本申请要求2016年4月20提交的美国临时专利申请序列号62/325,255的优先权，将其整体并入本申请。本发明一般涉及可用作romk通道活性抑制剂的经取代的二环杂环化合物。本申请提供了经取代的二环杂环化合物，包含这些化合物的组合物，及其使用方法。本发明还涉及含有至少一种本发明化合物的药物组合物，其可用于治疗与romk通道活性有关的病症，包括心血管疾病。
背景技术：
：肾外髓质钾(romk，kirl.1)通道是弱内向整流k+通道，在肾脏k+循环和分泌中起关键作用(ho等人，nature，1993，362，31-38；shuck等人，thejournalofbiologicalchemistry，1994，269(39)，24261-24270；lee和hebert，americanjournalofphysiology-renalphysiology，1995，268(6)，f1124-f1131；lu等人，thejournalofbiologicalchemistry，2002，277，37881-37887；和hebert等人，physiologicalreviews，2005，85：319-371)。在肾单位的升支粗段(tal)中，romk通道活性通过na+-k+-2cl-(nkcc2)协同转运蛋白提供na和cl重吸收所必需的k+梯度。在远曲小管(dct)和皮质集合管(ccd)中，romk通道形成k+的主要分泌途径，因此在生理条件下在k+稳态中起重要作用(welling和ho，americanjournalofphysiology-renalphysiology，2009，297(4)：f849-f863)。多重证据表明，抑制romk通道活性导致尿钠排泄(natriuresis)、多尿(diuresis)和血压降低。因此，在罹患高血压、充血性心力衰竭或任何其他水肿性疾病的患者中，romk抑制可提供血压调节和利尿的新机制。nkcc2转运蛋白的活性与tal区域中的romk活性紧密结合，并且人类romk中的功能性突变的纯合性丧失导致疾病表型(肾性失盐、醛固酮水平升高代谢性碱中毒血压降低)非常类似于nkcc2纯合突变但具有轻微的低钾血症(simon等人，naturegenetics，1996，14：152-156)。此外，鉴定出来自弗雷明汉心脏研究(framinghamheartstudy)的杂合romk突变的人表现出血压降低(ji等人，naturegenetics，2008，40(5)：592-599)。与人类遗传学类似，小鼠遗传学也支持romk在肾脏的na+重吸收和整体血压调节中的作用(lu等人，thejournalofbiologicalchemistry，2002，277，37881-37887；和lorenz等人，thejournalofbiologicalchemistry，2002，277：37871-37880)。此外，已显示romk通道的药理学阻断在急性给药和在急性和长期给药的犬中诱导大鼠的尿钠排泄和多尿(tang等人，bioorganicandmedicinalchemistryletter，2013，23：5829-5832；garcia等人，thejournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics，2014，348：153-164；walsh等人，acsmedicinalchemistryletters，2015，6：747-752；和dajee等人，circulation，2014，130：a12397)。由于romk通道还涉及肾单位远端部分中净k+分泌的调节，据信，该区域中的romk抑制将减轻与袢(loop)和噻嗪类利尿剂相关的k+消耗和低钾血症。急性或延长(长达122天)的romk拮抗作用不会导致犬的尿钾排泄或低钾血症(garcia等人，thejournalofpharmacologyandexperimentaltherapeutics，2014，348：153-164；walsh等人，acsmedicinalchemistryletters，2015，6：747-752；dajee等人，circulation，2014，130：a12397)。总之，这些数据表明抑制romk可产生与现有袢利尿剂相当或更好的利尿效力，并且可能降低低钾血症的发生率。wo2015/095097披露了可用作romk的抑制剂的化合物。披露可用作romk的抑制剂的化合物的其他公开文本包括wo2010/129379、wo2010/136144、wo2012/058116、wo2012/058134、wo2013/028474、wo2013/039802、wo2013/062892、wo2013/062900、wo2013/066714、wo2013/066717、wo2013/066718、wo2013/090271、wo2014/015495、wo2014/018764、wo2014/085210、wo2014/099633、wo2014/126944、wo2014/150132、wo2015/017305、wo2015/065866、wo2015/095097、wo2015/100147、wo2015/105736、wo2016/008064、wo2016/010801、wo2016/010802、wo2016/060941、wo2016/065582、wo2016/065602、wo2016/065603、wo2016/069426、wo2016/069427、wo2016/069428、wo2016/069430、wo2016/091042、wo2016/122994、wo2016/127358、wo2016/130444和cn105693706。鉴于预期通过涉及抑制romk的治疗而受益的众多病症，显而易见的是，能够抑制romk的新化合物和使用这些化合物的方法应该为多种患者提供实质性治疗益处。本发明涉及一类新的经取代的二环杂环化合物，其被发现是romk的有效抑制剂。提供这些化合物可用作具有对其可药性重要的期望稳定性、生物利用度、治疗指数和毒性值的药物。技术实现要素：本发明提供式(i)化合物，其可用作romk的抑制剂，并且可用于治疗心血管疾病和预防和/或治疗多尿或尿钠排泄。本发明还提供药物组合物，其包含药学上可接受的载体和至少一种式(i)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。本发明还提供抑制romk的方法，包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种式(i)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。本发明还提供治疗心血管疾病的方法，包括向需要这种治疗的宿主施用治疗有效量的至少一种式(i)化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药。一个实施方案提供了治疗心血管疾病的方法。具体地，心血管疾病包括但不限于，高血压、冠心病、中风、心力衰竭、收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭、糖尿病性心力衰竭、急性失代偿性心力衰竭、手术后容量超负荷、特发性水肿、肺高压、肺动脉高压、心功能不全、肾病综合征和急性肾功能不全。一个实施方案提供促进利尿或尿钠排泄的方法。本发明还提供本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其用于治疗。本发明还提供本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药在制备用于治疗心血管疾病或预防和/或促进利尿或尿钠排泄的药物中的用途。本发明还提供试剂盒中的式(i)化合物或药物组合物，其中包含使用该化合物或组合物的说明书。本发明还提供制备本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物或前药的方法和中间体。随着本公开的继续，本发明的这些和其他特征将以扩展的形式阐述。具体实施方式在本发明的一个方面，提供至少一种式(i)化合物：或其盐，其中：x为cr4或n；y为cr4或n，条件是只有x为n时，y才为n；r1为：每个w独立地为nr1b或o；z为键或chr1d；每个r1a独立地为h、f、cl、-oh、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；每个r1b独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、芳基或杂芳基；r1c为h、c1-4烷基或c3-6环烷基；r1d为h、c1-3烷基、c3-6环烷基或c1-3烷氧基；n为0、1、2或3；l1为键、-chrb-或-chrachrb-；ra为h、卤素、-oh、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；rb为h、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；r2为r2a或-l2-r2b；l2为-nrc-或-nrcch2-；rc为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基或(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)；r2a为氮连接的杂环基，选自：咪唑基、二氢吲哚基、吗啉基、哌啶基、吡唑基、吡咯烷基、吡咯基、三唑基、1，2，3，4-四氢-1，5-二氮杂萘基、1，2，3，4-四氢-1，7-二氮杂萘基、1，2，3，4-四氢喹啉基、1，2，3-三唑并4，5-b]吡啶基、苯并[d][1，2，3]三唑基、苯并[d]咪唑基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[4，5-c]吡啶基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡嗪基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡唑并[4，3-c]吡啶基、吡唑并[4，3-d]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[3，2-b]吡啶基、吡咯并[3，2-c]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[2，3-b]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[2，3-c]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[3，2-b]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[3，2-c]吡啶基、3，4-二氢-苯并[b][1，4]噁嗪基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[4，5-c]吡啶基、5，6，7，8-四氢吡啶并[3，2-d]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡嗪基、吡咯并[3，2-c]哒嗪基、吡咯并[3，2-d]嘧啶基、6，7-二氢-吡咯并[3，2-d]嘧啶基和嘌呤基，其中每个所述杂环基取代有0至4个rd；r2b为苯基或碳连接的杂环基，选自：吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，4-三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，2，4-三嗪基、苯并[c][1，2，5]噁二唑基、苯并[c]异噻唑基、苯并[c]异噁唑基、苯并[d]咪唑基、苯并[d]异噻唑基、苯并[d]异噁唑基、苯并[d]噁唑-2(3h)-酮基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、吲唑基、吲哚基、异苯并呋喃-1(3h)-酮基、异色满-1-酮基、吡唑并[1，5-a]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[3，2-b]吡啶基和吡咯并[3，2-c]吡啶基；其中每个所述苯基和所述杂环基取代有0至4个rd；每个r3独立地为h、c1-3烷基、c1-3卤代烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)、-c(o)ore或-c(o)nrere；每个r4独立地为h、c1-3烷基、c1-3卤代烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)、芳基、杂芳基、-co2h、-co2re、-conhre、-conrere或-nr4ar4a，其中每个所述环烷基、芳基和所述杂芳基取代有0至3个rd；每个r4a独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、芳基或杂芳基，其中每个所述环烷基、芳基和所述杂芳基取代有0至3个rd；或者两个r4a与它们所连接的氮原子一起形成3-7元杂环基；每个rd独立地为f、cl、-oh、-cn、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基、c1-3氟烷氧基、-c(o)ore、-c(o)nrere、-oc(o)nrere、-nhc(o)ore、-nrec(o)ore、-s(o)2rc或四唑基；且每个re独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、芳基或杂芳基；或者两个re与它们所连接的氮原子一起形成3-7元杂环基。在本发明的另一方面，提供至少一种式(i)化合物：或其盐，其中：x为cr4或n；y为cr4或n，条件是只有x为n时，y才为n；r1为：每个w独立地为nr1b或o；z为键或chr1d；每个r1a独立地为h、f、cl、-oh、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；每个r1b独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、芳基或杂芳基；r1c为h、c1-4烷基或c3-6环烷基；r1d为h、c1-3烷基或c3-6环烷基；n为0、1、2或3；l1为键、-chrb-或-chrachrb-；ra为h、卤素、-oh、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；rb为h、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基或c1-3氟烷氧基；r2为r2a或-l2-r2b；l2为-nrc-或-nrcch2-；rc为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基或(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)；r2a为氮连接的杂环基，选自：咪唑基、二氢吲哚基、吗啉基、哌啶基、吡唑基、吡咯烷基、吡咯基、三唑基、1，2，3，4-四氢-1，5-二氮杂萘基、1，2，3，4-四氢-1，7-二氮杂萘基、1，2，3，4-四氢喹啉基、1，2，3-三唑并4，5-b]吡啶基、苯并[d][1，2，3]三唑基、苯并[d]咪唑基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[4，5-c]吡啶基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡嗪基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡唑并[4，3-c]吡啶基、吡唑并[4，3-d]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[3，2-b]吡啶基、吡咯并[3，2-c]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[2，3-b]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[2，3-c]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[3，2-b]吡啶基、2，3-二氢-吡咯并[3，2-c]吡啶基、3，4-二氢-苯并[b][1，4]噁嗪基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑并[4，5-c]吡啶基、5，6，7，8-四氢吡啶并[3，2-d]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡嗪基、吡咯并[3，2-c]哒嗪基、吡咯并[3，2-d]嘧啶基、6，7-二氢-吡咯并[3，2-d]嘧啶基和嘌呤基，其中每个所述杂环基取代有0至4个rd；r2b为苯基或碳连接的杂环基，选自：吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、1，2，3-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，2，4-三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，2，4-三嗪基、苯并[c][1，2，5]噁二唑基、苯并[c]异噻唑基、苯并[c]异噁唑基、苯并[d]咪唑基、苯并[d]异噻唑基、苯并[d]异噁唑基、苯并[d]噁唑-2(3h)-酮基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、吲唑基、吲哚基、异苯并呋喃-1(3h)-酮基、异色满-1-酮基、吡唑并[1，5-a]嘧啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基、吡咯并[3，2-b]吡啶基和吡咯并[3，2-c]吡啶基；其中每个所述苯基和所述杂环基取代有0至4个rd；每个r3独立地为h、c1-3烷基、c1-3卤代烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)、-c(o)ore或-c(o)nrere；每个r4独立地为h、c1-3烷基、c1-3卤代烷基、c1-3羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-3烷氧基)-(c1-3烯基)、芳基、杂芳基、-co2h、-co2re、-conhre、-conrere或-nr4ar4a，其中每个所述环烷基、芳基和所述杂芳基取代有0至3个rd；每个r4a独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、芳基或杂芳基，其中每个所述环烷基、芳基和所述杂芳基取代有0至3个rd；或者两个r4a与它们所连接的氮原子一起形成3-7元杂环基；每个rd独立地为f、cl、-oh、-cn、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、c1-3烷氧基、c1-3氟烷氧基、-c(o)ore、-c(o)nrere、-oc(o)nrere、-nhc(o)ore、-nrec(o)ore或-s(o)2re；且每个re独立地为h、c1-3烷基、c1-3氟烷基、c3-6环烷基、芳基或杂芳基；或者两个re与它们所连接的氮原子一起形成3-7元杂环基。