本发明属于药学领域，涉及一种抗菌药物林可霉素的分离纯化方法。
背景技术：
林可霉素(c18h34n2o6s)又称林肯霉素、洁霉素，是一种对革兰氏阳性菌的有效抑制剂，其作用原理是作用于敏感菌核糖体的50s亚基，阻止肽链的延长，抑制细菌细胞的蛋白质合成。在高浓度下，对高度敏感细菌也具有杀菌作用。林可霉素具有耐药性发展缓慢、组织渗透性好、对呼吸系统感染等有较好的疗效，因此林可霉素被广泛用于临床治疗。在青霉素等其它抗生素的耐药菌逐渐被发现，导致这些抗生素使用受限制的情况下，林可霉素需求量在逐渐增加。
如式1及表1所示，林可霉素分子中因取代基团r的不同而分为a、b、c、d、k、s六种组份，在发酵过程中有不同程度的表达，其中a组份占90％以上；b组份占5～10％，b组份的临床疗效仅为a组份的20％，且其毒性较大；其余4种组份的总量不超过1％，疗效与a组份相似。b组份的衍生物的临床应用有很大的副作用，特别是对肠、肝、肾功能影响较大。因此，林可霉素b组份在其质量控制中占有重要地位。在直接作为药用的林可霉素产品中，要求b组份含量低于5％，而利用林可霉素作原料生产衍生物时，一般希望b组份含量低于3％。
式1林可霉素分子结构式
表1林可霉素各组份取代基
现有技术中按一般生产工艺得到的盐酸林可霉素杂质b含量在3.5-4.5％之间，无法满足目前林可霉素的高质量要求。如果在生产工序上添加新的b组分处理工艺，比如树脂吸附解析工艺，虽然可以大幅度降低盐酸林可霉素b组分，但成品收率下降明显。如中国专利cn102746348b、cn104356179b就是采用树脂吸附工艺分离纯化林可霉素。因此需要在原有林可霉素生产工艺上进行适当改进，在不明显降低林可霉素收率的情况下降低林可霉素成品的b组分。
另外，除了采用树脂吸附工艺分离纯化盐酸林可霉素外，现有技术中还有其他分离纯化工艺。如中国专利cn103724380b公开了一种林可霉素的提取方法，该专利采用是陶瓷超滤膜、萃取、反萃取等工艺结合分离纯化林可霉素，该工艺较复杂繁琐，并且萃取液、反萃取液易残留。又如中国专利cn105037456a公开了分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺，该专利先采用氯仿萃取三次，然后用印迹聚合物填装的吸附柱来吸附分离林可霉素，最后用甲醇-醋酸混合液洗脱得到林可霉素；该专利分离林可霉素纯度为94.6％，收率81.93％，分离和收率效果一般。
现有技术中的盐酸林可霉素的生产工艺一般为：采用林可霉素链霉菌在一定条件下进行三级发酵，发酵液经酸化处理后过滤除去菌丝体，滤液用naoh调ph至10.5-11.5，向其中加入丁醇进行萃取提炼，减压浓缩后，加入hcl溶液反应生成盐酸林可霉素粗结晶，粗结晶溶解后进行活性炭吸附、二次结晶、干燥，得盐酸林可霉素原料药。
为此，本发明在生产工艺方法上进行改进，在加入hcl溶液进行盐酸结晶前，对林可霉素浓缩液进行氯化钠溶液洗涤，并对盐酸结晶各项工艺参数进行改进，达到大幅降低盐酸林可霉素b组分的目的，得到一种高纯度的林可霉素的制备方法。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，克服以上现有技术的缺点：提供一种林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，制备的盐酸林可霉素粗品b组分的含量≤4wt％，结晶单步收率≥86％。
本发明的技术解决方案如下：
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、将林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液混合、洗涤、分离，制得林可霉素浓缩洗涤液；
步骤2、将步骤1中林可霉素浓缩洗涤液与盐酸反应，制得盐酸林可霉素；
步骤3、将步骤2中盐酸林可霉素与正丁醇、氯化钠混合，盐酸林可霉素结晶析出、分离，制得盐酸林可霉素结晶粗品。
在本发明的一个优选实例中，所述步骤1中，林可霉素浓缩液为正丁醇相，其效价为24～28万u/ml，林可霉素浓缩液透光度≥50％；碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度0.5～1.5mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph11～12；林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液的加入体积比为2～4:1；
在本发明的一个优选实例中，所述步骤2中，林可霉素浓缩洗涤液的温度为10～20℃；盐酸的加入量为0.25～0.28kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸反应混合相ph稳定在3.0～4.0，盐酸加入时的温度为10～20℃；
在本发明的一个优选实例中，所述步骤3中，正丁醇的加入量为0.4～0.6l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度10～30℃；氯化钠用量的加入量为0.002～0.006kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
在本发明的一个优选实例中，所述林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1：
s11、将林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，林可霉素浓缩液冷却至室温；
s12、往搪瓷搅拌反应釜中加入配置好的碱性氯化钠洗涤液，林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液的体积比为2～4:1；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度0.5～1.5mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11～12；
s13、开启搅拌，搅拌10～30分钟后，关闭搅拌，并静置40～80分钟；
s14、打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液；
步骤2：
s21、开启搪瓷搅拌反应釜，对步骤s14中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，控制反应釜内温度为10～20℃；
s22、边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入盐酸，盐酸加入量为0.25～0.26kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为10～20℃；
s23、继续向搪瓷搅拌反应釜中加入盐酸，盐酸加入用量为0～0.02kg/十亿浓缩洗涤液效价，当林可霉素浓缩洗涤液与盐酸反应混合相ph稳定在3.0～4.0时，停止加入盐酸；
s24、继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：
s31、继续搅拌步骤s24中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入正丁醇和氯化钠，3～7分钟内加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.4～0.6l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为10～30℃；氯化钠的加入量为0.002～0.006kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；
