一种1/20水利巴韦林化合物的制作方法

本发明属于化学工程医药结晶技术领域，涉及一种1/20水利巴韦林化合物及其制法。

背景技术：

利巴韦林是一种非选择性核苷类广谱抗病毒药，属于单磷酸次黄嘌呤核苷(imp)脱氢酶抑制剂，在人体内参加鸟嘌呤代谢，干扰鸟嘌呤的生物合成，阻止病毒的复制，对多种dna和rna病毒均有抑制作用。临床上治疗呼吸道合胞病毒引起的病毒性肺炎和支气管炎、流感、乙脑、水痘、风疹、疱疹等。

利巴韦林的合成有三种方法：化学法、发酵法、酶促法

化学法如：cn101891786a由四乙酰核糖与三氮唑甲酯发生缩合，再氨解制得利巴韦林。

发酵法如：cn105483189a以过表达嘌呤核苷磷酸化酶的基因工程菌bl21/pet-his-pupg为生产菌株，采用乳糖诱导培养细胞，在磷酸盐缓冲液中，催化底物鸟苷和1,2,4-三氮唑-3-甲酰胺制备利巴韦林。

酶促法以肌苷、鸟苷、黄苷或d-核糖-1-磷酸酯与1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺为原料，在核苷磷酸酯酶的作用下合成利巴韦林。

上述三种方法制备的利巴韦林，均存在纯度差和稳定性较差的缺点，本发明人为了提高利巴韦林的稳定，通过对影响其结晶的因素进行大量研究，制得一种纯度高，稳定性好的利巴韦林化合物。

技术实现要素：

本发明公开了利巴韦林的一种新的溶剂化物，更具体的为1/20水利巴韦林化合物，即每摩尔利巴韦林化合物含1/20摩尔水，分子式c8h12n4o5·1/20h2o，分子量为245.11，结构式如下：

本发明所述的1/20水利巴韦林化合物，制备包括以下步骤：

将水加入到容器中，控制温度，加入利巴韦林粗品，搅拌溶解，用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠控制ph值，再加入活性炭，搅拌吸附脱色，减压抽滤，用水冲洗滤饼，取滤液加入反应釜中，降低温度，缓慢加入乙腈，静置析晶，减压抽滤，滤饼用乙腈洗涤，减压干燥，得1/20水利巴韦林化合物。

优选地，上述制备方法中，所述控制温度为40～70℃，更优选地，控制温度为50～60℃。

优选地，上述制备方法中，所述控制ph值为4～7，更优选地，控制ph值为5～6。

优选地，上述制备方法中，所述析晶温度为0～30℃，更优选地，析晶温度为10～20℃。

优选地，上述制备方法中，所述析晶时间为1～5h，更优选地，析晶时间为2～4h。

优选地，上述制备方法中，所述干燥温度为30～70℃，更优选地，干燥温度为40～60℃。

优选地，上述制备方法中，所述干燥时间为0.5～3h，更优选地，干燥温度为1～2h。

卡尔费休法是各种测定物质中水分方法中最为专一、准确的方法之一，本发明公开的利巴韦林化合物用卡尔费休法测定水分含量在0.32～0.43％之间，理论水含量为0.37％，可确定本发明每个利巴韦林化合物含有1/20摩尔水。

本发明所述的1/20水利巴韦林化合物，其tg分析结果显示，失重约0.34％，利巴韦林分子中水的理论百分含量是0.37％，参照费休氏法测得利巴韦林水分含量为0.32～0.43％，而实验测得tg失重为0.34％，与理论水含量基本相符。因此可推断利巴韦林tg失重是脱除水所致，且每摩尔利巴韦林含1/20摩尔水。如附图1所示。数据由热分析-质谱联用仪(netzschsta449c)分析得到。分析条件为：样品2～10mg，氧化铝坩埚，高纯氮气做反应气和保护气，流量分别为40ml/min和30ml/min，升温速率10k/min，温度测试范围为25～400℃。样品分解温度约为254.9℃。