本发明的第二方面提供至少一种式(i)化合物或其盐，其中x为cr4且y为cr4。该方面的化合物具有式(ia)的结构：其中r1、r2、r3、r4和l1在第一方面中定义。本发明的第三方面提供至少一种式(i)化合物或其盐，其中x为n且y为cr4。该方面的化合物具有式(ib)的结构：其中r1、r2、r3、r4和l1在第一方面中定义。本发明的第四方面提供至少一种式(i)化合物或其盐，其中x为n且y为n。该方面的化合物具有式(ic)的结构：其中r1、r2、r3、r4和l1在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中：r1为：一个w为nr1b且另一个w为o；每个r1a独立地选自f、cl、c1-3烷基、c1-3氟烷基和c3-6环烷基；r1b为h、c1-3烷基或c1-3氟烷基；r1c为h、c1-2烷基或c3-6环烷基；n为0、1或2；ra为h、f、-oh、c1-2烷基、-cf3、-ch2oh、环丙基、-och3或-ocf3；rb为h、c1-2烷基或环丙基；r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd；r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；每个r3独立地为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c1-2羟基烷基或c3-6环烷基；每个r4独立地为h、-ch3、-cf3、环丙基、苯基或-nr4ar4a；每个r4a独立地为h或-ch3；每个rd独立地为f、cl、-oh、-cn、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c3-6环烷基、c1-2烷氧基、-ocf3、-c(o)ore、-c(o)nrere、-oc(o)nrere、-nhc(o)ore、-nrec(o)ore或-s(o)2re；每个re独立地为h、-ch3、-cf3或c3-6环烷基；且x、y、l1、l2和r2在第一方面中定义。该实施方案包括式(ia)化合物，其中x为cr4且y为cr4。该实施方案还包括式(ib)化合物，其中x为n且y为cr4。该实施方案包括的其他化合物为式(ic)化合物，其中x为n且y为n。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、w、r2、r3、r4、l1、r1a和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1b和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1b和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1b和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1b和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、z、r2、r3、r4、l1、r1a、r1c和n在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1c和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中每个r1a独立地选自f、cl、c1-3烷基、c1-3氟烷基和c3-6环烷基；且r1c为h、c1-2烷基或c3-6环烷基。该实施方案还包括这样的化合物，其中每个r1a独立地为h或-ch3；且r1c为h或-ch3。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为：且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1c、r1d和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中每个r1a独立地选自f、cl、c1-3烷基、c1-3氟烷基和c3-6环烷基；r1c为h、c1-2烷基或c3-6环烷基；且r1d为h、c1-2烷基或c3-6环烷基。该实施方案还包括这样的化合物，其中每个r1a独立地为h或-ch3；r1c为h或-ch3；且r1d为h、-ch3或-och3。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；且x、y、r1、r2a、r3、r4、rd和l1在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂环基，选自：苯并[d]咪唑基、咪唑并[4，5-b]吡啶基、咪唑基、吲唑基、二氢吲哚基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡唑基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂环基取代有0至3个rd。还包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；x、y、r1、r2a、r3、r4、rd和l1如第一方面中所定义；且r2a为选自以下的杂环基：其中每个所述杂环基取代有0至4个rd。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；x、y、r1、r2a、r3、r4、rd和l1如第一方面中所定义；且r2a为选自以下的杂环基：其中每个所述杂环基取代有0至3个rd。还包括式(i)化合物，其中r2a为选自以下的杂芳基：其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；且x、y、r1、r2a、r3、r4和l1在第二方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；且x、y、r1、r2a、r3、r4和l1在第三方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；且x、y、r1、r2a、r3、r4和l1在第四方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-l2-r2b；且x、y、r1、r2b、r3、r4、l1和l2在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-l2-r2b；且x、y、r1、r2b、r3、r4、l1和l2在第二方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-l2-r2b；且x、y、r1、r2b、r3、r4、l1和l2在第三方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-l2-r2b；且x、y、r1、r2b、r3、r4、l1和l2在第四方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-nrc-r2b；且x、y、r1、r2b、r3、r4和l1在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-nrcch2-r2b；且x、y、r1、rc、r2b、r3、r4和l1在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；且rd在第一方面中定义。该实施方案还包括这样的化合物，其中rc为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c3-6环烷基或(c1-2烷氧基)-(c1-2烯基)。此外，该实施方案包括这样的化合物，其中rc为h、-ch3、-cf3或-ch2och3该实施方案包括的其他化合物为这样的化合物，其中rc为h或-ch3.一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为r2a；r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至4个rd；且x、y、r1、r3、r4、l1和rd在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至3个rd。该实施方案还包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至1个选自-cn的取代基。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r2为-l2-r2b；r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至4个rd；且x、y、r1、r3、r4、l1、l2和rd在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd。该实施方案还包括这样的化合物，其中r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至1个选自-cn的取代基。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中每个r3独立地为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c1-2羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-2烷氧基)-(c1-2烯基)、-c(o)ore或-c(o)nrere；每个re独立地为h或-ch3；且x、y、r1、l1、r2和r4在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中每个r3独立地为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c1-2羟基烷基或c3-6环烷基。该实施方案还包括这样的化合物，其中每个r3独立地为h、-ch3、-cf3、-ch2oh或环丙基。此外，该实施方案包括这样的化合物，其中每个r3为h。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中每个r4独立地为h、c1-2烷基、c1-2卤代烷基、c1-2羟基烷基、c3-6环烷基、(c1-2烷氧基)-(c1-2烯基)、苯基、单环杂芳基或-nr4ar4a，其中每个所述环烷基、苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；每个r4a独立地为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c3-6环烷基、苯基或单环杂芳基，其中每个所述环烷基、苯基和所述杂芳基取代有0至3个rd；每个rd为f、cl、-oh、-cn、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c3-6环烷基、c1-2烷氧基、c1-2氟烷氧基、-c(o)ore、-c(o)nrere、-oc(o)nrere、-nhc(o)ore、-nrec(o)ore或-s(o)2re；每个re独立地为h、c1-2烷基、c1-2氟烷基或c3-6环烷基；且x、y、r1、l1、r2和r3在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中每个r4独立地为h、-ch3、-cf3、环丙基、苯基或-nr4ar4a；每个r4a独立地为h或-ch3；每个rd独立地为f、cl、-oh、-cn、c1-2烷基、c1-2氟烷基、c3-6环烷基、c1-2烷氧基、-ocf3、-c(o)ore、-c(o)nrere、-oc(o)nrere、-nhc(o)ore、-nrec(o)ore或-s(o)2re；且每个re独立地为h、-ch3、-cf3或c3-6环烷基。该实施方案还包括这样的化合物，其中每个r4为h。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中：r1为x为n；y为n；且l1、r1a、r1c、r2、r3、r4和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2为r2a；且r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至2个rd；且每个rd独立地为f、cl、-oh、-cn、-ch3或-cf3。该实施方案还包括这样的化合物，其中r1c为h或-ch3；n为0；且l1为-ch2-或-ch(oh)ch2-.一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中：r1为x为n；y为n；r2为-l2-r2b；且l1、l2、r1a、r1c、r2b、r3、r4和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、异苯并呋喃酮基和苯并[d]噁唑酮基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至2个rd；且rd为f、cl、-oh、-cn、-ch3或-cf3。该实施方案还包括这样的化合物，其中l2为-nh-或-nh(ch3)-。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中：r1为x为cr4；y为cr4；且l1、r1a、r1c、r2、r3、r4和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r2为-l2-r2b；l2为-nh-或-nhch2-；且r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、苯并[d]噁唑酮基、异苯并呋喃酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至2个rd；且rd为f、cl、-oh、-cn、-ch3或-cf3。该实施方案还包括这样的化合物，其中r2b为取代有f和-cn的苯基。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中：r1为且x、y、r2、r3、r4、l1、r1a、r1b和n在第一方面中定义。该实施方案包括这样的化合物，其中r1b为h或-ch3；n为0；且l1为-ch2-或-ch(oh)ch2-。该实施方案还包括这样的化合物，其中x为n；y为n；r2为r2a；r2a为氮连接的杂芳基，选自：吲哚基和吲唑基，各自取代有-cn。一个实施方案提供式(i)化合物或其盐，其中r1为r1b为h或-ch3；l1为键、-ch2-、-ch2ch2-、-ch(ch2oh)-或-ch(oh)ch2-；l2为-nh-、-n(ch3)-或-nhch2-；r2a为氮连接的杂芳基，选自：苯并[d]咪唑基、吲唑基、吲哚基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、吡唑并[3，4-c]吡啶基、吡唑并[4，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-b]吡啶基、吡咯并[2，3-c]吡啶基和吡咯并[3，2-b]吡啶基，其中每个所述杂芳基取代有0至1个选自的取代基-cn；r2b为苯基或碳连接的杂芳基，选自：吡啶基、嘧啶基、异苯并呋喃酮基、苯并[d]噁唑酮基和吡唑并[1，5-a]嘧啶基，其中每个所述苯基和所述杂芳基取代有0至2个独立选自以下的取代基：f、-cn和-ch3；每个r3为h；每个r4为h；且x、y和r2在第一方面中定义。一个方面提供式(ia)化合物或其盐，其中所述化合物为2-氟-4-((2-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(4)；2-氟-4-((2-(2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(6)；2-氟-4-(((2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)甲基)苯甲腈(10)；3-甲基-5-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯并[d]噁唑-2(3h)-酮(14)；5-((6-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-基)甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(15)；1-(2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)-1h-吲哚-4-甲腈(24)；2-氟-4-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(30)；2-氟-4-((2-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(32)；2-氟-4-((2-(2-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-i，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(33)；4-甲基-6-((2-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)吡啶-3-甲腈(34)；2-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)嘧啶-5-甲腈(37)；4-甲基-5-((6-(吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-基氨基)-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-基)甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(38)；2-氟-6-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(39)；或2-氟-4-((2-((3-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈(48)。一个实施方案提供式化合物(ib)或其盐，其中所述化合物为2-氟-4-((6-(2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘-2-基)氨基)苯甲腈(7)。