并且涉及其药学上适合的酸加成盐。
在本文中所公开并且由以上式i所涵盖的化合物可以展现出互变异构性。预期的是，本发明包括该化合物的任何互变异构形式或此类形式的混合物，并且不限于在以上式中描绘的任一种互变异构形式。
现在已经发现，式i的化合物(5-乙基-4-甲基-n-[4-[(2s)吗啉-2-基]苯基]-1h-吡唑-3-甲酰胺)对痕量胺相关受体(traceamineassociatedreceptor,taar)、尤其是taar1具有良好的亲和力，并且具有与现有技术的化合物相比更少的副作用。
已经在wo2011/076678和wo2012/16826中公开了小鼠taar1和大鼠taar1的类似配体。
式i的化合物及其药学上可用的加成盐拥有有价值的药理学性质。具体地，已经发现，本发明的化合物是人痕量胺相关受体1(htaar1)的部分激动剂。
本发明的化合物与现有技术的化合物相比具有明显的优点，所述优点是
-对人taar1受体的强效激动活性，
-针对多巴胺转运蛋白(dat)的选择性，
-针对herg离子通道的选择性，
-低两亲性矢量(amphiphilicvector)并且从而产生低的导致药物诱导的磷脂沉积(drug-inducedphospholipidosis,dipl)的风险(见下页)。
式i的化合物因此可以用作用于治疗下列各项的安全药物：抑郁症(depression)、焦虑症(anxietydisorders)、双相型精神障碍(bipolardisorder)、注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivitydisorder,adhd)、应激相关障碍(stress-relateddisorders)、精神病性精神障碍(psychoticdisorders)如精神分裂症(schizophrenia)、神经病(neurologicaldiseases)如帕金森病(parkinson’sdisease)、神经变性疾病(neurodegenerativedisorders)如阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)、癫痫(epilepsy)、偏头痛(migraine)、高血压(hypertension)、成瘾(addiction)、精神药物滥用(substanceabuse)和代谢性疾病(metabolicdisorders)如进食障碍(eatingdisorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并发症(diabeticcomplications)、肥胖症(obesity)、异常脂肪血症(dyslipidemia)、能量消耗和同化障碍(disordersofenergyconsumptionandassimilation)、体温稳态紊乱和功能障碍(disordersandmalfunctionofbodytemperaturehomeostasis)、睡眠和昼夜节律障碍(disordersofsleepandcircadianrhythm)、以及心血管疾病(cardiovasculardisorders)。
经典的生物胺(血清素，去甲肾上腺素，肾上腺素，多巴胺，组胺)在中枢和外周神经系统中作为神经递质发挥重要的作用[1]。它们的合成和储存，以及它们在释放后的降解和再吸收被严格调节。已知生物胺水平的不平衡在很多病理条件下是造成改变的脑功能的原因[2-5]。第二类的内源胺化合物，即通常所说的痕量胺(ta)与经典的生物胺在结构、新陈代谢和亚细胞定位方面显著地重叠。ta包括对酪胺、β-苯基乙胺、色胺和章鱼胺(octopamine)，并且它们在哺乳动物神经系统中以通常比经典的生物胺低的水平存在[6]。
ta的调节异常与多种精神病学疾病相关，如精神分裂症和抑郁症[7]，以及其他病况，如注意缺陷多动障碍、偏头痛、帕金森病、精神药物滥用和进食障碍[8,9]。
长期以来，ta特异性受体仅是基于人类和其他哺乳动物的cns中解剖学上截然不同的高亲和力ta结合部位而猜测的[10,11]。因此，ta的药理学作用被认为是经由众所周知的经典生物胺的机制通过如下而介导的：通过引起它们的释放、抑制它们的再吸收或通过与它们的受体体系“交叉反应”介导[9,12,13]。随着gpcr的新家族的多个成员、即痕量胺相关受体(taar)的鉴定，该观点明显地改变[7,14]。在人类中存在9种taar基因(包括3种假基因)并且在小鼠中存在16种基因(包括1种假基因)。taar基因不含有内含子(有一个例外，taar2含有1个内含子)并且在相同的染色体节段上位于彼此相临的位置。与深入的gpcr药效团相似性比较一致的受体基因的系统发育关系以及药理学数据暗示：这些受体形成三个不同的亚族[7,14]。taar1在人类与啮齿动物之间高度保守的第一亚类的四种基因(taar1-4)中。ta通过gα活化taar1。已显示ta的调节异常有助于多种疾病的病因学，所述疾病如抑郁症(depression)、焦虑症(anxietydisorders)、双相型精神障碍(bipolardisorder)、注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivitydisorder,adhd)、应激相关障碍(stress-relateddisorders)、精神病性精神障碍(psychoticdisorders)如精神分裂症(schizophrenia)、神经病(neurologicaldiseases)如帕金森病(parkinson’sdisease)、神经变性疾病(neurodegenerativedisorders)如阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)、癫痫(epilepsy)、偏头痛(migraine)、高血压(hypertension)、成瘾(addiction)、精神药物滥用(substanceabuse)和代谢性疾病(metabolicdisorders)如进食障碍(eatingdisorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并发症(diabeticcomplications)、肥胖症(obesity)、异常脂肪血症(dyslipidemia)、能量消耗和同化障碍(disordersofenergyconsumptionandassimilation)、体温稳态紊乱和功能障碍(disordersandmalfunctionofbodytemperaturehomeostasis)、睡眠和昼夜节律障碍(disordersofsleepandcircadianrhythm)、以及心血管疾病(cardiovasculardisorders)。
因此，对于增加关于痕量胺相关受体的知识存在广泛的兴趣。
