本发明涉及一种环肽、亲和层析载体、标记抗体、抗体药物复合体及药物制剂。
背景技术：
目前，抗体药物作为可靠性最高的分子靶标药物受到瞩目，而且在迅速扩大新的医药品领域。目前研发中或上市中的抗体药物大部分使用属于igg(immunoglobuling；免疫球蛋白g)等级的抗体。
以往，igg抗体的纯化中使用来源于金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)的蛋白质蛋白a或蛋白g。这些蛋白质还与小鼠、兔子的igg结合，因此多用于研究试剂的igg纯化。近年来，得以利用以人igg1为中心的抗体药物，这些蛋白质在工业、制药利用中的重要性提高。尤其，蛋白a柱多用于抗体药物的纯化。在很多抗体药物的制造工艺中导入有使用蛋白a柱的纯化系统。
然而，该蛋白a柱被指出一些问题点。例如，存在蛋白a混入纯化抗体中的问题。蛋白a为来源于细菌的蛋白质，人体服用后的免疫原性高，有可能成为内毒素。要求医药品纯化时的作为亲和配体的蛋白a高纯化度，以免引起不合适的物质的混入。由此，医药品纯化中所利用的蛋白a柱的成本会上升。
为了解决这种问题，正在进行新的igg抗体的纯化系统的研发。
例如，专利文献1中记载有具有r1-x01-x02-x03-x04-x05-x06-x07-x08-x09-x10-x11-x12-x13-r2的氨基酸序列的11～13个残基左右的免疫球蛋白结合性多肽。记载有该多肽可以为在x02与x12之间形成二硫键(x02＝x12＝c的情况)或酰胺键(x02及x12中的一个为dpr、dab、k或orn，另一个为d或e的情况；其中，dab表示二氨基丁酸，dpr表示二氨基丙酸，orn表示鸟氨酸)而进行了环化的环肽(<0017>～<0034>)。
并且，专利文献2中记载有包括由(x1-3)-c-(x2)-h-r-g-(xaa1)-l-v-w-c-(x1-3)表示的13～17个氨基酸残基的igg结合性多肽。记载有该多肽可以为在2个半胱氨酸(c)残基之间形成有二硫键的环肽(<0042>～<0044>)。
另外，例如，专利文献3中记载有含有具有式xaa1-xaa2-xaa3-xaa4-cys-xaa5-xaa6-xaa7-xaa8-gly-glu-leu-val-trp-cys-xaa9-xaa10-xaa11-xaa12-xaa13的11至20个氨基酸的igg-fc结合性肽(权利要求39)。记载有该肽能够通过二硫键或内酰胺键的形成而进行环化；能够形成二硫键的残基为cys、pen、mpr及mpp等；能够形成内酰胺键的残基为asp、glu、lys、0rn、αβ-二氨基丁酸、二氨基乙酸、氨基苯甲酸及巯基苯甲酸等(<0039>)。
以往技术文献
专利文献
专利文献1：美国专利申请公开第2004/0087765号说明书
专利文献2：国际公开第2013/027796号
专利文献3：日本特开2007-289200号公报
技术实现要素：
发明要解决的技术课题
本发明人着眼于控制立体结构来改善抗体结合性，对专利文献1～3中所记载的抗体结合性环肽的结合活性及耐化学性进行了研究，其结果发现在结合活性或耐化学性方面有改善的余地。
因此，本发明的目的在于提供一种抗体结合性优异而且耐化学性得到改善的环肽。
用于解决技术课题的手段
本发明人为了实现上述目的而重复进行了深入研究，其结果发现交联部氨基酸残基在耐化学性方面发挥重要的作用，并完成了本发明。
即，本发明提供以下[1]～[20]。
[1]一种环肽，其由下述式(i)表示。
rn-xg-[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]k-xh-rc……(i)
式(i)中，
rn表示n末端基；
rc表示c末端基；
x1表示l-亮氨酸残基、l-异亮氨酸残基、l-甲硫氨酸残基、l-赖氨酸残基或l-精氨酸残基；
x2表示l-缬氨酸残基或l-异亮氨酸残基；
x3表示l-色氨酸残基或l-苯丙氨酸残基；
xa及xb中的一个表示来源于在侧链上具有叠氮基的氨基酸的氨基酸残基，另一个表示来源于在侧链上具有炔基的氨基酸的氨基酸残基，且xa及xb经由三唑键键合；
xg、xh、xi、xj、xm及xn分别表示连续的g个x、连续的h个x、连续的i个x、连续的j个x、连续的m个x及连续的n个x；
x表示氨基酸残基，当x为多个时，多个x可以相互相同也可以不同；
g、h、i及j分别独立地为0以上的整数；
m及n为同时满足0≤m≤9、0≤n≤9及3≤m+n≤9的整数；
k为1以上的整数，当k≥2时，重复单元[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]中的x1、x2、x3、xa、xb、xi、xj、xm及xn分别在各重复单元之间可以相同也可以不同。
[2]根据上述[1]所述的环肽，其由下述式(ia)表示。
rn-xg-[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]k-xh-rc……(ia)
式(ia)中，
rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xg、xh、xm、xn、x、g、h、m、n及k的含义与上述式(i)中的含义相同；
x4r、x5s、xp1、xp2、xq1及xq2分别表示连续的r个x4、连续的s个x5、连续的p1个x、连续的p2个x、连续的q1个x及连续的q2个x；
x4及x5分别独立地表示来源于在侧链上具有羧基的氨基酸的氨基酸残基或来源于在侧链上具有羟基的氨基酸的氨基酸残基，当x4或x5为多个时，多个x4或x5可以相互相同也可以不同；
p1、p2、q1及q2分别独立地为0以上的整数；
r及s分别为满足0≤r≤5、0≤s≤5及1≤max(r，s)≤5的整数，其中，关于max(r，s)，当r≠s时表示r和s这两个数中较大的数，当r＝s时表示r或s；
当k≥2时，重复单元[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]中的x1、x2、x3、xa、xb、x4r、x5s、xm、xn、xp2、xp1、xq1及xq2分别在各重复单元之间可以相同也可以不同。
[3]根据上述[1]所述的环肽，其由下述式(ib)表示。
rn-xv1-x6t-xv2-[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]k-xw2-x7u-xw1-rc……(ib)
式(ib)中，
rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xi、xj、xm、xn、x、i、j、m、n及k的含义与上述式(i)中的含义相同；
x6t、x7u、xv1、xv2、xw1及xw2分别表示连续的t个x6、连续的u个x7、连续的v1个x、连续的v2个x、连续的w1个x及连续的w2个x；
x6及x7分别独立地表示来源于在侧链上具有固定化官能团的氨基酸的氨基酸残基，当x6或x7为多个时，多个x6或x7可以相互相同也可以不同；
t及u分别为满足0≤t≤5、0≤u≤5及1≤max(t，u)≤5的整数，其中，关于max(t，u)，当t≠u时表示t和u这两个数中较大的数，当t＝u时表示t或u；
v1、v2、w1及w2分别独立地为0以上的整数；
当k≥2时，重复单元[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]中的x1、x2、x3、xa、xb、xi、xj、xm及xn分别在各重复单元之间可以相同也可以不同。
[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的环肽，其由下述式(ic)表示。
rn-xv1-x6t-xv2-[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]k-xw2-x7u-xw1-rc……(ic)
式(ic)中，
rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xm、xn、x、m、n及k的含义与上述式(i)中的含义相同；
xp1、xp2、xq1、xp2、x4r、x5s、x6t、x7u、xv1、xv2、xw1及xw2分别表示连续的p1个x、连续的p2个x、连续的q1个x、连续的q2个x、连续的r个x4、连续的s个x5、连续的t个x6、连续的u个x7、连续的v1个x、连续的v2个x、连续的w1个x及连续的w2个x；
x4及x5分别独立地表示来源于在侧链上具有羧基的氨基酸的氨基酸残基或来源于在侧链上具有羟基的氨基酸的氨基酸残基，当x4或x5为多个时，多个x4或x5可以相互相同也可以不同；
x6及x7分别独立地表示来源于在侧链上具有固定化官能团的氨基酸的氨基酸残基，当x6或x7为多个时，多个x6或x7可以相互相同也可以不同；
p1、p2、q1及q2分别独立地为0以上的整数；
r及s分别为满足0≤r≤5、0≤s≤5及1≤max(r，s)≤5的整数，其中，关于max(r，s)，当r≠s时表示r和s这两个数中较大的数，当r＝s时表示r或s；
t及u分别为满足0≤t≤5、0≤u≤5及1≤max(t，u)≤5的整数，其中，关于max(t，u)，当t≠u时表示t和u这两个数中较大的数，当t＝u时表示t或u；
v1、v2、w1及w2分别独立地为0以上的整数；
当k≥2时，重复单元[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]中的x1、x2、x3、xa、xb、x4r、x5s、xm、xn、xp2、xp1、xq1及xq2分别在各重复单元之间可以相同也可以不同。
[5]根据上述[2]或[4]所述的环肽，其中，
上述在侧链上具有羧基的氨基酸为选自由l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-谷氨酸、d-谷氨酸、l-高谷氨酸及d-高谷氨酸组成的组中的至少1种氨基酸，上述在侧链上具有羟基的氨基酸为选自由l-丝氨酸、d-丝氨酸、l-高丝氨酸、d-高丝氨酸、l-酪氨酸、d-酪氨酸、l-苏氨酸、d-苏氨酸、l-别苏氨酸及d-别苏氨酸组成的组中的至少1种氨基酸。
[6]根据上述[3]或[4]所述的环肽，其中，
上述在侧链上具有固定化官能团的氨基酸为选自由l-赖氨酸、d-赖氨酸、l-半胱氨酸、d-半胱氨酸、l-高半胱氨酸及d-高半胱氨酸组成的组中的至少1种氨基酸。
[7]根据上述[1]～[6]中任一项所述的环肽，其中，
上述在侧链上具有叠氮基的氨基酸为选自由β-叠氮基-l-丙氨酸、γ-叠氮基-l-高丙氨酸、δ-叠氮基-l-正缬氨酸及ε-叠氮基-l-赖氨酸组成的组中的至少1种氨基酸，上述在侧链上具有炔基的氨基酸为选自由l-炔丙基甘氨酸、l-高炔丙基甘氨酸及l-双高炔丙基甘氨酸组成的组中的至少1种氨基酸。
[8]根据上述[1]～[7]中任一项所述的环肽，其中，
xm-x1-x2-x3-xn与下述式(1)所表示的氨基酸序列(序列号1)或下述式(2)所表示的氨基酸序列(序列号2)具有70％以上的序列同源性。
a-y-h-l1-g-e-l2-v-w……(1)
a-y-h-r-g-e-l2-v-w……(2)
式(1)及式(2)中，
a表示l-丙氨酸残基或d-丙氨酸残基；
y表示l-酪氨酸残基或d-酪氨酸残基；
h表示l-组氨酸残基或d-组氨酸残基；
l1表示l-亮氨酸残基或d-亮氨酸残基；
r表示l-精氨酸残基或d-精氨酸残基；
g表示甘氨酸残基；
e表示l-谷氨酸残基或d-谷氨酸残基；
l2表示l-亮氨酸残基；
v表示l-缬氨酸残基；
w表示l-色氨酸残基。
[9]根据上述[1]～[8]中任一项所述的环肽，其中
k＝1。
[10]根据上述[1]所述的环肽，其由下述式(ii)表示。
rn-xv0-x6t0-xe0-x4r0-xp0-xa-a-y-h-x8-g-e-l-v-w-xb-xq0-x5s0-xf0-x7u0-xw0-rc……(ii)
式(ii)中，
xa、xb、x、rn及rc的含义与上述式(i)中的含义相同；
x4及x5分别独立地表示在侧链上具有羧基或羟基的l-氨基酸残基或d-氨基酸残基，当x4或x5为多个时，多个x4或x5可以相互相同也可以不同；
x6及x7分别独立地表示在侧链上具有固定化官能团的l-氨基酸残基或d-氨基酸残基，当x6或x7为多个时，多个x6或x7可以相互相同也可以不同；
x8表示选自由l-亮氨酸残基、l-精氨酸残基、d-亮氨酸残基及d-精氨酸残基组成的组中的任1个；
e0及f0分别为满足0≤e0≤10及0≤f0≤10的整数；
p0及q0分别为满足0≤p0≤5及0≤q0≤5的整数；
r0及s0分别为满足0≤r0≤5及0≤s0≤5的整数；
t0及u0分别为满足0≤t0≤5及0≤u0≤5的整数；
v0及w0分别为满足0≤v0≤5及3≤w0≤5的整数；
另外，p0、q0、r0、s0、t0、u0、v0及w0满足0≤p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤39；
a表示l-丙氨酸残基或d-丙氨酸残基；
