c1-6卤烷基。

在一个实施方案中，r3和r4各自是氢。

作为由本发明的式1表示的化合物的新型n-酰基脲衍生物的具体例子包括：

(1)n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(2)n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(3)n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(4)n-((2-(3a,7a-二氢-1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺)；

(5)n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(6)n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(7)n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺；

(8)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(9)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(10)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(11)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(12)n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰胺；

(13)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(14)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(15)2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(16)n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(17)n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(18)2-(2-甲氧基苯氧基)-n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(19)n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(20)n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰胺；

(21)n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(22)n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(23)n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺；

(24)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(25)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(26)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(27)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(28)n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰胺；

(29)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(30)n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰胺；

(31)2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(32)n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(3-溴苯氧基)乙酰胺；

(33)2-(3-溴苯氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(34)2-(2,3-二甲基苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(35)2-(4-(苄氧基)苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺；

(36)n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-吗啉基乙酰胺；以及

(37)4-(2-(3-(2-氟苯基)脲基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯。

根据本发明的上式1的n-酰基脲衍生物包括其药学上可接受的盐以及由其制备的水合物和溶剂化物。

如本文所用，指定的由式1表示的化合物旨在包括其药学上可接受的盐。所述药学上可接受的盐可以通过本领域常用的盐制备方法制备。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱或酸制备的盐，所述碱或酸包括无机或有机碱和无机或有机酸。衍生自无机碱的盐优选为铝、铵、钙、镁、钾或钠盐。固体盐可以具有一种或多种晶体结构，或者在其他方面可以呈水合物的形式。衍生自药学上可接受的无毒有机碱的盐的例子包括伯胺、仲胺或叔胺、取代胺如天然存在的取代胺、环状胺、或碱性离子交换树脂(如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基胺基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、葡甲胺(methylglucamine)、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等)。

当本发明的化合物是碱性时，其盐可以由药学上可接受的无毒酸制备，这些无毒酸包括无机酸和有机酸。酸的例子包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、帕莫酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别地，药学上可接受的盐可以优选为乙酸、柠檬酸、氢溴酸、盐酸，马来酸、磷酸、硫酸、富马酸或酒石酸。

由本发明的式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的水合物旨在包括化学计量或非化学计量量的通过非共价分子间力与其结合的水。所述水合物可以含有一个或多个当量的水、典型地1当量至5当量的水。所述水合物可以通过使本发明的由式1表示的化合物或其药学上可接受的盐在水或含水溶剂中结晶来制备。

由本发明的式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物旨在包括化学计量或非化学计量量的通过非共价分子间力与其结合的溶剂。优选的溶剂是挥发性的，无毒的，并且适用于对人类给予。在另一个方面，本发明涉及一种用于预防或治疗心血管疾病的药物组合物，所述药物组合物含有新型n-酰基脲衍生物或其药学上可接受的盐作为活性成分。

本发明的心血管疾病包括但不限于高血压、缺血性心脏病、冠状动脉疾病、心绞痛、心肌梗塞、动脉硬化、脑血管疾病、心律失常等。

进行实施例44和45以验证由本发明的式1化合物诱导的踝蛋白活性调节，并且结果显示n-酰基脲衍生物通过直接结合到踝蛋白来抑制踝蛋白的活性，并且因此显示出优异的抗血小板作用。因此，含有根据本发明的式1化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过调节踝蛋白网络而有利地用于预防或治疗血栓形成心血管疾病。

可以看出，通过实施例46，本发明的由式1表示的化合物抑制血管生成。

图7示出了本发明的新型n-酰基脲衍生物的抗血小板机制。如前所报道，踝蛋白分子通过血栓形成信号与处于非活性状态的gpiib/iiia蛋白结合，从而引起gpiib/iiia蛋白的形态变化并且激活所述gpiib/iiia蛋白(图7a)。然而，本发明的新型n-酰基脲衍生物与踝蛋白分子结合，从而抑制踝蛋白分子直接与gpiib/iiia蛋白结合。这将gpiib/iiia蛋白维持在非活性状态下(图7b)。

因此，在再另一方面，本发明涉及一种用于通过将具有式1的化合物与踝蛋白分子结合来抑制踝蛋白分子与gpiib/iiia蛋白的结合的方法。

本发明的药物组合物还可以包含通常用于制备药物的合适载体、赋形剂或稀释剂。

可以根据常规方法来配制根据本发明的药物组合物。例如，可以将其配制成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆、气溶胶、口服剂和外用剂、栓剂或无菌注射溶液的形式。可以包含在本发明的组合物中的载体、赋形剂和稀释剂包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。

根据本发明的药物组合物是使用稀释剂或赋形剂配制的，所述稀释剂或赋形剂例如常用的填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或表面活性剂。用于口服给予的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊等。此类固体制剂通过将本发明的组合物与至少一种赋形剂(如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)混合来制备。除了简单的赋形剂，还可以添加润滑剂如硬脂酸镁、滑石等。用于口服给予的液体制剂，如悬浮液、内部溶液(internalsolution)、乳液、糖浆等，可以包括简单的稀释剂(例如，水和液体石蜡)以及各种赋形剂(例如，湿润剂、甜味剂、芳香族化合物、防腐剂等)。用于肠胃外给予的制剂包括灭菌水溶液、非水性溶剂、悬浮液、乳液、冻干剂、栓剂等。非水溶剂和悬浮液可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)或可注射酯(如油酸乙酯(ethyloleate))制备。作为栓剂的基础，可以使用witepsol、macrogol、吐温61、可可脂、月桂精脂(laurinfat)、甘油明胶等。