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本发明的目的是式i的新型化合物及其药用盐，其用于治疗与痕量胺相关受体的生物功能相关的疾病的用途，它们的制备和用于控制或预防以下疾病的基于根据本发明的化合物的药物，所述疾病如抑郁症(depression)、焦虑症(anxietydisorders)、双相型精神障碍(bipolardisorder)、注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivitydisorder)、应激相关障碍(stress-relateddisorders)、精神病性精神障碍(psychoticdisorders)如精神分裂症(schizophrenia)、神经病(neurologicaldiseases)如帕金森病(parkinson’sdisease)、神经变性疾病(neurodegenerativedisorders)如阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)、癫痫(epilepsy)、偏头痛(migraine)、精神药物滥用(substanceabuse)、成瘾(addiction)和代谢性疾病(metabolicdisorders)如进食障碍(eatingdisorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并发症(diabeticcomplications)、肥胖症(obesity)、异常脂肪血症(dyslipidemia)、能量消耗和同化障碍(disordersofenergyconsumptionandassimilation)、体温稳态紊乱和功能障碍(disordersandmalfunctionofbodytemperaturehomeostasis)、睡眠和昼夜节律障碍(disordersofsleepandcircadianrhythm)、以及心血管疾病(cardiovasculardisorders)。
本发明的式i的化合物及其药用盐可以通过本领域中已知的方法制备，例如，通过下述方法，所述方法包括
a)从下式的化合物裂开n-保护基团(pg)
成为下式化合物，
其中pg是选自-c(o)o-叔丁基(boc)的n-保护基团，和
如果需要，将得到的所述化合物转化为药用酸加成盐。
一般过程
方案1
起始材料1,1’和2是可商购获得的或者可以通过在本领域内公知的方法制备。外消旋2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(casrn：1002726-96-6)是可商购获得的。(2r)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(casrn：1260220-42-5)是可商购获得的。(2s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(casrn：1260220-43-6)是可商购获得的，或可以按照在文献中描述的进行制备，例如按照在trussardi,r.&iding,h,pct国际申请wo2015/086495a1中描述的。
步骤a：在偶联试剂如dcc、edc、tbtu或hatu的存在下，在有机碱如三乙胺、n,n-二异丙基乙胺或n-甲基吗啉的存在下，在卤化的溶剂如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或或醚溶剂如二乙醚、二
优选的条件是tbtu与n-甲基吗啉在thf中在50-60℃下历时12-48小时。
备选地，在卤化的溶剂如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚溶剂如二乙醚、二
优选的条件是三乙胺在thf中在室温下历时18小时。
如果需要，通过用草酰氯在卤化的溶剂如二氯甲烷或1,2-二氯乙烷或醚溶剂如二乙醚、二
优选的条件是二氯乙烷在室温下历时1小时。
备选地，根据ghosez和同事的方法(j.chem.soc.,chem.commun.1979,1180；org.synth.1980,59,26-34)通过用1-氯-n,n,2-三甲基丙烯基胺[cas26189-59-3]在二氯甲烷中处理，接着在真空中移除溶剂，可以由相应的羧酸1原位制备酰氯化合物1’。
步骤b：bocn-保护基团的移除可以用无机酸如hcl、h2so4或h3po4或有机酸如cf3cooh、chcl2cooh、hoac或对甲苯磺酸在溶剂如ch2cl2、chcl3、thf、meoh、etoh或h2o中在0至80℃下进行。
优选的条件是cf3cooh在乙腈水溶液中在80℃下历时3小时或4nhcl在二
在已经使用外消旋起始材料2的情况下，可以通过使用手性hplc将所得的吗啉化合物i’的外消旋混合物分离为其组成的对映异构体。备选地，通过从对映体纯的化合物2开始，可以以对映体纯的形式得到化合物i。
化合物的分离和纯化
如果需要，本文所描述的化合物和中间体的分离和纯化可以通过任意适合的分离或纯化程序完成，如例如，过滤、萃取、结晶、柱色谱、薄层色谱、厚层色谱、制备型低压或高压液相色谱或这些程序的组合。适合的分离和离析程序的具体说明可以通过参考在下面在本文中的制备和实施例而得到。然而，当然也可以使用其他等价的分离或离析程序。手性的式i的化合物的外消旋混合物可以使用手性hplc分离。手性合成中间体的外消旋混合物也可以使用手性hplc分离。
式i的化合物的盐
式i的化合物是碱性的并且可以转化为相应的酸加成盐。该转化通过用至少化学计量的合适的酸处理来完成，所述酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，以及有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。典型地，将游离碱溶解在惰性有机溶剂如二乙醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇或甲醇等中，并且将酸加入相似的溶剂中。将温度保持在0℃至50℃之间。所得到的盐自发地沉淀或可以用极性较小的溶剂使其从溶液中析出。
实施例1
5-乙基-4-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-1h-吡唑-3-甲酰胺
a)(2s)-2-[4-[(5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-羰基)氨基]苯基]吗啉-4-甲酸叔丁酯