y表示l-酪氨酸残基或d-酪氨酸残基；
h表示l-组氨酸残基或d-组氨酸残基；
g表示甘氨酸残基；
e表示l-谷氨酸残基或d-谷氨酸残基；
l表示l-亮氨酸残基；
v表示l-缬氨酸残基；
w表示l-色氨酸残基。
[11]根据上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，其为抗体结合性配体。
[12]根据上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，其为抗体标记用连接体。
[13]根据上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，其为抗体药物复合体用连接体。
[14]根据上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，其为药物载体。
[15]一种亲和层析载体，其包含水不溶性载体及上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，
上述水不溶性载体和上述环肽直接或间接结合。
[16]一种标记抗体，其包含抗体、标记化合物及上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，
上述抗体和上述标记化合物经由上述环肽结合。
[17]一种抗体药物复合体，其包含抗体、药物及上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，
上述抗体和上述药物经由上述环肽结合。
[18]根据上述[17]中所记载的抗体药物复合体，其中，
上述药物为脂质体化、高分子胶束化或peg化的药物。
[19]一种药物制剂，其包含药物及上述[1]～[10]中任一项所述的环肽，
上述药物和上述环肽直接或间接结合。
[20]根据上述[19]中所记载的药物制剂，其中，
上述药物为脂质体化、高分子胶束化或peg化的药物。
发明效果
根据本发明，可提供抗体结合性优异而且耐化学性得到改善的环肽。
具体实施方式
[环肽]
首先，对现有技术中所没有的本发明的特征进行记载。
专利文献1～3中记载有在2个半胱氨酸残基之间形成二硫键而环化的环肽。但是，根据后述的比较例2的相对结合活性及耐化学性的评价结果，通过2个半胱氨酸残基之间的二硫键而环化的环肽虽然抗体结合性优异，但耐化学性差，无法得到所希望的性能。
并且，专利文献1中记载有在2个氨基酸残基之间通过侧链氨基和侧链羧基的反应形成酰胺键而环化的环肽，专利文献3中记载有n末端氨基或侧链氨基和侧链羧基形成内酰胺键(酰胺键)而环化的环肽。但是，根据后述的比较例1的相对结合活性及耐化学性的评价结果，通过侧链氨基及侧链羧基之间的酰胺键而环化的环肽虽然耐化学性优异，但抗体结合性差，无法得到所希望的性能。
相对于此，本发明中，通过采用后述的构成，能够得到抗体结合性优异而且耐化学性得到改善的环肽。
另外，本说明书中，使用“～”表示的范围是指在该范围内包含“～”的前后所记载的两端的范围。例如，“a～b”是指包含a及b的范围。并且，使用“以上”或“以下”表示的范围分别是指在该范围内包含“以上”或“以下”所记载的值的范围。例如，“c以上”是指c及比c大的范围，“d以下”是指d及比d小的范围。
本发明中，氨基酸原则上使用在国际纯化学与应用化学联合会和国际生物化学与分子生物学联合会的iupac-iub生物化学命名联合委员会(internationalunionofpureandappliedchemistryandinternatioralunionofbiochemistryandmolecularbiologyiupac-iubjointcommissiononbiochemicalnomenclature(jcbn))所采用的名称、缩写等来表示。并且，氨基酸残基使用该氨基酸残基的来源的氨基酸的缩写来表示。另外，氨基酸残基中包括n末端氨基酸残基(也称为“n末端残基”。)及c末端氨基酸残基(也称为“c末端残基”。)。
只要没有特别明示，肽或蛋白质的氨基酸序列(也称为“一级结构”。)是以从左端至右端成为n末端至c末端的方式将氨基酸残基排成1列来表示。将肽或蛋白质的氨基酸序列中的氨基酸残基包括位置在内进行特定时，有时在氨基酸残基的缩写的右侧标注表示是从n末端侧起第几个氨基酸残基的数字来表示。例如，有时将从n末端起第2个l-赖氨酸表示为lys2。
并且，在将氨基酸使用其名称来表示的情况下，存在处于对映体的关系的异构体即l体及d体时，除了明示区分l体及d体的情况以外，原则上表示l体。例如，“异亮氨酸”表示“l-异亮氨酸”，“异亮氨酸”的对映体表示为“d-异亮氨酸”。关于氨基酸残基也相同。
并且，在将氨基酸使用其缩写(三字母缩写或单字母缩写)来表示的情况下，存在处于对映体的关系的异构体即l体及d体时，除了明示区分l体及d体的情况以外，原则上表示l体。但是，表示任意氨基酸的“x”并不限于此。例如，“lys”及“l-lys”均表示“l-赖氨酸”，“d-lys”表示“d-赖氨酸”。关于氨基酸残基也相同。
并且，在将氨基酸使用其名称来表示的情况下，存在处于非对映体的关系的异构体时，不包括在由其名称特定的氨基酸中。非对映体使用前缀“别”来作为不同种类的氨基酸处理。例如，“苏氨酸”及“l-苏氨酸”不包括“l-别苏氨酸”，“d-苏氨酸”不包括“d-别苏氨酸”。关于氨基酸残基也相同。
将单字母缩写及三字母缩写被正式认可的氨基酸的名称及缩写(单字母缩写、三字母缩写)示于表1。
[表1]
氨基酸并不限定于表1中举出的氨基酸，也能够使用被称为罕见氨基酸的氨基酸。以下表2中举出罕见氨基酸的例子，但并不限定于这些。
[表2]
以下，对本发明的环肽进行详细说明。
本发明的环肽为由下述式(i)表示的环肽。
rn-xg-[x1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]k-xh-rc……(i)
式(i)中，例如xn表示n个x相连结。换言之，也可以称为-(x)n-。另外，xg、xh、xi、xj及xm的定义也与上述xn相同。
在本发明的环肽中，多肽链中将通过交联而封闭的环部分称为环状部，将不包括在环状部的部分称为直链部。并且，环状部中将形成本发明的环肽的分子内交联结构的部分称为交联部，将对本发明的环肽的抗体结合性贡献大的部分称为抗体结合部。
由式(i)表示的环肽的环状部为“xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb”部分，直链部为“xg”、“xh”、“xi”及“xj”，交联部为“xa”及“xb”，抗体结合部为“x1-x2-x3”。
并且，式(i)中，有时将[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]称为重复部。
上述式(i)中，x1为l-亮氨酸残基、l-异亮氨酸残基、l-甲硫氨酸残基、l-赖氨酸残基或l-精氨酸残基，优选为l-亮氨酸残基或l-异亮氨酸残基，更优选为l-亮氨酸残基。
并且，上述式(i)中，x2为l-缬氨酸残基或l-异亮氨酸残基，优选为l-缬氨酸残基。
并且，上述式(i)中，x3为l-色氨酸残基或l-苯丙氨酸残基，优选为l-色氨酸残基。
上述式(i)中，xa及xb中的一个为来源于在侧链上具有叠氮基的氨基酸的氨基酸残基，另一个为来源于在侧链上具有炔基的氨基酸的氨基酸残基，且xa及xb经由三唑键键合。另外，本发明中，有时将在侧链上具有叠氮基的氨基酸称为“含有叠氮基的氨基酸”，将在侧链上具有炔基的氨基酸称为“含有炔基的氨基酸”。
其中，三唑键为通过下述式所表示的huisgen反应由叠氮基和炔基形成的键。
[化学式1]
其中，上述式中，r表示含有叠氮基的氨基酸残基(称为在侧链上具有叠氮基的氨基酸残基。)的叠氮基以外的部分，r’表示含有炔基的氨基酸残基(称为在侧链上具有炔基的氨基酸残基。)的乙炔基以外的部分。
作为上述在侧链上具有叠氮基的氨基酸，优选侧链由下述式(a)表示的氨基酸。
-r11-n3……(a)
式(a)中，r11表示碳原子数1～10的亚烷基，优选表示碳原子数1～6的亚烷基，更优选表示亚甲基、乙烯基、丙烷-1，3-二基、丙烷-1，2-二基、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基或丁烷-2，3-二基，进一步优选表示亚甲基、乙烯基或丁烷-1，4-二基。从经济性或交联反应性的观点而言，优选短链，但并不受这些原因的限制。
另外，叠氮基除了标记为“-n3”以外，有时还标记为“-n＝n+＝n-”或“-n--n+≡n”等。
作为上述在侧链上具有炔基的氨基酸，优选侧链由下述式(b)表示的氨基酸。
-r12-c≡ch……(b)
式(b)中，r12表示碳原子数1～10的亚烷基，优选表示碳原子数1～6的亚烷基，更优选表示亚甲基、乙烯基、丙烷-1，3-二基、丙烷-1，2-二基、丁烷-1，2-二基、丁烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基或丁烷-2，3-二基，进一步优选表示亚甲基、乙烯基或丙烷-1，2-二基，进一步优选表示亚甲基或乙烯基。从经济性或交联反应性的观点而言，优选短链，但并不受这些原因的限制。
上述xa及xb优选一个为来源于β-叠氮基-l-丙氨酸、γ-叠氮基-l-高丙氨酸、δ-叠氮基-l-正缬氨酸或ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，另一个为来源于l-炔丙基甘氨酸、l-高炔丙基甘氨酸或l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，更优选一个为来源于β-叠氮基-l-丙氨酸、γ-叠氮基-l-高丙氨酸、δ-叠氮基-l-正缬氨酸或ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，另一个为来源于l-高炔丙基甘氨酸或l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，进一步优选一个为来源于β-叠氮基-l-丙氨酸、γ-叠氮基-l-高丙氨酸或ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，另一个为来源于l-高炔丙基甘氨酸或l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基。
式(i)中，x表示氨基酸残基，当x为多个时，多个x可以相互相同也可以不同。
上述x为氨基酸残基即可，并没有特别限定，但优选为来源于选自由表1所示的氨基酸(b、z及x除外。)及表2所示的氨基酸组成的组中的氨基酸的氨基酸残基，更优选为来源于选自由表1所示的氨基酸(b、z及x除外。)组成的组中的氨基酸的氨基酸残基。并且，在存在的情况下，也可以为来源于这些氨基酸的对映体或非对映体的氨基酸残基。
式(i)中，rn表示n末端基。
作为上述n末端基，例如可以举出氨基，该氨基可以进行n-乙酰化、n-甲酰化或n-酰化等n末端修饰。
式(i)中，rc表示c末端基。
作为上述c末端基，例如可以举出羧基，该羧基可以进行酰胺化等c末端修饰。
式(i)中，g及h分别独立地为0以上的整数。
g优选满足0≤g≤20，更优选满足0≤g≤10，进一步优选满足0≤g≤5。
h优选满足0≤h≤20，更优选满足0≤h≤10，进一步优选满足0≤h≤5。
式(i)中，i及j分别独立地为0以上的整数。
i优选满足0≤i≤20，更优选满足0≤i≤10，进一步优选满足0≤i≤5。
j优选满足0≤j≤20，更优选满足0≤j≤10，进一步优选满足0≤j≤5。
式(i)中，m及n分别为满足0≤m≤9及0≤n≤9的整数。
另外，m及n满足3≤m+n≤9，优选满足4≤m+n≤8，更优选满足5≤m+n≤7。
上述式(i)中，环状部[xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb]的氨基酸残基数量[(m+n+5)个残基]为8～14个残基，优选为9～13个残基，更优选为10～12个残基。
若环状部的氨基酸残基数量在该范围内，则环肽的分子内张力不会变得过大，α螺旋等高级结构稳定化，因此本发明的环肽的抗体结合性优异。
k为满足k≥1的整数，优选为1≤k≤3，更优选为1≤k≤2，进一步优选为k＝1。
重复单元的数量并没有特别限定，但重复单元的数量越多，越能够包含多的环状部，因此存在能够提高环肽的抗体结合性的可能性，重复单元的数量越少，越能够减少氨基酸残基总数，因此存在能够抑制环肽的抗原性的可能性。从环肽的合成成本的观点而言，优选氨基酸残基数量少，且优选重复单元的数量少。
并且，当k≥2时，即由式(i)表示的环肽包含2个以上重复单元[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]时，重复单元中的x1、x2、x3、xa、xb、xi、xj、xm及xn分别在重复单元之间可以相同也可以不同。