一个实施方案提供式(ic)化合物或其盐，其中所述化合物为1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈(1)；2-氟-5-((6-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(2)；1-(6-(2-羟基-2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈(3)；4-甲基-5-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-基)甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(5)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈(8)；1-(6-(2-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈(9)；1-(6-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-5-甲腈(11)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈(12)；1-(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-5-甲腈(13)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-5-甲腈(16)；1-(6-(2-羟基-2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-5-甲腈(17)；1-(6-(2-羟基-2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈(18)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-甲腈(19)；1-(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈(20)；1-(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-5-甲腈(21)；1-(6-(2-羟基-2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈(22)；1-(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈(23)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-6-甲腈(25)；2-氟-4-((6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(26)；2-氟-4-((6-(2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(27)；2-氟-4-((6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(28)；2-氟-4-((6-(2-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(29)；4-甲基-6-((6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-甲腈(31)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-甲腈(35)；5-(2-(2-(1h-吡咯并[3，2-b]吡啶-1-基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-基)-1-羟基乙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3h)-酮(36)；1-(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-苯并[d]咪唑-4-甲腈(40)；5-(2-(2-(1h-吡唑并[4，3-b]吡啶-1-基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-基)-1-羟基乙基)-4-甲基异苯并呋喃-1(3h)-酮(41)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡咯并[2，3-c]吡啶-4-甲腈(42)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡唑并[3，4-c]吡啶-4-甲腈(43)；1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈(44)；1-(6-(2-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈(45)；1-(6-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-甲腈(46)；2-氟-4-(甲基(6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈(47)；3-甲基-5-((6-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯并[d]噁唑-2(3h)-酮(49)；或1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-5-甲腈(50)。在另一方面，本发明公开了式(i)化合物或任何其他实施方案或方面所述的式(i)化合物，包括其盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中：所述化合物选自实施例。在另一方面，本发明公开了药物组合物，其包含药学上可接受的载体和任何一种或多种式(i)化合物或如任何其他实施方案或方面或实施例所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐。在另一方面，本发明公开了一种治疗一种或多种可通过romk抑制调节的疾病或障碍的方法，包括向需要这种治疗或预防的患者施用治疗有效量的至少一种式(i)化合物或如任何其他实施方案或方面或实施例所述的式(i)化合物，其中所述疾病或障碍通过促进利尿或尿钠排泄进行治疗。在另一方面，本发明公开了一种治疗或预防一种或多种可通过romk抑制调节的疾病或障碍的方法，其中任意实施方案的化合物与至少一种其他类型的治疗剂联合施用。在另一方面，本发明公开了一种治疗或预防多种疾病或障碍或romk相关障碍的方法，包括向需要这种治疗或预防的患者施用治疗有效量的至少一种式(i)化合物或如任何其他实施方案或方面所述的式(i)化合物，其中所述疾病或障碍通过促进利尿或尿钠排泄进行治疗。在另一方面，本发明公开了治疗或预防疾病或病症的方法，其中任意实施方案的化合物与至少一种其他类型的治疗剂联合施用。在另一方面，本发明提供选自示例性实施例的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或溶剂化物。在另一方面，本发明提供选自实施例范围内的任何化合物子集列表的化合物。在另一方面，本发明为需要利尿或尿钠排泄的患者提供高血压或心力衰竭的治疗。在另一方面，本发明提供高血压的治疗。在另一方面，本发明提供高血压、特发性高血压、难治性高血压和/或动脉高压的治疗。在另一方面，本发明提供心力衰竭的治疗。在另一方面，本发明提供水肿、心功能不全、收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭、糖尿病性心力衰竭和/或急性失代偿性心力衰竭的治疗。本发明可以其他特定形式实施而不脱离其精神或基本属性。本发明包括本申请提到的本发明优选方面的所有组合。应当理解，本发明的任意和所有实施方案可以结合任何其他一个或多个实施方案来描述另外的实施方案。还应理解，实施方案的每个单独元素是其自己的独立实施方案。此外，实施方案的任意元素旨在与来自任意实施方案的任意和所有其他元素组合以描述另外的实施方案。定义本发明的特征和优势可由本领域技术人员在阅读以下详细描述后更容易地了解。应当了解，出于清楚原因，上文和下文在各个实施方案的情况下描述的本发明的某些特征也可组合形成单一实施方案。反之，出于简洁原因，在单一实施方案的情况下描述的本发明的各种特征也可组合形成其子组合。本申请确定为示例性或优选的实施方案旨在是说明性而非限制性的。除非本申请另外特定说明，否则以单数形式提及也可包括复数。例如，“一个(a)”和“一种(an)”可指一个或一种、一个或多个或一种或多种。本申请使用的短语“化合物”是指至少一种化合物。例如，式(i)化合物包括式(i)化合物；和两种或更多种式(i)化合物。除非另外指示，否则任何具有不饱和化合价的杂原子被认为具有足以满足这种化合价的氢原子。本申请所阐述的定义优先于以引用方式并入本申请中的任何专利、专利申请和/或专利申请公开中所阐述的定义。用于描述本发明的各种术语的定义列于下文中。当术语在整篇说明书(除非其在特定情况下另外限制)中个别地或作为较大基团/团体的一部分使用时，这些定义均适用于这种术语。在整篇说明书中，基团及其取代基可由本领域技术人员选择以提供稳定的部分和化合物。根据本领域内使用的惯例，在本申请结构式中使用的用来描述部分或取代基与母核或主链结构的连接点的键。本申请使用的术语“卤代”和“卤素”是指f、cl、br和i。术语“氰基”是指基团-cn。术语“氨基”是指基团-nh2。术语“氧代”是指基团＝o。本申请使用的术语“烷基”指含有例如1至12个碳原子、1至6个碳原子和1至4个碳原子的支链和直链饱和脂族烃基。烷基的实例包括，但不限于，甲基(me)、乙基(et)、丙基(例如，正丙基和异丙基)、丁基(例如，正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)和戊基(例如，正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基和4-甲基戊基。当数字在符号“c”后以下标形式出现时，所述下标更特定地定义具体基团可含有的碳原子数目。例如，“c1-6烷基”表示具有1至6个碳原子的直链和支链烷基。本申请使用的术语“卤代烷基”旨在包括取代有一个或多个卤素原子的支链和直链饱和脂族烃基。例如，“c1-4卤代烷基”旨在包括取代有一个或多个卤素原子的c1、c2、c3和c4烷基。卤代烷基的代表性实例包括但不限于-cf3、-ccl3、-cfcl2和-ch2cf3。本申请使用的术语“氟代烷基”旨在包括取代有一个或多个氟原子的支链和直链饱和脂族烃基。例如，“c1-4氟代烷基”旨在包括取代有一个或多个氟原子的c1、c2、c3和c4烷基。氟代烷基的代表性实例包括但不限于-cf3和-ch2cf3。术语“羟基烷基”包括取代有一个或多个羟基的支链和直链饱和烷基。例如，“羟基烷基”包括-ch2oh、-ch2ch2oh和c1-4羟基烷基。本申请使用的术语“环烷基”是指通过从饱和环碳原子上除去一个氢原子而衍生自非芳族单环或多环烃分子的基团。环烷基的代表性实例包括，但不限于，环丙基、环戊基和环己基。当数字在符号“c”之后以下标形式出现时，所述下标更特定地定义了具体环烷基可含有的碳原子数目。例如，“c3-6环烷基”表示具有3至6个碳原子的环烷基。本申请使用的术语“烷氧基”是指通过氧原子与母体分子部分连接的烷基，例如甲氧基(-och3)。例如，“c1-3烷氧基”表示具有1至3个碳原子的烷氧基。术语“卤代烷氧基”和“-o(卤代烷基)”表示通过氧键(-o-)连接的如上定义的卤代烷基。例如，“c1-4卤代烷氧基”旨在包括c1、c2、c3和c4卤代烷氧基。术语“氟代烷氧基”和“-o(氟代烷基)”表示通过氧键(-o-)连接的如上定义的氟代烷基。例如，“c1-4氟代烷氧基”旨在包括c1、c2、c3和c4氟代烷氧基。本申请使用的术语“芳基”是指通过除去一个与芳族环键合的氢而衍生自含有芳族环的分子的一组原子。具有两个或更多个环的芳基必须仅包括芳族环。芳基的代表性实例包括，但不限于，苯基和萘基。芳族环可以是未经取代的或可含有一个或多个取代基，如化合价所允许。本申请使用的术语“苄基”是指其中一个氢原子被苯基取代的甲基。苯环可以是未经取代的，或者可含有一个或多个取代基，如化合价所允许。术语“杂原子”是指氧(o)，硫(s)和氮(n)。本申请使用的术语“杂环基”是指经取代的和未经取代的饱和的、部分饱和的和芳族的3至7元单环基团、7至11元二环基团和10至15元三环基团，其中至少一个环具有至少一个杂原子(o、s或n)，所述含杂原子的环具有1、2、3或4个选自o、s和n的杂原子。这种含环杂原子的基团的每个环可含有一个或两个氧或硫原子和/或1至4个氮原子，条件是每个环中杂原子的总数为4或更少，并且进一步条件为该环含有至少一个碳原子。氮和硫原子可任选被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。形成二环和三环基团的稠合环可含有其他杂原子或仅含有碳原子；并且可以是饱和的、部分饱和的或芳族的。杂环基可连接在杂环基中的任何可用的氮或碳原子上。术语“杂环基”包括“杂芳基”。如化合价所允许，若所述另外的环是环烷基或杂环基，则其额外任选取代有＝o(氧代)。术语“杂芳基”是指经取代和未经取代的芳族5或6元单环基团、9或10元二环基团和11至14元三环基团，所述基团在至少一个环中具有至少一个杂原子(o、s或n)，所述含杂原子的环优选具有1、2或3个独立地选自o、s和/或n的杂原子。含有杂原子的杂芳基的每个环可含有一个或两个氧或硫原子和/或1至4个氮原子，条件是每个环中杂原子的总数为4或更少并且每个环具有至少一个碳原子。形成双环基团的稠合环是芳族的并且可含有其他杂原子或仅含有碳原子。氮和硫原子可任选被氧化，并且氮原子可任选被季铵化。二环和三环杂芳基必须仅包括芳族环。杂芳基可连接在任何环的任何可用的氮或碳原子处。杂芳基环系统可以是未经取代的或可含有一个或多个取代基。示例性单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和三嗪基。示例性二环杂芳基包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基和吡咯并吡啶基。术语“氮连接的杂环基”是指经取代和未经取代的杂环基，其包括至少一个氮杂原子并通过键连接至杂环基中的氮杂原子。术语“氮连接的杂芳基”是指经取代和未经取代的杂芳基，其包括至少一个氮杂原子并通过键连接至杂芳基中的氮杂原子。术语“碳连接的杂环基”是指经取代和未经取代的杂环基，其通过键连接至杂环基中的碳原子。术语“碳连接的杂芳基”是指经取代和未经取代的杂芳基，其通过键连接至杂芳基中的碳原子。短语“药学上可接受的”在本申请中用于指在正确医学判断范畴内适用于与人类和动物组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症且与合理效益/风险比率相称的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。式(i)化合物可以无定形固体或结晶固体形式提供。可使用冻干来提供呈无定形固体状的式(i)化合物。还应当理解，式(i)化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。术语“溶剂化物”意指式(i)化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在一些情况中，该溶剂化物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子掺入至结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相溶剂化物和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂化物和乙酸乙酯溶剂化物。溶剂化的方法是本领域已知的。各种前药形式是本领域公知的且描述于以下文献中：a)thepracticeofmedicinalchemistry，camilleg..wermuth等人，ch31，(academicpress，1996)；b)designofprodrugs，editedbyh.bundgaard，(elsevier，1985)；c)atextbookofdrugdesignanddevelopment，p.krogsgaard-larson和h.bundgaard，eds.ch5，pgs113-191(harwoodacademicpublishers，1991)；和d)hydrolysisindrugandprodrugmetabolism，bernardtesta和joachimm.mayer，(wiley-vch，2003)。另外，式(i)化合物在制备之后可被分离和纯化，以获得含有等于或大于99重量％的量的式(i)化合物(“基本上纯”)的组合物，接着如本申请所述使用或配制。这种“基本上纯”的式(i)化合物在本申请中也涵盖作为本发明的一部分。“稳定化合物”和“稳定结构”旨在指示足够稳固而能够从反应混合物中分离出达适用纯度且能够配制成有效治疗剂的化合物。本发明旨在包含稳定化合物。“治疗有效量”旨在包括有效充当romk抑制剂或有效治疗或预防心血管疾病的单独本发明化合物的量，或所要求保护的化合物组合的量，或与其他活性成分组合的本发明化合物的量。另一方面，公开了一种治疗或预防可通过romk抑制调节的一种或多种疾病或障碍的方法，包括向需要这种治疗或预防的患者施用治疗有效量的至少一种式(i)化合物或如其他实施方案或方面中任一项所述的式(i)化合物，其中通过促进利尿或尿钠排泄来治疗所述疾病或障碍。在另一方面，公开了一种治疗可通过促进利尿或尿钠排泄治疗的一种或多种疾病或障碍的方法，其中所述心血管疾病包括，但不限于，高血压、冠心病、中风、心力衰竭、收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭、糖尿病性心力衰竭、急性失代偿性心力衰竭、术后容量超负荷、特发性水肿、肺高压、肺动脉高压、顽固性高血压、心功能不全、肾病综合征和急性肾功能不全。本申请使用的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖治疗哺乳动物(具体是人类)的疾病状态，且包括：(a)预防哺乳动物出现疾病状态，具体而言，在所述哺乳动物易患所述疾病状态但尚未诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制所述疾病状态，即阻止其发展；和/或(c)减轻所述疾病状态，即使所述疾病状态消退。本发明化合物旨在包括本发明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同但质量数不同的那些原子。作为一般实例且非限制性地，氢的同位素包括氘(d)和氚(t)。碳的同位素包括13c和14c。通常，同位素标记的本发明化合物可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本申请所述类似的方法，使用适当的同位素标记试剂替代在其他情况下使用的未经标记的试剂来制备。例如，甲基(-ch3)还包括氘代甲基，诸如-cd3。式(i)化合物可通过任何适用于待治疗的病症的方式施用，方式可视对部位特异性治疗的需要或待递送的式(i)化合物的量而定。本发明还涵盖一类药物组合物，其包含一种式(i)化合物和一种或多种无毒的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或辅料(本申请统称作“载体”物质)和必要时选用的其他活性成分。式(i)化合物可通过任何合适途径，优选以适于所述途径的药物组合物形式且以有效用于预期治疗的剂量施用。