本发明涉及医药
技术领域：
，特别是制备抗肿瘤药物
技术领域：
，具体涉及4-烷氨基--喹唑啉类衍生物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
pi3k(phosphatidylinositol3-kinases，磷脂酰肌醇3-激酶)为类脂激酶，pi3k磷可以磷酸化磷脂酰肌醇pi(一种膜磷脂)的3位碳原子。pi的肌醇环上有5个可被磷酸化的位点，多种激酶可磷酸化pi肌醇环上的第4和第5位点，因而通常在这两位点之一或两位点发生磷酸化修饰，尤其发生在质膜内侧。通常，pi-4,5-二磷酸(pip2)在磷脂酶c的作用下，产生二酰甘油(dag)和肌醇-1,4,5-三磷酸。pi3k转移一个磷酸基团至位点3，形成的产物对细胞的功能具有重要的影响。譬如，单磷酸化的pi-3-磷酸，能刺激细胞迁移(celltrafficking)，而未磷酸化的则不能。pi-3,4-二磷酸则可促进细胞的增殖(生长)和增强对凋亡的抗性，而其前体分子pi-4-磷酸则不然。通过催化磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(pip2)磷酸化为磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(pip3)，继而激活下游的蛋白激酶b(akt)，激活后的akt将信号传递给数种下游底物，从而控制诸如转录、翻译、细胞周期、凋亡等生物学效应。pi3k根据结构和磷酸化底物的不同分为i、ii、iii三种类型。人们通常把i型pi3k称为pi3k。i型pi3k根据它们的催化亚单位等的不同又分为pi3kα、pi3kβ、pi3kδ和pi3kγ四种亚型。近期的综合性肿瘤基因组分析结果表明，在肿瘤中pi3k通路中许多成员发生突变，表明该通路在肿瘤发生的重要性不言而喻，现已证实磷脂酰肌醇3-激酶(pi3ks)是潜力巨大的药物治疗靶点，特别是pi3kα现己成为抗肿瘤治疗的重要靶点之一。pi3k通路为肿瘤治疗提供了很大机遇，也面临着巨大挑战。目前，各大制药公司与生物技术公司正展开一场针对pi3k抑制剂的竞赛。很多pi3k抑制剂由于毒副作用大、引起肿瘤耐药而不能成为药物，因此研发新型毒副作用小，效果好的抗肿瘤药物非常关键和必要。技术实现要素：本发明的目的是提供4-烷氨基-喹唑啉类衍生物及其制备方法及用途。该类化合物有较好的抗肿瘤活性，可以作为新型抗肿瘤药物，用于预防或者治疗肿瘤及其肿瘤并发症。本发明提供4-烷氨基-喹唑啉类衍生物及其盐，其结构通式如式(i)所示：其中，r1为h，c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素；r2为c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，取代或未取代的6-10元芳基或5-10元杂环基，所述的杂环基含有1-3个n，o或s的杂原子；所述取代基为：c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，卤素；r3为h、c1-c6烷基，c1-c6烷氧基，c1-c6烷基氨基，5-10元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基含有1-3个n、o或s的杂原子；n取值为1-3。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷氧基，卤素；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的苯基；所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，卤素；r3为h、c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，c1-c4烷基氨基，5-6元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基含有1-3个n、o或s的杂原子；n取值为1-3。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h，c1-c4烷氧基，氟，氯，溴；r2为c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，取代或未取代的苯基；所述取代基为：c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，氟，氯，溴；r3为h、c1-c4烷基，c1-c4烷氧基，c1-c4烷基氨基，5-6元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基含有1-3个n、o或s的杂原子；n取值为1-3。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为h、甲氧基、乙氧基、氯、氟、溴；r2为甲基、丁基、未取代或卤素取代的苯基；r3为氢、吗啉基、哌嗪基、二甲基胺基、二乙基胺基；n取值为2或3。