另外，上述式(i)中，环肽的氨基酸残基总数优选为8～50个残基，更优选为9～40个残基，进一步优选为10～30个残基，更进一步优选为10～20个残基。
即，式(i)中，g、h、j、j、m、n及k优选满足8≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤50，更优选满足9≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤40，进一步优选满足10≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤30，更进一步优选满足10≤g+h+(i+j+m+n+5)×k≤20。
通常，氨基酸残基数量越多，制造成本越高，因此从经济性的观点而言，优选氨基酸残基的总数少。
并且，由上述式(i)表示的环肽的分子量并没有特别限定，但从抗原性的观点而言，本发明的环肽的分子量优选为约5000以下，更优选为约4000以下，进一步优选为约3000以下，最优选为约2000以下。在此，“约”是指包括±2％的范围。
并且，本发明的环肽优选为由下述式(ia)表示的环肽。
rn-xg-[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]k-xh-rc……(ia)
式(ia)中，rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xg、xh、xm、xn、x、g、h、m、n及k的含义均与上述式(i)中的含义相同。
并且，式(ia)中，与式(i)中的xn相同，xn表示n个x相连结。关于xm、xp1、xp2、xq1及xq2也相同。
另外，式(ia)中，x4r及x5s分别表示r个x4相连结及s个x5相连结。
由式(ia)表示的环肽的直链部为“xg”、“xh”、“xp2-x4r-xp1”及“xq1-x5s-xq2”。环状部、交联部及抗体结合部与式(i)所表示的环肽的环状部、交联部及抗体结合部相同。
并且，式(ia)中，重复单元为[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]。
式(ta)中，x4及x5分别独立地表示来源于在侧链上具有羧基的氨基酸的氨基酸残基或来源于在侧链上具有羟基的氨基酸的氨基酸残基。
作为上述在侧链上具有羧基的氨基酸，例如可以举出l-天冬氨酸、d-天冬氨酸、l-谷氨酸、d-谷氨酸、l-高谷氨酸及d-高谷氨酸等。
作为上述在侧链上具有羟基的氨基酸，例如可以举出l-丝氨酸、d-丝氨酸、l-高丝氨酸、d-高丝氨酸、l-酪氨酸、d-酪氨酸、l-苏氨酸、d-苏氨酸、l-别苏氨酸及d-别苏氨酸等。
上述x4及x5优选分别独立地为选自由l-丝氨酸残基、d-丝氨酸残基、l-高丝氨酸残基、d-高丝氨酸残基、l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-谷氨酸残基、d-谷氨酸残基、l-高谷氨酸残基、d-高谷氨酸残基、l-酪氨酸残基、d-酪氨酸残基、l-高酪氨酸残基、d-高酪氨酸残基、l-苏氨酸残基、d-苏氨酸残基、l-别苏氨酸残基及d-别苏氨酸残基组成的组中的氨基酸残基，更优选分别独立地为选自由l-天冬氨酸残基、d-天冬氨酸残基、l-苏氨酸残基及d-苏氨酸残基组成的组中的氨基酸残基，进一步优选为x4为l-天冬氨酸残基且x5为l-苏氨酸残基。
认为若上述x4及x5分别独立地为来源于在侧链上具有羧基的氨基酸的氨基酸残基或来源于在侧链上具有羟基的氨基酸的氨基酸残基，则环状部的抗体结合部和抗体通过氢键和/或静电相互作用能够更强力地相互作用，从而改善抗体结合性。
式(ia)中，p1、p2、q1及q2分别独立地为0以上的整数。
p1优选满足0≤p1≤20，更优选满足0≤p1≤10，进一步优选满足0≤p1≤5，更进一步优选满足0≤p1≤2。
p2优选满足0≤p2≤20，更优选满足0≤p2≤10，进一步优选满足0≤p2≤5，更进一步优选满足0≤p2≤2。
q1优选满足0≤q1≤20，更优选满足0≤q1≤10，进一步优选满足0≤q1≤5，更进一步优选满足0≤q1≤2。
q2优选满足0≤q2≤20，更优选满足0≤q2≤10，进一步优选满足0≤q2≤5，更进一步优选满足0≤q2≤2。
式(ia)中，r及s分别为满足0≤r≤5、0≤s≤5及1≤max(r，s)≤5的整数，优选为满足0≤r≤4、0≤s≤4及1≤max(r，s)≤4的整数，更优选为满足0≤r≤3、0≤s≤3及1≤max(r，s)≤3的整数。
其中，关于max(r，s)，当r≠s时表示r和s这两个数中较大的数，当r＝s时表示r或s。
上述式(ia)中，与上述式(i)相同，环状部[xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb]的氨基酸残基数量[(m+n+5)个残基]为8～14个残基，优选为9～13个残基，更优选为10～12个残基。
若环状部的氨基酸残基数量在该范围内，则环肽的分子内张力不会变得过大，α螺旋等高级结构稳定化，因此本发明的环肽的抗体结合性优异。
并且，当k≥2时，即由式(ia)表示的环肽包含2个以上重复单元[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]时，重复单元中的x1、x2、x3、xa、xb、x4r、x5s、xm、xn、xp2、xp1、xq1及xp2分别在重复单元之间可以相同也可以不同。
另外，上述式(ia)中，环肽的氨基酸残基总数优选为8～50个残基，更优选为9～40个残基，进一步优选为10～30个残基，更进一步优选为10～20个残基。
即，式(ia)中，g、h、m、n、p1、p2、q1、q2、r、s及k优选满足8≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤50，更优选满足9≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤40，进一步优选满足10≤g+h+(m+n+pl+p2+ql+q2+r+s+5)×k≤30，更进一步优选满足10≤g+h+(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k≤20。
通常，氨基酸残基数量越多，制造成本越高，因此从经济性的观点而言，优选氨基酸残基的总数少。
并且，本发明的环肽优选为由下述式(ib)表示的环肽。
rn-xv1-x6t-xv2-[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]k-xw2-x7u-xw1-rc……(ib)
式(ib)中，rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xi、xj、xm、xn、x、i、j、m、n及k的含义均与上述式(i)中的含义相同。
并且，式(ib)中，与式(i)中的xn相同，xn表示n个x相连结。关于xm、xv1、xv2、xw1及xw2也相同。
另外，式(ib)中，x6t及x7u分别表示t个x6相连结及u个x7相连结。
由式(ib)表示的环肽的直链部为“xi”、“xj”、“xv1-x6t-xv2”及“xw2-x7u-xw1”。环状部、交联部及抗体结合部与式(i)所表示的环肽的环状部、交联部及抗体结合部相同。
并且，式(ib)中，与式(i)相同，重复单元为[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]。
式(ib)中，x6及x7分别独立地表示来源于在侧链上具有固定化官能团的氨基酸的氨基酸残基。
当x6或x7为多个时，多个x6或x7可以相互相同也可以不同。
上述“固定化官能团”是指能够与载体上的官能团进行反应而形成共价键的官能团。另外，关于“载体”将进行后述。
作为这种固定化官能团，例如可以举出氨基、羧基、羟基、硫醇基、醛基(甲酰基)、氨甲酰基、叠氮基及炔基等。
作为本发明的环肽所具有的固定化官能团与载体上的官能团的组合，可以举出氨基与羧基(酰胺键形成反应)、氨基与醛基(还原的氨基化反应)、氨基与环氧基、羟基与环氧基、羧基与羟基(酯键形成反应)、硫醇基与硫醇基(二硫键)、硫醇基与环氧基及叠氮基与炔基(huisgen环化加成反应)等。
通过本发明的环肽所具有的固定化官能团与载体上的官能团进行反应而形成共价键，本发明的环肽被固定化于载体上。另外，只要本发明的环肽所具有的固定化官能团的至少一部分与载体上的官能团进行反应而形成共价键即可，无需所有的固定化官能团与载体上的官能团进行反应。
在上述在侧链上具有固定化官能团的氨基酸中，固定化官能团优选为选自由氨基、硫醇基及醛基组成的组中的至少1个，更优选为选自由氨基及硫醇基组成的组中的至少1个。
上述在侧链上具有固定化官能团的氨基酸优选为选自由l-赖氨酸、d-赖氨酸、l-半胱氨酸、d-半胱氨酸、l-高半胱氨酸及d-高半胱氨酸组成的组中的至少1种氨基酸。
通过将氨基用作固定化官能团，能够经由酰胺键与载体上的羧基键合，能够容易将作为亲和配体的本发明的环肽固定化。
并且，通过将硫醇基用作固定化官能团，能够经由共价键与载体上的环氧基键合，能够容易将作为亲和配体的本发明的环肽固定化。
作为在侧链上具有氨基的氨基酸，有l-赖氨酸及d-赖氨酸等，作为在侧链上具有硫醇基的氨基酸，有l-半胱氨酸、d-半胱氨酸，由于它们比较廉价，能够抑制本发明的环肽的制造成本，因此从经济性的观点而言为优选。
另外，本发明中，“载体”是指能够将本发明的环肽固定化的基材。载体具有官能团，该官能团能够与本发明的环肽所具有的固定化官能团进行反应而形成共价键。根据固定化官能团适当选择该官能团。
作为构成载体的材料，例如可以举出琼脂糖、葡聚糖、淀粉、纤维素、普鲁兰多糖、甲壳素、壳聚糖、三乙酸纤维素及二乙酸纤维素等多糖类及其衍生物、以及聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚烷基乙烯醚及聚乙烯醇等乙烯基类聚合物等。这些材料能够确保机械强度，因此可以形成交联结构。载体优选包含这些中的1种或2种以上的材料。
并且，载体优选为多孔载体，更优选为多孔膜或多孔粒子，进一步优选为多孔粒子。
式(ib)中，t及u分别为满足0≤t≤5、0≤u≤5及1≤max(t，u)≤5的整数，优选为满足0≤t≤4、0≤u≤4、1≤max(t，u)≤4的整数，更优选为满足0≤t≤3、0≤u≤3、1≤max(t，u)≤3的整数。
其中，关于max(t，u)，当t≠u时表示t和u这两个数中较大的数，当t＝u时表示t或u。
式(ib)中，v1、v2、w1及w2分别独立地为0以上的整数。
v1优选满足0≤v1≤20，更优选满足0≤v1≤10，进一步优选满足0≤v1≤5，更进一步优选满足0≤v1≤2。
v2优选满足0≤v2≤20，更优选满足0≤v2≤10，进一步优选满足0≤v2≤5，更进一步优选满足0≤v2≤2。
w1优选满足0≤w1≤20，更优选满足0≤w1≤10，进一步优选满足0≤w1≤5，更进一步优选满足0≤w1≤2。
w2优选满足0≤w2≤20，更优选满足0≤w2≤10，进一步优选满足0≤w2≤5，更进一步优选满足0≤w2≤2。
并且，上述式(ib)中，与上述式(i)相同，环状部[xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb]的氨基酸残基数量[(m+n+5)个残基]为8～14个残基，优选为9～13个残基，更优选为10～12个残基。
若环状部的氨基酸残基数量在该范围内，则环肽的分子内张力不会变得过大，α螺旋等高级结构稳定化，因此本发明的环肽的抗体结合性优异。
并且，当k≥2时，即由式(ib)表示的环肽包含2个以上重复单元[xi-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xj]时，重复单元中的x1、x2、x3、xa、xb、xm、xn、xi及xj分别在重复单元之间可以相同也可以不同。
另外，上述式(ib)中，环肽的氨基酸残基总数优选为8～50个残基，更优选为9～40个残基，进一步优选为10～30个残基，更进一步优选为10～20个残基。
即，式(ib)中，i、j、m、n、t、u、v1、v2、w1、w2及k优选满足8≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤50，更优选满足(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤40，进一步优选满足10≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤30，更进一步优选满足10≤(i+j+m+n+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤20。
通常，氨基酸残基数量越多，制造成本越高，因此从经济性的观点而言，优选氨基酸残基的总数少。
另外，本发明的环肽更优选为由下述式(ic)表示的环肽。
