本发明涉及椰子多肽技术领域，具体涉及一种酶法制备椰子多肽的方法。
背景技术：
椰子属于棕榈科椰子属，是热带地区典型的木本油料作物和食品能源作物。椰肉中含有4～5%的蛋白质，椰干中含有18～20%的蛋白质，虽然单个椰子的蛋白质含量比较少，但由于椰子产量很大，全世界椰子栽培面积达1100万m2，年产椰子约536亿个，因此椰子蛋白质也是丰富的植物蛋白质资源。椰子蛋白质中含有人体所需的18种氨基酸，必需氨基酸种类齐全，营养价值高；而且椰子蛋白有降血脂、降低胆固醇、抑制高血脂症等保健功能,尤其是椰子蛋白中含大量的l-精氨酸(14.8g/100g)蛋白具有抑制高血脂症的作用，同时l-精氨酸又是个抗氧化剂，可以显著清除自由基。椰肉蛋白质还能通过降低糖原水平和碳水化合物代谢酶的活性，且能使胰腺b细胞再生，使胰腺的损伤恢复到正常水平，所以具有显著的降糖作用。
不少研究发现，人类摄取蛋白质，是要经过消化酶作用以后，是以肽的形式达到吸收，而并非是以氨基酸的形式吸收，一些肽不仅能提供人体的生长、发育所需要的营养物质，它还具有很好的溶解性和流动性，椰子蛋白活性肽还有清除自由基、抗氧化性、增强吞噬细胞和b细胞活力，增强免疫功能、抗癌、抗衰老、保护肝脏、预防老年痴呆、老年性骨质酥松和胆结石的发生，有助于肝功能恢复。因此，有必要研究一种椰子多肽的制备方法。
技术实现要素：
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷、椰子多肽纯度高的椰子多肽制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种椰子多肽的制备方法，包括如下步骤：步骤一、椰子蛋白的制备；步骤二、蛋白预处理：将所述椰子蛋白与蒸馏水混匀，并进行加热加压处理，得到湿热椰子蛋白浆液；步骤三、一次酶解：调节所述湿热椰子蛋白浆液ph，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液；步骤四、二次酶解：调节所述一次酶解液的ph，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液；步骤五、微波灭酶：对所述二次酶解液进行微波灭酶处理，得到灭酶酶解液，并依次经降温，离心，取上清液，超滤，取滤液，冷冻干燥即得成品的椰子多肽。
优选的，所述步骤一中椰子蛋白的制备过程如下：将椰子粕粉原料与0.2mol/l的碱性磷酸盐缓冲液按料液比1：8～12混匀制成椰子粕粉浆液，调节椰子粕粉浆液ph至9～10，并进行超声辅助处理3～4小时，超声温度为45～55℃，超声功率为40～50khz，待处理结束，离心得到上层清液，再加入酸性磷酸盐缓冲液调节上层清液ph至4.5进行酸沉处理1.0～1.5小时，待酸沉处理结束，静置25～35分钟，再离心得到下层沉淀，将下层沉淀水洗至中性，并进行冷冻干燥处理，即得到椰子蛋白。
优选的，所述椰子粕粉原料的制备过程如下：将椰子去椰衣、破壳、取椰肉、去掉椰肉上的种皮、将椰肉刨丝，然后冷冻干燥得到低变性椰干，将椰干采用正己烷浸泡，脱除溶剂后得到脱脂椰子粕，其残油量为0.7～0.9%，将脱脂椰子粕粉碎过60～80目筛，即得椰子粕粉原料。
优选的，所述步骤二中蛋白预处理的过程如下：第一阶段，将椰子蛋白与蒸馏水按料液比1：8～12混匀，并加热至90～95℃，在压力0.02～0.04mpa下保温处理5～10分钟；第二阶段，以10～15°c/min的速度继续加热至100～105℃，在压力0.06～0.08mpa下保温处理10～15分钟；第三阶段，以5～10°c/min的速度继续加热至115℃，以115℃的高温蒸汽继续保温处理15～20分钟，得到湿热椰子蛋白浆液。
优选的，所述步骤三中一次酶解的过程如下：调节湿热椰子蛋白浆液的ph至7～9，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，酶解反应温度为50～60℃，酶解反应时间为1～3小时，超声功率为20～40khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。
优选的，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶+胰酶，所述纤维素酶：糖化酶：胰酶的比例为1：2：4，且一次复合酶的加酶量为湿热椰子蛋白浆液用量的2～2.5ug/g。