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：其中，r1为甲氧基、氯；r2为正丁基、氟取代苯基；r3为吗啉基、二甲基胺基；n取值为2或3。本发明优选式i所述的衍生物及其盐：本发明提供了4-烷氨基-喹唑啉类衍生物，同时提供了该衍生物的制备方法，该方法合成步骤简便且易于操作。该类化合物具有较好的抗肿瘤活性，在制备抗肿瘤药物领域，具有重要的实用价值和应用前景。本发明提供的制备式i所述化合物的方法，包括如下步骤：1)使式ii化合物与不同的胺类发生缩合反应，得到式iii所示化合物；2)使式iii所示化合物与式iv偶联，得到式i所示化合物；r1、r2、r3、n如权利要求书所述。具体实施方式下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均为市售。实施例1n-(5-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲磺酰胺(化合物1)步骤1)4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉的合成于50ml圆底烧瓶中，加入二甲基胺基乙二胺0.13g(1.5mmol)，4-氯-6-溴喹唑啉0.24g(1mmol)，异丙醇20ml，50℃搅拌1小时，回收异丙醇，硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇(v:v20:1))，得4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉0.27g，收率92.0％。结构确证数据如下：mp132-134℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ8.56(d,j＝2.1hz,1h,ar-h),8.48(s,1h,ar-h),8.34(t,j＝5.3hz,1h,nh),7.88(dd,j＝8.8,2.2hz,1h,ar-h),7.62(d,j＝8.8hz,1h,ar-h),3.63(dd,j＝12.3,6.6hz,2h,ch2),2.52(t,j＝6.6hz,2h,ch2),2.20(s,6h,ch3).esi-ms:m/z295.2[m+h]+.步骤2)n-(5-(4-(3-氯-4-氟苯基氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)甲磺酰胺的合成于100ml圆底烧瓶中，加入4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)0.29g(1mmol)，n-(2-甲氧基-5-(4,4,5,5-4甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡啶-3-基)甲磺酰胺0.43g(1mmol)，双三苯基磷二氯化钯0.035g(0.5mmol)，10mldmf，n2保护下，90℃搅拌4小时，之后将dmf浓缩，采用硅胶柱色谱分离，流动相采用二氯甲烷和甲醇系统柱层析，得到目标化合物0.30g，收率58.3％。结构确证数据如下：mp256-258℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ9.26(s,1h,nh),8.92(s,1h,ar-h),8.61(s,1h,ar-h),8.51(s,1h,ar-h),8.26(s,1h,nh),8.08(s,2h,ar-h),7.79(s,1h,ar-h),3.99(s,3h,och3),3.92(brs,2h,ch2),3.31(brs,2h,ch2),3.17(s,3h,ch3),2.76(s,6h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.6,160.0,157.1,155.4,148.9,141.8,134.2,131.8,131.5,129.3,128.6,121.8,121.3,115.9,56.1,54.3,43.2,41.6,36.6.hrms:m/z417.1716[m+h]+.实施例2n-(5-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)正丁基磺酰胺(化合物2)合成方法同化合物1结构确证数据如下：67.4％yield.mp108-110℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ8.57(d,j＝1.5hz,1h,ar-h),8.50(d,j＝2.3hz,2h,ar-h),8.48(s,1h,nh),8.07(dd,j＝8.7,1.8hz,1h,ar-h),8.05(d,j＝2.3hz,1h,ar-h),7.77(d,j＝8.6hz,1h,ar-h),3.99(s,3h,och3),3.78-3.70(m,2h,ch2),3.18-3.10(m,2h,ch2),2.73(brs,2h,ch2),2.36(brs,6h,ch3),1.74(dt,j＝15.3,7.7hz,2h,ch2),1.40(dq,j＝14.7,7.4hz,2h,ch2),0.89(t,j＝7.4hz,3h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ172.0,159.4,156.6,155.1,148.4,141.30,133.6,132.2,130.8,128.9,128.2,121.1,120.0,115.2,57.2,53.7,52.0,44.7,25.1,21.0,20.7,13.4.hrms:m/z459.2147[m+h]+.