本发明涉及化学领域,尤其涉及一种快速制备异淡红乳菇素的方法。
背景技术:
异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯是存在于绒白乳菇子实体中的两种化合物,研究表明异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯为有效的血管内皮生长因子165激活剂,二者可以通过激活血管内皮生长因子165表达促进骨髓间充质干细胞成骨分化(中国专利申请号:2018109771474;2018109771489)。
异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式如图1所示。
目前,制备异淡红乳菇素或3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的方法无不依赖于反复硅胶柱层析,甚至需要借助凝胶柱层析。但是,无论是硅胶柱层析还是凝胶柱层析均只能局限于实验室规模,还无法适用于工厂大规模分离制备。
工厂大规模制备最常用的柱层析当属大孔树脂和微孔树脂,大孔树脂可以实现粗分,微孔树脂可以相对实现细分。但是,由于大孔树脂和微孔树脂理论塔板数不高,只能适用于一小部分化合物的工业化分离纯化,且需要选择好恰当的树脂型号。
技术实现要素:
本发明的目的在于提供一种快速制备异淡红乳菇素的方法。
为实现上述目的,本发明提供了以下技术方案:
一种制备异淡红乳菇素的方法,包括如下步骤:
步骤s1、绒白乳菇子实体的提取
干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用乙醇溶液常温浸泡提取,滤过,滤液减压回收乙醇至无醇味,得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液,脱脂棉过滤备用。
步骤s2、lx-68大孔树脂富集
上样和吸附:计算需要使用的lx-68大孔树脂,然后装填在长径比为5:1的树脂柱内,在吸附流速为1.5bv/h的条件下上样,上样结束后关闭树脂柱的阀门,静置吸附0.5h;
洗脱:先用40%乙醇以3bv/h洗脱流速洗脱2h,再用75%乙醇以4bv/h洗脱流速进行洗脱,收集7-7.5bv的75%乙醇洗脱液,浓缩至无醇味,得到lx-68大孔树脂富集液。
步骤s3、mcigelchp20p微孔树脂纯化
上样和吸附:计算需要使用的mcigelchp20p微孔树脂,然后将该mcigelchp20p微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内,在吸附流速为1.5bv/h的条件下上样,上样结束后关闭树脂柱阀门,静置吸附0.5h;
洗脱:先用30%甲醇以3bv/h洗脱流速洗脱2h,再用60%甲醇以4bv/h洗脱流速进行洗脱,收集4.2~4.5bv的60%甲醇洗脱液,浓缩干燥即得到异淡红乳菇素。
进一步地,步骤s1采用95%乙醇提取。
进一步地,步骤s1每公斤子实体使用5l95%乙醇。
进一步地,步骤s1共浸泡提取3次,每次12h。
进一步地,步骤s2按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的lx-68大孔树脂。
进一步地,步骤s3按照每100glx-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的mcigelchp20p微孔树脂。
本发明提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析,仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99%以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯,制备方法简单,应用前景广阔。
附图说明
图1是异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的化学结构式。
图2是异淡红乳菇素的hplc色谱图,a为异淡红乳菇素对照品,b为本发明制备得到的异淡红乳菇素。
图3是3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的hplc色谱图,a为3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯对照品,b为本发明制备得到的3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。
具体实施方式
一、实验材料
lx-68大孔树脂购自郑州和成新材料科技有限公司;mcigelchp20p微孔树脂购自三菱化学;绒白乳菇新鲜子实体采自云南,洗净后风干。
二、实验方法和实验结果
1、绒白乳菇子实体的提取
干燥的绒白乳菇子实体经粉碎后用95%乙醇常温浸泡提取,每公斤子实体使用5l的95%乙醇,共浸泡提取3次,每次12h,滤过,合并滤液,减压回收乙醇至无醇味,得到绒白乳菇子实体的提取浓缩液,脱脂棉过滤备用。
2、lx-68大孔树脂富集
上样和吸附:按照每150g提取浓缩液使用100g大孔树脂的量计算需要使用的lx-68大孔树脂,然后将该lx-68大孔树脂装填在长径比为5:1的树脂柱内,在吸附流速为1.5bv/h的条件下上样,上样结束后关闭树脂柱的阀门,静置吸附0.5h;
洗脱:先用40%乙醇以3bv/h洗脱流速洗脱2h,再用75%乙醇以4bv/h洗脱流速进行洗脱,收集7-7.5bv的75%乙醇洗脱液,浓缩至无醇味,得到lx-68大孔树脂富集液。
3、mcigelchp20p微孔树脂纯化
上样和吸附:按照每100glx-68大孔树脂富集液使用100g微孔树脂的量计算需要使用的mcigelchp20p微孔树脂,然后将该mcigelchp20p微孔树脂装填在长径比为8:1的树脂柱内,在吸附流速为1.5bv/h的条件下上样,上样结束后关闭树脂柱阀门,静置吸附0.5h;
洗脱:先用30%甲醇以3bv/h洗脱流速洗脱2h,再用60%甲醇以4bv/h洗脱流速进行洗脱,分别收集4.2~4.5bv、7.6~8.0bv的60%甲醇洗脱液,浓缩干燥即分别得到异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯。
使用hplc法分别测定上述方法制备得到的异淡红乳菇素、3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的纯度,色谱柱采用agilentzorbaxextend-c18(4.6×250mm,5μm),流动相及洗脱梯度为40min内乙腈浓度从0上升至100%,流速为1.0ml/min,异淡红乳菇素检测波长为215nm,3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯检测波长为255nm,供试品溶液的浓度为1mg/ml,上样量为10μl。
结果本发明方法制备得到的异淡红乳菇素的hplc归一化纯度为99.2%,3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯的hplc归一化纯度为99.5%。色谱图如图2、3所示。
综上可见,本发明提供的方法不需要采用反复硅胶柱层析,仅使用可以工业化大生产的大孔树脂和微孔树脂即可制备纯度高达99%以上的异淡红乳菇素和3β,8β,5,13-二环氧-5,7(13)-乳菇二烯,制备方法简单,应用前景广阔。