优选的，所述步骤四中二次酶解的过程如下：调节一次酶解液的ph至4～5，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，酶解反应温度为45～55℃，酶解反应时间为2～4小时，超声功率为20～40khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
优选的，所述二次复合酶采用木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶：复合风味蛋白酶的比例为2：3，且二次复合酶的加酶量为椰子蛋白浆液用量的2.5～3.5ug/g。
优选的，所述步骤五中微波灭酶的过程如下：对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为400～600w，微波灭酶温度为90～100℃，微波灭酶时间为2～3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却25～35分钟，离心,取上清液，再将上清液过膜，取滤液进行冷冻干燥处理，即得成品的椰子多肽。
优选的，所述椰子蛋白的吸水性为2.03～3.21g/g、吸油性为2.52～3.37g/g；所述椰子多肽的吸水性为1.82～2.23g/g、吸油性为2.52～3.05g/g。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：
（1）本发明提供的椰子多肽的制备方法，通过采用磷酸盐缓冲液替代传统的碱溶酸沉法制备椰子蛋白，由于椰子蛋白中主要含清单白和球蛋白，两者总量高达90%左右，因此采用磷酸盐缓冲液可充分溶解椰子粕粉原料中的蛋白成分，且采用磷酸盐缓冲液来提取蛋白条件更温和，易控制，对蛋白伤害小。
（2）通过对椰子蛋白进行分阶段加热加压处理，可有效提高后续一次酶解和二次酶解的效率，前面两阶段加热加压处理，可使其高度压缩的结构松散开，暴露出分子内部的酶作用位点以利酶的结合，改善反应条件，加快反应速度，提高反应效率；第三阶段选择高温蒸汽处理能够使蛋白质充分变性，水解度可以大大提高，不仅显著地提高了酶解效率，还有利于降低酶解工艺的成本。
（3）通过对一次酶解时采用一定比例的纤维素酶+糖化酶+胰酶组成的复合酶进行酶解，不仅有效提高椰子蛋白的水解率，还能有效去除一些糖类等假蛋白，显著提高了椰子多肽的纯度。
（4）通过二次酶解时采用一定比例的木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，不仅进一步充分水解椰子蛋白，并且复合风味蛋白酶通过内切蛋白酶切断多肽内部的肽键，形成短链肽，其中一些含有疏水氨基酸，因而成为苦肽，使用外切酶每一次从多肽链的末端切断释放一个氨基酸，从而把苦肽彻底降解为氨基酸，从而去除多肽苦味，改善口感，增强和改善了多肽的风味。
（5）该椰子多肽的制备方法，工艺安全、纯度高、风味较佳、制备便捷。
附图说明
图1是本发明所述椰子多肽的制备方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
如图1所示，本发明提供了一种椰子多肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、椰子蛋白的制备：将椰子去椰衣、破壳、取椰肉、去掉椰肉上的种皮、将椰肉刨丝，然后冷冻干燥得到低变性椰干，将椰干采用正己烷浸泡，脱除溶剂后得到脱脂椰子粕，其残油量为0.7～0.9%，将脱脂椰子粕粉碎过60～80目筛，即得椰子粕粉原料；将椰子粕粉原料与0.2mol/l的碱性磷酸盐缓冲液按料液比1：8～12混匀制成椰子粕粉浆液，调节椰子粕粉浆液ph至9～10，并进行超声辅助处理3～4小时，超声温度为45～55℃，超声功率为40～50khz，待处理结束，离心得到上层清液，再加入酸性磷酸盐缓冲液调节上层清液ph至4.5进行酸沉处理1.0～1.5小时，待酸沉处理结束，静置25～35分钟，再离心得到下层沉淀，将下层沉淀水洗至中性，并进行冷冻干燥处理，即得到椰子蛋白，所述椰子蛋白的吸水性为2.03～3.21g/g、吸油性为2.52～3.37g/g。
步骤二、蛋白预处理：第一阶段，将椰子蛋白与蒸馏水按料液比1：8～12混匀，并加热至90～95℃，在压力0.02～0.04mpa下保温处理5～10分钟；第二阶段，以10～15°c/min的速度继续加热至100～105℃，在压力0.06～0.08mpa下保温处理10～15分钟；第三阶段，以5～10°c/min的速度继续加热至115℃，以115℃的高温蒸汽继续保温处理15～20分钟，得到湿热椰子蛋白浆液。