rn-xv1-x6t-xv2-[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]k-xw2-x7u-xw1-rc……(ic)
式(ic)中，rn、rc、x1、x2、x3、xa、xb、xm、xn、x、m、n及k的含义均与上述式(i)中的含义相同、x4、x5、p1、p2、q1、q2、r及s的含义均与式(ia)中的含义相同，x6、x7、t、u、v1、v2、w1及w2的含义均与式(ib)中的含义相同。
并且，式(ic)中，与式(i)中的xn相同，xn表示n个x相连结。关于xm、xp1、xp2、xq1、xq2、xv1、xv2、xw1及xw2也相同。
另外，式(ic)中，x4r、x5s、x6t及x7u分别表示r个x4相连结、s个x5相连结、t个x6相连结及u个x7相连结。
由式(ic)表示的环肽的直链部为“xv1-x6t-xv2”、“xw2-x7u-xw1”、“xp2-x4r-xp1”及“xq1-x5s-xq2”。环状部、交联部及抗体结合部与式(i)所表示的环肽的环状部、交联部及抗体结合部相同。
并且，式(ic)中，与式(ia)相同，重复单元为[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]。
上述式(ic)中，与上述式(i)相同，环状部[xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb]的氨基酸残基数量[(m+n+5)个残基]为8～14个残基，优选为9～13个残基，更优选为10～12个残基。
若环状部的氨基酸残基数量在该范围内，则环肽的分子内张力不会变得过大，α螺旋等高级结构稳定化，因此本发明的环肽的抗体结合性优异。
并且，当k≥2时，即由式(ic)表示的环肽包含2个以上重复单元[xp2-x4r-xp1-xa-xm-x1-x2-x3-xn-xb-xq1-x5s-xq2]时，重复单元中的x1、x2、x3、xa、xb、x4r、x5s、xm、xn、xp2、xp1、xq1及xq2分别在重复单元之间可以相同也可以不同。
另外，上述式(ic)中，环肽的氨基酸残基总数优选为8～50个残基，更优选为9～40个残基，进一步优选为10～30个残基，更进一步优选为10～20个残基。
即，式(ic)中，m、n、p1、p2、q1、q2、r、s、t、u、v1、v2、w1、w2及k优选满足8≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤50，更优选满足9≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤40，进一步优选满足10≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤30，更进一步优选满足10≤(m+n+p1+p2+q1+q2+r+s+5)×k+t+u+v1+v2+w1+w2≤20。
通常，氨基酸残基数量越多，制造成本越高，因此从经济性的观点而言，优选氨基酸残基的总数少。
另外，上述式(i)、(ia)、(ib)或(ic)中的xm-x1-x2-x3-xn所表示的部分与下述式(1)所表示的氨基酸序列(序列号1)或下述式(2)所表示的氨基酸序列(序列号2)具有优选70％以上、更优选75％以上、进一步优选85％以上、更进一步优选90％以上的序列同源性。
a-y-h-l1-g-e-l2-v-w……(1)
a-y-h-r-g-e-l2-v-w……(2)
式(1)及式(2)中，a表示l-丙氨酸残基或d-丙氨酸残基；y表示l-酪氨酸残基或d-酪氨酸残基；h表示l-组氨酸残基或d-组氨酸残基；l1表示l-亮氨酸残基或d-亮氨酸残基；r表示l-精氨酸残基或d-精氨酸残基；g表示甘氨酸残基；e表示l-谷氨酸残基或d-谷氨酸残基；l2表示l-亮氨酸残基；v表示l-缬氨酸残基；及w表示l-色氨酸残基。
在此，2个氨基酸序列的序列同源性以如下方式求出。
(i)进行2个氨基酸序列的比对
一致(匹配)赋予+1分，不一致(错配)赋予-1分，缺口赋予-1分，以比对分数成为最大的方式进行比对。
(ii)计算序列同源性
根据所得到的比对，通过下式计算序列同源性。
序列同源性[％]＝(一致位点数/总位点数)×100[％]
总位点数为比对的长度，一致位点数为氨基酸的种类一致的位点数。
在此，氨基酸残基的种类是否一致的判断基于成为该氨基酸残基的来源的氨基酸的侧链(氨基酸侧链)的结构是否相同。另外，处于对映体的关系的氨基酸的侧链的结构并不相同。
(iii)序列同源性的计算例
例如，考虑如下氨基酸序列。
序列aayhrgelvw
序列bawhlgelvw
若将其在上述条件下进行比对，则成为如下。在此，为了使观察变得容易，在序列a、b之间氨基酸(残基)的种类一致的部位附加同源性字符串“|”。并且，“-”为缺口。
该比对的分数为：一致(+1)×7+不一致(-1)×2+缺口(-1)×0＝5。
在该例子中，总位点数为9，一致位点数为7，因此按照上述式计算出的序列同源性为7/9×100＝77.8％。
本发明中，上述式(i)及(ia)～(ic)中，优选为k＝1。
若包含环状部的部分为1个，则能够缩短环肽的总长，容易进行合成。并且，通过环化时的huisgen反应，能够避免在不希望的部位形成交联。
作为本发明的环肽，尤其优选为由下述式(ii)表示的环肽。
rn-xv0-x6t0-xe0-x4r0-xp0-xa-a-y-h-x8-g-e-l-v-w-xb-xq0-x5s0-xf0-x7u0-xw0-rc……(ii)
式(ii)中，xa、xb、x、rn及rc的含义与上述式(i)中的含义相同。
并且，式(ii)中，与式(i)中的xn相同，xe0是指连结有e0个x。关于xf0、xp0、xq0、xv0及xw0也相同。
由式(ii)表示的环肽的环状部为“xa-a-y-h-x8-g-e-l-v-w-xb”，直链部为“xv0-x6t0-xe0-x4r0-xp0-”及“xq0-x5s0-xf0-x7u0-xw0”，交联部为“xa”及“xb”，抗体结合部为“l-v-w”。
式(ii)中，x4及x5的含义与上述式(ia)中的含义相同。
式(ii)中，x6及x7的含义与上述式(ib)中的含义相同。
式(ii)中，e0及f0分别为满足0≤e0≤10及0≤f0≤10的整数。
e0优选满足0≤e0≤5，更优选满足0≤e0≤3，进一步优选满足0≤e0≤2。
f0优选满足0≤f0≤5，更优选满足0≤f0≤3，进一步优选满足0≤f0≤2。
式(ii)中，p0及q0分别为满足0≤p0≤5及0≤q0≤5的整数。
p0优选满足0≤p0≤3，更优选满足0≤p0≤2。
q0优选满足0≤q0≤3，更优选满足0≤q0≤2。
式(ii)中，r0及s0分别为满足0≤r0≤5及0≤s0≤5的整数。
r0优选满足0≤r0≤3，更优选满足0≤r0≤2。
s0优选满足0≤s0≤3，更优选满足0≤s0≤2。
式(ii)中，t0及u0分别为满足0≤t0≤5及0≤u0≤5的整数。
t0优选满足0≤t0≤3，更优选满足0≤t0≤2。
s0优选满足0≤s0≤3，更优选满足0≤s0≤2。
式(ii)中，v0及w0分别为满足0≤v0≤5及3≤w0≤5的整数。
v0优选满足0≤v0≤3，更优选满足0≤v0≤2。
w0优选满足0≤w0≤3，更优选满足0≤w0≤2。
并且，上述(ii)式中，a表示l-丙氨酸残基或d-丙氨酸残基，y表示l-酪氨酸残基或d-酪氨酸残基，h表示l-组氨酸残基或d-组氨酸残基；l1表示l-亮氨酸残基或d-亮氨酸残基，g表示甘氨酸残基，e表示l-谷氨酸残基或d-谷氨酸残基，l2表示l-亮氨酸残基，v表示l-缬氨酸残基，w表示l-色氨酸残基。
另外，上述式(ii)中，环肽的氨基酸残基总数为11～50个残基，优选为11～40个残基，更优选为11～30个残基，进一步优选为11～20个残基。
即，式(ii)中，e0、f0、p0、q0、r0、s0、t0、u0、v0及w0满足0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤39，优选满足0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤29，更优选满足0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤19，进一步优选满足0≤e0+f0+p0+q0+r0+s0+t0+u0+v0+w0≤9。
将本发明的环肽的尤其优选的例子示于下述式(3)～(18)(序列号3～18)。
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(3)
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(4)
asp-[bpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[lys(n3)]-thr-lys-lys……(5)
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[ala(n3)]-thr-lys-lys……(6)
lys-lys-lys-asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[ala(n3)]-thr……(7)
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(8)
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(9)
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[hpg]-thr-lys-lys……(10)
asp-[pra]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[lys(n3)]-thr-lys-lys……(11)
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(12)
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[hpg]-thr-lys-lys……(13)
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[abu(n3)]-thr-lys-lys……(14)
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(15)
asp-[bpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[nva(n3)]-thr-lys-lys……(16)
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[nva(n3)]-thr-lys-lys……(17)
asp-[nva(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(18)
其中，上述式(3)～(18)中，[ala(n3)]表示来源于β-叠氮基-l-丙氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[nva(n3)]表示来源于δ-叠氮基-l-正缬氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[pra]表示来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[hpg]表示l-高炔丙基甘氨酸，[bpg]表示l-双高炔丙基甘氨酸。
另外，[ala(n3)]、[abu(n3)]、[nva(n3)]或[lys(n3)]和[pra]、[hpg]或[bpg]形成下述式所示的三唑键。其中，下述式中，“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点，x为1～4的整数，y为1～3的整数。
[化学式2]
用于确定本发明的环肽的结构的方法并没有特别限定，例如能够通过适当组合蛋白测序仪(也称为肽测序仪。)、质谱分析法、核磁共振法及x射线晶体结构解析法来决定以一级结构为代表的结构。质谱分析法中可以组合场解吸(fd)电离法、快原子轰击(fab)电离法、电喷雾电离(esi)法或基质辅助激光解吸电离(maldi)法等。