实施例3n-(5-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(4-氟苯基)磺酰胺(化合物3)合成方法同化合物1结构确证数据如下：56.9％yield.mp215-218℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ10.05(s,1h,nh),8.53(d,j＝1.6hz,1h,ar-h),8.48(s,1h,ar-h),8.43(t,j＝5.2hz,1h,nh),8.40(d,j＝2.3hz,1h,ar-h),8.04(d,j＝2.4hz,1h,ar-h),8.02(dd,j＝8.6,1.8hz,1h,ar-h),7.83–7.78(m,2h,ar-h),7.76(d,j＝8.6hz,1h,ar-h),7.40(t,j＝8.8hz,2h,ar-h),3.71(dd,j＝12.2,6.4hz,2h,ch2),3.64(s,3h,och3),2.66(t,j＝6.7hz,2h,ch2),2.31(s,6h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.1(d,j＝249.3hz),159.4,156.9,155.1,148.4,141.4,137.2,133.6,132.2,130.6,129.58(d,j＝9.5hz),128.7,128.2,121.4,120.0,115.9(d,j＝22.5hz),115.2,57.4,53.2,45.0,38.2.hrms:m/z497.1738[m+h]+.实施例4n-(5-(4-((2-(二甲基胺基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(2,4-二氟苯基)甲磺酰胺(化合物4)合成方法同化合物1结构确证数据如下：64.3％yield.mp197-199℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ8.57–8.43(m,3h,ar-handnh),8.35(d,j＝1.7hz,1h,ar-h),7.99(t,j＝16.3hz,2h,ar-h),7.77(dd,j＝15.1,8.4hz,2h,ar-h),7.51(dd,j＝13.8,5.2hz,1h,ar-h),7.18(dd,j＝11.7,4.9hz,1h,ar-h),3.76(d,j＝5.0hz,2h,ch2),3.66(s,3h,ch3),2.81(t,j＝6.1hz,2h,ch2),2.42(s,6h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.5(dd,j＝11.4,251.1hz),162.2,159.4,159.3(dd,j＝13.2,255.2hz),157.6,155.0,148.3,140.4,133.8,132.5,131.6(d,j＝10.4hz),130.6,128.7,128.2,126.4(dd,j＝3.6,14.9hz),122.5,119.8,115.2,111.3(dd,j＝2.7,21.5hz),105.5(t,j＝26.0hz),57.1,53.1,44.5,37.8.hrms:m/z515.1632[m+h]+.实施例5n-(5-(4-((3-(二甲基胺基)丙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)正丁基磺酰胺(化合物5)合成方法同化合物1结构确证数据如下：58.6％yield.mp45-47℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ8.66(brs,1h,nh),8.59(s,1h,ar-h),8.51(d,j＝2.1hz,1h,ar-h),8.49(s,1h,ar-h),8.08(dd,j＝8.6,1.3hz,1h,ar-h),8.06(d,j＝2.1hz,1h,ar-h),7.77(d,j＝8.6hz,1h,ar-h),3.99(s,3h,och3),3.63(dd,j＝11.8,6.2hz,2h,ch2),3.19–3.11(m,2h,ch2),2.92–2.88(m,2h,ch2),2.58(s,6h,ch3),2.02–1.94(m,2h,ch2),1.74(dt,j＝15.3,7.7hz,2h,ch2),1.46–1.34(m,2hch2),0.89(t,j＝7.4hz,3h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ162.2,159.4,156.6,155.1,148.4,141.3,132.1,130.8,128.9,128.2,121.1,120.1,115.2,55.3,53.7,52.0,43.1,37.9,25.1,21.0,20.7,13.5.hrms:m/z473.2307[m+h]+.