向(2s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(casrn：1260220-43-6，350mg，1.26mmol，1.00当量)和5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸(casrn：957129-38-3，245mg，1.51mmol，1.20当量)在thf(8ml)中的搅拌溶液中加入tbtu(807mg，2.51mmol，2.00当量)和n-甲基吗啉(509mg，553μl，5.03mmol，4.00当量)。将反应混合物在50℃下搅拌15h。在t＝15h的tlc显示反应完成。将反应混合物在真空中浓缩。将粗物质通过快速色谱(硅胶，洗脱液：在庚烷中的0％至100％etoac)纯化以得到作为灰白色固体的(2s)-2-[4-[(5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-羰基)氨基]苯基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(501mg，96％)。ms(isp)：413.7([m-h]-)。
b)5-乙基-4-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-1h-吡唑-3-甲酰胺
向三氟乙酸(1.37g，918μl，12.0mmol，10当量)在水(8ml)中的搅拌溶液中加入(2s)-2-[4-[(5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-羰基)氨基]苯基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(497mg，1.2mmol，1.00当量)在乙腈(4ml)中的悬浮液。将反应混合物在80℃下搅拌3h。在t＝3h的ms显示反应完成。将反应混合物倒入1mnaoh水溶液中并且用etoac萃取两次。将有机层经过na2so4干燥并且在真空中浓缩。将粗物质通过快速柱色谱(siliaseptm胺筒，洗脱液：在庚烷中的0％至100％etoac，然后在etoac中的0％至10％meoh)纯化以得到作为灰白色固体的5-乙基-4-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-1h-吡唑-3-甲酰胺(327mg，87％)。ms(isp)：315.7([m+h]+)。
实施例2(比较例)
5-乙基-4-甲基-n-[4-[(2r)-吗啉-2-基]苯基]-1h-吡唑-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用(2r)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸酯(casrn：1260220-42-5)代替(2s)-2-(4-氨基苯基)吗啉-4-甲酸酯，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：315.6([m+h]+)。
实施例3(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-6-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用6-(2,2,2-三氟乙氧基)烟酸(casrn：159783-29-6)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：382.1([m+h]+)。
实施例4(比较例)
6-氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用6-氯-烟酸(casrn：5326-23-8)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：320.1([{37cl}m+h]+),318.2([{35cl}m+h]+)。
实施例5(比较例)
2-氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-氯-异烟酸(casrn：6313-54-8)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：320.1([{37cl}m+h]+),318.1([{35cl}m+h]+)。
实施例6(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-2-苯基-1,3-噻唑-5-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-苯基噻唑-5-羧酸(casrn：10058-38-5)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：366.1([m+h]+)。
实施例7(比较例)
2,6-二氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2,6-二氯-异烟酸(casrn：5398-44-7)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：356.1([{37cl}m+h]+),354.1([{37cl35cl}m+h]+),352.1([{35cl}m+h]+)。
实施例8(比较例)
4-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-5-苯基-1h-吡唑-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用4-甲基-5-苯基-1h-吡唑-3-甲酸(casrn：879770-33-9)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：363.2([m+h]+)。
实施例9(比较例)
5,6-二氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用5,6-二氯-烟酸(casrn：41667-95-2)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：356.1([{37cl35cl}m+h]+),354.1([{37cl}m+h]+),352.1([{35cl}m+h]+)。
实施例10(比较例)
6-氰基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用6-氰基-烟酸(casrn：70165-31-0)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：309.1([m+h]+)。
实施例11(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-6-(三氟甲基)吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用6-(三氟甲基)烟酸(casrn：158063-66-2)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：352.2([m+h]+)。
实施例12(比较例)