本发明的环肽的抗体结合性优异。抗体结合性是指与抗体和/或抗体衍生物的结合活性。结合活性越高，在用作抗体纯化用亲和层析用的亲和配体时，抗体的吸附量越多，能够一次性纯化大量的抗体。抗体是指免疫球蛋白或其类似物、片段或融合体。在此，类似物是指至少局部保持了免疫球蛋白的结构或功能的天然或人工制作的蛋白质或蛋白质缀合物。并且，片段是指通过酶处理或基因工程设计而制作的具有免疫球蛋白的部分结构的蛋白质。并且，融合体是指使各种细胞因子、细胞因子受体等具有生物活性的蛋白质的功能部分与免疫球蛋白整体或一部分以基因工程的方式融合而制作的蛋白质。并且，作为抗体，优选单克隆抗体或具有免疫球蛋白的fc区的融合体，更优选单克隆抗体。另外，本发明中，免疫球蛋白可以为igg(immunoglobuling；免疫球蛋白g)、igm(immunoglobulinm；免疫球蛋白m)、iga(immunoglobulina；免疫球蛋白a)、igd(immunoglobulind；免疫球蛋白d)及ige(immunoglobuline；免疫球蛋白e)这5种类别(同种型)中的任意一种，优选igg或igm，更优选igg。
另外，本发明的环肽的经时稳定性或耐化学性、尤其是耐碱性及耐还原剂性优异。由于耐化学性优异，所以例如在抗体纯化中使用了将本发明的环肽用作亲和配体的亲和层析载体时，即使反复进行使用药品、尤其是碱的清洗，也能够维持抗体结合性，能够进一步降低抗体纯化成本。
[环肽的合成方法]
本发明的环肽的合成方法并没有特别限定，例如能够通过有机合成化学肽合成方法或基因工程肽合成方法进行合成。
作为有机合成化学肽合成方法，能够使用液相合成法、固相合成法中的任意一种。作为本发明的多肽的合成方法，使用全自动肽合成装置的固相合成法方便，因此优选。
基因工程肽合成方法为向细胞中导入基因来合成肽的方法。作为细胞，可以使用细菌、线虫细胞、昆虫细胞、哺乳类细胞及动物细胞等。
例如，能够使用四碱基密码子法导入非天然氨基酸来进行合成。并且，合成链状肽，通过使导入到环状部的氨基酸残基的侧链的交联性官能团进行反应来进行环化，由此能够进行合成。
在本发明的环肽的合成中，使用叠氮基及炔基作为交联性官能团。为了合成包含导入有叠氮基或炔基的氨基酸残基的多肽链，有在肽合成时将导入有叠氮基或炔基的氨基酸编入多肽链中的方法、或在合成多肽链之后在所期望的氨基酸残基的侧链中导入叠氮基或炔基的方法。可以通过任何方法来进行。
在合成包含导入有叠氮基或炔基的氨基酸残基的多肽链之后，通过huisgen反应引起炔基与叠氮基的加成反应，使氨基酸残基之间交联。huisgen反应为由叠氮化物(具有-n＝n+＝n-原子团的化合物)和炔烃(碳-碳三键化合物)形成1，2，3-三唑的1，3-偶极加成环化反应。叠氮基及炔基对于很多官能团或生体分子是惰性的，由两者生成三唑环的反应为在发热热力学方面有利的反应。huisgen反应在铜催化剂的存在下反应惊人地加速，因此优选使用铜催化剂，但无需一定要使用。
[本发明的环肽的用途]
本发明的环肽能够用作抗体结合性配体、抗体标记用连接体(linker)、抗体药物复合体用连接体及药物载体(医药品用连接体)等。但是，并不限定于这些。
<抗体结合性配体及亲和层析载体>
本发明的环肽的用途有在亲和层析的技术领域中作为抗体结合性配体的用途。
作为本发明的环肽的抗体结合性配体用途的应用，例如能够举出将本发明的环肽固定化于水不溶性载体而得到的抗体或抗体衍生物的吸附材料及亲和层析载体。
“水不溶性载体”是指实质上不溶于水的载体。作为这种载体，例如可以举出结晶性纤维素、交联纤维素、交联琼脂糖、交联葡聚糖及交联普鲁兰多糖等多糖类、丙烯酸酯类聚合物及苯乙烯类聚合物等有机载体、玻璃珠及硅胶等无机载体、以及通过它们的组合而得到的有机-有机、有机-无机等复合载体等。作为水不溶性载体，从耐碱性的观点而言，更优选多糖类或丙烯酸酯类聚合物，进一步优选琼脂糖或纤维素等多糖类。作为能够用作水不溶性载体的市售品，例如可以举出作为多孔纤维素凝胶的cellufinegcl2000(jnccorporation制造)(cellufine为注册商标)、cellufinemax(jnccorporation制造)、将烯丙基葡聚糖与亚甲基双丙烯酰胺以共价键交联而得到的sephacryls-1000sf(gehealthcare公司制造)(sephacryl为注册商标)、作为丙烯酸酯类载体的toyopearl(tosohcorporation制造)(toyopearl为注册商标)、toyopearlaf-carboxy-650(tosohcorporation制造)、toyopearlgigacapcm-650(tosohcorporation制造)、作为琼脂糖类交联载体的sepharosecl4b(gehealthcare公司制造)(sepharose为注册商标)及作为被环氧基活化的聚甲基丙烯酰胺的eupergitc250l(sigma-aldrich公司)(eupergit为注册商标)等。但是，本发明中的水不溶性载体并不仅限于这些载体或活化载体。并且，本发明中所使用的水不溶性载体从其使用目的及方法来看，优选表面积大，优选为具有多个适当大小的细孔的多孔体。作为载体的形态并没有特别限定，可以为珠子状、纤维状、膜状及中空丝状等中的任意一种，能够选择任意形态。
将本发明的环肽固定化于水不溶性载体的方法并没有特别限定，例示出一般将蛋白质或多肽固定化于载体时所采用的方法。
可以举出如下方法：使载体与溴化氰、环氧氯丙烷、二缩水甘油醚、对甲苯磺酰氯、2，2，2-三氟乙基磺酰氯或肼等进行反应而将载体活化或者将反应性官能团导入到载体表面，与作为配体而固定化的化合物进行反应、固定化的方法；以及在存在载体和作为配体而固定化的化合物的体系中，加入如碳化二亚胺那样的缩合试剂或如甘油醛那样在分子中具有多个官能团的试剂而使其缩合、交联而进行的固定化。
本发明中，“配体”是指对特定的物质保持某种亲和性而结合的分子。上述特定的物质并没有特别限定，但优选为抗体或抗体衍生物。配体与抗体或抗体衍生物的结合部位并没有特别限定，从通用性的观点而言，优选为抗体或抗体衍生物的恒定区。恒定区并没有特别限定，优选为fc(fragmentcrystallizable；可结晶片段)区、cl区(constantregionsofalightchain；轻链恒定区)或ch区(constantregionsofaheavychain；重链恒定区)。本发明中，有时将具有与抗体或抗体衍生物的结合性的配体称为“抗体结合性配体”。
在将配体固定化于载体时，优选将配体溶解(分散)于水系溶剂(水系分散介质)或有机系溶剂(有机系分散介质)中。作为水系溶剂(水系分散介质)并没有特别限定，例如能够举出hepes(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸；；赫佩斯)缓冲液、乙酸缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、三盐酸缓冲液等。有机系溶剂(有机系分散介质)并没有特别限定，但优选极性有机溶剂，尤其优选dmso(dimethylsulfoxide；二甲基亚砜)、dmf(n，n-dimethylformamide；n，n-二甲基甲酰胺)或醇，例如可以举出甲醇、乙醇、ipa(isopropylalcohol；异丙醇)、tfe(2，2，2-trifluoroethanol；2，2，2-三氟乙醇)及hfip(1，1，1，3，3，3-hexafluoro-2-propanol；1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇)等。
将配体固定化的ph条件并没有特别限定，可以为酸性、中性及碱性中的任意一种，例如能够根据所使用的溶剂(分散介质)适当设定。
例如，当设为碱性时，可以将dbu(diazabicycloundecene；二氮杂双环十一烯)等碱添加到dmso(dimethylsulfoxide；二甲基亚砜)或醇中。
将上述吸附材料作为亲和层析用填充剂时的抗体结合性配体密度并没有特别限定，但优选0.1～1000mmol/填充剂1l，更优选0.1～100mmol/填充剂1l，进一步优选0.5～20mmol/填充剂1l。若在该范围内，则抗体结合性配体的使用量与抗体纯化性能的平衡良好，成本更低，能够高效地纯化抗体。
<抗体标记用连接体及标记抗体>
在免疫分析的技术领域中，本发明的环肽的用途有作为抗体标记用连接体的用途。
作为本发明的环肽作为抗体标记用连接体的用途的应用，能够举出包含抗体、标记化合物及本发明的环肽且抗体和标记化合物经由本发明的环肽结合的标记抗体。
免疫分析为利用免疫反应(抗原抗体反应)进行微量物质的检测及定量的分析方法，具有特异性高且高灵敏度的特征。
在免疫分析中，检测结合于微量物质(抗原)上的抗体(一次抗体)时，有在一次抗体上直接标记的方法及在结合于一次抗体的抗体(二次抗体)上标记的方法等。本发明的环肽能够用作用于使标记物质结合于一次抗体的连接体，也能够用作用于使标记物质结合于二次抗体的连接体。本发明的环肽具有抗体结合性(igg(immunoglobuling；免疫球蛋白g)结合性)，因此也能够使用经标记的本发明的环肽来代替经标记的二次抗体。
并且，标记有多种，将放射性同位素用作标记的体系称为放射免疫测定法(ria；radioimmunoassay)，将过氧化物酶等酶用作标记的体系称为eia(enzymeimmunoassay；酶免疫测定法)，将鲁米诺等化学发光物质用作标记的体系称为clia(chemiluminescentimmunoassay；化学发光免疫测定法)，将fitc(fluoresceinisothiocyanate；异硫氰酸荧光素)等荧光发光物质(荧光色素)用作标记物质的体系称为fia(fluorescentimmunoassay；荧光免疫测定法)。本发明的环肽在任意一种体系中均能够用作抗体标记用连接体。
为了提高免疫分析的检测灵敏度，需要对抗体的1个分子附加多个标记，但现有的抗体标记用连接体在多个结合时会导致抗体的结合活性降低，反而有可能损害作为免疫分析的优点的特异性及灵敏度。但是，本发明的环肽即使在多个结合于抗体的情况下也能够保持抗体结构的完整性，不会使抗体的结合活性降低，因此在多个结合时也不会损害作为免疫分析的优点的特异性及灵敏度，可期待提高检测灵敏度。并且，由于是基于抗原抗体反应的结合，因此也能够进行以往难以进行的标记后的分离，能够实现标记的可逆操作。
本发明的环肽与抗体的结合可以通过使用交联剂使构成本发明的环肽的氨基酸残基的侧链官能团与构成抗体的氨基酸残基的侧链官能团交联来形成。
作为上述交联剂，可以举出氨基间交联剂、氨基-硫醇基间交联剂、羧基-氨基间交联剂及硫醇基间交联剂等。
上述氨基间交联剂的例子为dsg(双琥珀酰亚胺戊二酸酯)、dss(双琥珀酰亚胺辛二酸酯)及bs3(双(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯)以及dma(己二亚氨酸二甲酯)、dmp(庚二亚氨酸二甲酯)及dms(辛二亚氨酸二甲酯)等。
上述氨基-硫醇基间交联剂的例子为sia(琥珀酰亚胺基碘乙酸酯)、sbap(琥珀酰亚胺基-3-(溴乙酰胺)丙酸酯)及siab(琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰)氨基苯甲酸酯)、amas(n-α-马来酰亚胺基乙酰氧基琥珀酰亚胺酯)、bmps(n-β-马来酰亚胺丙基-氧基琥珀酰亚胺酯)及gmbs(n-γ-马来酰亚胺丁酰基-氧基琥珀酰亚胺酯)、以及spdp(琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、lc-spdp(6-(3(2-吡啶基二硫代)丙酰胺)己酸琥珀酰亚胺酯)及smpt(4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯)等。
上述羧基-氨基间交联剂的例子为edc(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、nhs(n-羟基琥珀酰亚胺)及sulfo-nhs(磺基-n-羟基磺基琥珀酰亚胺)等。
上述硫醇基间交联剂的例子为bmoe(双马来酰亚胺乙烷)、bmb(1，4-双马来酰亚胺丁烷)及bmh(双马来酰亚胺己烷)等。
并且，本发明的环肽与抗体的结合也可以使用ccap(chemicalconjugationbyaffinitypeptide)法(参考国际公开第2016/186206号)来形成。
ccap法为如下方法：向本发明的环肽的侧链氨基或侧链硫醇基等官能团中导入含有与抗体的侧链氨基或侧链硫醇基等官能团具有反应性的官能团(称为“反应性官能团”。)的基团，首先通过抗原抗体反应使本发明的环肽与抗体键合，接着使导入到环肽中的反应性官能团与抗体的氨基或硫醇基等官能团偶联，由此形成共价键。
上述反应性官能团的例子为与氨基具有反应性的nhs-酯基及酰亚胺酯基、以及与硫醇基具有反应性的马来酰亚胺基及卤代乙酰基等。
ccap法中，在弱酸性至中性的条件下迅速且定量地进行反应，因此不会损害本发明的环肽、抗体及标记的稳定性及亲和性。
例如，通过以下所示的反应，使具有nhs-酯基的基团键合于具有构成本发明的环肽的氨基酸残基的侧链氨基，使该nhs-酯基与抗体的氨基偶联，由此能够形成共价键。
[化学式3]
<抗体药物复合体用连接体及抗体药物复合体>
在抗体药物复合体的技术领域中，本发明的环肽的用途有作为抗体药物复合体用连接体的用途。