本发明的化合物和组合物可以含有常规药学上可接受的载体、辅料和媒介物的剂量单位制剂形式，例如口服、经粘膜或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌内和胸骨内)施用。例如，药物载体可含有甘露醇或乳糖和微晶纤维素的混合物。混合物可含有其他组分，诸如润滑剂，例如硬脂酸镁；和崩解剂，诸如交聚维酮(crospovidone)。载体混合物可填充至明胶胶囊中或压制成片剂。药物组合物可以例如口服剂型或输注剂形式施用。对于口服施用，药物组合物可呈例如片剂、胶囊剂、液体胶囊剂、混悬剂或液体形式。药物组合物优选以含有特定量的活性成分的剂量单位形式制成。例如，药物组合物可以包含约0.1mg至1000mg，优选约0.25mg至250mg，且更优选约0.5mg至100mg范围内的量的活性成分的片剂或胶囊剂形式提供。虽然适用于人类或其他哺乳动物的日剂量可视患者的病症和其他因素而广泛变化，但可使用常规方法确定。本申请涵盖的任何药物组合物可例如经由任何可接受且合适的口服制剂来口服递送。示例性口服制剂包括，但不限于，例如片剂、糖衣锭(troches)、口含锭(lozenges)、水性和油性混悬剂、可分散性散剂或颗粒剂、乳剂、硬胶囊剂和软胶囊剂、液体胶囊剂、糖浆剂和酏剂。旨在口服施用的药物组合物可根据本领域中已知用于制备旨在口服施用的药物组合物的任何方法来制备。为提供药学上适口的制剂，本发明药物组合物可含有至少一种选自甜味剂、矫味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂和防腐剂的试剂。片剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种适用于制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂来制备。示例性赋形剂包括，但不限于，例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；成粒剂和崩解剂，诸如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉和海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶、聚乙烯-吡咯烷酮和阿拉伯胶(acacia)；和润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。另外，片剂可无包衣，或通过已知技术包覆包衣以掩蔽味道令人不悦的药物的不良味道，或延迟活性成分在胃肠道中的崩解和吸收，从而使活性成分的作用持续较长时段。示例性水溶性味觉掩蔽物质包括，但不限于，羟基丙基甲基纤维素和羟基丙基纤维素。示例性时间延迟物质包括，但不限于，乙基纤维素和乙酸丁酸纤维素。硬明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种惰性固体稀释剂(诸如碳酸钙；磷酸钙；和高岭土(kaolin))来制备。软明胶胶囊剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种水溶性载体(诸如聚乙二醇)；和至少一种油介质(诸如花生油、液体石蜡和橄榄油)来制备。水性混悬剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种适用于制造水性混悬剂的赋形剂来制备。适用于制备水性混悬剂的示例性赋形剂包括，但不限于，例如助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，诸如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，诸如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，诸如十七亚乙基-氧基鲸蜡醇；环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯；和环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，诸如聚乙烯脱水山梨醇单油酸酯。水性混悬剂也可含有至少一种防腐剂，诸如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种矫味剂；和/或至少一种甜味剂，包括，但不限于，例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜。油性混悬剂可例如通过将至少一种式(i)化合物悬浮于植物油(诸如花生油；橄榄油；芝麻油；和椰子油)；或矿物油(诸如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂也可含有至少一种增稠剂，诸如蜂蜡；硬石蜡；和鲸蜡醇。为提供适口的油性混悬剂，可将至少一种上文已描述的甜味剂和/或至少一种矫味剂添加至油性混悬剂中。油性混悬剂可进一步含有至少一种防腐剂，包括，但不限于，例如抗氧化剂，诸如丁基化羟基苯甲醚和α-生育酚。可分散性散剂和颗粒剂可例如通过混合至少一种式(i)化合物与至少一种分散剂和/或湿润剂；至少一种助悬剂；和/或至少一种防腐剂来制备。合适的分散剂、湿润剂和助悬剂如上文已描述。示例性防腐剂包括，但不限于，例如抗氧化剂，例如抗坏血酸。另外，可分散性散剂和颗粒剂也可含有至少一种赋形剂，包括，但不限于，例如甜味剂；矫味剂；和着色剂。至少一种式(i)化合物的乳剂可例如制备成水包油乳剂。包含式(i)化合物的乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。油相可由，但不限于，例如植物油(诸如橄榄油和花生油)；矿物油(诸如液体石蜡)；和其混合物提供。虽然所述相可仅包含乳化剂，但其可包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。合适的乳化剂包括，但不限于，例如天然存在的磷脂，例如大豆卵磷脂；源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，诸如脱水山梨醇单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，诸如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。优选地，亲水性乳化剂连同用作稳定剂的亲脂性乳化剂一起包括在内。也优选包括油和脂肪两者。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起组成所谓乳化蜡，且所述蜡与油和脂肪一起组成所谓乳化软膏基质，所述乳化软膏基质形成乳膏剂制剂的油性分散相。乳剂还可含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明制剂中的乳化剂和乳剂稳定剂包括吐温(tween)60、司盘(span)80、鲸蜡硬质醇混合物(cetostearylalcohol)、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、单独或与蜡一起的二硬脂酸甘油酯，或本领域中熟知的其他物质。式(i)化合物也可例如经由任何药学上可接受且合适的可注射形式静脉内、皮下和/或肌内递送。示例性可注射形式包括，但不限于，例如包含可接受的媒介物和溶剂(诸如水、林格溶液和等张氯化钠溶液)的无菌水溶液；无菌水包油微乳剂；和水性或油性混悬剂。用于肠胃外施用的制剂可为水性或非水性等张无菌注射溶液剂或混悬剂的形式。这些溶液剂和混悬剂可使用所提及的用于口服施用的制剂的一种或多种载体或稀释剂或通过使用其他合适的分散剂或湿润剂和助悬剂由无菌粉末或颗粒制备。所述化合物可溶于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其他辅料和施用方式是在药学领域中公知的。活性成分也可作为含合适载体(包括盐水、右旋糖或水)或含环糊精(即captisol)、共溶剂溶解(即丙二醇)或胶束溶解(即吐温80)的组合物形式通过注射施用。无菌可注射制剂也可为于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，例如于1，3-丁二醇中的溶液剂。可使用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格溶液和等张氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油惯常用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。另外，在可注射剂制备中可使用脂肪酸，诸如油酸。无菌可注射水包油微乳剂可例如通过以下来制备：1)将至少一种式(i)化合物溶解于油相(诸如大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)组合含有式(i)的油相与水和甘油混合物；和3)加工所述组合，形成微乳剂。无菌水性或油性混悬剂可根据本领域中早已已知的方法来制备。例如，无菌水溶液剂或混悬剂可用无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂来制备，诸如1，3-丁二醇；且无菌油性混悬剂可用无菌无毒可接受的溶剂或悬浮介质来制备，诸如无菌不挥发性油，例如合成的单酸甘油酯或二酸甘油酯；和脂肪酸，诸如油酸。可用于本发明药物组合物中的药学上可接受的载体、辅料和媒介物包括，但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂；自乳化药物递送系统(sedds)，诸如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯；用于药物剂型中的表面活性剂，诸如吐温、聚乙氧基化蓖麻油，诸如cremophor表面活性剂(basf)，或其他类似聚合递送基质；血清蛋白，诸如人血清白蛋白；缓冲物质，诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐；或电解质，诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。环糊精(诸如α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精)或经化学修饰的衍生物(诸如羟基烷基环糊精，包括2-羟基丙基-环糊精和3-羟基丙基-环糊精)或其他溶解的衍生物也可有利地用于增强本申请所述式的化合物的递送。药物组合物可以包装或分配器装置存在，所述包装或分配器装置可含有一种或多种单位剂型，包括式(i)化合物。该包装可例如包括金属或塑料箔，诸如泡罩包装。包装或分配器装置可附有施用说明书。本发明的药学活性化合物可根据常规药学方法加工以产生用于向患者(包括人类和其他哺乳动物)施用的医药药剂。药物组合物可经受常规医药操作(诸如杀菌)和/或可含有常规辅料，诸如防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂和缓冲剂。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣制备。这些组合物也可包含辅料，诸如湿润剂、甜味剂、矫味剂和芳香剂。所施用的化合物的量和以本发明的化合物和/或组合物治疗疾病病症的给药方案视多种因素而定，包括受试者的年龄、体重、性别、医学状况、疾病的类型、疾病的严重度、施用途径和频率及所采用的具体化合物。因此，给药方案可广泛不同，但可常规地使用标准方法来确定。每千克体重约0.001mg至100mg，优选每千克体重约0.0025mg至约50mg和最优选每千克体重约0.005mg至10mg的日剂量可为适当的。日剂量可以每天一至四次施用。其他给药方案包括每周一剂和每两天周期一剂。为达治疗目的，通常将本发明的活性化合物与适用于所示施用途径的一种或多种辅料组合。若口服施用，则可将化合物与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸的纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，接着制成片剂或胶囊剂以方便施用。这些胶囊剂或片剂可含有控制释放制剂，如可以活性化合物于羟基丙基甲基纤维素中的分散体的形式提供。本发明的药物组合物包含至少一种式(i)化合物和任选的额外试剂，所述额外试剂选自任何药学上可接受的载体、辅料和媒介物。本发明的替代组合物包含本申请所述的式(i)化合物和药学上可接受的载体、辅料或媒介物。药物组合物可含有其他治疗剂，并且可例如根据诸如药物制剂领域公知的技术，通过使用常规的固体或液体媒介物或稀释剂，以及适合于所需施用方式的类型的药物添加剂(例如，赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂和调味剂)。本发明还包括制品。本申请使用的制品旨在包括，但不限于，试剂盒和包装。本发明的制品包括：(a)第一容器；(b)位于第一容器内的药物组合物，其中所述组合物包含：第一治疗剂，其包含：本发明化合物或其药学上可接受的盐形式；(c)包装说明书，其说明所述药物组合物可用于治疗心血管疾病，和/或促进利尿和/或尿钠排泄。在另一个实施方案中，所述包装说明书说明药物组合物可与第二治疗剂组合使用(如前所定义)以治疗心血管疾病，和/或促进利尿和/或尿钠排泄。制品还可包括：(d)第二容器，其中组分(a)和(b)位于第二容器内，组分(c)位于第二容器内或外。位于第一和第二容器内意味着相应的容器将物品保持在其边界内。第一容器是用于容纳药物组合物的容器。该容器可用于制造、储存、运输和/或零售/批发。第一容器旨在涵盖瓶(bottle)、罐、小瓶、瓶(flask)、注射器、管(例如，用于乳膏制剂)，或用于制造、保持、储存或分配药品的任何其他容器。第二容器是用于容纳第一容器和任选地包装说明书的容器。第二容器的实例包括，但不限于，盒(例如，纸板盒或塑料盒)、板条箱、纸箱、袋(bag)(例如纸袋或塑料袋)、囊(pouch)和袋子(sack)。包装说明书可通过胶带、胶水、u形钉或其他连接方法物理地连接至第一容器的外部，或者它可放置在第二容器内而无需任何物理连接至第一容器的装置。或者，包装说明书位于第二容器的外侧。当位于第二容器的外侧时，优选的是，包装说明书通过胶带、胶水、u形钉或其他连接方法物理地连接。或者，它可与第二容器的外侧相邻或接触，而不是物理连接。包装说明书是标签(label)、标签(tag)、标记(marker)或其他书面表格，其描述了与位于第一容器内的药物组合物有关的信息。所述信息通常由管理销售该制品的区域的管理机构(例如，美国食品和药品管理局)确定。优选地，包装说明书具体描述了药物组合物已被批准的适应症。包装说明书可以由人可以阅读其中或其上包含的信息的任何材料制成。优选地，包装说明书是上面已形成(例如，印刷或施加)所需信息的可印刷材料(例如，纸、塑料、纸板、箔、背胶纸或塑料)。效用本发明化合物抑制romk的活性。因此，式(i)化合物可用于治疗与抑制romk有关的病症。本申请描述的化合物旨在用于治疗和/或预防任何受益于来自身体或任何需要利尿或尿钠排泄的患者的水和钠排泄增加的病症。特定病症包括任何形式的高血压或心力衰竭(急性失代偿和慢性、舒张性和收缩性)。对于心力衰竭治疗，该化合物将用于治疗急性失代偿性心力衰竭，以减轻水肿和其他症状和/或克服对其他类别利尿剂的抵抗，或缩短住院时间。该化合物还可用于出院后或慢性治疗期间的心力衰竭，以治疗症状并减少急性失代偿的复发和住院。利尿剂或利尿钠或两者对其具有治疗或预防益处的其他病症包括术后容量超负荷、任何水肿状态(包括特发性水肿)、肺高压(包括肺动脉高压)、心功能不全、肾病综合征和急性肾功能不全。本发明化合物有益于治疗和/或预防各种人类疾病。本发明化合物作为独立疗法或与治疗上可提供更大益处的其他疗法组合可以是有益的。本发明化合物可能对其有益的疾病包括心血管疾病；以及利尿或尿钠排泄的预防和/或治疗。一个实施方案提供了治疗心血管疾病的方法。具体地，心血管疾病包括，但不限于，高血压、冠心病、中风、心力衰竭、收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭、糖尿病性心力衰竭、急性失代偿性心力衰竭、术后容量超负荷、特发性水肿、肺高压、肺动脉高压、心功能不全、肾病综合征和急性肾功能不全。例如，在本实施方案的方法中可施用用于治疗病症的治疗有效量。一个实施方案提供了促进利尿或尿钠排泄的方法。一种或多种另外的药理学活性剂可与本申请所述的化合物组合施用，包括来自任何其他利尿剂类的任何其他利尿剂(噻嗪类利尿剂、袢利尿剂、保钾利尿剂、渗透利尿剂、碳酸酐酶抑制剂、盐皮质激素受体拮抗剂)、乙酰胆碱酯酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、中性内肽酶抑制剂、双重血管紧张素受体拮抗剂和中性内肽酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、利钠肽、钙通道阻滞剂、松弛素或松弛素模拟物、正性肌力药、外周血管扩张剂或盐皮质激素受体拮抗剂。一个实施方案提供式(i)化合物，其用于治疗。在本实施方案中，治疗中的用途可包括施用治疗有效量的式(i)化合物。本发明还提供式(i)化合物在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。在本实施方案中，制备药物的用途可包括施用治疗有效量的式(i)化合物用于治疗心血管疾病。本发明还提供式(i)化合物在制备用于促进利尿或尿钠排泄的药物中的用途。在一个实施方案中，通过铊通量(thalliumflux)测定法测量，式(i)化合物抑制romk活性的ic50值小于10μm，例如0.001至小于10μm。优选地，式(i)化合物抑制romk活性的ic50值小于1μm，例如0.001至小于1μm。其他优选的化合物抑制romk活性的ic50值为100nm或更低，例如1至100nm。以下“实施例”部分中所述的式(i)化合物的实施例已在一种或多种下述测定中进行了测试。制备方法本发明化合物可通过有机化学领域技术人员可用的许多方法合成。可用于制备本发明化合物的合成方法概要可以在larock，r.c.，comprehensiveorganictransformations，vch，newyork(1989)中找到。用于制备本发明化合物的一般合成方案如下所述。这些方案是说明性的，并不意味着限制本领域技术人员可用于制备本申请公开的化合物的可能技术。制备本发明化合物的不同方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。在下面描述的合成方法的描述中，应当理解，所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理操作的选择，通常被选择为本领域技术人员应该容易认识到的对反应而言标准的条件。对于与反应条件相容的取代基的限制对于本领域技术人员来说是显而易见的，然后必须使用替代方法。还应当了解，在该领域的任何合成路线的规划中的另一个主要考虑因素是明智地选择用于保护化合物中存在的反应性官能团的保护基团。描述许多替代物的权威著作是greene等人(protectivegroupsinorganicsynthesis，wileyandsons(1991))。另外，合成中的各个步骤可以可替换的顺序进行，以得到期望的一种或多种化合物。通过一般方案中描述的方法制备的本发明化合物的实施例在下文所述的制备和实施例部分中给出。纯手性实施例的制备可通过本领域技术人员已知的技术进行。例如，可通过手性相制备型hplc分离外消旋产物来制备纯手性化合物。