5-氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-2-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用5-氯-吡啶甲酸(casrn：86873-60-1)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：320.1([{37cl}m+h]+),318.2([{35cl}m+h]+)。
实施例13(比较例)
5-氯-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用5-氯-烟酸(casrn：22620-27-5)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：320.1([{37cl}m+h]+),318.1([{35cl}m+h]+)。
实施例14(比较例)
2-氯-6-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-氯-6-甲基吡啶-4-羧酸(casrn：25462-85-5)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：334.1([{37cl}m+h]+),332.1([{35cl}m+h]+)。
实施例15(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-2-苯基-1,3-
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-苯基
实施例16(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-2-苯基-1,3-噻唑-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-苯基噻唑-4-羧酸(casrn：7113-10-2)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：366.1([m+h]+)。
实施例17(比较例)
2-甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-甲基-异烟酸(casrn：4021-11-8)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：298.2([m+h]+)。
实施例18(比较例)
2,6-二甲基-n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]吡啶-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2,6-二甲基-异烟酸(casrn：54221-93-1)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：312.2([m+h]+)。
实施例19(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-2-甲基-1,3-噻唑-4-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用2-甲基噻唑-4-羧酸(casrn：35272-15-2)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：304.1([m+h]+)。
实施例20(比较例)
n-[4-[(2s)-吗啉-2-基]苯基]-1-苯基吡唑-3-甲酰胺
类似于实施例1，在步骤(a)中使用1-苯基-1h-吡唑-3-甲酸(casrn：4747-46-0)代替5-乙基-4-甲基-1h-吡唑-3-甲酸，得到标题化合物。白色固体。ms(isp)：349.2([m+h]+)。
如以上提及的，本发明的化合物与现有技术的化合物相比具有明显的优点，所述优点是对人taar1受体的强效激动活性，针对多巴胺转运蛋白(dat)的选择性，针对herg离子通道的选择性，低两亲性矢量并且从而产生低的导致药物诱导的磷脂沉积(drug-inducedphospholipidosis,dipl)的风险(见下页)。
可以提供以下比较数据和评述以示出式i的化合物与现有技术的已知化合物相比的优越性优点。
1.人痕量胺相关受体1(htaar1)的部分激动剂的药理学作用和治疗可能性
在啮齿动物和人taar1之间的配体-受体相互作用中存在明显物种差异的证据[1]。因此，当选择化合物用作用于治疗taar1相关疾病的人治疗剂时，重要的是基于它们对taar1受体的人形式(htaar1)的功能活性的效力优先考虑候选化合物。htaar1是g蛋白偶联跨膜受体(gpcr)，其中配体可以起受体的拮抗剂、激动剂、部分激动剂或反向激动剂的作用。已经体外测试了式i的化合物和比较例对htaar1的功能活性，其中发现式i的化合物是htaar1的部分激动剂。在表1中示出了式i的化合物的实验确定的htaar1ec50值和比较例的选择(见下页)。因此尤其发现实施例1的化合物在体外是htaar1的强效部分激动剂。
在腹侧被盖区和背缝神经核中的离体电生理学实验显示，taar1部分激动剂在野生型小鼠中提高了da和5-ht神经元放电速率[2,3]，而完全激动剂如对酪胺降低放电速率[3,4]。然而，已经显示完全和部分激动剂二者针对精神兴奋剂可卡因的奖赏和强化作用是保护性的[5]。而完全激动剂如安非他明(amphetamine)诱导负反馈，以减弱它们本身对da和5-ht系统的作用[6、7]，部分激动剂可以通过增加经由taar1的放电速率而增加它们对神经元信号传输的作用。因为这些发现以及taar1部分激动剂在啮齿动物中具有比完全激动剂更丰富的体内药理学性质的报道[3、8]，所以出现了强有力的临床前证据，表明taar1部分激动剂显示出用作用于治疗包括但不限于精神分裂症、双相性精神障碍、抑郁症、帕金森病在内的cns疾病以及用于治疗酒精和药物成瘾的人治疗剂的非常有前景的可能性。
例如，通过显示出具有改善的认知和心情的益处以及具有降低的副作用概况(例如，未诱发对于当前抗精神病药所见到的代谢综合征)的抗精神病功效，提出了taar1部分激动剂优于现有的非典型抗精神病药物[3、8]。其他文献表明，可能的适应症包括双相性精神障碍[8]、药物成瘾[5,9]、和糖尿病[10]。
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2.多巴胺转运蛋白(dat)和药物滥用和/或成瘾可能性的相关倾向
多巴胺转运蛋白(dat)的药理学尤其涉及精神兴奋作用并且涉及某些精神兴奋药物如可卡因和mdpv的滥用倾向和成瘾机制。[1-3]因此，对于预期用于人用途的新型治疗剂来说，希望避免多巴胺转运蛋白dat的抑制或与其的相互作用，从而使滥用倾向或成瘾可能性的风险最小化。