本发明的组合物可以口服或肠胃外给予。可以使用任何肠胃外给予方法，并且可以进行全身或局部给予，但是全身给予是更优选的，并且静脉内给予是最优选的。

根据本发明的组合物是以药学有效量给予的。如本文所用，术语“药学有效量”是指足以按适用于任何医学治疗的合理益处/风险比治疗疾病的量。所述组合物的有效剂量水平可以根据患者疾病的类型、疾病的严重程度、药物的活性、对药物的敏感性、给予时间、给予途径和排泄率、治疗持续时间、包括与所述组合物组合使用的药物在内的因素、以及医学领域中已知的其他因素来确定。本发明的药物组合物可以单独给予或与其他治疗剂组合给予，并且可以顺序给予或与常规治疗剂同时给予。所述组合物可以按单一或多种剂型给予。重要的是，鉴于以上描述的全部因素，以能够展现出最大效果而不会引起副作用的最小量给予所述组合物，并且此量可以由本领域技术人员容易地确定。

更具体地，根据本发明的化合物的有效量可以根据患者的年龄、性别和体重而变化，并且本发明的化合物通常可以从0.1mg至100mg、优选从0.5mg至10mg/1kg体重的每日或两天剂量给予，或可以一次至三次/天来给予。然而，剂量可以根据给予途径、肥胖的严重程度、性别、体重、年龄而增加或减少，并且因此并不旨在以任何方式限制本发明的范围。

在又另一方面，本发明涉及一种用于制备具有上式1的化合物的方法，其包括以下步骤：(a)将2-氯乙酰胺、n,n-二甲基甲酰胺、碳酸钾和亲核试剂在反应器中混合并且反应，通过添加水使反应终止，随后浓缩，以获得乙酰胺；(b)向获得的乙酰胺中添加草酰氯，用氩气置换反应器的内部，并且然后向反应器中通入二氯乙烷，并且加热和搅拌，随后浓缩，以获得乙酰基异氰酸酯；并且(c)向获得的乙酰基异氰酸酯中添加二氯甲烷，添加亲核试剂并且使所述亲核试剂反应，并且通过添加水使反应终止，随后浓缩，以获得n-酰基脲衍生物。

在本发明的一个实施方案中，步骤(a)中乙酰胺的获得可以包括：用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用mgso4干燥有机层，过滤，减压浓缩，并且使浓缩的化合物经受用乙酸乙酯/正己烷进行的柱色谱法。

在本发明的一个实施方案中，步骤(a)中的加热可以在60℃-100℃、优选75℃-90℃下进行。

在本发明的一个实施方案中，步骤(c)中的n-酰基脲衍生物的获得可以包括：用合适的溶剂稀释减压浓缩的残余物，用水洗涤，收集有机层，用mgso4干燥所述有机层，过滤，减压浓缩，并且使浓缩的化合物经受柱色谱法。

在另外的方面，本发明涉及一种用于制备具有上式1的化合物的方法，其包括以下步骤：(a)将2-氯乙酰胺与草酰氯在反应器中混合，用氩气置换反应器的内部，向所述反应器中通入二氯乙烷，并且加热和搅拌，随后浓缩，以获得2-氯乙酰基异氰酸酯；(b)向获得的2-氯乙酰基异氰酸酯中添加二氯甲烷，添加亲核试剂并且使所述亲核试剂反应，并且通过添加水使反应终止，随后浓缩，以获得氨基甲酰基2-氯乙酰胺；并且(c)向获得的氨基甲酰基2-氯乙酰胺中添加甲醇，在搅拌下添加亲核试剂并且使所述亲核试剂反应，通过添加水使反应终止，用有机溶剂萃取n-酰基脲衍生物，并且然后回收所述n-酰基脲衍生物。

在本发明中，所述亲核试剂可以选自：4-溴-3-甲氧基苯胺、4-甲氧基苄胺、色胺、2,4-二甲氧基苯胺、4-(苄氧基)苯胺、2-氟苯胺、芝麻酚、3-氟吡啶-2-胺、(4-甲氧基苯基)甲胺、4-(苄氧基)苯胺hcl、2-甲氧基苯酚、4-苯氧基苯胺、3,5-二(三氟甲基)苯酚、3-溴苯酚、4-溴-3-甲氧基苯胺、2,3-二甲基苯酚和4-(苄氧基)苯酚。

在本发明的一个实施方案中，步骤(a)中的加热可以在60℃-100℃、优选75℃-90℃下进行。

在本发明的一个实施方案中，步骤(b)中的2-氯乙酰基异氰酸酯的获得可以包括：用溶剂稀释减压浓缩的残余物，用mgso4干燥所述有机层，过滤，减压浓缩，并且然后使浓缩的化合物经受柱色谱法。

在本发明的一个实施方案中，步骤(c)中的n-酰基脲衍生物的获得可以包括：用乙酸乙酯萃取减压浓缩的残余物，用mgso4干燥有机层，过滤，减压浓缩，并且然后使浓缩的化合物经受柱色谱法。

实施例

在下文中，将参考实施例更详细地描述本发明。将对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，这些实施例仅用于说明目的，而不应被解释为限制本发明的范围。

[制备实施例]

<制备实施例1>n-酰基脲衍生物的制备1

步骤1：乙酰胺衍生物(2)的制备

将可商购的2-氯乙酰胺(1)置于反应器中，并且向其中添加n,n-二甲基甲酰胺。添加碳酸钾(3当量)和亲核试剂(1当量)，随后在合适的温度下搅拌过夜。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，随后减压浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释并且用水洗涤，并且将有机层用mgso4干燥，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受用乙酸乙酯/正己烷进行的柱色谱法，以获得所希望的化合物(3)。