作为本发明的环肽作为抗体药物复合体用连接体的用途的应用，例如能够举出包含抗体、药物及本发明的环肽且抗体和药物经由本发明的环肽结合的抗体药物复合体。
adc(antibodydrugconjugate；抗体药物复合体)，别名也被称作武装抗体(armedantibody)，是将识别细胞的抗体和作为活性主体的药物(低分子药物)用适当的连接体结合而得到的药物。抗体药物复合体的作用机理大致为如下。
(1)抗体药物复合体的抗体部分结合于靶细胞表面的靶分子。
(2)抗体药物复合体被导入细胞内。
(3)在细胞内，抗体药物复合体的连接体被切断。
(4)在细胞内发挥药物(低分子药物)的药效。
抗体药物复合体中，抗体仅在发现靶分子的细胞中发挥药效，因此能够抑制全身的副作用，且在靶细胞集中发挥药效，因此与药物单体相比，非常有效且副作用少。例如，以攻击细胞分裂活跃的癌细胞为目的而研发出的抗癌剂也攻击同样以活跃的细胞分裂来维持功能的细胞，具体而言为负责免疫的细胞、消化管道的细胞、毛根细胞等，因此作为副作用，有时会出现易感染、引起腹泻、头发脱落等症状。但是，抗体药物复合体能够选择性地将抗癌剂递送至靶癌细胞，因此能够抑制抗癌剂攻击靶细胞以外的细胞而引起的副作用。
对于抗体药物复合体用连接体，不仅要求连接抗体药物复合体的抗体部分和药物部分、在血液中稳定、在细胞内将抗体和药物切断并释放，而且还要求不损害抗体的结合活性。为了提高药物的递送效率，需要在抗体的1个分子上附加大量药物，但现有的抗体药物复合体用连接体在多个结合时会导致抗体的结合活性降低，反而损害作为抗体药物复合体的优点的选择性，有可能降低对靶细胞的药物递送效率。但是，本发明的环肽即使在多个结合于抗体的情况下也能够保持抗体的结构完整性，不会使抗体的结合活性降低，因此在多个结合时也不会损害作为抗体药物复合体的优点的选择性，可期待提高向靶细胞的药物递送效率。
并且，与以往的环肽相比，本发明的环肽的经时稳定性高，因此可期待抗体药物复合体用连接体及抗体药物复合体在血中的稳定性也得到提高。
另外，通过变更作为环状部的三唑键的侧链部分，可期待控制在细胞内的药物释放性。
本发明的环肽与抗体的结合可以通过使用交联剂使构成本发明的环肽的氨基酸残基的侧链官能团与构成抗体的氨基酸残基的侧链官能团交联来形成。
作为上述交联剂，可以举出氨基间交联剂、氨基-硫醇基间交联剂、羧基-氨基间交联剂及硫醇基间交联剂等。
上述氨基间交联剂的例子为dsg(双琥珀酰亚胺戊二酸酯)、dss(双琥珀酰亚胺辛二酸酯)及bs3(双(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯)、以及dma(己二亚氨酸二甲酯)、dmp(庚二亚氨酸二甲酯)及dms(辛二亚氨酸二甲酯)等。
上述氨基-硫醇基间交联剂的例子为sia(琥珀酰亚胺基碘乙酸酯)、sbap(琥珀酰亚胺基-3-(溴乙酰胺)丙酸酯)及siab(琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰)氨基苯甲酸酯)、amas(n-α-马来酰亚胺基乙酰氧基琥珀酰亚胺酯)、bmps(n-β-马来酰亚胺丙基-氧基琥珀酰亚胺酯)及gmbs(n-γ-马来酰亚胺丁酰基-氧基琥珀酰亚胺酯)、以及spdp(琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、lc-spdp(6-(3(2-吡啶基二硫代)丙酰胺)己酸琥珀酰亚胺酯)及smpt(4-琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯)等。
上述羧基-氨基间交联剂的例子为edc(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、nhs(n-羟基琥珀酰亚胺)及sulfo-nhs(磺基-n-羟基磺基琥珀酰亚胺)等。
上述硫醇基间交联剂的例子为bmoe(双马来酰亚胺乙烷)、bmb(1，4-双马来酰亚胺丁烷)及bmh(双马来酰亚胺己烷)等。
并且，本发明的环肽与抗体的结合也可以使用ccap(chemicalconjugationbyaffinitypeptide)法(参考国际公开第2016/186206号)来形成。
ccap法为如下方法：向本发明的环肽的侧链氨基或侧链硫醇基等官能团中导入含有与抗体的侧链氨基或侧链硫醇基等官能团具有反应性的官能团(称为“反应性官能团”。)的基团，首先通过抗原抗体反应使本发明的环肽与抗体结合，接着使导入到环肽中的反应性官能团与抗体的氨基或硫醇基等官能团偶联，由此形成共价键。
上述反应性官能团的例子为与氨基具有反应性的nhs-酯基及酰亚胺酯基、以及与硫醇基具有反应性的马来酰亚胺基及卤代乙酰基等。
ccap法中，在弱酸性至中性的条件下迅速且定量地进行反应，因此不会损害本发明的环肽、抗体及药物的稳定性及亲和性。
例如，通过以下所示的反应，使具有马来酰亚胺基的基团键合于构成本发明的环肽的氨基酸残基的侧链氨基，使该马来酰亚胺基与抗体的硫醇基偶联，由此能够形成共价键。
[化学式4]
另外，药物可以为脂质体化的药物、高分子胶束化的药物或peg(聚乙二醇)化的药物。
药物通过脂质体化、高分子胶束化或peg化，在很多情况下能够实现以有效成分的生物体内稳定性、组织迁移性轮廓(profile)为代表的药物动态及细胞内动态等的改善。
<药物载体及药物制剂>
本发明的环肽的用途有在药物输送系统中作为药物载体的用途。
作为本发明的环肽作为药物载体的用途的应用，例如能够举出包含药物及本发明的环肽且药物和本发明的环肽直接或间接结合的药物制剂。
通过本发明的环肽结合于生物体内所存在的igg，能够期待与上述抗体药物复合体相同的效果。药物可以直接与环肽结合，也可以以脂质体化、高分子胶束化或peg(聚乙二醇)化的药物的形式与环肽结合。并且，也可以经由如葡聚糖那样的多糖类或亲水性聚合物与环肽结合。
实施例
以下，根据实施例对本发明进行更详细的说明，但本发明并不受这些实施例的限定。
[实施例1]
(1)环肽的合成
使用全自动肽合成装置(pssm-8，shimadzucorporation制造)合成了下述式(3)所表示的环状多肽(序列号3)。以下，有时将该环肽称为“环肽1”。
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(3)
式(3)中，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]和[bpg]经由通过侧链叠氮基和侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联(参考下述化学式)。
[化学式5]
另外，上述化学式中“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点。
(2)配体的固定
在gehealthcare公司制造的作为表面等离子共振装置的biacore3000(biacoa为注册商标)中设置市售的cm5(羧基甲基葡聚糖导入类型，gehealthcare公司制造))传感器芯片，使spr(surfaceplasmonresonance；表面等离子共振)用hepes(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸；赫佩斯)缓冲液(20mmhepes-hcl，150mmnacl，ph7.4)以10μl/min的流速稳定，并注入了0.2m的edc(1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide；1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺)与0.04m的nhs(n-hydroxysuccinimide；n-羟基琥珀酰亚胺)的混合水溶液70μl。然后，利用hepes缓冲液稀释成0.2g/l，将用0.20μm直径的ptfe(polytetrafluoroethylene：聚四氟乙烯)过滤器(advantecco.，ltd.制造)处理的环肽1的试样液100μl供给给传感器芯片。接着，用乙醇胺水溶液对试样液实施封闭(blocking)处理，并且用氢氧化钠水溶液清洗而进行了固定化。同样地，在上述传感器芯片的另一流路中未将试样固定化，添加0.2m的edc与0.04m的nhs的混合水溶液70μl之后，进行了封闭处理和清洗处理。以下，将所得到的固定化传感器芯片称为“固定化传感器芯片a”。
(3)结合活性的评价
在25℃下向上述(2)中制作出的固定化传感器芯片a中添加了10分钟3000nm的人igg(immunoglobuling；免疫球蛋白g)抗体。接着，测定了将刚添加后的环肽固定化的流路和未固定的流路的抗体结合量。根据将环肽固定化的流路与未固定的流路的抗体结合量的差量和环肽的固定化量计算出环肽的活性，另外，计算出将比较例1的环肽5的活性设为1时的与人igg抗体的相对结合活性。
(相对结合活性的评价基准)
相对结合活性超过8倍…………a
相对结合活性超过4倍且8倍以下…………b
相对结合活性超过2倍且4倍以下…………c
相对结合活性超过1倍且2倍以下…………d
相对结合活性为1倍以下…………e
将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
评价a、b及c表示基于本固定化的改善效果充分，评价d及e表示未显现充分的结合活性。通过使用显出充分的结合活性的环肽，能够与抗体特异性地结合，能够更高效地纯化抗体，从而能够进一步降低抗体的纯化成本。
(4)配体的固定
使环肽1溶解于固定化缓冲液(10％dmsoin200mmnahco3，500mmnagl，ph8.3)而制备出的10mg/ml环肽液1ml与hitrapnhs-activatedhpcolumns(配体固定化用偶联柱，gehealthcare公司制造)(hitrap为注册商标)1ml在25℃下反应1小时。将其用乙醇胺水溶液进行封闭、清洗，得到了环肽1的固定化载体。以下，将所得到的固定化载体称为“固定化载体a”。
(5)耐化学性的评价
在上述(4)中制作出的固定化载体a上连接chromatosystemaktaavant25(gehealthcare公司制造)(aktaavant为注册商标)，并进行了抗体结合量的测定。用平衡化液(20mm磷酸缓冲液，150mmnacl，ph7.4)使柱平衡化之后，以流速0.21ml/min注入了5mg/ml的人igg抗体标准缓冲液(20mm磷酸缓冲液，150mmnacl，ph7.4)溶液20ml。然后，将载样后清洗液(20mm磷酸缓冲液，150mmnacl，ph7.4)以相同的流速流放5ml进行清洗之后，将洗脱前清洗液(20mm磷酸缓冲液，1mnacl，ph7.4)以相同的流速流放了5ml。然后，将洗脱液(100mm柠檬酸缓冲液，ph3.2)以相同的流速流放了5ml。另外，接着将cip(cleaninginplace；定置清洗)液(0.1m氢氧化钠)以相同的流速流放5ml，然后将再平衡液(20mm磷酸缓冲液，150mmnacl，ph7.4)以相同的流速流放了5ml。此时，根据监测280nm的吸光度而得到的igg(immunoglobuling；免疫球蛋白g)洗脱峰，将直至抗体原液的10％从载体漏出为止抗体结合于载体的量作为抗体结合量而进行了测定。接着，在25℃下将固定化载体a在0.05mnaoh水溶液中装满并静置6小时之后，同样测定载体的抗体结合量，根据碱处理前后的抗体结合量计算出结合量变化率。
(结合量变化率的评价基准)
结合量变化率超过90％………………………a
结合量变化率超过80％且90％以下………………………b
结合量变化率超过70％且80％以下………………………c
结合量变化率超过50％且70％以下………………………d
结合量变化率为50％以下………………………e
将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
评价a、b及c表示耐化学性充分，评价d及e表示未显现充分的耐化学性。通过使用显出充分的耐化学性的环肽，清洗后也能够与抗体特异重复结合，能够长期纯化抗体，从而能够进一步降低抗体的纯化成本。
(6)人血浆中的稳定性评价
评价了环肽1在人血浆(promeddxllc.制造)中的稳定性。
制备5μm的环肽1水溶液，向20μl的人血浆中添加2μl，并在室温下放置了20分钟。20分钟后，向其中添加甲醇(wakopurechemicalindustries，ltd制造)100μl，使反应停止。搅拌后，对溶液进行离心分离，并采集上清液，将其作为20分钟样品。另一方面，向20μl的人血浆中添加甲醇100μl之后，添加环肽水溶液2μl，并搅拌、离心分离，采集上清液，将其作为0分钟样品。
使用质谱分析装置triplequad5500(absciexpte.ltd.制造)对0分钟样品及20分钟样品定量了环肽1的含量。将0分钟样品的定量值设为100％时的20分钟样品定量值计算为残存率。
(残存率的评价基准)
结合量变化率超过90％…………………a
结合量变化率超过80％且90％以下…………………b