步骤三、一次酶解：调节湿热椰子蛋白浆液的ph至7～9，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶+胰酶，所述纤维素酶：糖化酶：胰酶的比例为1：2：4，且一次复合酶的加酶量为湿热椰子蛋白浆液用量的2～2.5ug/g，酶解反应温度为50～60℃，酶解反应时间为1～3小时，超声功率为20～40khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。
步骤四、二次酶解：调节一次酶解液的ph至4～5，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶：复合风味蛋白酶的比例为2：3，且二次复合酶的加酶量为椰子蛋白浆液用量的2.5～3.5ug/g，酶解反应温度为45～55℃，酶解反应时间为2～4小时，超声功率为20～40khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。
步骤五、微波灭酶：对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为400～600w，微波灭酶温度为90～100℃，微波灭酶时间为2～3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却25～35分钟，离心,取上清液，再将上清液过膜，取滤液进行冷冻干燥处理，即得成品的椰子多肽，所述椰子多肽的吸水性为1.82～2.23g/g、吸油性为2.52～3.05g/g。
实施例1：
将椰子去椰衣、破壳、取椰肉、去掉椰肉上的种皮、将椰肉刨丝，然后冷冻干燥得到低变性椰干，将椰干采用正己烷浸泡，脱除溶剂后得到脱脂椰子粕，其残油量为0.7%，将脱脂椰子粕粉碎过60目筛，即得椰子粕粉原料；将椰子粕粉原料与0.2mol/l的碱性磷酸盐缓冲液按料液比1：8混匀制成椰子粕粉浆液，调节椰子粕粉浆液ph至9，并进行超声辅助处理3小时，超声温度为45℃，超声功率为40khz，待处理结束，离心得到上层清液，再加入酸性磷酸盐缓冲液调节上层清液ph至4.5进行酸沉处理1.0小时，待酸沉处理结束，静置25分钟，再离心得到下层沉淀，将下层沉淀水洗至中性，并进行冷冻干燥处理，即得到椰子蛋白，所述椰子蛋白的吸水性为2.03g/g、吸油性为2.52g/g。蛋白预处理：第一阶段，将椰子蛋白与蒸馏水按料液比1：8混匀，并加热至90℃，在压力0.02mpa下保温处理5分钟；第二阶段，以10°c/min的速度继续加热至100℃，在压力0.06mpa下保温处理10分钟；第三阶段，以5°c/min的速度继续加热至115℃，以115℃的高温蒸汽继续保温处理15分钟，得到湿热椰子蛋白浆液。调节湿热椰子蛋白浆液的ph至7，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶+胰酶，所述纤维素酶：糖化酶：胰酶的比例为1：2：4，且一次复合酶的加酶量为湿热椰子蛋白浆液用量的2ug/g，酶解反应温度为50℃，酶解反应时间为1小时，超声功率为20khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。调节一次酶解液的ph至4，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶：复合风味蛋白酶的比例为2：3，且二次复合酶的加酶量为椰子蛋白浆液用量的2.5ug/g，酶解反应温度为45℃，酶解反应时间为2小时，超声功率为20khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为400w，微波灭酶温度为90℃，微波灭酶时间为2分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却25分钟，离心,取上清液，再将上清液过膜，取滤液进行冷冻干燥处理，即得成品的椰子多肽，所述椰子多肽的吸水性为1.82g/g、吸油性为2.52g/g。
实施例2：
