BMX剪切体及其在肺癌耐药性中的应用的制作方法

文档序号:12814566阅读:238来源:国知局

本发明涉及生物技术领域,尤其涉及bmx剪切体及其在肺癌耐药性中的应用。



背景技术:

肺癌发生于支气管黏膜上皮。近年来,肺癌的发病率在全球均呈显著上升趋势,在欧美工业发达国家和我国的一些工业大城市中,肺癌发病率在男性恶性肿瘤中已居首位,在女性发病率也迅速增高,占女性常见恶性肿瘤的第2位或第3位。肺癌成为危害生命健康的一种主要疾病。临床上,第三代基于铂的联合疗法治疗非小细胞肺癌虽具有一些优势,但是结合几种细胞毒类药物的治疗方式并没有取得比铂双试剂治疗更好的效果,表明这种治疗方法已经达到了瓶颈。随着对肺癌生物学的深入研究以及对肺癌发病分子机制的进一步了解,根据不同患者个体肿瘤中存在的关键致病基因进行针对性的分子靶向治疗。比较成功的例子即针对表皮生长因子受体(egfr)激活型突变(比如l858r点突变、19号外显子缺失突变)所设计的靶向egfr激酶域的小分子抑制剂,包括吉非替尼(gefitinib,iressa)和厄洛替尼(erlotinib,tarceva)。临床上这些小分子抑制剂对具有上述egfr激酶域突变的肺癌患者疗效显著,然而一些耐药突变(比如egfr激酶域t790m点突变等)的出现却极大削弱了靶向药物的治疗效果,且目前并没有很好的解决策略。

因此,深入研究肺癌的耐药机制,制定肺癌耐药性防治的有效策略迫在眉睫。基于上述陈述,本发明提出了bmx剪切体及其在肺癌耐药性中的应用。



技术实现要素:

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的bmx剪切体及其在肺癌耐药性中的应用。

bmx剪切体位于染色体xp25.5的dxs203与dxs212两位点之间,是由前380个氨基酸组成,具有seqidno1-15、39-54、72-83、102-137所示的氨基酸序列;所述bmx剪切体不包含蛋白缺失野生型bmx的n端。

优选的,所述bmx剪切体由包含seqno.1所包含的核苷酸序列或其互补序列的多核苷酸编码。

优选的,所述bmx剪切体的cdna引物包括5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段。

一种bmx剪切体的制备方法,包括以下步骤:准备防爆玻璃反应器,从反应器的下方通入氮气,通入反应器的氮气从反应器的上方排出,按权利要求1中所述的氨基酸序列将氨基酸加入反应器中,加入权利要求2中的多核苷酸,利用氮气鼓泡的方式对反应物进行搅拌,从而制得bmx剪切体。

优选的,所述bmx剪切体可用于制备检测肺癌耐药性机制的试剂。

优选的,所述检测肺癌耐药性机制试剂的筛选方法,包括以下步骤:

步骤s1、在酪氨酸激酶的催化作用下,将bmx剪切体进行分解,将所得的分解产物分别注射于小鼠腹腔内,并向小鼠腹腔内注射肺癌感染病毒;

步骤s2、观察注射bmx剪切体分解产物后的小鼠,并对小鼠体内的氨基酸n端片段、中间片段及c端片段的表达抑制结果进行检测,从而获得bmx剪切体具有肺癌耐药性机制检测活性的关键位点;

步骤s3、将获得的具有肺癌耐药性机制检测活性的关键位点利用现有的医学技术,制备检测肺癌耐药性机制试剂。

本发明提出的bmx剪切体可作为肺癌细胞对抗癌药物耐药性形成和程度的相关因子,能够有效的检测肺癌耐药性机制,本发明提出的bmx剪切体,其制备方法简单,制备条件温和,制备所需成本低,制备的bmx剪切体用于制备检测肺癌耐药性机制的试剂,其筛选方法简单,值得推广。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。

实施例

本发明提出的bmx剪切体,位于染色体xp25.5的dxs203与dxs212两位点之间,是由前380个氨基酸组成,具有seqidno1-15、39-54、72-83、102-137所示的氨基酸序列;所述bmx剪切体不包含蛋白缺失野生型bmx的n端;其中bmx剪切体由包含seqno.1所包含的核苷酸序列或其互补序列的多核苷酸编码。

bmx剪切体的cdna引物包括5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段,其扩增条件为:以bmx剪切体的cdna为模板,以蛋白缺失野生型bmx的n端为参照,以引物5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段,在反应体系为15ul,反应条件为:88℃5min;88℃30sec,59℃30sec,65℃30sec,32个循环;65℃5min,进行扩增。

一种bmx剪切体的制备方法,包括以下步骤:准备防爆玻璃反应器,从反应器的下方通入氮气,通入反应器的氮气从反应器的上方排出,按权利要求1中所述的氨基酸序列将氨基酸加入反应器中,加入权利要求2中的多核苷酸,利用氮气鼓泡的方式对反应物进行搅拌,从而制得bmx剪切体。

bmx剪切体可用于制备检测肺癌耐药性机制的试剂,其中检测肺癌耐药性机制试剂的筛选方法,包括以下步骤:

步骤s1、在酪氨酸激酶的催化作用下,将bmx剪切体进行分解,将所得的分解产物分别注射于小鼠腹腔内,并向小鼠腹腔内注射肺癌感染病毒;

步骤s2、观察注射bmx剪切体分解产物后的小鼠,并对小鼠体内的氨基酸n端片段、中间片段及c端片段的表达抑制结果进行检测,从而获得bmx剪切体具有肺癌耐药性机制检测活性的关键位点;

步骤s3、将获得的具有肺癌耐药性机制检测活性的关键位点利用现有的医学技术,制备检测肺癌耐药性机制试剂。

以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。



技术特征:

技术总结
本发明公开了BMX剪切体,所述BMX剪切体位于染色体Xp25.5的DXS203与DXS212两位点之间,是由前380个氨基酸组成,具有SEQ ID NO 1‑15、39‑54、72‑83、102‑137所示的氨基酸序列;所述BMX剪切体不包含蛋白缺失野生型BMX的N端。本发明提出的BMX剪切体可作为肺癌细胞对抗癌药物耐药性形成和程度的相关因子,能够有效的检测肺癌耐药性机制,本发明提出的BMX剪切体,其制备方法简单,制备条件温和,制备所需成本低,制备的BMX剪切体用于制备检测肺癌耐药性机制的试剂,其筛选方法简单,值得推广。

技术研发人员:奉水东;凌宏艳;刘艳
受保护的技术使用者:南华大学
技术研发日:2017.04.11
技术公布日:2017.07.07
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