结合量变化率超过70％且80％以下…………………c
结合量变化率超过50％且70％以下…………………d
结合量变化率为50％以下…………………e
将环肽的结构及评价结果示于表3的“血浆中稳定性”栏。
[实施例2]
(1)依照实施例1合成了下述式(4)所表示的环肽(序列号4)。以下，有时将该环肽称为“环肽2”。
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(4)
式(4)中，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]和[bpg]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联(参考下述化学式)。
[化学式6]
另外，上述化学式中，“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点。
(2)除了代替环肽1而使用环肽2以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片b。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽2以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体b。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
(6)以与实施例1相同的方式进行了人血浆中的环肽2的稳定性评价。将评价结果示于表3的“血浆中稳定性”栏。
[实施例3]
(1)依照实施例1合成了下述式(5)所表示的环肽(序列号5)。以下，有时将该环肽称为“环肽3”。
asp-[bpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[lys(n3)]-thr-lys-lys……(5)
式(5)中，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[bpg]和[lys(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽3以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片c。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽3以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体c。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例4]
(1)依照实施例1合成了下述式(6)所表示的环肽(序列号6)。以下，有时将该环肽称为“环肽4”。
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[ala(n3)]-thr-lys-lys……(6)
式(6)中，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[ala(n3)]表示来源于β-叠氮基-l-丙氨酸的氨基酸残基，[hpg]和[ala(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联(参考下述化学式)。
[化学式7]
另外，上述化学式中，“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点。
(2)除了代替环肽1而使用环肽4以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片d。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽4以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体d。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
(6)以与实施例1相同的方式进行了人血浆中的环肽4的稳定性评价。将评价结果示于表3的“血浆中稳定性”栏。
[实施例5]
(1)依据实施例1合成了下述式(7)所表示的环肽(序列号7)。以下，有时将该环肽称为“环肽5”。
lys-lys-lys-asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[ala(n3)]-thr……(7)
式(7)中，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[ala(n3)]表示来源于β-叠氮基-l-丙氨酸的氨基酸残基，[hpg]和[ala(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽5以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片e。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽5以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体e。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例6]
(1)依据实施例1合成了下述式(8)所表示的环肽(序列号8)。以下，有时将该环肽称为“环肽6”。
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(8)
式(8)中，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[pra]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]和[pra]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽6以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片f。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽6以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体f。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例7]
(1)依据实施例1合成了下述式(9)所表示的环肽(序列号9)。以下，有时将该环肽称为“环肽7”。
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(9)
式(9)中，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[pra]表示来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]和[pra]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽7以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片g。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽7以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体g。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例8]
(1)依据实施例1合成了下述式(10)所表示的环肽(序列号10)。以下，有时将该环肽称为“环肽8”。
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[hpg]-thr-lys-lys……(10)
式(10)中，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]和[hpg]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽8以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片h。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽8以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体h。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例9]
(1)依据实施例1合成了下述式(11)所表示的环肽(序列号11)。以下，有时将该环肽称为“环肽9”。
asp-[pra]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[lys(n3)]-thr-lys-lys……(11)
式(11)中，[pra]表示来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[pra]和[lys(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽9以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片i。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽9以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体i。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例10]
(1)依据实施例1合成了下述式(12)所表示的环肽(序列号12)。以下，有时将该环肽称为“环肽10”。
asp-[lys(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[pra]-thr-lys-lys……(12)
式(12)中，[lys(n3)]表示来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基，[pra]表示来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[lys(n3)]和[pta]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽10以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片j。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽10以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体j。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例11]
(1)依据实施例1合成了下述式(13)所表示的环肽(序列号13)。以下，有时将该环肽称为“环肽11”。
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[hpg]-thr-lys-lys……(13)
式(13)中，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]和[hpg]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽11以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片k。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽11以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体k。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例12]
(1)依据实施例1合成了下述式(14)所表示的环肽(序列号14)。以下，有时将该环肽称为“环肽12”。
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[abu(n3)]-thr-lys-lys……(14)