实施例6n-(5-(4-((3-(二甲基胺基)丙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(2,4-二氟苯基)磺酰胺(化合物6)合成方法同化合物1结构确证数据如下：56.9％yield.mp48-50℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ8.61(s,1h,nh),8.54(d,j＝1.8hz,1h,ar-h),8.48(d,j＝4.6hz,1h,ar-h),8.38(d,j＝2.3hz,1h,ar-h),8.02(dd,j＝8.0,2.1hz,2h,ar-h),7.80–7.73(m,2h,ar-h),7.55–7.49(m,1h,ar-h),7.18(td,j＝8.5,2.4hz,1h,ar-h),3.66(s,3h,och3),3.63(dd,j＝12.0,6.6hz,2h,ch2),2.92–2.85(m,2h,ch2),2.57(s,6h,ch3),2.02–1.95(m,2h,ch2).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.5(dd,j＝11.7,251.4hz),159.4,159.3,(dd,j＝13.2,255.3hz),157.6,155.0,148.3,140.7,133.8,132.8(d,j＝1.7hz),131.6(d,j＝10.8hz),130.6,128.7,128.2,126.2(dd,j＝1.7,14.0hz),122.2,120.0,111.4(dd,j＝3.2,21.8hz),105.5(t,j＝26.0hz),55.3,53.1,43.1,38.0,24.7.hrms:m/z529.1734[m+h]+.实施例7n-(5-(4-((2-(吗啉基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)正丁基磺酰胺(化合物7)合成方法同化合物1结构确证数据如下：58.1％yield.mp113-116℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ9.46(s,1h),8.54(d,j＝1.2hz,1h),8.49(d,j＝2.2hz,1h),8.48(s,1h),8.44(t,j＝5.1hz,1h),8.07(dd,j＝9.4,1.8hz,2h),7.77(d,j＝8.6hz,1h),4.00(d,j＝6.5hz,3h),3.72(dd,j＝12.4,6.4hz,2h),3.66–3.52(m,4h),3.19–3.09(m,2h),2.64(t,j＝6.8hz,2h),2.50(d,j＝9.7hz,4h),1.75(dt,j＝15.3,7.7hz,2h),1.46–1.35(m,2h),0.89(t,j＝7.4hz,3h).13cnmr(150mhz,dmso)δ159.4,156.6,155.2,148.4,141.3,133.6,132.2,130.7,128.9,128.2,121.1,119.9,115.1,66.0,56.8,53.7,53.3,52.0,39.7,25.1,20.7,13.4.hrms:m/z501.2233[m+h]+.实施例8n-(5-(4-((2-(吗啉基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(2,4-二氟苯基)磺酰胺(化合物8)合成方法同化合物1结构确证数据如下：59.4％yield.mp234-236℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ10.40(s,1h,nh),8.55(d,j＝1.6hz,1h,ar-h),8.49(d,j＝2.4hz,2h,ar-h),8.44(t,j＝5.2hz,1h,nh),8.21–8.02(m,2h,ar-h),7.75(dd,j＝13.0,8.6hz,2h,ar-h),7.68–7.54(m,1h,ar-h),7.21(td,j＝8.5,2.2hz,1h,ar-h),3.73(dd,j＝12.5,6.5hz,2h,ch2),3.64(s,3h,och3),3.60(t,j＝4.4hz,4h,ch2),2.64(t,j＝6.9hz,2h,ch2),2.52–2.51(m,4h,ch2).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.9(dd,j＝11.6,252.3hz),159.4,159.3(dd,j＝13.4,256.1hz),157.8,155.2,148.4,142.5,134.7,133.3,131.7(d,j＝10.7hz),130.5,128.8,128.2,125.2(dd,j＝3.5,14.6hz),120.0,119.8,115.2,111.6(dd,j＝3.2,22.1hz),105.6(t,j＝26.0hz),66.0,56.9,53.3,48.5,37.7.hrms:m/z557.1753[m+h]+.