步骤2：乙酰基异氰酸酯(4)的制备

将以上步骤1中获得的乙酰胺(3)和草酰氯(1.5当量)置于反应器中，并且用氩气置换反应器的内部，之后向所述反应器中通入二氯乙烷。将反应溶液加热至85℃并且搅拌5小时。反应完成后，获得所希望的化合物(4)，并且不经单独的纯化程序而用于下一步反应。

步骤3：n-酰基脲(6)的制备

将以上步骤2中获得的乙酰基异氰酸酯置于反应器中，并且向其中添加二氯甲烷，随后添加亲核试剂(5)(1当量)。将反应溶液在室温下搅拌过夜。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，随后减压浓缩。用合适的溶剂稀释残余物并且用水洗涤，并且然后收集有机层。用mgso4干燥所述有机层，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受柱色谱法，以获得所希望的化合物(6)。

<制备实施例2>n-酰基脲衍生物的制备2

步骤1：2-氯乙酰基异氰酸酯(7)的制备

将可商购的2-氯乙酰胺(1)和草酰氯(1.5当量)置于反应器中，并且用氩气置换所述反应器的内部，之后向所述反应器中引入二氯乙烷。接着，将反应溶液加热至85℃并且搅拌5小时。反应完成后，将反应溶液减压浓缩，并且获得所希望的化合物(7)，并且不经单独的纯化程序而用于下一步反应。

步骤2：氨基甲酰基2-氯乙酰胺(8)的制备

将以上步骤1中获得的2-氯乙酰基异氰酸酯(7)置于反应器中，并且向其中添加二氯甲烷，随后添加亲核试剂(5)(1当量)。将反应溶液在室温下搅拌过夜。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，随后减压浓缩。用合适的溶剂稀释残余物并且用水洗涤，并且然后收集有机层。用mgso4干燥所述有机层，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受柱色谱法，以获得所希望的化合物(8)。

步骤3：n-酰基脲(6)的制备

将以上步骤2中获得的化合物氨基甲酰基2-氯乙酰胺(8)(1当量)置于反应器中，并且向其中添加甲醇，之后在0℃下向其中添加亲核试剂(3当量)。将溶液在0℃下搅拌30分钟，并且然后在室温下搅拌过夜。通过添加h2o使反应终止，并且用乙酸乙酯萃取反应溶液。用mgso4干燥所述有机层，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受柱色谱法，以获得所希望的化合物(6)。

[实施例]

<实施例1>kch-1510n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5a)的制备

步骤1：2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)的制备

使用5-苯基-2h-四唑作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)的制备

将以上步骤1中获得的2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)(69mg，0.340mm)和草酰氯(1.5当量)(0.049ml，0.509mm)置于反应器中，并且用氩气置换所述反应器的内部，之后向所述反应器中引入二氯乙烷(1.5ml)。接着，将反应溶液加热至85℃的温度，并且然后搅拌5小时。反应完成后，将反应减压浓缩，并且不经单独的纯化程序而用于下一步反应。

步骤3：n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5a)的制备

将以上步骤2中获得的2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)置于反应器中，并且向其中添加二氯甲烷(1.7ml)，随后添加作为亲核试剂的4-溴-3-甲氧基苯胺(1当量)(68.6mg，0.340mm)。将反应溶液在室温下搅拌过夜。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，随后减压浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释并且用水洗涤，并且将有机层用mgso4干燥，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受用乙酸乙酯:己烷(1:2)的柱色谱法，以获得所希望的化合物(5a)(102mg，70％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ8.08(d,2h,j＝6.0hz),7.61-7.56(m,2h),7.48(d,1h,j＝5.0hz),7.30(d,1h,j＝5.0hz),7.16(dd,1h,j＝2.5hz,2.5hz),5.90(s,1h),3.80(s,2h),3.35(s,3h)；lc-ms[m+h]+432。

<实施例2>kch-1511n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5b)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5b)的制备

此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用4-苯氧基苯胺(1当量)(62.9mg，0.340mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5b)(91.5mg，65％)。

白色固体，rf0.25(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ9.94(s,1h),8.085(dd,1h,j＝1.5hz,9.9hz),7.55(m,6.0h),7.105(t,2h,j＝7.5hz),6.98(t,2h,j＝9.0hz),5.89(s,1h),4,03(q,2h,j＝6.5hz)；lc-ms[m+h]+415。

<实施例3>kch-1512n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5d)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用4-甲氧基苄胺(1当量)(46.5mg，0.340mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5b)(87mg，70％)。

白色固体，rf0.35(乙酸乙酯:正己烷＝1:1)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ8.07(dd,2h,j＝2.5hz,8.5hz),7.57(d,3h,j＝6.5hz),7.21(d,2h,j＝8.5hz),6.88(d,2h,j＝8.5hz),5.79(s,2h),4.28(d,2h,j＝6.15hz),3.72(s,3h)；lc-ms[m+h]+367。

<实施例4>kch-1513n-((2-(3a,7a-二氢-1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺)(5c)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用色胺(1当量)(54.4mg，0.340mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5c)(103mg，78％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝2:1)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.79(s,1h),8.07(dd,1h,j＝2.0hz,9.5hz),7.56(m,3h),7.31(d,1h,j＝8.0hz),7.14(s,1h),7.04(t,2h,j＝7.0hz),6.95(t,2h,j＝7.0hz),5.77(s,1h),4.03(q,2h,j＝7.5hz),3.45(q,2h,j＝7.0hz),2.87(t,2h,j＝7.5hz)；lc-ms[m+na]+414。