例如，证据表明，可卡因的强化作用依赖于其迅速阻断多巴胺转运蛋白(dat)的能力。在动物研究中，还自施用除可卡因外的多巴胺再吸收抑制剂，其具有通常与其在抑制dat而不是血清素或去甲肾上腺素转运蛋白(sert、net)方面的效力正相关的相对效力[4-8]。被训练自施用可卡因的动物还将会自施用直接多巴胺激动剂[9-11]。此外，多巴胺神经末梢的破坏可能会导致可卡因自施用行为的消失[12、13]，并且即使当保持由其他强化剂维持的响应时，也已经观察到这些作用[14、15]。在人类中，可卡因诱导的“兴奋(high)”与在脑中的dat占有率相关[16]。
为了进一步测试dat对可卡因强化作用来说是必需的假设，生成并且在小鼠中表达功能性但是“可卡因不敏感”的dat[17、18]。相对于野生型dat，这种突变dat显示出对可卡因89倍低的亲和力，并且可卡因无法增加在伏隔核中的细胞外多巴胺，也无法诱导表达这种突变dat的敲入(datki)小鼠中的自发活动、刻板动作、或条件性位置偏好的增加[18-20]。此外，可卡因无法在这些datki小鼠中充当正增强剂，而食品、d-安非他明、和直接多巴胺激动剂可靠地将在这些小鼠中的操作性行为维持在与野生型小鼠相当的水平[21]。可卡因敏感的野生型dat向尤其包括腹侧被盖区(vta)的脑区域的再引入导致在datki小鼠中的可卡因奖赏行为的恢复[22]。总之，可卡因阻断dat的能力足以消除其在小鼠中的强化作用，这提供了强有力的证据：dat阻断对于可卡因的强化作用来说是至关重要的。
因此，总之，这些发现表明，对于预期用于人用途的新型治疗剂来说，希望避免多巴胺转运蛋白dat的抑制或与其的相互作用，从而使滥用倾向或成瘾可能性的风险最小化。
在表1中示出了针对一系列taar1化合物的测量的体外datki(见下页)。已经意外地发现，与其他化合物相比，实施例1是针对dat的明显较弱的配体，而同时是htaar1的强效部分激动剂，并且因此对于实施例1来说htaar1/dat选择比明显高于其他化合物。
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3.herg阻断和心脏qt间期延长的相关倾向
对于预期用于在人中安全使用的治疗剂来说，尤其是对于预期用于长期治疗方案的药物来说，导致药物诱导的心脏副作用的可能性的最小化是非常合乎需要的。近年来，针对延长心脏qt间期的治疗剂的使用，监管机构已经推迟了批准或施加了限制，并且甚至拒绝了批准或从市场上移除。qt间期是心电图(ecg)从qrs波群的起点到t波的终点的时间，并且是心室去极化和复极化的持续时间的量度。延长qt间期的药物与被称为尖端扭转型室性心动过速(torsadesdepointes,tdp)的多形性室性心动过速(polymorphicventriculartachycardia)相关。这种心律失常(arrhythmia)可能会导致严重的心血管后果，并且可能会发展为不可逆的心室纤维化和死亡。ichs7b监管指引[1]推荐了用于评价新型分子实体(nme)的心血管风险的整体非临床策略，其包括体外ikr测定[由人类醚a-go-go(human-ether-a-go-go)相关基因(herg)引导的钾电流]。确定了herg的抑制为qt延长的主要机制。[2]因此，推荐的最小非临床qt间期去风险化策略是测试来自在体外herg测定中给出的化学系列的代表性化合物。[3]目标是选择在比对于治疗活性来说有效的体外(或如果可用的话，体内)浓度至少30倍低的浓度下导致不大于20％的herg抑制的化合物。在taar1激动剂的情况中，可以将htaar1ec50认为是预测治疗活性的相关的体外浓度(见上)。因此，希望选择其中hergic20/htaar1ec50的比是至少30倍的taar1激动剂。
在表1中示出了针对一系列taar1化合物的测量的体外hergic20和ic50(见下页)。
已知碱性化合物尤其特别易于导致herg通道的强效抑制。[4]所有taar1化合物都带有相同的吗啉代头部基团，因此预期所有化合物都是类似地碱性的。对于对htaar1的激动剂活性来说，碱性部分是必需的。已经意外地发现，与比较化合物相比，实施例1是明显较弱的herg通道抑制剂，并且因此对于实施例1来说hergic20/htaar1ec50比明显高于推荐的30倍最小值。
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4.两亲性和药物诱导的磷脂沉积(dipl)的相关倾向
磷脂沉积(pld)是特征在于磷脂在组织中的过量积累的溶酶体贮积病症。[1][2][3]许多阳离子两亲性药物，包括抗抑郁药、抗心绞痛药、抗疟疾药、和降胆固醇药，据报道在动物和人中导致药物诱导的磷脂沉积(dipl)。dipl的机制涉及dipl药物的在受影响的细胞的溶酶体和酸性囊泡内的捕获或选择性吸收。药物捕获之后是药物-磷脂复合物在内部溶酶体膜内的逐渐积累。未消化的材料的增加引起组织中多板层体(髓样体)的异常积累。尽管主要认为磷脂沉积是贮积病症，但是对于一些化合物来说，已知贮积病症与导致受影响组织的功能性损害的炎症和坏死相关。因此特别希望治疗药物不应产生导致dipl的风险。在预期用于长期使用的药物，例如预期用于治疗慢性精神病症如精神分裂症、双相性精神障碍或抑郁症的药物，或预期用于治疗慢性代谢病症如糖尿病的药物的情况中，这尤其适用。
dipl是已知尤其与阳离子两亲性药物(cad)相关的不良反应。[4]为了避免dipl，需要降低化合物的碱性pka(碱性pka<6.3)或两亲性(δδgam>-6kjmol-1)(即需要增加δδgam)。[5]如果碱性pka值低于6.3或两亲性高于δδgam＝-6kjmol-1，则化合物被分类为dipl负。可以在计算机中直接由分子结构式计算给出的化合物的两亲性[6]，并且因此也可以在计算机中计算针对该化合物的预测的dipl的风险[5]，其中预测算法使用根据以下标准定义的dipl风险分类，所述标准基于从包括一大组化合物的实验确定的磷脂沉积结果的计算训练组中提取的参数：
两亲性矢量>-5.0kj/mol和bpka1≤5.60得到负dipl预测；
-7.0kj/mol<两亲性矢量<-5.0kj/mol和/或7.0>bpka1>5.60得到边界dipl预测；
两亲性矢量<-7.0kj/mol和bpka1≥7.00得到正dipl预测。
在表1中示出了针对一系列taar1化合物的计算的两亲性(以kjmol-1为单位的δδgam)以及在计算机中的dipl风险预测(负/边界/正)(见下页)。
所有taar1化合物都带有相同的吗啉代头部基团，因此所有化合物的碱性pka非常相似并且明显高于6.3。对于对htaar1的激动剂活性来说，碱性部分是必需的。因此，避免dipl的唯一方式是降低分子的骨架的亲油性。已经意外地发现，对于实施例1来说，与基于相似化合物的结果所预期的相比，明显地降低了亲油性，并且因此明显地降低了实施例1的两亲性，作为结果，预测这种化合物不导致dipl。
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根据在下文中给出的试验研究这些化合物。