本发明所述的1/20水利巴韦林化合物，其红外光谱在波数为3451.7±2cm^-1，3349.1±2cm^-1，2955.6±2cm^-1，1663.3±2cm^-1，1502.8±2cm^-1，1438.4±2cm^-1，1362.1±2cm^-1，1234.6±2cm^-1，1070.6±2cm^-1，958.7±2cm^-1，836.6±2cm^-1，773.2±2cm^-1处有特征吸收峰，如附图2所示。红外光谱测试条件为：安捷伦cary630，溴化钾压片。

本发明所述的1/20水利巴韦林化合物，其粉末x射线衍射图谱在衍射角2θ为11.97±0.2°，13.45±0.2°，18.22±0.2°，23.30±0.2°，24.11±0.2°，25.40±0.2°，27.12±0.2°，29.18±0.2°处有特征衍射峰，衍射角的相对衍射强度分别为100，48.66，21.72，60.30，76.51，67.64，47.33，50.94。如附图3所示。x射线粉末衍射测试条件：荷兰panalytical公司的empyrean(锐影)x射线衍射仪，cukα辐射，光管电压40kv，灯丝电流300ma，连续扫描，步长0.02°，扫描速度8°/min，扫描范围为2～50°。

本发明所述的1/20水利巴韦林化合物，其dsc分析结果显示，在约172.0℃有吸热峰，在约270.8℃有放热峰。如附图4所示。dsc数据由热分析-质谱联用仪(netzschsta449c)分析得到，分析条件为：样品2～10mg，氧化铝坩埚，高纯氮气做反应气和保护气，流量分别为40ml/min和30ml/min。升温速率10℃/min，温度范围25～400℃。

本发明的进一步的目的，提供了一种含1/20水利巴韦林化合物的药物组合物。优选地，所述药物组合物包含1/20水利巴韦林化合物和药学上接受的赋形剂。更优选地，药物组合物选自药学上可接受的剂型。

附图说明

图11/20水利巴韦林化合物的tg分析图。

图21/20水利巴韦林化合物的傅里叶红外光谱图。

图31/20水利巴韦林化合物的粉末x射线衍射图谱。

图41/20水利巴韦林化合物的dsc分析图。

具体实施方式

下面将通过具体实施方式对本发明做进一步说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围中，本领域的技术人员应理解，对本发明内容所做的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。

实施例1：1/20水利巴韦林化合物的制备

将1000ml水加入到容器中，控制温度在50℃，加入100.06g利巴韦林粗品，搅拌溶解，用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠控制ph值在5.0，再加入1.02g活性炭，搅拌吸附脱色30min，减压抽滤，用50ml水冲洗滤饼，取滤液加入反应釜中，降低温度至15℃，缓慢加入乙腈1000ml，静置析晶2h，减压抽滤，滤饼用乙腈50ml洗涤，40℃减压干燥2h，得1/20水利巴韦林化合物92.62g。

结果：

粉末x射线衍射图谱在衍射角2θ为11.97°，13.45°，18.22°，23.30°，24.11°，25.40°，27.12°，29.18°处有特征衍射峰，衍射角的相对衍射强度分别为100，48.66，21.72，60.30，76.51，67.64，47.33，50.94。

红外光谱在波数为3451.7cm^-1，3349.1cm^-1，2955.6cm^-1，1663.3cm^-1，1502.8cm^-1，1438.4cm^-1，1362.1cm^-1，1234.6cm^-1，1070.6cm^-1，958.7cm^-1，836.6cm^-1，773.2cm^-1处有特征吸收峰。

hplc法检测纯度为99.86％；卡尔费休法测定水分为0.38％，热重分析失重为0.34％，这样与含有的1/20个水的结果(理论值0.37％)基本一致；元素分析理论值为：c：39.20％，h：4.98％，n：22.86％，o：32.96％；实测值为：c：39.18％，h：4.96％，n：22.89％，o：32.97％。