实施例9n-(5-(4-((3-(吗啉基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)正丁基磺酰胺(化合物9)合成方法同化合物1结构确证数据如下：67.5％yield.mp140-142℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ9.47(s,1h,nh),8.56(s,1h,ar-h),8.49(d,j＝2.2hz,1h,ar-h),8.47(d,j＝4.4hz,1h,ar-h),8.07(d,j＝1.7hz,1h,ar-h),8.05(d,j＝1.9hz,1h,ar-h),7.76(d,j＝8.6hz,1h,ar-h),3.99(s,3h,och3),3.67–3.55(m,6h,ch2),3.16–3.09(m,2h,ch2),2.41(d,j＝7.3hz,6h,ch2),1.85(dt,j＝14.3,7.1hz,2h,ch2),1.79–1.69(m,2h,ch2),1.40(dq,j＝14.8,7.4hz,2h,ch2),0.89(t,j＝7.4hz,3h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ159.3,156.6,155.2,148.4,141.3,133.6,132.2,130.7,128.9,128.2,121.2,120.0,115.2,66.0,55.9,53.7,53.2,52.0,25.3,25.1,21.0,20.7,13.4.hrms:m/z515.2407[m+h]+.实施例10n-(5-(4-((3-(吗啉基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(2,4-二氟苯基)磺酰胺(化合物10)合成方法同化合物1结构确证数据如下：61.9％yield.mp178-180℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ10.55(s,1h,nh),8.56(d,j＝1.5hz,1h,ar-h),8.50–8.47(m,2h,ar-handnh),8.46(d,j＝2.2hz,1h,ar-h),8.07(d,j＝2.2hz,1h,ar-h),8.04(dd,j＝8.6,1.7hz,1h,ar-h),7.80–7.71(m,2h,ar-h),7.59–7.52(m,1h,ar-h),7.19(td,j＝8.5,2.2hz,1h,ar-h),3.64(s,3h,och3),3.62–3.56(m,6h,ch2),2.43(m,6h,ch2),1.90–1.82(m,2h,ch2).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.8(dd,j＝11.3,252.0hz),159.3,159.2(dd,j＝13.5,255.9hz),157.7,155.2,148.4,141.9,134.1,133.3,131.7(d,j＝10.8hz),130.5,128.8,128.2,125.5(dd,j＝1.4,13.7hz),120.6,119.9,111.5(dd,j＝3.2,22.1hz),105.6(t,j＝26.0hz),66.0,55.8,53.2,53.1,38.8,25.2.hrms:m/z571.1905[m+h]+.实施例11n-(5-(4-((4-吡啶甲基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)正丁基磺酰胺(化合物11)合成方法同化合物1结构确证数据如下：66.7％yield.mp57-59℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ9.47(s,1h,nh),9.09(t,j＝5.7hz,1h),8.66(s,1h,ar-h),8.51(d,j＝6.4hz,3h,ar-h),8.46(s,1h,nh),8.13(d,j＝8.7hz,1h,ar-h),8.09(d,j＝1.8hz,1h,ar-h),7.81(d,j＝8.6hz,1h,ar-h),7.38(d,j＝5.2hz,2h,ar-h),4.85(d,j＝5.6hz,2h,ch2),3.99(s,3h,ch3),3.14(t,j＝7.8hz,2h,ch2),1.77-1.72(m,2h,ch2),1.43-1.37(m,2h,ch2),0.89(t,j＝7.4hz,3h,ch3).13cnmr(150mhz,dmso)δ159.4,156.7,155.0,149.5,148.4,148.3,141.4,133.9,132.3,131.0,128.8,128.3,122.1,121.1,120.0,115.0,53.7,52.0,42.6,25.1,20.7,13.4.hrms:m/z479.1847[m+h]+.