<实施例5>kch-1514n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5e)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用2,4-二甲氧基苯胺(1当量)(52.0mg，0.340mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5e)(103mg，79％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；¹h-nmr(dmso,500mhz)δ11.24(s,1h),10.15(s,1h),8.10(dd,1h,j＝2.0hz,9.5hz),7.99(d,1h,j＝9.0hz),7.59(d,3h,j＝7.5hz),6.63(d,2h,j＝2.75hz),6.51(dd,1h,j＝2.5hz,11.5hz),5.86(s,2h),3.78(s,3h),3.74(s,3h)；lc-ms[m+na]+405。

<实施例6>kch-1515n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5f)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用4-(苄氧基)苯胺(1当量)(116.0mg，0.492mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5f)(147mg，70％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ11.24(s,1h),9.80(s,1h),8.08(s,2h),7.58(s,3h),7.42-7.32(m,4h),6.97(s,2h),5.89(s,2h),5.07(s,2h)；lc-ms[m+h]+430。

<实施例7>kch-1516n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(5g)的制备

步骤1：此步骤以与实施例1的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用2-氟苯胺(1当量)(0.049mg，0.51mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5g)(121mg，70％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.18(s,1h),8.11-8.08(m,3h),7.60-7.56(m,3h),7.30-7.13(m,3h),5.90(s,2h)；lc-ms[m+h]+341。

<实施例8>kch-15172-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)乙酰胺(5i)的制备

步骤1：使用芝麻酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰胺(2i)(60mg，0.335mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰基异氰酸酯(3i)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)和3-氟吡啶-2-胺(1当量)(38.7mg，0.345mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5i)(90.8mg，79％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.34(s,1h),8.43(s,1h),7.215(d.1h,j＝8.5hz),6.890-6.790(m,3h),6.6395(s,1h),6.33(d,1h,j＝8.75),4.64(s,2h),4.30(dd,1h,j＝5.5hz)；lc-ms[m+na]+357。

<实施例9>kch-15182-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5j)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用4-溴-3-甲氧基苯胺(69.8mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5j)(96mg，66％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.69(s,1h),10.26(s,1h),7.49(d,1h,j＝8.5hz),7.31(s,1h),7.14(d,1h,j＝9.0hz),6.82(d,1h,j＝8.25hz),6.68(s,1h),6.38(d,1h,j＝8.75hz),5.97(s,2h),4.75(s,2h),3.83(s,3h)；lc-ms[m+na]+446。

<实施例10>kch-15192-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5k)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用4-苯氧基苯胺(64mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5k)(98mg，70％)。

灰色固体，rf0.4(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.63(s,1h),10.18(s,1h),7.53(d,2h,j＝8.5hz),7.37(t,2h,j＝8.5hz),7.158(t,4h,j＝7.0hz),6.82(d,1h,j＝8.5hz),6.68(s,1h),6.38(dd,1h,j＝2.5hz,11hz),5.97(s,2h),4.73(s,2h)；lc-ms[m+h]+408。

<实施例11>kch-15202-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)乙酰胺(5l)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用(4-甲氧基苯基)甲胺(47.4mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5l)(86.5mg，70％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ11.13(s,1h),10.23(s,1h),8.227(d,1h,j＝4.5hz),7.8(t,1h,j＝9.8hz),7.345-7.31(m,2h),6.82(d,1h,j＝8.0hz),6.69(s,1h),5.97(s,2h),4.77(s,2h),1.24(s,2h)；lc-ms[m+na]+382。

<实施例12>kch-1521n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰胺(5m)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用色胺(55.3mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5m)(92mg，70％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.81(s,1h),10.26(s,1h),7.56(d,1h,j＝7.5hz),7.33(d,1h,j＝8.0hz),7.15(s,1h),7.06(t,1h,j＝7.5hz),6.96(t,1h,j＝7.0hz),6.80(d,1h,j＝8.5hz),6.64(d,1h,j＝2.5hz),6.33(dd,1h,j＝2.5hz,11.0hz),5.96(s,2h),4.61(s,2h),3.46(q,2h,j＝7.4hz),2.88(t,2h,j＝7.0hz)。

<实施例13>kch-15222-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5n)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用2,4-二甲氧基苯胺(52.9mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5n)(90mg，70％)。

棕色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.66(s,1h),10.39(s,1h),7.99(d,1h,j＝8.8hz),6.83-6.80(m,1h),6.65(dd,2h,j＝2.5hz,17.2hz),6.50(dd,1h,j＝2.5hz,11.3hz),6.36(dd,1h,j＝2.5hz,11.0hz),5.97(d,2h,j＝5.3hz),4.70(s,2h),3.83(s,3h),3.74(s,3h)；lc-ms[m+h]+375。

<实施例14>kch-15232-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5o)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用4-(苄氧基)苯胺hcl(81.4mg，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂之外，从而获得所希望的化合物(5o)(60.9mg，42％)。

棕色固体，rf0.35(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.59(s,1h),10.04(s,1h),7.45-7.31(m,6h),6.98(d,2h,j＝9.3hz),6.82(d,1h,j＝8.3hz),6.68(d,1h,j＝2.5hz),6.37(dd,1h,j＝2.5hz,11.0hz),5.97(s,2h),5.08(s,2h),4.72(s,2h)；lc-ms[m+h]+421。

<实施例15>kch-15242-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5p)的制备

步骤1：此步骤以与实施例8的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例8的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例8的步骤3相同的方式进行，除了使用2-氟苯胺(0.033ml，0.345mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5p)(43.5mg，38％)。