材料和方法
人taar1
为了构建表达质粒，基本上如lindemann等[14]所述，从基因组dna扩增人taar1的编码序列。以1.5mmmg2+使用扩展高保真pcr系统(expandhighfidelitypcrsystem)(rochediagnostics)，并按照制造商的使用说明将纯化的pcr产物克隆至pcr2.1-topo克隆载体(invitrogen)中。将pcr产物亚克隆至piresneo2载体(bdclontech，paloalto，california)中，并且在引入细胞系中之前对表达载体进行序列证实。
基本上如lindemann等(2005)所述，培养hek293细胞(atcc#crl-1573)。为了产生稳定转染的细胞系，用含有taar编码序列的piresneo2表达质粒(上面描述)与lipofectamine2000(invitrogen)根据制造商的使用说明转染hek293细胞，并且转染后24小时，用1mg/mlg418(sigma，buchs，瑞士)补充培养基。在约10d的培养期之后，将克隆分离、扩增并用campbiotrak酶免疫测定(eia)系统(amersham)，按照由制造商提供的非乙酰化eia程序对其测定对痕量胺(所有化合物购自sigma)的反应性。将对于15个传代的培养期显示出稳定的ec50的单克隆细胞系用于所有随后的研究。
如先前描述的(revel等，proc.natl.acad.sci.usa2011,108,8485-8490)，进行camp测量。简而言之，将表达人taar1的细胞接种在96孔板(biocoat6640；bectondickinson,allschwil,瑞士)上并且在37℃下温育20h。在用宽浓度范围的激动剂将细胞在37℃下刺激30min之前，将细胞用pbs洗涤并用含有1mm3-异丁基-1-甲基黄嘌呤的pbs在37℃和5％co2下预温育10min。将用0.2％dmso的刺激设定为基础水平，并且将30μmβ-pea的作用设定为最大响应。随后，将细胞裂解，并且根据厂商使用说明进行camp测定(camp试剂盒；upstate/millipore,schaffhausen,瑞士)。最后，用照度计(1420多标签计数器；perkinelmer,schwerzenbach,瑞士)对平板进行读数，并且计算camp的量。结果由至少三个独立实验得到。实验一式两份或一式三份进行。给出ec50值作为平均值±标准差(以μm为单位)。针对taar1的功能活性数据的e最大值描述了与对于内源配体和完全激动剂β-pea来说的100％相比的功能活性的程度。
人dat
与多巴胺转运蛋白(dat)的体外结合。培养用人dat稳定转染的人胚胎肾(hek)293细胞(invitrogen,zug,瑞士)。将细胞收集并且用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤三次。将沉淀物在-80℃下冷冻。然后将沉淀物在400ml的ph7.4的含有10mmedta的20mmhepes-naoh中在4℃下重悬。在用polytron(kinematica,lucerne,瑞士)以10000转/分钟(rpm)均质化15s之后，将匀浆以48000xg在4℃下离心30min。将膜储液的等分试样在-80℃下冷冻。所有测定进行至少三次。将测试化合物在20ml的结合缓冲液(252mmnacl，5.4mmkcl，20mmna2hpo4，3.52mmkh2po4，ph7.4)中稀释，并且制作10点稀释曲线，并且转移至96孔白色聚苯乙烯测定平板(sigma-aldrich,buchs,瑞士)。[3h]-win35,428(～86ci/mmol；perkin-elmer)是用于dat测定的放射性配体并且具有12nm的kd。将五十毫升的[3h]-win35,428(～40nm浓度)加入至hdat测定平板的每个孔中，实现10nm的最终[3h]-win35428浓度。在测定平板中单独的二十毫升结合缓冲液定义为总结合，而在10μm吲达曲林的存在下的结合定义为非特异性结合。将冷冻的dat膜储液解冻并且使用polytron组织均化器重悬至大约0.04mg蛋白质/ml结合缓冲液(在h2o中1:1稀释)的浓度。然后以7.7mg珠/ml匀浆将膜匀浆(40μg/ml)与涂布有聚乙烯基甲苯(pct)麦芽凝集素的闪烁邻近测定(wgaspa；amershambiosciences)珠轻轻混合5-30min。将一百三十毫升膜/珠混合物加入至含有放射性配体和测试化合物的测定平板的每个孔中(在每个孔中的最终体积，200μl)以开始测定，将其在搅拌的情况下在室温下温育大约2h。然后以packardtopcount的pvtspa计数模式对测定平板进行计数。在packard1900ca液体闪烁计数器上在5ml的readysafe闪烁混合物(beckmanindustries)中对五十毫升的[3h]-win35428储液进行计数，以确定加入至相应测定的总数量。使用非线性回归将数据拟合为s型曲线并且确定结合和吸收的ic50值。使用以下cheng-prusoff方程式计算结合和吸收的ki值：ki＝ic50/(1+[s]/km)。
人erg(herg)
使用全细胞膜片钳(whole-cellpatch-clamp)技术研究在稳定转染的cho细胞中在生理温度附近(36±1℃)测试物对herg(人醚a-go-go相关基因)钾通道的影响。在4种浓度(0.3-3-30-300μm)下在至少3种稳定表达herg通道的细胞中评价化合物对hergk+电流参数的影响。为了进行电生理学测量，将细胞接种至含有2ml不具有潮霉素(hygromycin)b的培养基的35mm无菌培养皿上。在实现待测量的单细胞(不具有与相邻细胞的可见连接)的密度下对细胞进行培养。将细胞在37℃下在具有5％co2的加湿气氛(相对湿度约95％)中温育。在含有补充有10％胎牛血清和10％青霉素/链霉素溶液的营养物质混合物f-12(具有l-谷氨酰胺的dmem/f-12)的无菌培养瓶中将细胞连续维持并且传代。每天用选择性ikr阻断剂(e-4031，参照物)处理至少三种细胞以确保方法的准确性。将在其上以允许记录单细胞的密度接种细胞的35mm培养皿放置在显微镜的培养皿支架上并且在生理温度附近(36±1℃)用浴溶液(氯化钠150mm，氯化钾4mm，氯化钙1.2mm，氯化镁1mm，hepes10mm，ph(naoh)7.4)连续灌注(以大约1ml/min)。在贴片电极和单独的herg稳定转染的cho细胞之间形成千兆欧姆密封件(移液管电阻范围：2.0mω-7.0mω；密封件电阻范围：>1gω)之后，使在整个移液管尖端的细胞膜破裂以确保向细胞内部(全细胞贴片构造)的电气接入。在密封件的品质差的情况下，可以用不同的细胞和新的移液管重复密封件形成的过程。一形成稳定的密封件，就在细胞膜在50ms内去极化为-40mv并且之后在500ms内从-80mv的保持电位到+20mv(通道的活化)时，并且在随后在500ms内复极化为-40mv时，测量herg外向尾电流。这种电压方案以10s的间隔运行至少10次。如果判断电流密度对于测量来说过低，则记录另一种细胞。一旦已经完成控制记录，将细胞用含有测试物的浴溶液连续灌注。在测试物的洗涤期间，再次以10s间隔连续运行以上指出的电压方案，直到达到稳态的阻断水平。以累积方式依次向3种细胞施加四种测试物浓度的化合物。在通过测试物抑制herg尾电流时，生成浓度-响应曲线并且计算ic50值。基于ic50值，估算ic20。在三个实验(n＝3)中分析测试物的每个浓度。