实施例12n-(5-(4-((4-吡啶甲基)乙基)氨基)喹唑啉-6-基)-2-甲氧基吡啶-3-基)-(2,4-二氟苯基)(化合物12)合成方法同化合物1结构确证数据如下：62.4％yield.mp121-123℃.1hnmr(600mhz,dmso)δ10.41(s,1h,nh),9.10(t,j＝5.8hz,1h,nh),8.68(d,j＝1.7hz,1h,ar-h),8.54(d,j＝2.3hz,1h,ar-h),8.52(d,j＝5.5hz,2h,ar-h),8.47(s,1h,ar-h),8.14(dd,j＝10.6,2.1hz,2h,ar-h),7.81(d,j＝8.7hz,1h,ar-h),7.76(td,j＝8.5,6.6hz,1h,ar-h),7.64–7.56(m,1h,ar-h),7.39(d,j＝5.8hz,2h,ar-h),7.21(td,j＝8.5,2.3hz,1h,ar-h),4.87(d,j＝5.6hz,2h,ch2),3.64(s,3h,och3).13cnmr(150mhz,dmso)δ164.96(dd,j＝11.7,253.9hz),159.5,159.4(dd,j＝13.4,256.1hz),157.9,155.0,149.5,148.4(d,j＝18.7hz),142.8,135.1,133.1,131.7(d,j＝10.8hz),130.8,128.7,128.3,125.1(dd,j＝3.5,14.5hz),122.1,120.0,119.5,115.1,111.6(dd,j＝3.1,22.1hz),105.7(t,j＝25.8hz),53.27,42.65.hrms:m/z535.1348[m+h]+.活性测试实施例1体外抗肿瘤实验取对数生长期的肿瘤细胞，吸除旧培养基，pbs洗一遍吸除干净，1ml胰酶消化1min左右(根据细胞瓶大小适当调整)，加入到提前准备好的3-5ml的新鲜培养基中，吹打均匀后，取少量于血球计数板上计数，以1×104个/ml密度接种于96孔板中，5％co2，37℃孵育过夜(12h-16h)。吸去旧培养基，每孔加入含有各浓度药物的新鲜培养基100μl，使作用终浓度为100、50、25、10、5、2.5、1nm，每种样品设五个复孔，同时设阴性对照和阳性对照，5％co2，37℃孵育48小时。每孔加入10μlmtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，继续培养4h。终止培养，2000rpm，4℃，离心5分钟，小心吸去孔内培养液。每孔加入100μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。用酶标仪于495nm处测量od值，按如下公式计算不同浓度下的细胞增殖抑制率(inhibitionrate，ir％)：ir％＝(对照od－样品od)/(对照od-空白od)×100％通过计算获得化合物的ic50(单位μm)值肿瘤细胞a549mcf-7hct116sk-hep-1mda-mb-231化合物113.512.62.320.414.12化合物20.160.280.280.481.32化合物33.209.501.221.212.42化合物41.444.720.710.620.94化合物50.490.860.881.263.52化合物62.204.681.541.262.78化合物70.590.440.420.611.56化合物82.740.840.383.960.62化合物91.741.142.580.983.14化合物1018.813.48.964.529.82化合物115.728.984.326.669.42化合物1217.612.49.716.2111.4hs-1730.541.090.760.680.26活性测试实施例2激酶抑制活性实验1)按照布置每孔加入1μl10x化合物(待测化合物或各种激酶的阳性对照物)溶液，全抑制对照及零抑制对照孔加入1μl反应液。2)按照布置每孔加入4μl2.5x激酶溶液。全抑制对照孔加入4μl反应液。3)将检测板1000rpm离心以混匀。4)将4xatp溶液与4x底物溶液等体积混合，得到2xatp-底物溶液。5)按照布置每孔加入5μl上述2xatp-底物溶液。6)将检测板1000rpm离心以混匀。7)将检测板置于30℃反应1小时。8)每孔加入10μlkinasegloplus或adp-glo反应试剂，27℃放置20分钟。9)每孔加入20μlkinasedetection试剂，27℃放置30分钟。10)envision读取荧光数值。prism5.0分析原始数据。计算所测化合物的激酶抑制率。激酶抑制系率＝(化合物孔荧光值-零对照孔荧光值)/(全抑制对照孔荧光值-零对照孔荧光值)×100％将细胞活性表现较好的化合物2测试了pi3k4种亚型的ic50值，单位nm化合物pi3kαpi3kβpi3kγpi3kδ化合物413.6396.2117.5101.8通过细胞和激酶测试实验结果表明，本发明的化合物对5株细胞株具有很好的抗肿瘤活性，并且对pi3kα激酶的选择性以及活性也较好，具有很好的开发前景。当前第1页12