或者，可通过已知的方法制备实施例化合物，得到对映异构体富集的产物。可在适于所用试剂和材料且适于所实施转变的溶剂中进行此部分中所述的反应和技术。而且，在下文所述合成方法的描述中，应当理解，所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理操作的选择，被选择为本领域技术人员应该容易认识到的对反应而言标准的条件。有机合成领域的技术人员应当理解，分子的不同部分上存在的官能团必须与所提出的试剂和反应相容。本领域技术人员应容易了解对与反应条件相容的取代基的这些限制，然后必须使用替代方法。有时此需要进行判断以修改合成步骤的顺序或选择一种特定方法方案而非另一种，以获得期望的本发明化合物。还应当认识到，在该领域的任何合成路线的规划中的另一个主要考虑因素是明智地选择用于保护本发明所述化合物中存在的反应性官能团的保护基团。向技术人员描述许多替代物的权威著作是greene等人(protectivegroupsinorganicsynthesis，第三版，wileyandsons(1999))。通式d、e、f的化合物可根据方案1合成。方案1化合物a可根据文献操作合成。将化合物a进行buchwald偶联反应以安装各种经取代的氮连接基团，得到产生b。使用氯甲酸氯乙酯或tfa将化合物b脱保护，得到化合物c。用环氧化物、醛或卤代甲基羰基化合物处理化合物c，然后还原，生成通式d、e和f的化合物。通式j的化合物可根据方案2合成。方案2通过用化合物h和三乙酰氧基硼氢化钠进行还原胺化，可将经取代的乙醛(g)转化为(i)。对化合物i进行buchwald偶联反应以安装各种适当经取代的氮连接基团，生成通式j的化合物。缩写ar芳基acn乙腈boc叔丁氧基羰基ch2cl2二氯甲烷chcl3氯仿cdcl3氘代氯仿cd3od氘代甲醇dcm二氯甲烷dea二乙胺dmfn，n-二甲基甲酰胺dmso二甲基亚砜dmso-d6氘代二甲基亚砜et乙基etoac乙酸乙酯etoh乙醇hcooh甲酸ipa异丙醇k2co3碳酸钾me甲基meoh甲醇nahco3碳酸氢钠na2so4硫酸钠nbsn-溴代琥珀酰亚胺nh4oac乙酸铵pd2(dba)3三(二亚苄基丙酮)二钯(0)pdcl2(dppf)ch2cl21，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)与二氯甲烷的络合物pocl3三氯氧磷(phosphorusoxychloride)tea三乙胺tfa三氟乙酸thf四氢呋喃xantphos4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨hplc/ms高压液相色谱-质谱lc液相色谱min分钟mmol毫摩尔nmr核磁共振谱实施例以下实施例说明了本发明的具体和优选实施方案，但不限制本发明的范围。除非另有说明，否则化学缩写和符号以及科学缩写和符号具有其通常和惯常的含义。以上定义了本申请实施例和其他地方采用的其他缩写。常见中间体通常可用于制备一个以上的实施例并且顺序鉴定(例如，中间体1、中间体2等)并缩写为int.1、int.2等。通过制备它们的实施例和步骤(例如，“1-a”表示实施例1，步骤a)或仅通过其中化合物是标题化合物的实施例(例如，“1”表示实施例1的标题化合物)鉴定实施例的化合物。在一些情况下，描述了中间体或实施例的替代制备。合成领域的技术人员经常可以设计基于一个或多个考虑因素的替代制备，诸如更短的反应时间、更便宜的起始物质、易于操作、适于于催化、避免有毒试剂、专用仪器的可及性和减少线性步骤的数量。描述替代制备的目的是进一步使得能够制备本发明的实施例。在一些情况下，概述的实施例和权利要求中的一些官能团可用本领域已知的公知的生物等排替代物代替，例如用四唑或磷酸酯部分替代羧酸基团。一般方法：除非另有说明，否则在工作实施例中使用以下方法。用于表征实施例的分析型hplc和hplc/ms方法：在waterszmd质谱仪偶联的shimadzulc10as系统或与watersmicromasszq质谱仪偶联的waterswaters系统上进行反相分析型hplc/ms。手性分析型lc在bergeranalyticalsfc仪器上进行。方法a：ascentisexpressc18(2.1x50mm)2.7μm颗粒；溶剂a：95％水，5％乙腈，0.1％tfa；溶剂b：95％乙腈，5％水，0.1％tfa；温度：50℃；梯度：0-100％b历经3分钟，然后在100％b保持1分钟；流速：1.1ml/min。方法b：ascentisexpressc18(2.1x50mm)2.7μm颗粒；溶剂a：95％水，5％乙腈，含有10mm乙酸铵；溶剂b：95％乙腈，5％水，含有10mm乙酸铵；温度：50℃；梯度：0-100％b历经3分钟，然后在100％b保持1分钟；流速：1.1ml/min。uv220nm。方法c：sunfirec18柱(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经12min，然后100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。uv220nm。方法d：xbridgephenyl柱(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经12min，然后100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法e：kinetex，xbc18(2.6μmx75.3mm)。使用自20-100％溶剂b历经4min，然后100％溶剂b保持0.6min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为10mmnh4co2h/98％水，2％乙腈且溶剂b为10mmnh4co2h/2％水，98％乙腈，uv220nm。方法f：ascentisexpressc18(2.1x50mm)2.7-μm颗粒；溶剂a：95％水，5％乙腈，0.1％tfa；溶剂b：95％乙腈，5％水，0.1％tfa；温度：50℃；梯度：0-100％b历经4分钟，然后在100％b保持1分钟；流速：1.1ml/min。uv220nm方法g：ascentisexpressc18(2.1x50mm)2.7-μm颗粒；溶剂a：95％水，5％乙腈，含有10mm乙酸铵；溶剂b：95％乙腈，5％水，含有10mm乙酸铵；温度：50℃；梯度：0-100％b历经4分钟，然后在100％b保持1分钟；流速：1.1ml/min。uv220nm。方法h：sunfirec18(3.0x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经12min，然后100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法i：xbridgephenylc18(3.0x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经12min，然后100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法j：sunfirec18(3.0x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经25min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法k：xbridgec18(3.0x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经25min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法l：sunfirec18(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经25min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法m：xbridgephenyl(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经25min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm方法n：sunfirec18(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经18min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min).溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法o：xbridgephenyl(4.6x150mm)3.5μm。使用自10-100％溶剂b历经18min，然后在100％溶剂b保持5min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈0.05％tfa，uv220nm。方法p：sunfirec18(3.5μm，4.6x250mm)。使用自10-100％溶剂b历经12min，然后100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min)。溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法q：eclipsexdb-c18柱(4.6x150mm)。使用自10-100％溶剂b历经7min，然后在100％溶剂b保持3min的梯度洗脱(1.0ml/min).溶剂a为95％水，5％乙腈，0.05％tfa且溶剂b为5％水，95％乙腈，0.05％tfa，uv220nm。方法r：acquitybehc8(2.1x50mm)1.7微米。使用自20-90％溶剂b历经1.1min，然后在90％溶剂b保持0.7min的梯度洗脱(0.5ml/min)。溶剂a：95％水，5％乙腈，含有10mm乙酸铵；溶剂b：95％乙腈，5％水，含有10mm乙酸铵；uv220nm。方法s：sunfireobd(30x250mm)5微米。自30-100％溶剂b历经55min的梯度洗脱(28ml/min)。溶剂a：10mm乙酸铵/h2o，溶剂b：乙腈。uv220nm。方法t：acquitybehc8(2.1x50mm)1.7微米。使用自10-90％溶剂b历经1.1min，然后在90％溶剂b保持0.6min的梯度洗脱(0.5ml/min)。溶剂a：95％水，5％乙腈，含有0.1％tfa；溶剂b：95％乙腈，5％水，含有0.1％tfa；uv220nm。sfc和手性纯化方法：方法i：chiralpakad-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％{0.2％dea/ipa∶acn(1∶1)}，总流速：4.0ml/min，背压：100巴，温度：25℃，uv：218nm。方法ii：chiralpakod-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％{0.2％dea/ipa∶acn(1∶1)}，总流速：4.0ml/min，背压：104巴，温度：24.9℃，uv：287nm。方法iii：chiralpakoj-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：30％(0.3％dea/meoh)，总流速：4.0ml/min，背压：101巴，温度：23.6℃，uv：272nm。方法iv：chiralpakas-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.3％dea/meoh)，总流速：4.0ml/min，背压：102巴，温度：25.4℃，uv：272nm。方法v：chiralceloj-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/meoh)，总流速：4.0ml/min，背压：102巴，温度：24.6℃，uv：272nm。方法vi：luxcellulose-2(250x4.6mm)5.0-μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：35％(0.2％dea/meoh)，总流速：3.0ml/min，背压：101巴，温度：23.6℃，uv：260nm。方法vii：chiralcelas-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/meoh)，总流速：4.0ml/min，背压：101巴，温度：24.4℃，uv：270nm。方法viii：chiralpakic(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/etoh)，总流速：4.0ml/min，背压：101巴，温度：24.4℃，uv：270nm。方法ix：chiralpakif(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷∶etoh∶meoh∶1∶1∶1，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：270nm。方法x：luxamylose2(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷∶etoh：5∶95流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：270nm。方法xi：chiralcelod-h(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷∶etoh：70∶30流速：1.0，ml/min，温度：25℃，uv：260nm。方法xii：chiralpackid(250x4.6mm)5微米；0.1％dea/meoh，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：270nm。方法xiii：chiralpackad-h(250x4.6mm)5微米；0.1％dea/正己烷∶etoh：70∶30，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：270nm。方法xiv：luxcellulose-2(250x4.6mm)5.0微米；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/正己烷：etoh：80：20)，总流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：260nm方法xv：chiralpakad-h(250x4.6mm)5.0微米.％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/meoh)总流速：4.0ml/min，背压：100巴，温度：30℃，uv：218nm。方法xvi：chiralpakad-h(250x4.6mm)5.0微米.％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/etoh)总流速：2.5ml/min，背压：98巴，温度：15℃，uv：218nm。方法xvii：chiralpakid(250x4.6mm)5微米；0.1％dea/etoh，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm方法xviii：chiralcelladh(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷：etoh：10∶90，流速：1.0ml\min，温度：25℃，uv：272nm方法xix：chiralceloj-h(250x4.6mm)5.0μm颗粒；％co2：60％，％共溶剂：40％(0.2％dea/正己烷：etoh)，总流速：1.0ml/min，背压：102巴，温度：24.6℃，uv：272nm。方法xx：chiralpakie(250x4.6mm)5.0μm颗粒；0.2％dea/etoh，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：220nm方法xxi：luxcellulose-4(250x4.6mm)5.0微米；％co2：50％，％共溶剂：50％(0.2％dea/ipa∶acn：1∶1)，总流速：4ml/min，温度：25℃，uv：260nm方法xxii：chiralpakic(250x4.6mm)5微米；0.1％dea/etoh，流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm方法xxiii：chiralpakic(250x4.6mm)5微米；0.1％dea/正己烷∶etoh(50∶50)流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：260nm方法xxiv：chiralpakid(250x4.6mm)5微米；0.2％tea/正己烷∶etoh(10∶90)流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm方法xxv：chiralpakia(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷∶ipa(5∶95)流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm方法xxvi：chiralpakadh(250x4.6mm)5微米；0.2％dea/正己烷∶etoh(5∶95)流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm方法xxvii：chiralpakia(250x4.6mm)5；0.2％dea/正己烷∶etoh(10∶90)流速：1.0ml/min，温度：25℃，uv：254nm用于表征实施例的nmr：使用在以如下频率操作的bruker或jeol傅立叶变换光谱仪获得1hnmr谱：1hnmr：400mhz或300mhz(bruker)。13cnmr：100mhz或75mhz(bruker)。光谱数据以以下格式报告：化学位移(多重性，偶合常数和氢的数量)。化学位移以四甲基甲硅烷内标的低场ppm(δ单位，四甲基甲硅烷＝0ppm)和/或参考溶剂峰来指定，在1hnmr谱中cd2hsocd3溶剂峰出现在2.49ppm，cd2hod溶剂峰出现在3.30ppm，且chcl3溶剂峰出现在7.24ppm；在13cnmr谱中，对于cd3socd3溶剂峰出现在39.7ppm，cd3od溶剂峰出现在49.0ppm，且cdcl3溶剂峰出现在77.0ppm。所有13cnmr谱都是质子去偶的。中间体i-1-i和i-1-ii4-甲基-5-(氧杂环丙-2-基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(对映异构体i(i-1-i))(对映异构体ii(i-1-ii))两种对映异构体根据wo2010/129379中公开的操作合成。中间体i-22-氨基-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-甲酸叔丁酯中间体i-2根据wo2014/089324中公开的操作合成。