白色固体，rf0.35(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.89(s,1h),10.48(s,1h),8.13(t,1h,j＝7.6hz),7.29(t,1h,j＝10.1hz),7.21-7.11(m,2h),6.82(d,1h,j＝8.5hz),6.69(d,1h,j＝6.3hz),6.38(dd,1h,j＝2.5hz,11.0hz),5.97(s,2h),4.74(s,2h)；lc-ms[m+h]+333。

<实施例16>kch-1525n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5q)的制备

步骤1：使用2-甲氧基苯酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(2q)(40mg，0.2207mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰基异氰酸酯(3q)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-酮)(3a)，并且使用3-氟吡啶-2-胺(1当量)(24.7mg，0.221mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5q)(17mg，24％)。

白色固体，rf0.4(乙酸乙酯:正己烷＝1:1)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ11.08(s,1h),10.22(s,1h),8.21(s,1h),7.79(t,1h,j＝9.5hz),7.33(m,2h),6.95(m,2h),4.83(s,2h),3.79(s,3h)；lc-ms[m+na]+343。

<实施例17>kch-1526n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5r)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用4-溴-3-甲氧基苯胺(44.6mg，0.221mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5r)(63mg，70％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.72(s,1h),10.31(s,1h),7.49(d,1h,j＝7.5hz),7.31(s,1h),7.16(d,1h,j＝9.0hz),7.01(d,1h,j＝7.5hz),6.96-6.85(m,3h),4.81(s,2h),3.82(s,3h),3.78(s,3h)；lc-ms[m+na]+431。

<实施例18>kch-15272-(2-甲氧基苯氧基)-n-((4-苯氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5s)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例15的步骤3相同的方式进行，除了使用4-苯氧基苯胺(51.1mg，0.276mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5s)(62mg，57％)。

黄色固体，rf0.32(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.58(s,1h),10.16(s,1h),7.54(d,2h,j＝10.0hz),7.37(t,2h,j＝8.0hz),7.12(t,2h,j＝7.5hz),7.02-6.86(m,7h),4.80(s,2h),3.80(s,3h)；lc-ms[m+h]+393。

<实施例19>kch-1528n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5t)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用(4-甲氧基苯基)甲胺(0.029ml，0.221mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5t)(31mg，41％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.25(s,1h),8.44(s,1h),7.22(d,3h,j＝7.5hz),7.01-6.84(m,5h),4.70(s,2h),4.30(s,3h),3.77(s,3h),3.73(s,3h)；lc-ms[m+h]+345。

<实施例20>kch-1529n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基氧基)乙酰胺(5u)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用色胺(53mg，0.331mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5u)(94.6mg，76％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.82(s,1h),10.20(s,1h),7.56(d,1h,j＝7.8hz),7.33(s,1h),7.16(s,1h),7.08-6.86(m,5h),4.68(s,2h),3.78(s,2h),3.46(q,2h,j＝7.5hz),3.32(s,3h),2.88(t,2h,j＝7.0hz)；lc-ms[m+h]+369。

<实施例21>kch-1530n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5v)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用2,4-二甲氧基苯胺(51mg，0.331mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5v)(83.4mg，70％)。

棕色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:5)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.61(s,1h),10.39(s,1h),7.99(d,1h,j＝8.8hz),7.02(d,1h,j＝8.0hz),6.97-6.86(m,4h),6.65(d,1h,j＝2.5hz),6.51(dd,1h,j＝2.5hz,11.4hz),4.77(s,2h),3.83(s,2h),3.80(s,3h),3.74(s,3h)；lc-ms[m+h]+361。

<实施例22>kch-1531n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5w)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用4-(苄氧基)苯胺(52mg，0.221mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5w)(56.5mg，63％)。

棕色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.58(s,1h),10.06(s,1h),7.53-6.88(m,13h),5.07(s,2h),4.78(s,2h),3.79(s,3h)；lc-ms[m+na]+430。

<实施例23>kch-1532n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-(2-甲氧基苯氧基)乙酰胺(5x)的制备

步骤1：此步骤以与实施例16的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例16的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例16的步骤3相同的方式进行，除了使用2-氟苯胺(0.033ml，0.331mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5x)(74mg，70％)。

白色固体，rf0.4(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.86(s,1h),10.48(s,1h),8.13(t,1h,j＝8.0hz),7.3(t,1h,j＝8.0hz),7.21-7.11(m,2h),7.03-6.86(m,4h),4.81(s,2h),3.80(s,3h)；lc-ms[m+h]+319。

<实施例24>kch-15332-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((3-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)乙酰胺(5y)的制备

步骤1：使用3,5-二(三氟甲基)苯酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用步骤1中获得的2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰胺(2y)(70mg，0.244mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰基异氰酸酯(3y)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)和使用3-氟吡啶-2-胺(1当量)(27mg，0.243mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5y)(72mg，70％)。

白色固体，rf0.4(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ11.23(s,1h),10.17(s,1h),8.24(s,1h),7.81-7.68(m,4h),7.34(s,1h),5.16(s,2h)；lc-ms[m+h]+427。

<实施例25>kch-15342-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5z)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用4-溴-3-甲氧基苯胺(52.5mg，0.259mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得希望的化合物(5z)(29mg，22％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.75(s,1h),10.15(s,1h),7.72(s,1h),7.68(s,1h),7.5(d,2h,j＝8.8hz),7.3(d,1h,j＝2.5hz),7.2(dd,1h,j＝2.3hz,11.0hz),3.82(s,2h),3.2(d,3h,j＝5.0hz)。