两亲性矢量(δδgam)计算和在计算机中的dipl预测
根据公开的算法由式i的化合物和比较化合物的分子结构式，通过计算确定两亲性(δδgam)和在计算机中的dipl预测(fischer,h.；kansy,m.；bur,d.；“cafca：用于计算带电药物分子的两亲性质的新型工具(cafca:anoveltoolforthecalculationofamphiphilicpropertiesofchargeddrugmolecules)”.chimia2000,54,640-645；fischer,h.；atzpodien,e.a.；csato,m；doessegger,l.；lenz,b.；schmitt,g.；singer,t.；“用于评估小药物如分子的磷脂沉积可能性的在计算机中的测定：使用多个数据组的训练、验证和修正(insilicoassayforassessingphospholipidosispotentialofsmalldruglikemolecules:training,validationandrefinementusingseveraldatasets)”.j.med.chem.2012,55,126-139)。
如在表1中所示，式i的化合物具有对htaar1的部分激动剂活性(以μm为单位的ec50)，对hdat的结合亲和力(以μm为单位的ki)，以及对herg的通道阻断活性(以μm为单位的ic20和ic50)。表1还示出了如使用上述程序计算的式i的化合物和比较化合物的计算的两亲性矢量(以kjmol-1为单位的δδgam)和在计算机中的磷脂沉积估算(对体外dipl和体内dipl的负/正/边界预测)。
已经意外地发现，与现有技术的其他taar1化合物相比，式i的化合物(实施例1)在对htaar1的强效激动剂活性、针对hdat的高选择性、针对herg的高选择性、低两亲性矢量和因此的低磷脂沉积风险方面显示出综合的优秀的性能组合。对表1的检查显示，实施例1具有对htaar1的强效部分激动剂活性(ec50＝0.059μm)，针对hdat具有高度选择性(ki＝27.5μm；选择比＝相对于htaar1ec50的471倍)，针对herg具有高度选择性(ic20＝36.2μm；选择比＝相对于htaar1ec50的619倍)，并且具有大大低于关于磷脂沉积担忧的阈值的低两亲性矢量(δδgam＝-3.47kjmol-1)(在计算机中的dipl风险预测＝负)。
对表1的检查显示，实施例1的相近的类似物与实施例1相比在一个或多个方面具有较差的性能。
例如，作为实施例1的r对映体的比较例2，对htaar1效力更低(ec50＝0.2632μm)，这教导了如在实施例1中的绝对立体化学的s构型是优选的，从而得到对htaar1较高的效力。
比较例3对herg明显效力更高(ic20＝1.97μm；选择比＝相对于htaar1ec50的52倍)并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-6.3kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例4对dat明显效力更高(ki＝2.5μm；选择比＝相对于htaar1ec50的40倍)并且还具有更高的两亲性矢量(δδgam＝-5.3kjmol-1)以及因此的边界dipl预测。
比较例5对dat明显效力更高(ki＝1.5μm；选择比＝相对于htaar1ec50的23倍)并且还具有更高的两亲性矢量(δδgam＝-5.9kjmol-1)以及因此的边界dipl预测。
比较例6对herg明显效力更高(ic20＝0.38μm；选择比＝相对于htaar1ec50的5倍)，对dat效力更高(ki＝5.9μm；选择比＝相对于htaar1ec50的74倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-8.46kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例7对herg明显效力更高(ic20＝3.57μm；选择比＝相对于htaar1ec50的43倍)，对dat明显效力更高(ki＝0.79μm；选择比＝相对于htaar1ec50的9倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-7.41kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例8对herg明显效力更高(ic20＝3.01μm；选择比＝相对于htaar1ec50的28倍)。
比较例9对htaar1效力更低(ec50＝0.144μm)，对herg明显效力更高(ic20＝1.14μm；选择比＝相对于htaar1ec50的8倍)，对dat明显效力更高(ki＝0.48μm；选择比＝相对于htaar1ec50的3倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-8.83kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例10对htaar1效力更低(ec50＝0.184μm)并且对herg效力更高(ic20＝5.78μm；选择比＝相对于htaar1ec50的31倍)。
比较例11对htaar1效力更低(ec50＝0.203μm)，对herg明显效力更高(ic20＝2.59μm；选择比＝相对于htaar1ec50的13倍)，对dat明显效力更高(ki＝2.33μm；选择比＝相对于htaar1ec50的12倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-6.18kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例12对htaar1效力更低(ec50＝0.212μm)，对herg明显效力更高(ic20＝3.21μm；选择比＝相对于htaar1ec50的15倍)，对dat明显效力更高(ki＝1.78μm；选择比＝相对于htaar1ec50的8倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-6.59kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例13对htaar1明显效力更低(ec50＝0.405μm)，对herg效力更高(ic20＝9.14μm；选择比＝相对于htaar1ec50的23倍)，对dat明显效力更高(ki＝1.31μm；选择比＝相对于htaar1ec50的3倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-6.23kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例14对htaar1明显效力更低(ec50＝0.447μm)，对dat明显效力更高(ki＝7.32μm；选择比＝相对于htaar1ec50的16倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-6.96kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例15对htaar1明显效力更低(ec50＝0.663μm)，对herg明显效力更高(ic20＝2.40μm；选择比＝相对于htaar1ec50的4倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-7.4kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例16对htaar1明显效力更低(ec50＝0.666μm)，对herg明显效力更高(ic20＝3.35μm；选择比＝相对于htaar1ec50的5倍)，并且还具有明显更高的两亲性矢量(δδgam＝-8.48kjmol-1)以及因此的正dipl预测。
比较例17对htaar1明显效力更低(ec50＝0.673μm)并且对dat效力更高(ki＝10.32μm；选择比＝相对于htaar1ec50的15倍)。
比较例18对htaar1明显效力更低(ec50＝0.827μm)并且还具有更高的两亲性矢量(δδgam＝-5.82kjmol-1)以及因此的边界dipl预测。
比较例19对htaar1明显效力更低(ec50＝1.025μm)并且对herg效力更高(ic20＝8.32μm；选择比＝相对于htaar1ec50的8倍)。
最后，比较例20对htaar1明显效力更低(ec50＝2.48μm)，对herg明显效力更高(ic20＝2.49μm；选择比＝相对于htaar1ec50的1倍)，并且还具有更高的两亲性矢量(δδgam＝-5.37kjmol-1)以及因此的边界dipl预测。
因此，考虑在表1中的所有数据，对于作为用于在人中治疗taar1相关病症、尤其是用于治疗慢性cns病症的预期用途来说，式i的化合物(实施例1)是总体上最优选的化合物，所述病症如抑郁症(depression)、焦虑症(anxietydisorders)、双相型精神障碍(bipolardisorder)、注意缺陷多动障碍(attentiondeficithyperactivitydisorder,adhd)、应激相关障碍(stress-relateddisorders)、精神病性精神障碍(psychoticdisorders)如精神分裂症(schizophrenia)、神经病(neurologicaldiseases)如帕金森病(parkinson’sdisease)、神经变性疾病(neurodegenerativedisorders)如阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)、癫痫(epilepsy)、偏头痛(migraine)、高血压(hypertension)、精神药物滥用(substanceabuse)、成瘾(addiction)和代谢性疾病(metabolicdisorders)如进食障碍(eatingdisorders)、糖尿病(diabetes)、糖尿病并发症(diabeticcomplications)、肥胖症(obesity)、异常脂肪血症(dyslipidemia)、能量消耗和同化障碍(disordersofenergyconsumptionandassimilation)、体温稳态紊乱和功能障碍(disordersandmalfunctionofbodytemperaturehomeostasis)、睡眠和昼夜节律障碍(disordersofsleepandcircadianrhythm)、以及心血管疾病(cardiovasculardisorders)。最优选的病症是精神分裂症、双相性精神障碍或抑郁症。
可以使用式i的化合物和式i的化合物的药用盐作为药物，例如以药用制剂的形式。药用制剂可以口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂的形式。然而，施用也可以是经直肠进行，例如以栓剂的形式，或者肠胃外进行，例如以注射溶液的形式。
可以用药学上惰性的无机或有机载体加工式i的化合物以用于制备药用制剂。例如，可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等作为用于片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬质明胶胶囊的那些载体。用于软明胶胶囊的适合的载体是，例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而，取决于活性物质的性质，在软明胶胶囊的情况中通常不需要载体。用于制备溶液和糖浆的适合的载体是，例如水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的适合的载体是，例如天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。
此外，药物制剂可以含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或者抗氧化剂。它们还可以含有其它的治疗上有价值的物质。
含有式i的化合物或其药用盐以及治疗上惰性的载体的药物也是本发明的目的，用于制备其的方法也是本发明的目的，所述方法包括将一种或多种式i的化合物和/或药用酸加成盐以及如果需要，一种或多种其他治疗上有价值的物质，与一种或多种治疗上惰性的载体一起得到盖伦制剂施用形式。
根据本发明的最优选的适应症是包括中枢神经系统病症在内的那些，例如抑郁症、精神分裂症和双相性精神障碍的治疗或预防。
剂量可以在宽的限度内变化，并且当然将会需要在每种特定情况中针对个体要求进行调节。在口服施用的情况中，针对成人的剂量可以在以下范围变化：约0.01mg至约1000mg/天的通式i的化合物或相应量的其药用盐。每天的剂量可以作为单剂量施用或以分开的剂量施用，并且此外，当发现指示需要时，也可以超过上限。
片剂制剂(润湿粒化)
制备程序
1.将第1、2、3和4项混合，并用纯净水粒化。
2.将颗粒在50℃下干燥。
3.使颗粒经过适合的研磨设备。
4.加入第5项并且混合三分钟；在适合的压机压制。
胶囊制剂
制备程序
1.将第1、2和3项在适合的混合器中混合30分钟。
2.加入第4和5项并且混合3分钟。
3.填充至适合的胶囊中。