中间体i-31-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-甲醛中间体i-3a：5-乙烯基异苯并呋喃-1(3h)-酮将5-溴异苯并呋喃-1(3h)-酮(5.00g，23.5mmol)与乙烯基三氟硼酸钾(4.72g，35.2mmol)、pdcl2(dppf)ch2cl2(1.91g，2.35mmol)和tea(6.54ml，46.9mmol)于乙醇(50ml)中混合。反应混合用氮气脱气且在85℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释且用etoac(3x50ml)萃取。合并的萃取物用盐水(30ml)洗涤，以硫酸钠干燥且减压浓缩。通过使用combiflash(redisep-40g，15％etoac/正己烷)的柱色谱纯化粗品，得到中间体i-3a(3.60g，83.0％)，其为灰白色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm5.41(s，2h)，5.49(d，j＝10.9hz，1h)，6.07(d，j＝17.4hz，1h)，6.90(dd，j＝17.8，10.9hz，1h)，7.65-7.72(m，1h)，7.76(s，1h)，7.78-7.86(m，1h)。lcms(方法r)，保留时间：0.64min，(m+h)161.1。中间体i-3：将中间体i-3a(3.60g，22.5mmol)溶于meoh∶thf/1∶1的混合物(60ml)且冷却至-78℃。臭氧气体鼓泡通过溶液，直至反应混合物的颜色变为橙色。通过氮气鼓泡通过反应混合物约1分钟除去残留的臭氧。向反应混合物中添加二甲基硫醚(4.99ml，67.4mmol)，使其温热至环境温度且搅拌2小时。真空除去挥发物，且通过使用combiflash(redisep-40g，40％etoac/正己烷)的柱色谱纯化粗物质，得到中间体i-3(1.70g，46.6％)，其为灰白色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm5.52(s，2h)，8.04-8.12(m，2h)，8.20(s，1h)，10.18(s，1h)。lcms(方法e)，保留时间0.92min，[m+h]162.9。中间体i-45-溴-3-甲基苯并[d]噁唑-2(3h)-酮中间体i-4根据wo2010/130773中公开的操作合成。中间体i-51h-吲唑-5-甲腈中间体i-5根据wo2014/0171432中公开的操作合成。中间体i-61h-吲唑-4-甲腈中间体i-6根据wo2013/026914中公开的操作合成。中间体i-71h-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-甲腈中间体i-7根据wo2014073904中公开的操作合成。中间体i-81h-吡唑并[4，3-b]吡啶中间体i-8根据wo2008/071451中公开的操作合成。中间体i-91h-吡咯并[2，3-c]吡啶-4-甲腈中间体i-9根据wo2013/092940中公开的操作合成。中间体i-101h-吡唑并[3，4-c]吡啶-4-甲腈向4-溴-1h-吡唑并[3，4-c]吡啶(0.320g，1.62mmol)于dmf(10ml)中的经搅拌溶液中添加zn(cn)2(0.190g，1.62mmol)和zncl2(0.110g，0.808mmol)。将所得反应混合物用氮气脱气5分钟，添加四(三苯基膦)钯(0)(0.373g，0.323mmol)且再次用氮气脱气5分钟。将反应混合物在密封管中在100℃加热10小时。冷却反应混合物且减压浓缩，用水(40ml)稀释且用etoac(2x20ml)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash(redisep-24g，70％etoac/正己烷s)纯化所得残余物，得到中间体i-10(0.14g，60％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm8.50(s，1h)，8.75(s，1h)，9.38(s，1h)，14.32(br，s，1h)。lcms(方法e)，保留时间0.647min，[m+h]145.0。中间体i-11吡唑并[1，5-a]嘧啶-5-胺中间体i-11根据wo2014/074657中公开的操作合成。中间体i-124-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-甲醛中间体i-12根据wo2015/095097中公开的操作合成。中间体i-132-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙醛中间体i-13根据wo2012/058134a1，2012中公开的操作合成。中间体i-141h-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-甲腈中间体i-14根据wo2007/48070a2，2007中公开的操作合成。中间体i-151h-吲哚-3-甲腈中间体i-15根据tetrahedron69(2013)4236-4240中公开的操作合成。中间体i-166-苄基-2-氯-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘中间体i-16根据wo2007/52124中公开的操作合成。中间体i-174-(溴甲基)-2-氟苯甲腈中间体i-18根据organicandbiomolecularchemistry，2，(2004)1339-1352中公开的操作合成。中间体i-196-苄基-2-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶中间体i-19a：6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2，4-二醇1-苄基-4-氧代哌啶-3-甲酸甲酯(10.0g，40.4mmol)和脲(4.86g，81.0mmol)溶于乙醇(35ml)，并且逐滴添加1m甲醇钠于甲醇中的溶液(20ml，20.0mmol)。将所得反应混合物在氮气气氛下加热至回流24小时。将反应混合物冷却至0℃，保持15分钟，通过抽滤分离所得晶体。将晶体悬浮于水中且添加盐酸以调节ph至6.0。将该混合物在室温搅拌1小时，通过抽滤分离所得晶体且真空干燥，得到中间体i-19a(5.20g，50.1％)，其未经进一步纯化即使用。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ2.27(t，j＝5.5hz，2h)，2.53-2.59(m，2h)，2.98(s，2h)，3.57(s，2h)，5.42(brs，2h)，7.23-7.37(m，5h)。lcms(方法r)：保留时间0.67min，[m+h]258.4。中间体i-19b：6-苄基-2，4-二氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶历经15分钟，将pocl3(25ml，268mmol)缓慢添加至含有中间体19a(5.00g，19.4mmol)的烧瓶中。将所得反应混合物加热至100℃，保持16小时，然后完全浓缩。将残余物用冰水淬灭且用饱和碳酸氢钠溶液碱化至ph8。含水混合物用dcm(3x200ml)萃取，合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。通过使用combiflash(redisep-40g柱和25-30％etoac/己烷)的硅胶柱色谱纯化残余物，得到中间体i-19b(3.20g，56.0％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ2.77-2.84(m，2h)，2.95-3.04(m，2h)，3.63(s，2h)，3.77(s，2h)，7.27-7.40(m，5h)。lcms(方法e)：保留时间3.02min，[m+h]294.0。中间体i-19：向中间体i-19b(3.00g，10.20mmol)于乙醇(60ml)中的溶液中添加锌(3.33g，51.0mmol)和氢氧化铵(2.00ml，51.4mmol)。将所得反应混合物加热至75℃，保持15小时，然后冷却，通过硅藻土过滤且用乙酸乙酯(20ml)洗涤。滤液用乙酸乙酯(3x50ml)萃取，合并的有机相经无水硫酸钠干燥且过滤。减压浓缩滤液。通过使用combiflash(redisep-24g，40-50％etoac/石油醚)的硅胶柱色谱纯化残余物，得到中间体i-19(1.30g，49.1％)，其为黄色胶状物。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ2.80-2.90(m，2h)，2.97-3.05(m，2h)，3.58(d，j＝1.0hz，2h)，3.73(s，2h)，7.28-7.42(m，5h)，8.23(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间2.24min，[m+h]260.1。中间体i-202-溴-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-甲酸叔丁酯在0℃，向cubr2(6.69g，30.0mmol)于乙腈(3ml)中的经搅拌溶液中添加亚硝酸异戊酯(26.9ml，200mmol)且继续搅拌20分钟。向该所得反应混合物中添加中间体i-2(5.00g，19.9mmol)，且使其温热至环境温度。3小时后，将反应混合物用水(10ml)淬灭且用乙酸乙酯(3x250ml)萃取。合并的有机萃取物经无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩。通过combiflash(redisep-40g，35％etoac/正己烷)纯化残余物，得到中间体i-20(1.50g，23.9％)，其为无色液体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.43(s，9h)2.87(t，j＝6.0hz，2h)3.64(t，j＝6.0hz，2h)4.53(s，2h)8.56(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间2.08min，[m+h]316.2。中间体i-215-(2-溴乙酰基)-3-甲基苯并[d]噁唑-2(3h)-酮中间体i-21a：5-(1-乙氧基乙烯基)-3-甲基苯并[d]噁唑-2(3h)-酮将中间体i-4(4.00g，17.4mmol)，三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(7.05ml，20.8mmol)和licl(1.47g，34.8mmol)于甲苯(30ml)中的溶液用氮气脱气15分钟，添加四(三苯基膦)钯(0.603g，0.522mmol)。将所得反应混合物用氮气再脱气5分钟且加热至100℃保持16小时。然后冷却反应混合物，用水(40ml)稀释且用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩，得到中间体i-21a(5.50g，70.0％)。lcms(方法e)：保留时间2.50min，[m+h]221。化合物未经进一步纯化或表征直接用于后续步骤。中间体i-21：在0℃，向中间体i-21a(5.50g，12.5mmol)于二噁烷(50ml)和h2o(15ml)中的溶液中逐份添加nbs(2.68g，15.0mmol)。将所得反应混合物在环境温度搅拌1小时，然后用水(50ml)稀释且用乙酸乙酯(3x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经硫酸钠干燥，且减压蒸发。通过combiflash(redisep-40g，50％etoac/正己烷)纯化残余物，得到中间体i-21(5.00g，73.8％)，其为棕色固体。1hnmr(400mhz，cdcl3)δppm3.45(s，3h)，4.44(s，2h)，7.28(d，j＝8.0hz，1h)，7.67(d，j＝1.6hz，1h)，7.82(dd，j＝8.0hz，j＝1.6hz，1h)。lcms(方法r)：保留时间0.99min，[m-h]268。中间体i-226-溴-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯向6-溴-1，2，3，4-四氢异喹啉(1.00g，4.72mmol)于dcm(20ml)中的溶液中添加tea(1.314ml，9.43mmol)，然后添加一缩二碳酸二叔丁酯(1.31ml，5.66mmol)且将反应混合物在环境温度搅拌12小时。将反应用水淬灭且用dcm(2x50ml)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，且减压浓缩。通过combiflash(redisep-12g，15％etoac/正己烷)纯化粗品，得到中间体i-22(1.10g，74.7％)，其为浅棕色液体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm1.42(s，9h)，2.77(t，j＝5.85hz，2h)，3.52(t，j＝5.85hz，2h)，4.45(s，2h)，7.14(d，j＝7.93hz，1h)，7.33-7.40(m，2h)。lcms(方法e)：保留时间3.41min，[m+h]316.0。中间体i-232-氯-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘将中间体i-16(0.475g，1.84mmol)和氯甲酸1-氯乙酯(0.240ml，2.203mmol)的混合物溶于dce(20ml)且回流3小时。减压浓缩反应混合物，将残余物重新溶于meoh(20ml)且回流30分钟。冷却反应混合物且减压浓缩。将残余物重新溶于水且用etoac(3x30ml)洗涤。将水层用10％碳酸氢钠溶液(100ml)碱化且用dcm(2x50ml)萃取。合并的dcm层用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash(redisep-12g，2％meoh/氯仿)纯化粗品，得到中间体i-23(0.300g79％)，其为棕色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm3.07(t，j＝6.2hz，2h)，3.47(brs，2h)，4.31(brs，2h)，7.44(d，j＝8.3hz，1h)，7.75(d，j＝8.3hz，1h)，9.46(brs，1h)。lcms(方法b)：保留时间0.57min，[m-1]174.9。中间体i-255-溴-4-甲基异苯并呋喃-i(3h)-酮中间体i-25根据wo2015/095097中公开的操作合成。中间体i-263-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-甲醛中间体i-26a：3-甲基-5-乙烯基苯并[d]噁唑-2(3h)-酮根据中间体i-3a的一般合成方案且自中间体i-4(2.00g，8.77mmol)起始，制备中间体i-26a(1.60g，89.0％)，其为棕色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm3.41(s，3h)，5.26(d，j＝10.4hz，1h)，5.71(d，j＝16.8hz，1h)，6.72(dd，j＝16.8，10.4hz，1h)，7.01(s，1h)，7013(s，2h)。lcms(方法e)：保留时间2.013min，(m+h)175.0。中间体i-26：根据中间体i-3的一般合成方案且自中间体i-26a(1.60g，7.76mmol)起始，制备中间体i-26(1.10g，80.0％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm3.45(s，3h)，7.34(d，j＝8.0hz，1h)，7.65(s，1h)，7.67(d，j＝7.2hz，1h)，9.95(s，1h)。实施例编号后跟-i或-ii是指离散的对映异构体(discreteenantiomer)。对映异构体是根据中间体i-1(i-1-i或i-1-ii)的任一对映异构体的选择确定的。如果使用中间体i-1-i，则将产物指定为“-i”。如果使用中间体i-1-ii，则将产物指定为“-ii”。实施例1-i和1-ii1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈(对映异构体-i和ii)中间体1a：1-(6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈向中间体i-19(0.500g，1.92mmol)和1h-吲哚-4-甲腈(0.328g，2.31mmol)于二噁烷(15ml)中的经搅拌溶液中添加k2co3(0.798g，5.78mmol)和xantphos(0.223g，0.385mmol)。将所得反应混合物用氮气脱气5分钟，然后添加pd2(dba)3(0.176g，0.193mmol)且将反应混合物用氮气再脱气5分钟。将反应混合物在密封管中于100℃加热16小时，冷却且减压浓缩。将残余物用etoac稀释且通过硅藻土过滤。滤液经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。将粗固体用乙醚(50ml)洗涤，得到中间体1a(0.600g，81.1％)，其为淡黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.85(t，j＝5.6hz，2h)，3.02(t，j＝5.6hz，2h)，3.62(s，2h)，3.74(s，2h)，6.90(d，j＝3.6hz，1h)，7.27-7.30(m，1h)，7.34-7.40(m，4h)，7.48(t，j＝8.4hz，1h)，7.74(d，j＝7.2hz，1h)，8.48(d，j＝3.6hz，1h)，8.66(s，1h)，9.04(d，j＝8.4hz，1h)。lcms(方法-r)：保留时间1.60min，[m+h]366.4。中间体1b：1-(5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-4-甲腈根据中间体i-23的一般合成方案且自中间体1a(0.600g，1.64mmol)起始，制备中间体1b(0.380g，58.0％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.88(t，j＝8.0hz，3h)，3.07(t，j＝8.0hz，2h)，3.89(s，2h)，6.90(d，j＝4.8hz，1h)，7.48(t，j＝10.0hz，1h)，7.75(d，j＝10.0hz，1h)，8.49(d，j＝5.2hz，1h)，8.57(s，1h)，9.06(d，j＝11.8hz，1h)。lcms(方法r)：保留时间1.59min，[m+h]276.2。实施例1-i：(对映异构体-i)将中间体1b(0.0950g，0.345mmol)和中间体i-1-i(0.0980g，0.518mmol)溶于乙醇(15ml)且加热至回流48小时。将所得反应混合物减压蒸发至干。