s32、继续搅拌1～3h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使物料温度控制在10～15℃；
s33、关闭搅拌，继续静置冷却结晶2～4h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；
s34、抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.08～0.12l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
在本发明的一个优选实例中，所述s11中林可霉素浓缩液为正丁醇相，其效价为24～28万u/ml，浓缩液透光度≥50％。
在本发明的一个优选实例中，所述s12中，林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液的体积比为3:1；碱性氯化钠洗涤液中氯化钠浓度为1mol/l；所述s13中，搅拌15分钟后，关闭搅拌，并静置50分钟。
在本发明的一个优选实例中，所述s21中，控制反应釜内温度为15℃；所述s22中，盐酸为化学纯盐酸，盐酸的浓度1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为15℃；所述s23中，混合相ph稳定在3.5时，停止加入盐酸。
在本发明的一个优选实例中，所述s31中，5分钟内加完正丁醇和氯化钠，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；氯化钠的加入量为0.004kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；所述s32中，继续搅拌2h；降温后物料温度控制在12℃；所述s33中，关闭搅拌后继续静置冷却结晶3h；所述s34中，洗涤用正丁醇的用量为1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
其中，步骤1中的林可霉素发酵液由江西国药有限责任公司提供。
本发明的方法中，首先，由于b组分r2取代基为c2h5，a组分r2取代基为c3h7，从而林可霉素b组分相比较a组分更易溶解于极性大的溶剂中，因此通过本发明通过在盐酸林可霉素结晶前用碱性氯化钠溶液对正丁醇相的林可霉素浓缩液进行洗涤，使林可霉素浓缩液中的b组分更多地溶解在极性溶剂中，并去除林可霉素浓缩液中的水溶性杂质，从而有效降低林可霉素浓缩液中的b组分及其他极性组分。
其次，由于生成盐酸林可霉素的反应为放热反应，因此本发明通过控制林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度为10～20℃，降低反应前温度，从而有利于反应的进行，因此利于盐酸林可霉素的生成；同时，申请人通过实验发现，在酸性条件下，高温可造成林可霉素a转化为林可霉素b；因此本发明通过降低反应前温度，也可以减少林可霉素a向林可霉素b转化，并减少反应过程中异常杂质的产生。
最后，在盐酸林可霉素冷却静置结晶时，本发明通过加入食用级氯化钠及10～30℃的正丁醇，不仅可以使结晶混合物中的盐酸林可霉素更易结晶析出；而且加入地食用级氯化钠可以提高结晶母液的极性，使得盐酸林可霉素b组分更易溶解于结晶母液中，从而减少了盐酸林可霉素中b组分含量。同时，本发通过控制结晶温度为10～15℃，以降低结晶成型的速度，从而促使盐酸林可霉素b组分在盐酸林可霉素结晶前尽量多地溶解在结晶母液中；并且，本发明通过边降温边搅拌，使得结晶母液与盐酸林可霉素结晶晶体充分接触，从而使盐酸林可霉素b组分充分溶解在结晶母液中，以达到饱和状态。
本发明的分离提纯方法不仅可以充分降低盐酸林可霉素中b组分的含量，而且不会明显降低成品收率。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明通过采用碱性氯化钠溶液、控制盐酸林可霉素的反应温度、控制盐酸林可霉素结晶温度以及调节结晶母液的极性得方法来去除盐酸林可霉素中的盐酸林可霉素b组分；同时以上4个方法可以起相互协同、增效的作用，从而能够充分去除盐酸林可霉素结晶过程中的林可霉素b组分，并且对成品收率影响不明显。
2、采用本发明方法制得的盐酸林可霉素粗品b组分≤4.0wt％(原标准b组分≤6.0wt％)，盐酸结晶单步收率≥86％(原标准单步收率≥86％)；同时盐酸林可霉素成品b组分≤3.0wt％(原标准≤5.0wt％)，成品其他各项指标符合现行usp标准。
具体实施方式
下面用具体实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅局限于以下具体实施例。
本发明所述“室温”具有本领域公知的含义，具体是指20～30℃，优选22～28℃，更优选25℃。
本发明所述的“搪瓷搅拌反应釜”为现有技术，并且该搪瓷搅拌反应釜带冷却保温功能，同时反应釜上连接有盐酸计量罐。
本发明中所述的“林可霉素浓缩液”的制备方法为：将林可霉素发酵液加入正丁醇中，通过正丁醇对林可霉素发酵液进行萃取得到正丁醇提取液，正丁醇提取液再经过真空低温浓缩即制得林可霉素浓缩液。
实施例1
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、将效价为266040u/ml，透光度为58％、体积为15l的林可霉素浓缩液吸入搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11.4；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌15分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料50分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至16℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为16℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.012kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.2时；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，3分42秒内加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为17℃；氯化钠的加入量为0.004kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌2h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2.5h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：将步骤3制得的盐酸林可霉素结晶粗品依次进行活性炭脱色、丙酮结晶、干燥、过筛，即形成盐酸林可霉素成品。
上述步骤4中的活性炭脱色、丙酮结晶、干燥、过筛均为采用现有技术中的方法。
实施例2