<实施例26>kch-15352-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5aa)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用4-苯氧基苯胺(45.0mg，0.243mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5aa)(98mg，81％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:5)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.71(s,1h),10.06(s,1h),7.7(d,3h,j＝22.5hz),7.54(s,2h),7.37(s,2h),7.11(s,1h),7.0(s,4h),5.11(s,2h)；lc-ms[m+na]+521。

<实施例27>kch-15362-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((4-甲氧基苄基)氨基甲酰基)乙酰胺(5ab)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：所述步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用(4-甲氧基苯基)甲胺(0.0318ml，0.243mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ab)(66.7mg，61％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.47(s,1h),8.40(s,1h),7.68-7.64(m,3h),7.22-7.16(m,2h),6.88-6.84(m,2h),5.00(s,2h),4.29(d,2h,j＝5.8hz),3.72(s,3h)；lc-ms[m+na]+473。

<实施例28>kch-1537n-((2-(1h-吲哚-3-基)乙基)氨基甲酰基)-2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰胺(5ac)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用色胺(33.5mg，0.209mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ac)(69mg，70％)。

白色固体，rf0.2(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.81(s,1h),10.40(s,1h),8.14(s,1h),7.68(d,2h,j＝5.5hz),7.56(d,1h,j＝8.0hz),7.33(d,1h,j＝8.3hz),7.15(d,1h,j＝2.5hz),7.05(t,1h,j＝7.5hz),6.96(t,1h,j＝7.5hz),4.98(s,2h),3.46(q,2h,j＝7.4hz),2.88(t,2h,j＝7.3hz)；lc-ms[m+h]+475。

<实施例29>kch-15382-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5ad)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用2,4-二甲氧基苯胺(40mg，0.261mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ad)(60mg，49％)。

棕色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.76(s,1h),8.0(d,1h,j＝8.7hz),7.7(d,1hj＝15.0hz),6.6(d,1h,j＝2.5hz),6.58(d,1h,j＝7.8hz),6.6(dd,1h,j＝2.5hz,11.0hz),6.5(d,1h,j＝2.5hz),3.74(s,3h),3.65(s,3h)；lc-ms[m+h]+467。

<实施例30>kch-1539n-((4-(苄氧基)苯基)氨基甲酰基)-2-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)乙酰胺(5ae)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用4-(苄氧基)苯胺hcl(61mg，0.260mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ae)(32mg，24％)。

棕色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.65(s,1h),9.93(s,1h),7.72(s,2h),7.68(s,1h),7.44-7.37(m,5h),7.33-7.30(m,2h),5.1(d,2h,j＝7.0hz),3.2(d,2h)；lc-ms[m+na]+536。

<实施例31>kch-15402-(3,5-二(三氟甲基)苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5af)的制备

步骤1：此步骤以与实施例24的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例24的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例24的步骤3相同的方式进行，除了使用2-氟苯胺(0.025ml，0.260mm)代替3-氟吡啶-2-胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5af)(84mg，76％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.96(s,1h),10.36(s,1h),8.20(t,1h,j＝9.8hz),7.73(s,2h),7.69(s,1h),7.33(t,1h,j＝9.8hz),7.2(t,1h,j＝7.6hz),7.15-7.11(m,1h),5.10(s,2h)；lc-ms[m+na]+447。

<实施例32>kch-1541n-((4-溴-3-甲氧基苯基)氨基甲酰基)-2-(3-溴苯氧基)乙酰胺(5ag)的制备

步骤1：使用3-溴苯酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用步骤1中获得的2-(3-溴苯氧基)乙酰胺(2ag)(36mg，0.158mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(3-溴苯氧基)乙酰基异氰酸酯(3ag)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)，并且使用4-溴-3-甲氧基苯胺(1当量)(27mg，0.243mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ag)(84mg，76％)。

白色固体，rf0.4(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.73(s,1h),10.34(s,1h),7.98(d,1h,j＝9.3hz),7.29-7.16(m,3h),6.98(dd,1h,j＝1.5hz,10.0hz),6.64(d,1h,j＝3.0hz),6.50(dd,1h,j＝2.3hz,11.0hz),4.83(s,2h),3.82(s,3h)。

<实施例33>kch-15422-(3-溴苯氧基)-n-((2,4-二甲氧基苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5ah)的制备

步骤1：此步骤以与实施例32的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例32的步骤2相同的方式进行。

步骤3：此步骤以与实施例32的步骤3相同的方式进行，除了使用2,4-二甲氧基苯胺(1当量)(0.025ml，0.260mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ah)(52mg，49％)。

黄色固体，rf0.25(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.19(s,1h),7.5(d,2h,j＝8.5hz),7.30-7.17(m,4h),7.0(dd,1h,j＝2.3hz,10.5hz),5.75(s,2h),3.81(s,3h)；lc-ms[m+h]+409。

<实施例34>kch-14202-(2,3-二甲基苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5aj)的制备

步骤1：2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰胺的制备

使用2,3-二甲基苯酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰基异氰酸酯的制备

此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用步骤1中获得的2-(3,5-二甲基苯氧基)乙酰胺(2aj)(50mg，0.279mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：2-(2,3-二甲基苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺的制备

此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(2,3-二甲基苯氧基)乙酰基异氰酸酯(3aj)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)，并且使用2-氟苯胺(1当量)(0.0224ml，0.233mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5aj)(44.2mg，50％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:4)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.95(s,1h),10.49(s,1h),8.12(t,1h,j＝9.7hz),7.30(m,1h),7.20(t,1h,j＝7.0hz),7.13(m,1h),7.03(t,1h,j＝8.0hz),6.80(d,1h,j＝7.7hz,6.68(d,1h,j＝8.3hz),4.82(s,2h),2.23(s,3h),2.14(s,3h)。