通过制备型hplc[sunfire(250x30id)5微米，流动相a：0.1％hcooh/水，流动相b：acn，梯度：10-45％b历经7分钟，流速：25ml/min，保留时间12.05，uv254nm]纯化残余物，得到实施例1-i(对映异构体-i)(0.0800g，48.3％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.33(s，3h)，2.66-2.77(m，2h)，3.00(t，j＝5.2hz，4h)，3.84(q，j＝8.4hz，2h)，5.22(t，j＝4.4hz，1h)，5.40(d，j＝2.8hz，3h)，5.44(d，j＝4.0hz，1h)，6.91(dd，j＝0.4hz，j＝3.2hz，1h)，7.49(t，j＝8.0hz，1h)，7.70(t，j＝8.0hz，1h)，7.74(d，j＝3.2hz，1h)，8.50(d，j＝3.6hz，1h)，8.64(s，1h)，9.06(d，j＝8.4hz，1h)。lcms(方法-e)：保留时间2.85，[m+h]466.2.hplc(方法-n)：保留时间6.71min，纯度95.4％.(方法-o)：保留时间8.39min，纯度97.4％。手性纯度(方法xvi)：保留时间14.67min，100％ee。实施例1-ii：(对映异构体-ii)根据实施例1-i的一般合成方案且自中间体1b(0.095g，0.345mmol)和中间体i-1-ii起始，制备实施例1-ii(对映异构体-ii)(0.010g，6.28％)，其为类白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.33(s，3h)，2.66-2.77(m，2h)，3.00(t，j＝5.2hz，4h)，3.84(q，j＝8.4hz，2h)，5.22(t，j＝4.4hz，1h)，5.40(d，j＝2.8hz，3h)，5.44(d，j＝4.0hz，1h)，6.91(dd，j＝0.4hz，j＝3.2hz，1h)，7.49(t，j＝8.0hz，1h)，7.70(t，j＝8.0hz，1h)，7.74(d，j＝3.2hz，1h)，8.50(d，j＝3.6hz，1h)，8.64(s，1h)，9.06(d，j＝8.4hz，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间2.18，[m+1]466.1，纯度：96.3％.(方法b)：保留时间1.39，[m+1]466.1，纯度：94.5％。手性纯度(方法xvi)：保留时间11.37min，98.4％ee。实施例22-氟-5-((6-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈中间体2a：2-((4-氰基-3-氟苯基)氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-甲酸叔丁酯向中间体i-20(0.500g，1.59mmol)和4-氨基-2-氟苯甲腈(0.260g，1.91mmol)于二噁烷(3ml)中的溶液中添加k2co3(0.440g，3.18mmol)。将反应混合物用氮气吹扫10分钟。添加pd2(dba)3(0.146g，0.159mmol)和xantphos(0.0460g，0.0800mmol)，将反应混合物在密封管中加热至100℃，保持12小时。将反应混合物冷却至环境温度且通过硅藻土过滤，然后用乙酸乙酯(2x20ml)洗涤。滤液用水(50ml)稀释且用乙酸乙酯(2x150ml)萃取。合并的有机萃取物经无水na2so4干燥，过滤，且减压浓缩。通过combiflash(redisep-12g，40％etoac/正己烷)纯化残余物，得到中间体2a(0.350g，59.5％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.44(s，9h)，2.83(t，j＝6.0hz，2h)，3.67(t，j＝5.8hz，2h)，4.49(s，2h)，7.62(dd，j＝9.0，2.0hz，1h)，7.71-7.84(m，1h)，8.11(dd，j＝13.3，1.8hz，1h)，8.48(s，1h)，10.43(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间3.01min，[m-h]370.2。中间体2b：2-氟-4-((5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)苯甲腈向中间体2a(0.350g，0.948mmol)于dcm(5ml)中的经搅拌溶液中添加tfa(0.730ml，9.48mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，残余物用水稀释且用10％nahco3溶液碱化。用dcm(2x10ml)萃取含水混合物，且将合并的有机层减压浓缩，得到中间体2b(0.200g，78.0％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm3.04(t，j＝6.3hz，2h)，3.40(t，j＝6.3hz，2h)，4.28(brs，2h)，7.63(dd，j＝8.8，2.3hz，1h)，7.75-7.85(m，1h)，8.11(dd，j＝13.3，1.76hz，1h)，8.53(s，1h)，9.07(brs，1h)，10.5(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间1.55min，[m+h]270.2。实施例2：向中间体2b(0.0500g，0.186mmol)于meoh(3ml)中的经搅拌溶液中添加中间体i-3(0.0360g，0.223mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌15分钟，然后添加nacnbh4(0.0180g，0.279mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌14小时且减压蒸发至干。将残余物用水(20ml)稀释且用乙酸乙酯(3x20ml)萃取。合并的有机萃取物经用无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。通过制备型lc/ms[xbridgec18(19x10mm)5μm；流动相a：10mmnh4oac/水；流动相b：acn；梯度：10-35％b历经25min，接着在35％b保持10分钟且在100％b保持5分钟；流速：15ml/min。uv220nm]纯化残余物，得到实施例2(0.009g，11.6％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.81-2.92(m，4h)，3.55(s，2h)，3.87(s，2h)，5.41(s，2h)，7.57-7.63(m，2h)，7.69(s，1h)，7.71-7.78(m，1h)，7.83(d，j＝7.8hz，1h)，8.10(dd，j＝13.3，1.8hz，1h)，8.33(s，1h)，10.4(s，1h)。19fnmr(400mhz，dmso-d6)δppm107.4。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.34min，[m+h]416.2，纯度：98.5％，(方法b)：保留时间1.98min，[m+h]416.2，纯度：100％。实施例3-i和3-ii1-(6-(2-羟基-2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈(对映异构体-i和ii)中间体3a：1-(6-苄基-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈根据中间体1a的一般合成方案且自中间体i-19(0.500g，1.92mmol)起始，制备中间体3a(0.300g，34％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.85-2.91(m，2h)，2.97-3.06(m，2h)，3.66(s，2h)，3.75(s，2h)，7.23-7.41(m，5h)，7.75(t，j＝8.8hz，1h)，7.91(d，j＝7.2hz，1h)，8.65(d，j＝8.8hz，2h)，8.96(d，j＝8.8hz，1h)。lcms(方法e)：保留时间2.95min，[m+h]367.2。中间体3b：1-(5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈根据中间体1b的一般合成方案且自中间体3a(0.300g，0.657mmol)起始，制备中间体3b(0.160g，83.0％)，其为淡黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.85-2.92(m，2h)，3.04-3.12(m，2h)，3.91(s，2h)，7.24-7.38(m，1h)，7.74(t，j＝8.0hz，1h)，7.93(d，j＝6.8hz，1h)，8.64(d，j＝5.6hz，2h)，8.97(d，j＝7.6hz，1h)。lcms(方法e)：保留时间1.24min，[m+h]277.2。中间体3c：1-(6-(2-(3-甲基-2-氧代-2，3-二氢苯并[d]噁唑-5-基)-2-氧代乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲唑-4-甲腈向中间体3b(0.150g，0.432mmol)于thf(20ml)中的溶液中添加dipea(0.167g，1.29mmol)和中间体i-21(0.280g，0.518mmol)。将所得反应混合物在环境温度搅拌4小时且减压蒸发至干，得到中间体3c(0.400g85.0％)。lcms(方法r)：保留时间1.11min，[m+h]466.3。化合物未经进一步纯化或表征直接用于后续步骤。实施例3-i和3-ii：(对映异构体i和ii)向中间体3c(0.400g，0.378mmol)于thf(20ml)溶液中添加meoh(5ml)，然后在0℃逐份添加nabh4(0.0430g，1.13mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌1小时。反应混合物用水稀释，然后用10％meoh/dcm(3x50ml)萃取。合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且减压蒸发。通过制备型hplc[sunfirec18(250x30id)5微米，a：0.1％hcooh/h2o，b：乙腈，％b：0-100，16min，流速：17ml/min，保留时间14.5min，uv220nm]，得到外消旋体(0.0600g，33.6％)。通过sfc[luxcellulose-4(250x21.5mm)5微米，流动相50％dea/meoh，总流速：80.0g/min，背压：100巴，温度：30℃，uv：251nm]手性分离外消旋体。将较快洗脱的化合物(保留时间21.00min)指定为实施例3-i(对映异构体-i)，(0.0080g，13.0％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.55-2.70(m，2h)，2.95-3.05(m，4h)，3.35(s，3h)，3.84(s，2h)，4.85-4.93(m，1h)，5.33(d，j＝3.6hz，1h)，7.17(dd，j＝8.0hz，j＝1.2hz，1h)，7.27(s，1h)，7.30(d，j＝7.2hz，1h)，7.75-7.79(m，1h)，7.95(d，j＝8.0hz，1h)，8.67(s，1h)，8.68(d，j＝8.8hz，1h)，9.0(d，j＝8.8hz，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.28min，[m+h]468.1，纯度：100％.(方法b)：保留时间1.70min，[m+h]468.2，纯度：98.5％，chiralpurity(方法ix)：保留时间39.0min，100％ee。将较慢洗脱的化合物(保留时间27.0min)指定为实施例3-ii(对映异构体-ii)(0.0070g12.0％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ2.55-2.7(m，2h)，2.95-3.05(m，4h)，3.35(s，3h)，3.84(s，2h)，4.85-4.93(m，1h)，5.33(d，j＝3.6hz，1h)，7.17(dd，j＝8.0hz，j＝1.2hz，1h)，7.27(s，1h)，7.30(d，j＝7.2hz，1h)，7.75-7.79(m，1h)，7.95(d，j＝8.0hz，1h)，8.67(s，1h)，8.68(d，j＝8.8hz，1h)，9.0(d，j＝8.8hz，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.28min，[m+h]468.1，纯度：100％。(方法b)：保留时间1.70min，[m+h]468.2，纯度：98.6％。手性纯度(方法ix)：保留时间47.14min，95％ee。实施例42-氟-4-((2-((1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈中间体4a：6-((4-氰基-3-氟苯基)氨基)-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯向中间体i-22(0.100g，0.320mmol)和4-氨基-2-氟苯甲腈(0.0520g，0.384mmol)于二噁烷(1ml)中的溶液中添加k2co3(0.0890g，0.641mmol)。将所得反应混合物用氮气吹扫10分钟，且先后添加pd2(dba)3(0.0290g，0.0320mmol)和xantphos(9.27mg，0.0160mmol)。将所得反应混合物在密封管中于100℃加热12小时，冷却至环境温度且通过硅藻土过滤。将滤液用水(20ml)稀释且用etoac(2x15ml)萃取。合并的有机萃取物经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash(redisep-12g，40％etoac/正己烷)纯化残余物，得到中间体4a(0.0700g，59.5％)，其为黄色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm1.43(s，9h)，2.77(t，j＝6.04hz，2h)，3.54(t，j＝5.85hz，2h)，4.47(s，2h)，6.79-6.82(m，1h)，6.84(s，1h)，7.00-7.05(m，2h)，7.17(d，j＝8.69hz，1h)，7.54-7.66(m，1h)，9.14(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间3.36min，[m-h]366.0。中间体4b：2-氟-4-((1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈根据中间体2b的一般合成方案且自中间体4a(0.05g，0.136mmol)起始，制备中间体4b(0.0200g，55.0％)，其为淡黄色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm2.62-2.77(m，2h)，2.93(brs，2h)，3.81(brs，2h)，6.70-6.84(m，3h)，6.87-7.07(m，3h)，7.58(t，j＝8.50hz，1h)，9.07(brs，1h)。lcms(方法e)：保留时间1.50min，[m+h]268.0。实施例4：根据实施例2的一般合成方案且自中间体4b(0.0800g，0.215mmol)起始，制备实施例4(0.0110g14.2％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.68-2.76(m，2h)，2.84(d，j＝5.52hz，2h)，3.56(s，2h)，3.82(s，2h)，5.41(s，2h)，6.75-6.83(m，2h)，6.91-6.98(m，2h)，7.00-7.04(m，1h)，7.54-7.62(m，2h)，7.68(s，1h)，7.83(d，j＝8.03hz，1h)，9.10(s，1h).19fnmr(400mhz，dmso-d6)δppm107.84。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.14min，[m+h]414.3，纯度：99.2.(方法b)：保留时间1.80min，[m+h]414.3，纯度：100％。实施例54-甲基-5-((2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-基)甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮中间体5a：2-((4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)氨基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-甲酸叔丁酯向中间体2(0.500g，1.92mmol)和5-溴-4-甲基异苯并呋喃-1(3h)-酮(0.454g，1.99mmol)于二噁烷(15ml)中的经搅拌溶液中添加k2co3(0.552g，4.00mmol)和xantphos(0.0580g，0.100mmol)。将所得反应混合物用氮气脱气5分钟，接着添加pd2(dba)3(0.183g，0.200mmol)。将反应混合物用氮气再脱气5分钟。通过使用微波反应器将反应混合物在100℃加热1小时，冷却且减压浓缩。残余物用etoac稀释且通过硅藻土过滤。滤液经无水硫酸钠干燥，过滤且减压浓缩。通过combiflash(redisep-24g，65％etoac/正己烷)纯化粗固体，得到中间体5a(0.380g，48.0％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.40-1.48(m，9h)，2.20(s，3h)，2.74(t，j＝6.02hz，2h)，3.64(t，j＝6.02hz，2h)，4.45(s，2h)，5.38(s，2h)，7.63(d，j＝8.03hz，1h)，7.92(d，j＝8.03hz，1h)，8.32(s，1h)，9.12(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间2.42min，[m+h]397.2。中间体5b：4-甲基-5-((5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)氨基)异苯并呋喃-1(3h)-酮根据中间体4b的一般合成方案且自中间体5a(0.250g，0.631mmol)起始，合成中间体5b(0.130g，69.6％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.18(s，3h)，2.93(t，j＝6.27hz，2h)，3.46(d，j＝6.53hz，2h)，4.22(s，2h)，5.38(s，2h)，7.64(d，j＝8.53hz，1h)，7.82(d，j＝8.53hz，1h)，8.35(s，1h)，9.14(brs，1h)，9.32(s，1h)。lcms(方法e)：保留时间0.97min，[m+h]297.2。