步骤1、将效价为252640u/ml，透光度为60％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11.4；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌15分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料50分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至14℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为15℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.008kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.6；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，3分17秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为19℃；氯化钠的加入量为0.004kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌2h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2.5h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
实施例3
步骤1、将效价为261170u/ml，透光度为55％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11.4；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌15分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料50分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至15℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为15℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.014kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.2；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，3分49秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为17℃；氯化钠的加入量为0.004kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌2h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2.5h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
实施例4
步骤1、将效价为264210u/ml，透光度为59％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11.4；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌20分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料60分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至17℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为17℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.01kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.5；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，3分36秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为20℃；氯化钠的加入量为0.005kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌2h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2.5h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
实施例5
步骤1、将效价为253860u/ml，透光度为64％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11.4；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌20分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料60分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至17℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.25kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为18℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入小于0.015kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.3；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，4分11秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.5l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为21℃；氯化钠的加入量为0.005kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌2h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在11～13℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2.5h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
实施例6
步骤1、将效价为248990u/ml，透光度为61％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入3.75l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度1.5mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为11；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌10分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料40分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至10℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.26kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为10℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.001kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.4；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，3分20秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.4l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为10℃；氯化钠的加入量为0.002kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌1h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在11～13℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶2h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.08l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
实施例7
步骤1、将效价为260560u/ml，透光度为56％、体积为15l的正丁醇相林可霉素浓缩液吸入带冷却保温功能的搪瓷搅拌反应釜中，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的林可霉素浓缩液进行降温至室温；往搪瓷搅拌反应釜中加入7.5l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其中，碱性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠，工业级氢氧化钠配置而成，氯化钠浓度0.5mol/l，碱性氯化钠洗涤液ph为12；开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌30分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料80分钟；打开搪瓷搅拌反应釜下料口，将洗涤废水放入下料抽滤桶中，并通过下料抽滤桶下部的废液管路流出，检测剩余林可霉素浓缩洗涤液的透光度及效价，制得林可霉素浓缩洗涤液。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至20℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入量为0.255kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，盐酸加入时的温度为20℃；继续向搪瓷搅拌反应釜中加入0.005kg/十亿浓缩洗涤液效价的cp盐酸，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.5；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：继续搅拌步骤2中的盐酸林可霉素，边搅拌边加入工业级正丁醇和食用级氯化钠，5分55秒加完正丁醇和氯化钠；其中，正丁醇的加入量为0.6l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为30℃；氯化钠的加入量为0.006kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；继续搅拌3h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在13～15℃；关闭搅拌，继续静置冷却结晶4h，打开下料口将结晶混合物放入下料抽滤桶中，结晶母液通过抽滤桶下部废液管路抽出；抽干后使用工业级正丁醇对结晶粗品进行充分混合洗涤，将洗涤后的正丁醇真空抽出，即制得盐酸林可霉素结晶粗品；其中，洗涤用正丁醇的用量为0.12l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价。
步骤4：制备方法同实施例1。
对比例1(步骤1中林可霉素浓缩液效价大于28万u/ml)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、林可霉素浓缩液的效价为301350u/ml、透光度为56％，其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4的制备方法同实施例1。
对比例2(步骤1中林可霉素浓缩液效价小于24万u/ml)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、林可霉素浓缩液的效价227680u/ml、透光度为61％，其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4的制备方法同实施例1。
对比例3(将步骤1中的碱性氯化钠洗涤液换成中性氯化钠洗涤液)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、将步骤1中的碱性氯化钠洗涤液换成中性氯化钠洗涤液，中性氯化钠洗涤液由纯化水、食用级氯化钠配置而成，中性氯化钠洗涤液ph为7；其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4的制备方法同实施例1。
对比例4(步骤1中氯化钠浓度为2mol/l)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、氯化钠浓度为2mol/l，其余同实施例1步骤1；
步骤2、步骤3、步骤4同实施例1。
对比例5(步骤1中林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液的配比为1:1)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、往搪瓷搅拌反应釜中加入15l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4同实施例1。
对比例6(步骤1林可霉素浓缩液与碱性氯化钠洗涤液的配比为5:1)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、往搪瓷搅拌反应釜中加入3l配置好的碱性氯化钠洗涤液；其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4同实施例1。