<实施例35>kch-14212-(4-(苄氧基)苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺(5ak)的制备

步骤1：2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙酰胺的制备

使用4-(苄氧基)苯酚作为亲核试剂进行制备实施例1的步骤1中描述的方法。

步骤2：2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙酰基异氰酸酯的制备

此步骤以与实施例1的步骤2相同的方式进行，除了使用步骤1中获得的2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙酰胺(2ak)(50mg，0.194mm)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰胺(2a)。

步骤3：2-(4-(苄氧基)苯氧基)-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺的制备

此步骤以与实施例1的步骤3相同的方式进行，除了使用步骤2中获得的2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙酰基异氰酸酯(3ak)代替2-(5-苯基-2h-四唑-2-基)乙酰基异氰酸酯(3a)，并且2-氟苯胺(1当量)(0.0156ml，0.162mm)代替4-溴-3-甲氧基苯胺作为亲核试剂，从而获得所希望的化合物(5ak)(27.6mg，36％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:3)；1h-nmr(dmso,500mhz)δ10.92(s,1h),10.50(s,1h),8.13(t,1h,j＝8.3hz),7.43(d,2h),7.38(t,2h,j＝7.3hz),7.33-7.28(m,2h),7.20(t,1h,j＝7.3hz),7.13(m,1h),6.96-6.94(m,2h),6.91-6.89(m,2h),5.04(s,2h),4.75(s,2h)。

<实施例36>kch-14244-(2-(3-(2-氟苯基)脲基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5am)的制备

步骤1：此步骤以与实施例33的步骤1相同的方式进行。

步骤2：此步骤以与实施例33的步骤2相同的方式进行。

步骤3：4-(2-(3-(2-氟苯基)脲基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备

将哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1当量)(162mg，0.867mm)添加到步骤2中获得的化合物(2-氯-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺)(1当量)(200mg，0.867mm)中，并且然后将反应器设定为在80℃下，之后添加甲醇(6ml)并且将溶液搅拌4小时。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，并且用乙酸乙酯萃取反应溶液。用mgso4干燥所述有机层，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受用乙酸乙酯:己烷(1:1)进行的柱色谱法，以获得所希望的化合物4-(2-(3-(2-氟苯基)脲基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(122mg，37％)。

黄色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(cdcl3,500mhz)δ10.57(s,1h),9.26(s,1h),8.19(t,1h,j＝7.5hz),7.15-7.05(m,3h),3.53(s,4h),3.23(s,2h),2.58(s,4h),1.48(s,6h)。

<实施例37>kch-1425n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-吗啉基乙酰胺(5am)的制备

步骤1：进行制备实施例2的步骤1中描述的方法。

步骤2：使用2-氟苯胺作为亲核试剂进行制备实施例2的步骤2中描述的方法。

步骤3：向步骤2中获得的化合物(2-氯-n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)乙酰胺)(1当量)(191mg，0.830mm)中添加甲醇(4ml)，并且然后将反应器设定为在80℃下，之后添加吗啉(3当量)(217mg，2.49mm)并且将溶液搅拌30分钟。将反应溶液在室温下搅拌过夜。通过向反应溶液中添加h2o使反应终止，并且用乙酸乙酯萃取反应溶液。用mgso4干燥所述有机层，过滤，并且然后减压浓缩。使浓缩的化合物经受用乙酸乙酯:己烷(1:2)进行柱色谱法，以获得所希望的化合物n-((2-氟苯基)氨基甲酰基)-2-吗啉基乙酰胺(124mg，53％)。

白色固体，rf0.3(乙酸乙酯:正己烷＝1:2)；1h-nmr(cdcl3,500mhz)δ10.59(s,1h),9.25(s,1h),8.20(t,1h,j＝7.6hz),7.16-7.05(m,3h),3.79(t,4h,j＝4.5hz),3.20(s,2h),2.62(t,4h,j＝4.8hz)。

<实施例38>踝蛋白拮抗剂候选物的筛选

血小板与血液中存在的纤维蛋白原结合并且产生血栓。这种结合由存在于血小板细胞膜中的整联蛋白αiibβ3介导，并且此整联蛋白在被踝蛋白激活后与纤维蛋白原结合。为了通过将此程序简化为基于细胞系的实验来实现高通量功效测试，首先使用慢病毒使整联蛋白αiibβ3在cho细胞系中稳定表达，从而构建cho/αiibβ3细胞系。将构建的细胞系在涂覆有纤维蛋白原的96孔板中培养1小时并且洗涤，之后测量保留的细胞的量以评估踝蛋白拮抗剂候选物的功效。在此程序中，为了测量由于与纤维蛋白原结合而保留在孔中的cho/αiibβ3细胞系的相对量，使用细胞计数试剂盒-8(cck-8)测量在保留的细胞中存在的脱氢酶的活性。当由于这些细胞的存在而出现脱氢酶的活性时，cck-8的颜色从黄色变为橙色(图1)。为了测量颜色变成橙色的程度，用酶标仪测量在450nm的波长处的吸光度。这实现了简单、快速并且可靠的高通量筛选。

为了筛选踝蛋白拮抗剂候选物，通过上述功效测试方法检查cho/αiibβ3细胞系与纤维蛋白原之间的结合亲和力的抑制。

结果显示，与阴性对照相比，包括kch-1420、kch-1424、kch-1510、kch-1511、kch-1512、kch-1513、kch-1516、kch-1518、kch-1521、kch-1523、kch-1526、kch-1529、kch-1530、和kch-1542的化合物将cho/αiibβ3细胞系与纤维蛋白原之间的结合抑制至少80％(图2)。图3示出了kch-1513和kch-1521对cho/αiibβ3细胞系与纤维蛋白原之间的结合的抑制的浓度依赖性作用。在图3中，如图2，将表达血小板整联蛋白αiibβ3的细胞与不同浓度的候选物一起孵育，并且检查细胞与纤维蛋白原之间的结合。y轴上的细胞粘附是细胞-纤维蛋白原结合的相对程度。kch-1513和kch-1521显示出在0.02mm至0.07mm的浓度范围内至少50％的抑制作用。