实施例5：根据实施例2的一般合成方案且自中间体5b(0.0500g，0.169mmol)起始，合成实施例5(12.9mg，16.8％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.32(s，3h)，2.66-2.74(m，2h)，2.99(t，j＝4.8hz，4h)，3.83(d，j＝8.8hz，2h)，5.23(t，j＝4.0hz，1h)，5.40(d，j＝2.8hz，2h)，5.44(d，j＝4.0hz，1h)，6.90(dd，j＝3.6hz，j＝0.8hz，1h)，7.68-7.76(m，3h)，8.20(d，j＝1.2hz，1h)，8.42(d，j＝3.6hz，1h)，8.63(s，1h)，8.88(d，j＝8.8hz，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间0.96min，[m+h]457.2，纯度：100％.(方法b)：保留时间1.62min，[m+h]457.2，纯度：100％。实施例62-氟-4-((2-(2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)苯甲腈中间体6a：5-(2-(6-溴-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-基)乙基)异苯并呋喃-1(3h)-酮向6-溴-1，2，3，4-四氢异喹啉(0.700g，3.30mmol)于dcm(30ml)中的溶液中添加中间体i-13(0.640g，3.63mmol)，接着添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.40g，6.60mmol)。将所得反应混合物在环境温度搅拌14小时。将反应混合物用水(50ml)稀释且用dcm(2x50ml)萃取。合并的萃取物用盐水(50ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥且浓缩。将粗产物用乙醚(2x50ml)洗涤，得到中间体6a(1.05g，73.5％)，其为棕色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.70-2.80(m，6h)，2.99(t，j＝10hz，2h)，3.59(s，2h)，5.37(s，2h)，7.03(d，j＝10.8hz，1h)，7.27(d，j＝2.4hz，1h)，7.31(s，1h)，7.50(d，j＝10.4hz，1h)，7.56(s，1h)，7.76(d，j＝10.4hz，1h)。lcms(方法r)：保留时间1.03min，(m+h)374.2。实施例6：根据中间体1a的一般合成方案且自中间体6a(0.0800g，0.215mmol)起始，制备实施例6(0.00500g，5.44％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.69-2.83(m，6h)，3.01(t，j＝7.53hz，2h)，3.61(s，2h)，5.38(s，2h)，6.75-6.83(m，2h)，6.91-6.99(m，2h)，7.06(d，j＝8.53hz，1h)，7.51(d，j＝8.03hz，1h)，7.54-7.63(m，2h)，7.76(d，j＝8.03hz，1h)，9.09(s，1h).19fnmr(400mhz，dmso-d6)δppm-107.85。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.22min，[m+h]428.3，纯度：94.0％.(方法b)：保留时间1.84min，[m+h]428.3，纯度：95.0％。实施例72-氟-4-((6-(2-(1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘-2-基)氨基)苯甲腈中间体7a：5-(2-(2-氯-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5h)-基)乙基)异苯并呋喃-1(3h)-酮根据中间体6a的一般合成方案且自中间体i-23(0.350g，2.08mmol)起始，制备中间体7a(0.300g，79.0％)，其为棕色固体。化合物未经进一步纯化或表征直接用于后续步骤。lcms(方法b)：保留时间0.90min，[m+1]329.1。实施例7：根据中间体1a的一般合成方案且自中间体7a(0.0500g，0.152mmol)起始，制备实施例7(0.0090g，13.8％)，其为黄色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.74-2.89(m，6h)，2.97-3.05(m，2h)，3.58(s，2h)，5.38(s，2h)，6.75(d，j＝8.0hz，1h)，7.35-7.43(m，2h)，7.51(d，j＝8.0hz，1h)，7.57(s，1h)，7.68(t，j＝8.5hz，1h)，7.76(d，j＝8.0hz，1h)，8.14(dd，j＝13.5，1.5hz，1h)，9.82(s，1h)。19fnmr(400mhz，dmso-d6)δppm107.29。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.17min，纯度：97.0％[m+h]429.3.(方法b)：保留时间1.13min，纯度：96.0％，[m+h]429.3。实施例8-i和9-i1-(6-(2-羟基-2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈(8-i)和1-(6-(2-羟基-1-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)乙基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈(9-i)中间体8a：2-(3-氰基-1h-吲哚-1-基)-7，8-二氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-6(5h)-甲酸叔丁酯根据中间体1a的一般合成方案且自中间体i-20(0.200g，0.637mmol)起始，制备中间体8a(0.450g，90.0％)，其为淡黄色固体。lcms(方法b)：保留时间1.55min，[m+1]376.3。化合物未经进一步纯化或表征直接用于后续步骤。中间体8b：1-(5，6，7，8-四氢吡啶并[4，3-d]嘧啶-2-基)-1h-吲哚-3-甲腈根据中间体4b的一般合成方案且自中间体8a(0.650g，0.831mmol)起始，制备中间体8b(0.150g，53.1％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.90(t，j＝5.8hz，2h)，3.03-3.14(m，2h)，3.92(s，2h)，7.37-7.46(m，1h)，7.47-7.57(m，1h)，7.75(d，j＝8.0hz，1h)，8.62(s，1h)，8.75-8.85(m，1h)，9.06(s，1h)。lcms(方法b)：保留时间0.71min，[m+h]276.1。实施例8-i和9-i：根据中间体1-i的一般合成方案且自中间体8b(0.0600g，0.218mmol)起始，制备实施例8-i(对映异构体i)(0.0390g，38.8％)，其为白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.31(s，3h)，2.66-2.77(m，2h)，2.99-3.03(m，4h)，3.80-3.90(m，2h)，5.20-5.23(m，1h)，5.40(d，j＝3.2hz，2h)，5.45(d，j＝4.0hz，1h)，7.43(t，j＝7.6hz，1h)，7.51(t，j＝7.6hz，1h)，7.70(d，j＝8.0hz，1h)，7.73-7.76(m，2h)，8.68(s，1h)，8.81(d，j＝8.4hz，1h)，9.07(s，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.49min，[m+h]466.2，纯度：96.7％.(方法b)：保留时间2.26min，[m+h]466.2，纯度：100％。手性纯度(方法xx)：保留时间13.08min，100％ee。得到作为副产物的实施例9-i(对映异构体ii)，其为灰白色固体(0.0100g，9.76％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.32(s，3h)，2.88-3.00(m，4h)，3.71-3.77(m，2h)，3.93-4.02(m，3h)，4.91(t，j＝1.6hz，1h)，5.42(s，2h)，7.42(t，j＝7.6hz，1h)，7.50(t，j＝7.6hz，1h)，7.66-7.74(m，3h)，8.63(s，1h)，8.79(d，j＝8.8hz，1h)，9.05(s，1h)。lcms/hplc(方法a)：保留时间1.52min，[m+h]466.0，纯度：98.5％、lcms(方法b)：保留时间2.21min，[m+h]466.0，纯度：97.9％。手性纯度：(方法-xviii)：保留时间13.60min，100％ee。实施例102-氟-4-(((2-(4-甲基-1-氧代-1，3-二氢异苯并呋喃-5-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)甲基)苯甲腈中间体10a：6-((4-氰基-3-氟苄基)氨基)-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯向6-氨基-3，4-二氢异喹啉-2(1h)-甲酸叔丁酯(0.250g，1.01mmol)于乙腈(10ml)中的溶液中添加k2co3(0.417g，3.02mmol)和ki(0.016g，0.101mmol)。将反应混合物搅拌15分钟。将中间体i-18(0.259g，1.21mmol)添加至所得混合物中且将反应混合物在室温搅拌12小时。将反应混合物用水(20ml)稀释且用etoac(2x30ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥且真空浓缩。，通过使用combiflash(redisep-12g，30％etoac/正己烷)的柱色谱法纯化所得残余物，得到中间体10a(0.300g，78.0％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.35-1.47(m，9h)，2.60(s，2h)，3.46(t，j＝6.0hz，2h)，4.31(brs，2h)，4.37(d，j＝6.0hz，2h)，6.26-6.37(m，2h)，6.40(dd，j＝8.3，2.8hz，1h)，6.84(d，j＝7.5hz，1h)，7.32-7.51(m，2h)，7.80-7.95(m，1h)。lcms(方法t)：保留时间1.19min，[m+h]382.1。中间体10b：2-氟-4-(((1，2，3，4-四氢异喹啉-6-基)氨基)甲基)苯甲腈根据中间体4b的一般合成方案且自中间体10a(0.300g，0.786mmol)起始，制备中间体10b(0.150g，67.8％)，其为灰白色固体。1hnmr(300mhz，dmso-d6)δppm2.84(t，j＝5.8hz，2h)，3.36(t，j＝5.8hz，2h)，3.66(s，2h)，4.34(d，j＝6.4hz，2h)，6.15(t，j＝6.0hz，1h)，6.24(s，1h)，6.31(d，j＝7.9hz，1h)，6.68(d，j＝8.3hz，1h)，7.28-7.51(m，2h)，7.86(t，j＝7.5hz，1h)，lcms(方法e)：保留时间1.86min，[m+h]282.2。实施例10：根据中间体1a的一般合成方案且自中间体10b(0.100g，0.355mmol)起始，制备实施例10(0.0013g，0.90％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm2.21(s，3h)，2.82(t，j＝5.5hz，2h)，3.23(t，j＝5.7hz，2h)，4.07(s，2h)，4.39(d，j＝6.4hz，2h)，5.33(s，2h)，6.30(t，j＝6.4hz，1h)，6.35-6.45(m，2h)，6.86(d，j＝8.3hz，1h)，7.24(d，j＝8.3hz，1h)，7.40(dd，j＝8.1，1.5hz，1h)，7.47(d，j＝11.5hz，1h)，7.64(d，j＝8.1hz，1h)，7.88(dd，j＝8.1，6.8hz，1h)。19fnmr(400mhz，dmso-d6)δppm109.04。lcms/hplc(方法a)：保留时间2.25min，[m+h]428.1，纯度：96.4％.(方法b)：保留时间2.23min，[m+h]428.2，纯度：100％。根据实施例1至10中所述的一般合成操作合成表1中的实施例。表1表2生物学测定本发明化合物的药理学性质可通过许多生物学测定证实。随后的示例性生物测定已经用本发明的化合物进行。铊通量测定(thalliumfluxassay)溶液和试剂：使用fluxor试剂盒(f10017，lifetechnologies)进行铊通量测定。使用试剂盒组分制备上样缓冲液、测定缓冲液和刺激缓冲液。hbss(hank平衡盐溶液，cat#14025-092)单独购自lifetechnologies。制备10ml上样缓冲液：首先将10μlfluxor染料(于dmso中重构)添加至100μlpowerload浓缩剂中，然后将该混合物与100μlprobenicid(100x)一起添加至9.79mlhbss中。通过将2ml不含fluxor氯化物的缓冲液(5x)、100μl丙磺舒(probenicid)(100x)和0.2mlouabain(13.77mm)添加至7.7ml去离子水中来制备测定缓冲液(10ml)。刺激缓冲液由不含fluxor氯化物的缓冲液中的15mmtl2so4、0.75mmk2so4组成(使用去离子水稀释至1x)。测定板中tl2so4和k2so4的最终浓度分别为3mm和0.15mm。铺板和诱导细胞：在5％co2培养箱中，将chot-rexhromk(人kir1.1)稳定细胞系于37℃维持在补充有10％fbs、1％青霉素-链霉素、500μg/mlzeocin和10μg/ml杀稻瘟菌素(blasticidin)的ham′sf12培养基中。在实验前一天，通过与versene溶液(15040-066，lifetechnologies)于37℃温育10分钟，接着添加生长培养基使细胞解离。将细胞悬浮液以1200rpm离心5分钟。弃去上清液后，将细胞重悬于新鲜生长培养基中，使用血细胞计数器确定细胞浓度。接下来，将0.5μg/ml多西环素(doxycycline)添加至细胞悬浮液中以诱导hromk通道表达，且将50μl(10,000细胞/孔)的细胞悬浮液添加至聚-d赖氨酸包被的384孔黑色、透光底测定板(6007718，perkinelmer)的每个孔中。将测定板在5％co2培养箱中保持在37℃。测定方案：在实验当天，除去培养基且向测定板中添加上样缓冲液(30μl/孔)。将细胞在上样缓冲液中于37℃温育30分钟。然后用测定缓冲液(30μl/孔)替换上样缓冲液，接着添加测试化合物或对照。将细胞与化合物一起温育30分钟，然后将板固定在flexstation(moleculardevices)上，用于分别在488和525nm的激发和发射波长读出荧光。以2秒的间隔读取每个孔90秒且在基线记录20秒后添加刺激缓冲液。测定板中的最终dmso浓度为0.5或1％。通过分别向孔中添加dmso或3μm标准romk抑制剂代替测试化合物来定义阳性和阴性对照。数据分析：将添加刺激缓冲液后的荧光增加的斜率(在15秒内)增加从softmaxpro输出到定制软件中，其中将其转换为％抑制。使用10点浓度响应曲线估计测试化合物的ic50值。表3中的数据以两位有效数字进行报告。表3romk手动膜片钳测定(manualpatchclampassay)细胞培养条件：将细胞维持在与铊通量测定相似的条件下。在实验前16-24小时加入0.6μg/ml多西环素诱导hromk通道表达。在实验当天，使用versene将细胞解离，重悬于生长培养基中且在使用前15分钟铺在盖玻片上。电生理学：将铺有细胞的盖玻片置于用由(以mm计)：135份nacl、5份kcl、2份cacl2、1份mgcl2、10份hepes、5份葡萄糖(ph7.4)组成的槽液(bathsolution)灌注的实验腔室中。当填充含有(以mm计)：135份kcl、1份egta、1份mgcl2、10份hepes、2份na2atp(ph7.3)的溶液时，具有2-5兆欧(megaohms)的电阻的膜片移液管用于形成千兆欧封口(gigaseal)。使用由pclampsoftware(moleculardevices)控制的axopatch200b或multiclamp700b(moleculardevices)放大器，在全细胞构型中将细胞电压钳制在-75mv。通过每10秒施加-120mv的电压阶跃(voltagestep)来记录电流。对于每种化合物，从最低浓度开始以连续方式施加4-6个浓度，持续3-8分钟。在实验结束时，用含有2mmba2+的槽液灌注细胞以分离hromk电流的贡献。数据分析：将原始电流值(对于对照、不同的化合物浓度和ba2+处理组，各自5条迹线)从clampfit输出到microsoftexcel中，其中从原始电流中减去施加ba2+后剩余的电流以获得hromk特定电流。然后将这些hromk电流值(每组的5条迹线的平均值)导入定制模板中以产生浓度响应曲线，随后将其与四参数方程拟合以计算测试化合物的ic50值。表4中的数据以两位有效数字进行报告。表4专利实施例编号hromkepic50(nm)43141-i2342-i3453-i8756-i1258-i1368-i23herg手动膜片钳测定herg电生理学测定：使用膜片钳技术评估实验化合物在稳定表达herg通道的hek293细胞上的herg活性。将铺有herg表达细胞的盖玻片置于实验腔室中且在室温用(以mm计)：140份nacl、4份kcl、1.8份cacl2、1份mgcl2、10份葡萄糖、10份hepes(ph7.4，naoh)组成的溶液灌注。当填充含有130份kcl、1份mgcl2、1份cacl2、10份egta、10份hepes、5份atp-k2(ph7.2，koh)的内部溶液时，硼硅酸盐膜片移液管具有2-4兆欧姆(mohm)的尖端电阻。使用由pclamp(axoninstruments)软件控制的axopatch200b(axoninstruments，unioncity，ca)膜片钳放大器将细胞以全细胞构型夹在-80mv。在形成千兆欧封口时，重复(0.05hz)施加以下电压方案以记录尾电流：从-80mv至+20mv的去极化阶跃持续2秒，接着超极化阶跃至-65mv(3秒)以引发尾电流。在尾电流稳定后施加化合物。首先，在单独存在细胞外溶液(对照)的情况下记录尾电流，随后在含有增加的化合物浓度的细胞外溶液中记录尾电流。每种化合物浓度施加2-5分钟。每种浓度下的抑制百分比计算为峰值尾电流相对于在对照溶液存在下记录的峰值尾电流的减少。数据分析在定制模板中进行。绘制不同浓度下的抑制百分比以获得浓度响应曲线，随后将其与四参数方程拟合以计算hergic50值。较低的herg％抑制值表明较少的herg电流抑制。表5当前第1页12