实施例2：1/20水利巴韦林化合物的制备

将1000ml水加入到容器中，控制温度在55℃，加入100.14g利巴韦林粗品，搅拌溶解，用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠控制ph值在6.0，再加入1.05g活性炭，搅拌吸附脱色30min，减压抽滤，用50ml水冲洗滤饼，取滤液加入反应釜中，降低温度至10℃，缓慢加入乙腈1000ml，静置析晶4h，减压抽滤，滤饼用乙腈50ml洗涤，50℃减压干燥1.5h，得1/20水利巴韦林化合物93.35g。

结果：

粉末x射线衍射图谱在衍射角2θ为11.94°，13.46°，18.25°，23.32°，24.12°，25.43°，27.14°，29.19°处有特征衍射峰，衍射角的相对衍射强度分别为100，47.23，20.85，61.54，77.19，65.46，46.07，51.25。

红外光谱在波数为3451.3cm^-1，3349.0cm^-1，2955.8cm^-1，1663.5cm^-1，1502.6cm^-1，1438.9cm^-1，1362.0cm^-1，1234.2cm^-1，1070.4cm^-1，958.8cm^-1，836.5cm^-1，773.4cm^-1处有特征吸收峰。

hplc法检测纯度为99.82％；卡尔费休法测定水分为0.32％，热重分析失重为0.33％，这样与含有的1/20个水的结果(理论值0.37％)基本一致；元素分析理论值为：c：39.20％，h：4.98％，n：22.86％，o：32.96％；实测值为：c：39.19％，h：4.98％，n：22.88％，o：32.95％。

实施例3：1/20水利巴韦林化合物的制备

将1000ml水加入到容器中，控制温度在60℃，加入100.02g利巴韦林粗品，搅拌溶解，用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠控制ph值在5.5，再加入1.01g活性炭，搅拌吸附脱色30min，减压抽滤，用50ml水冲洗滤饼，取滤液加入反应釜中，降低温度至20℃，缓慢加入乙腈1000ml，静置析晶3h，减压抽滤，滤饼用乙腈50ml洗涤，60℃减压干燥1h，得1/20水利巴韦林化合物91.82g。

结果：

粉末x射线衍射图谱在衍射角2θ为11.94°，13.44°，18.21°，23.32°，24.12°，25.44°，27.15°，29.17°处有特征衍射峰，衍射角的相对衍射强度分别为100，49.24，22.75，58.68，73.70，65.45，46.12，48.77。

红外光谱在波数为3451.8cm^-1，3349.3cm^-1，2955.8cm^-1，1663.5cm^-1，1502.7cm^-1，1438.2cm^-1，1362.4cm^-1，1234.5cm^-1，1070.6cm^-1，958.8cm^-1，836.3cm^-1，773.0cm^-1处有特征吸收峰。

hplc法检测纯度为99.83％；卡尔费休法测定水分为0.43％，热重分析失重为0.40％，这样与含有的1/20个水的结果(理论值0.37％)基本一致；元素分析理论值为：c：39.20％，h：4.98％，n：22.86％，o：32.96％；实测值为：c：39.20％，h：4.96％，n：22.85％，o：32.99％。

对比例1根据现有技术文献cn101891786a制备利巴韦林化合物

采用该专利实施例1和实施例2相同的方法

制备方法：

1-(2，3，5-三-0-乙酰基-β-d-呋喃核糖基)-1h-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯的合成

在装有温度计和机械搅拌的2000ml的三口瓶中，加入318.03g(1mol)四乙酰核糖，127.10g(1mol)的三氮唑甲酯，20.06g三氟甲磺酸，放入微波反应器中，设置功率400w，加热至55℃，保温反应60min，冷却至室温，加入1000ml甲醇，加热溶解，倾出，冷却后析出大量白色固体，过滤，洗涤，干燥，得1-(2，3，5-三-0-乙酰基-β-d-呋喃核糖基)-1h-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯346.92g。