<实施例39>踝蛋白与踝蛋白拮抗剂候选物之间的结合亲和力的测量

为了测量踝蛋白与踝蛋白拮抗剂候选物之间的结合亲和力，使用表面等离子体共振光谱法。具体地，将踝蛋白拮抗剂候选物添加到固定在传感器芯片上的踝蛋白上，并且通过表面等离子体共振(下文称为‘spr’)光谱法测量这两种物质之间的亲和力常数。

踝蛋白分为n末端头部结构域和c末端杆结构域，并且头部结构域进一步分为四个子结构域f0、f1、f2和f3。其中，f3被称为整联蛋白结合位点。因此，分离并且纯化含有f3的6xhis标记的f2f3蛋白。作为用于固定踝蛋白的传感器芯片，使用htepbe10po1(biorad)。使用proteon^tmxpr36(biorad)测量spr。

结果，如图4所示，测得化合物kch-1513和kch-1521分别具有9.33×10^-3m和2.71×10^-4m的亲和力常数，并且显示，踝蛋白拮抗剂候选物确实以浓度依赖性的方式与踝蛋白结合。

<实施例40>使用小鼠血小板评价血小板聚集抑制作用

为了检查化合物kch-1513或kch-1521是否确实抑制了血小板聚集，进行此测试。众所周知，血小板与血液中的纤维蛋白原结合并且形成血栓，由于在激活的整联蛋白αiibβ3与纤维蛋白原之间结合后的信号传导，这导致细胞内骨骼肌的收缩。为了在体外实现这种血栓形成，分离小鼠血小板并且向其中添加被称为血小板活化剂的凝血酶。结果，如图5的左侧照片所示，血小板发生聚集。然而，当用凝血酶与kch-1513或kch-1521组合处理血小板时，观察到当添加了0.2mmkch-1513(中间照片)或相同浓度的kch-1521(右边照片)时，由凝血酶增加导致的血小板聚集减少。这表明本发明的kch-1513和kch-1521化合物显著抑制血小板聚集，如图5所示。

<实施例41>使用人外周血的血小板聚集抑制活性的比较

用trap(32μm)、adp(6.5μm)和花生四烯酸(aa；0.5mm)(它们是血小板聚集激动剂)与不同浓度(0μm、10μm和30μm)的各种化合物(kch-1513和kch-1521)组合处理从人外周血中分离的血小板，并且比较对血小板聚集的抑制(图6)。结果，可以看出，kch-1513和kch-1521具有与阳性对照相似的血小板聚集抑制活性。

<实施例42>使用人外周血的血小板聚集抑制活性的比较

用adp(6.5μm)、trap(32μm)和花生四烯酸(aa；0.5mm)(它们是血小板聚集激动剂)与kch-1526组合处理从已给予常规血小板抑制剂(环加氧酶抑制剂和adp受体阻滞剂)的人外周血中分离的血小板，并且比较对血小板聚集的抑制(图8)。结果，可以看出，在用血小板聚集激动剂(adp、trap和花生四烯酸)处理的血小板中，用代表性新型化合物kch-1526处理显示出与常规血小板抑制剂(环加氧酶抑制剂和adp受体阻滞剂)的那些相比相似或更好的血小板聚集抑制活性。

[制剂实施例]

在下文中，将说明可以制备为本发明的药物组合物的制剂。

<制剂实施例1>用于口服或肠胃外给予的药物制剂的制备

1.粉剂制剂的制备

n-酰基脲衍生物：2g；

乳糖：1g

将以上组分彼此混合并且填充到气密袋中，从而制备粉剂制剂。

2.片剂制剂的制备

n-酰基脲衍生物：100mg；

玉米淀粉：100mg；

乳糖：100mg；

硬脂酸镁：2mg。

将以上组分彼此混合并且根据常规片剂制备方法压制成片剂，从而制备片剂制剂。

3.胶囊制剂的制备

n-酰基脲衍生物：100mg；

玉米淀粉：100mg；

乳糖：100mg；

硬脂酸镁：2mg。

将以上组分彼此混合并且根据常规胶囊制备方法填充到明胶胶囊中，从而制备胶囊制剂。

4.可注射制剂的制备

n-酰基脲：10μg/ml；

稀盐酸bp：至ph3.5；

注射用氯化钠bp：至1ml。

将2-乙氧基丙酸衍生物溶于适当体积的注射用氯化钠bp中，用稀盐酸bp将所得溶液的ph调节至ph3.5，并且然后用注射用氯化钠bp将溶液定容并且充分混合。将溶液填充到5mli型透明玻璃安瓿中，然后通过玻璃熔融密封在空气顶部空间下，并且然后通过在120℃下高压灭菌不小于15分钟来灭菌，从而制备可注射的液体制剂。

工业实用性

根据本发明的n-酰基脲衍生物可通过抑制细胞内基质中的踝蛋白的活性来抑制血小板聚集，并且因此可用于预防或治疗心血管疾病。

尽管已经参考具体特征详细描述了本发明，但是对于本领域技术人员来说清楚的是，此描述仅用于优选实施方案并且不限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将由所附权利要求及其等同物限定。