将椰子去椰衣、破壳、取椰肉、去掉椰肉上的种皮、将椰肉刨丝，然后冷冻干燥得到低变性椰干，将椰干采用正己烷浸泡，脱除溶剂后得到脱脂椰子粕，其残油量为0.9%，将脱脂椰子粕粉碎过80目筛，即得椰子粕粉原料；将椰子粕粉原料与0.2mol/l的碱性磷酸盐缓冲液按料液比1：12混匀制成椰子粕粉浆液，调节椰子粕粉浆液ph至10，并进行超声辅助处理4小时，超声温度为55℃，超声功率为50khz，待处理结束，离心得到上层清液，再加入酸性磷酸盐缓冲液调节上层清液ph至4.5进行酸沉处理1.5小时，待酸沉处理结束，静置35分钟，再离心得到下层沉淀，将下层沉淀水洗至中性，并进行冷冻干燥处理，即得到椰子蛋白，所述椰子蛋白的吸水性为3.21g/g、吸油性为3.37g/g。蛋白预处理：第一阶段，将椰子蛋白与蒸馏水按料液比1：12混匀，并加热至95℃，在压力0.04mpa下保温处理10分钟；第二阶段，以15°c/min的速度继续加热至105℃，在压力0.08mpa下保温处理15分钟；第三阶段，以10°c/min的速度继续加热至115℃，以115℃的高温蒸汽继续保温处理20分钟，得到湿热椰子蛋白浆液。调节湿热椰子蛋白浆液的ph至9，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶+胰酶，所述纤维素酶：糖化酶：胰酶的比例为1：2：4，且一次复合酶的加酶量为湿热椰子蛋白浆液用量的2.5ug/g，酶解反应温度为60℃，酶解反应时间为3小时，超声功率为40khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。调节一次酶解液的ph至5，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶：复合风味蛋白酶的比例为2：3，且二次复合酶的加酶量为椰子蛋白浆液用量的3.5ug/g，酶解反应温度为55℃，酶解反应时间为4小时，超声功率为40khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为600w，微波灭酶温度为100℃，微波灭酶时间为3分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却35分钟，离心,取上清液，再将上清液过膜，取滤液进行冷冻干燥处理，即得成品的椰子多肽，所述椰子多肽的吸水性为2.23g/g、吸油性为3.05g/g。
实施例3：
将椰子去椰衣、破壳、取椰肉、去掉椰肉上的种皮、将椰肉刨丝，然后冷冻干燥得到低变性椰干，将椰干采用正己烷浸泡，脱除溶剂后得到脱脂椰子粕，其残油量为0.8%，将脱脂椰子粕粉碎过70目筛，即得椰子粕粉原料；将椰子粕粉原料与0.2mol/l的碱性磷酸盐缓冲液按料液比1：10混匀制成椰子粕粉浆液，调节椰子粕粉浆液ph至9.5，并进行超声辅助处理3.5小时，超声温度为50℃，超声功率为45khz，待处理结束，离心得到上层清液，再加入酸性磷酸盐缓冲液调节上层清液ph至4.5进行酸沉处理1.2小时，待酸沉处理结束，静置30分钟，再离心得到下层沉淀，将下层沉淀水洗至中性，并进行冷冻干燥处理，即得到椰子蛋白，所述椰子蛋白的吸水性为2.62g/g、吸油性为2.95g/g。蛋白预处理：第一阶段，将椰子蛋白与蒸馏水按料液比1：10混匀，并加热至92℃，在压力0.03mpa下保温处理8分钟；第二阶段，以12°c/min的速度继续加热至102℃，在压力0.07mpa下保温处理12分钟；第三阶段，以8°c/min的速度继续加热至115℃，以115℃的高温蒸汽继续保温处理18分钟，得到湿热椰子蛋白浆液。调节湿热椰子蛋白浆液的ph至8，并加入一次复合酶进行超声辅助酶解，所述一次复合酶采用纤维素酶+糖化酶+胰酶，所述纤维素酶：糖化酶：胰酶的比例为1：2：4，且一次复合酶的加酶量为湿热椰子蛋白浆液用量的2.2ug/g，酶解反应温度为55℃，酶解反应时间为2小时，超声功率为30khz，待一次酶解反应结束，得到一次酶解液。调节一次酶解液的ph至4.5，并加入二次复合酶进行超声辅助酶解，所述二次复合酶采用木瓜蛋白酶+复合风味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶：复合风味蛋白酶的比例为2：3，且二次复合酶的加酶量为椰子蛋白浆液用量的3ug/g，酶解反应温度为50℃，酶解反应时间为3小时，超声功率为30khz，待二次酶解反应结束，得到二次酶解液。对二次酶解液进行微波灭酶处理，微波功率为500w，微波灭酶温度为95℃，微波灭酶时间为2.5分钟，待微波灭酶结束，得到灭酶酶解液；静置冷却30分钟，离心,取上清液，再将上清液过膜，取滤液进行冷冻干燥处理，即得成品的椰子多肽，所述椰子多肽的吸水性为2g/g、吸油性为2.79g/g。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。