对比例7(步骤1中洗涤搅拌时间5分钟，并静置25分钟)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1：开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌5分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料25分钟；其余同实施例1步骤1。
步骤2、步骤3、步骤4同实施例1。
对比例8(步骤2中加入林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度≥20℃)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1：同实施例1步骤1。
步骤2：开启搪瓷搅拌反应釜搅拌功能，对步骤1中林可霉素浓缩洗涤液进行搅拌，搪瓷搅拌反应釜内的物料为39℃；边搅拌边通过盐酸高位罐向搪瓷搅拌反应釜中加入cp盐酸，盐酸的浓度为1mol/l，盐酸加入时的温度为27℃，盐酸加入量为0.260kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.3；继续搅拌至结晶，制得盐酸林可霉素。
步骤3：2分47秒加完正丁醇和氯化钠；正丁醇加入时的温度为18℃；其余实施例1同步骤3.
步骤4：同实施例1步骤4。
对比例9(步骤3中加入正丁醇的温度≥30℃)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤1、同实施例1步骤1；
步骤2：通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料降温至15℃；盐酸加入量为0.259kg/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价，使林可霉素浓缩洗涤液与盐酸混合相的ph稳定在3.5；其余同实施例1步骤2；
步骤3：正丁醇加入时的温度为41℃；其余同实施例1步骤3；
步骤4：同实施例1步骤4。
对比例10(步骤3中加入正丁醇的用量为1l/十亿林可霉素浓缩液效价)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤3：正丁醇的加入量为1l/十亿林可霉素浓缩洗涤液效价；正丁醇加入时的温度为19℃；其余同实施例1步骤3；
步骤1、步骤2、步骤4同实施例1。
对比例11(步骤3中不加入氯化钠)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，步骤3中不加氯化钠，其余同实施例1。
对比例12(步骤3中结晶静置温度30℃)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤3：3分7秒内加完正丁醇和氯化钠；正丁醇加入时的温度为22℃；反应釜内物料温度控制在30℃；其余同实施例1。
对比例13(步骤3中结晶搅拌时间为0.5h)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，包括以下步骤：
步骤3：3分7秒内加完正丁醇和氯化钠；正丁醇加入时的温度为22℃；继续搅拌0.5h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；其余同实施例1。
对比例14(不进行步骤1、步骤3中不加入氯化钠)
林可霉素的盐酸结晶分离纯化方法，不进行实施例1中的步骤1，直接从步骤2开始处理，步骤2、步骤3、步骤4同实施例1。
对比例15
将实施例1步骤1中的碱性氯化钠洗涤液换成蔗糖溶液，其余同实施例1。
对比例16(不进行步骤1，步骤2中加入林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度≥20℃，步骤3中不加入氯化钠，且加入正丁醇的温度≥30℃)
去掉实施例1中的步骤1；将实施例1步骤2中的盐酸加入时的温度由16℃换成30℃；将实施例1步骤3中氯化钠去除，并且正丁醇加入时的温度为41℃；其余同实施例1。
对比例17(步骤1中洗涤搅拌时间5分钟，并静置25分钟，步骤2中加入林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度≥20℃，步骤3中不加入氯化钠，加入正丁醇的温度≥30℃，结晶搅拌时间为0.5h)
步骤1：开启搅拌，对搪瓷搅拌反应釜内的物料搅拌5分钟后，然后关闭搅拌，并静置物料25分钟；其余同实施例1步骤1；
步骤2：盐酸加入时的温度为30℃，其余同实施例1步骤2；
步骤3：不加入氯化钠，正丁醇加入时的温度为41℃，继续搅拌0.5h，同时通过冷却冰盐水对搪瓷搅拌反应釜内的物料进行降温，使反应釜内物料温度控制在10～12℃；其余同实施例1步骤3；
步骤4：同实施例1。
测定本发明各实施例及各对比例中制得的盐酸林可霉素结晶收率、盐酸林可霉素粗品b组分含量、盐酸林可霉素成品b组分含量：
1、盐酸林可霉素结晶收率测定：采用旋光光度法。
2、盐酸林可霉素粗品b组分含量测定：采用hplc高效液相法。
3、盐酸林可霉素成品b组分含量测定：采用hplc高效液相法。
测定结果如表2所示：
表2本发明各个实施例、对比例制得的盐酸林可霉素产品效果
由上表2可以看出，本发明的实施例1-7制得的盐酸林可霉素产品效果都质量均在期望的质量范围内：结晶收率≥85％，粗品b组分≤4.0wt％，成品b组分≤3.0wt％，均符合usp药典的要求。
与现有技术(盐酸林可霉素杂质b含量为3.5-4.5％)相比，本发明的制备方法明显降低了盐酸林可霉素成品中的b组分；并且，本发明在有效降低盐酸林可霉素成品中的b组分的同时，也不明显降低盐酸林可霉素结晶收率，使得盐酸林可霉素成品b组分与盐酸林可霉素结晶收率的保持适当平衡。
另外，与对比例1～15比较可以看出，由于对比例1～15中改变了单一反应条件，从而对比例1～15制得的盐酸林可霉素产品中，盐酸林可霉素成品b组分的降低与提高盐酸林可霉素结晶收率很难保持平衡；如对比例2、5、9、10、13中，在降低盐酸林可霉素成品b组分的同时，盐酸林可霉素结晶收率也明显降低；又如对比例1、3、4、6、7、8、11、12、14、15中，在保证盐酸林可霉素结晶收率的同时，盐酸林可霉素成品b组分也明显增加了。同时，对比例4中氯化钠用量大，且产品灰分增加；对比例5收率明显偏低；对比例10使用正丁醇数量偏多。因此，与对比例1～15比较可以看出，本发明实施例在不明显降低盐酸林可霉素结晶收率的前提下，能有效降低了盐酸林可霉素粗品b组分。
与对比例16～17比较可以看出，对比例16～17的方法制得的盐酸林可霉素产品中盐酸林可霉素成品b组分含量较高，这是由于对比例16～17中改变的是多个反应条件，从而使得采用对比例16～17的方法不能有效降低盐酸林可霉素成品b组分含量，且盐酸林可霉素成品b组分含量远高于实施例。可见，本发明实施例中反应条件和反应参数可以起协同增效作用，特别是采用碱性氯化钠洗涤液、林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度小于20℃、加入氯化钠、正丁醇的温度小于30℃之间，以及步骤1洗涤搅拌时间、静置时间与林可霉素浓缩洗涤液及盐酸温度小于20℃、加入氯化钠、加入正丁醇的温度小于30℃之间均能起到协同增效的作用，可以有效降低盐酸林可霉素成品b组分含量，并且不明显降低盐酸林可霉素结晶收率。
以上仅是本发明的特征实施范例，对本发明保护范围不构成任何限制。凡采用同等交换或者等效替换而形成的技术方案，均在本发明权利保护范围之内。