利巴韦林的合成

在高压反应釜中加入191.05g(0.5mol)的1-(2，3，5-三-0-乙酰基-β-d-呋喃核糖基)-1h-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯和2000ml的甲醇，在室温下通入氮气使反应釜保持2kg的压力，反应5h，然后回收多余的氨气，减压除去溶剂，剩余物用乙醇重结晶，得到利巴韦林产品107.52g

hplc法检测纯度为99.63％；卡尔费休法测定水分为0.22％，热重分析失重为0.23％；元素分析理论值为：c：39.35％，h：4.95％，n：22.94％，o：32.76％；实测值为：c：39.38％，h：4.94％，n：22.92％，o：32.76％。

对比例2根据现有技术文献cn102127134a制备利巴韦林化合物

采用该专利实施例2相同的方法

制备方法：

(1)将100.03g利巴韦林粗品溶于2000ml纯化水中，缓慢加入10％苯甲酸溶液，搅拌反应，产生沉淀，过滤得到利巴韦林苯甲酸盐固体。

(2)将利巴韦林苯甲酸盐固体溶于2000ml体积比为2：3的乙腈和二氯甲烷的混合溶剂中，加入3.00g活性炭，60℃搅拌20min，过滤脱炭，收集滤液。

(3)将滤液通过色谱柱分离纯化，以体积比为2：3的乙腈和二氯甲烷的混合溶剂为流动相，固定相填料为硅胶，流速4.5ml/min，柱温30℃，收集滤液。

(4)向滤液中加入8％碳酸氢钠溶液，60℃减压搅拌，逐渐析出固体，再保温充分搅拌反应2h，过滤，水洗涤，60℃减压干燥，得利巴韦林90.16g。

hplc法检测纯度为99.29％；卡尔费休法测定水分为0.25％，热重分析失重为0.27％；元素分析理论值为：c：39.35％，h：4.95％，n：22.94％，o：32.76％；实测值为：c：39.35％，h：4.93％，n：22.92％，o：32.80％。

试验例1稳定性考察

本发明人对实施例1、对比例1、对比例2制备的利巴韦林化合物进行了稳定性考察。温度为40℃±2℃，放置6个月，分别于0、1、2、3、6月末取样。考察指标为性状、溶液的澄清度与颜色、水分、含量及有关物质。

结果：通过加速试验结果可看出，本发明实施例1的水分未发生明显变化，对比例1和对比例2的水分明显降低，可进一步推断本实施例1制备的样品所含水分为结晶水；本发明实施例1的其他各项检测指标也明显优于对比例1和对比例2，充分说明了本发明制备的1/20水利巴韦林化合物稳定性更好，质量优于同类产品。

试验例2冷冻干燥试验

本发明人对实施例1、对比例1、对比例2制备的利巴韦林化合物进行了冷冻干燥。即将实施例1、对比例1、对比例2制备的利巴韦林化合物以0.25g/瓶分装于西林瓶中，置于冷冻干燥机，真空条件下-40℃干燥24h，检测冻干前后水分变化。

结果如下：

结论：本发明实施例1制备的1/20水利巴韦林化合物经冷冻干燥后水分未发生明显变化，对比例1、对比例2制备的利巴韦林化合物水分明显降低，可推测本发明利巴韦林化合物中的水分为结晶水，对比例1、对比例2利巴韦林中的水分为吸附水。

试验例3压片稳定性

本发明人对实施例1、对比例1、对比例2制备的利巴韦林化合物用压片机压成0.5g/片的圆形片进行加速考察。温度为40℃±2℃，放置6个月，分别于0、1、2、3、6月末取样。考察指标为水分。

结论：本发明实施例1制备的1/20水利巴韦林化合物压制的片剂加速试验水分未发生明显变化，对比例1、对比例2的利巴韦林化合物压制的片剂水分明显降低，可推论出本发明利巴韦林化合物中的水分为结晶水，对比例1、对比例2利巴韦林中的水分为吸附水。