式(14)中，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[hpg]和[abu(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽12以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片l。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽12以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体l。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例13]
(1)依据实施例1合成了下述式(15)所表示的环肽(序列号15)。以下，有时将该环肽称为“环肽13”。
asp-[abu(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(15)
式(15)中，[abu(n3)]表示来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[abu(n3)]和[bpg]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽13以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片m。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽13以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体m。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例14]
(1)依据实施例1合成了下述式(16)所表示的环肽(序列号16)。以下，有时将该环肽称为“环肽14”。
asp-[bpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[nva(n3)]-thr-lys-lys……(16)
式(16)中，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[nva(n3)]表示来源于δ-叠氮基-l-正缬氨酸的氨基酸残基，[bpg]和[nva(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽14以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片n。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽14以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体n。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例15]
(1)依据实施例1合成了下述式(17)所表示的环肽(序列号17)。以下，有时将该环肽称为“环肽15”。
asp-[hpg]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[nva(n3)]-thr-lys-lys……(17)
式(17)中，[hpg]表示来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[nva(n3)]表示来源于δ-叠氮基-l-正缬氨酸的氨基酸残基，[hpg]和[nva(n3)]经由通过侧链乙炔基与侧链叠氮基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽15以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片p。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽15以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体p。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[实施例16]
(1)依据实施例1合成了下述式(18)所表示的环肽(序列号18)。以下，有时将该环肽称为“环肽16”。
asp-[nva(n3)]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[bpg]-thr-lys-lys……(18)
式(18)中，[nva(n3)]表示来源于δ-叠氮基-l-正缬氨酸的氨基酸残基，[bpg]表示来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基，[nva(n3)]和[bpg]经由通过侧链叠氮基与侧链乙炔基的环化加成反应而形成的三唑键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽16以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片q。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽16以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体q。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
[比较例1]
(1)使用全自动肽合成装置(pssm-8，shimadzucorporation制造)合成了下述式(19)所表示的环肽(序列号19)。以下，有时将该环肽称为“环肽17”。
asp-[glu]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[lys]-thr-lys-lys……(19)
式(19)中，[glu]表示来源于l-谷氨酸的氨基酸残基，[lys]表示来源于l-赖氨酸的氨基酸残基，[glu]和[lys]经由通过侧链羧基与侧链氨基的脱水缩合而形成的酰胺键交联(参考下述化学式)。
[化学式8]
另外，上述化学式中，“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点。
(2)除了代替环肽1而使用环肽17以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片r。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽17以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体r。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
(6)以与实施例1相同的方式进行了人血浆中的环肽17的稳定性评价。将评价结果示于表3的“血浆中稳定性”栏。
[比较例2]
(1)以与比较例1相同的方式合成了下述式(20)所表示的环肽(序列号20)。以下，有时将该环肽称为“环肽18”。
asp-[glu]-ala-tyr-his-leu-gly-glu-leu-val-trp-[lys]-thr-lys-lys……(20)
式(20)中，[glu]表示来源于l-谷氨酸的氨基酸残基，[lys]表示来源于l-赖氨酸的氨基酸残基，[glu]和[lys]经由通过侧链羧基与侧链氨基的脱水缩合而形成的酰胺键交联。
(2)除了代替环肽1而使用环肽18以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片s。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽18以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体s。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
(6)以与实施例1相同的方式进行了人血浆中的环肽18的稳定性评价。将评价结果示于表3的“血浆中稳定性”栏。
[比较例3]
(1)使用全自动肽合成装置(pssm-8，shimadzucorporation制造)合成了下述式(21)所表示的环肽(序列号21)。以下，有时将该环肽称为“环肽19”。
asp-[cys]-ala-tyr-his-arg-gly-glu-leu-val-trp-[cys]-thr-lys-lys……(21)
式(21)中，[cys]表示来源于l-半胱氨酸的氨基酸残基，2个[cys]经由通过侧链硫醇基的氧化而形成的二硫醚键交联(参考下述化学式)。
[化学式9]
另外，上述化学式中，“*”表示与相邻的氨基酸残基的键合点。
(2)除了代替环肽1而使用环肽19以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化传感器芯片t。
(3)以与实施例1相同的方式评价了结合活性。将评价结果示于表3的“相对结合活性”栏。
(4)除了代替环肽1而使用环肽19以外，以与实施例1相同的方式得到了固定化载体t。
(5)以与实施例1相同的方式评价了耐化学性。将评价结果示于表3的“耐化学性”栏。
<实施例/比较例的结果>
在以下表3中示出实施例/比较例的性能评价的结果。
[表3]
<抗体结合性及耐化学性>
《实施例1～16及比较例1～3》
实施例1～16的相对结合活性为c评价以上，耐化学性为b评价以上。即，实施例1～16的抗体结合性充分，耐化学性优异。其中，实施例1～5、11及12的相对结合活性及耐化学性均为a评价，特别优异。
相对于此，通过酰胺键交联的比较例1及2的耐化学性为b评价，耐化学性充分，但是相对结合活性为e评价，抗体结合活性差。并且，通过二硫醚键交联的比较例3的相对结合活性为a评价，抗体结合活性充分，但是耐化学性为e评价，耐化学性差。
《实施例2、8及10》
实施例2、8及10是在交联部的氨基酸残基中多肽链的n末端侧的氨基酸残基为来源于ε-叠氮基-l-赖氨酸的氨基酸残基[lys(n3)]、多肽链的c末端侧的氨基酸残基为来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[bpg](实施例2)、来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[hpg](实施例8)或来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[pra](实施例10)的实施例。
关于相对结合活性，实施例2为a评价，实施例8为b评价，实施例10为c评价。推测这种评价的差异是因为，根据在交联部的c末端侧的氨基酸残基中三唑环所键合的碳原子为δ碳原子(实施例2)、还是γ碳原子(实施例8)或β碳原子(实施例10)，存在三唑环对抗体结合部位的立体障碍的影响。
《实施例7、11及13》
实施例7、11及13是在交联部的氨基酸残基中多肽链的n末端侧的氨基酸残基为来源于γ-叠氮基-l-高丙氨酸的氨基酸残基[ahu(n3)]、多肽链的c末端侧的氨基酸残基为来源于l-炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[pra](实施例7)、来源于l-高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[hpg](实施例11)或来源于l-双高炔丙基甘氨酸的氨基酸残基[bpg](实施例13)的实施例。
关于相对结合活性，实施例11为a评价，实施例7及13为b评价。这种评价的差异是因为，根据在交联部的c末端侧的氨基酸残基中三唑环所键合的碳原子为γ碳原子(实施例11)、还是β碳原子(实施例7)或δ碳原子(实施例13)，存在三唑环对抗体结合部位的立体障碍的影响。
《实施例2及3、实施例9及10、实施例11及12、以及实施例14及16》
实施例2的环肽2和实施例3的环肽3是将交联部的n末端侧的氨基酸残基与c末端侧的氨基酸残基调换的实施例。并且，实施例9的环肽9和实施例10的环肽、实施例11的环肽11和实施例12的环肽12及实施例14的环肽14和实施例16的环肽16也分别是将交联部的n末端侧的氨基酸残基和c末端侧的氨基酸残基调换的实施例。实施例2、3、9、10、11、12、14及16的相对结合活性均为c评价以上，耐化学性均为a评价。因此，这些环肽的抗体结合活性及耐化学性充分。
《实施例4及5》
实施例4的环肽4与实施例5的环肽5的差异在于具有作为固定化官能团的氨基的3个赖氨酸残基(单字母标记＝k、三字母标记＝lys)存在于n末端还是存在于c末端。但是，实施例4及实施例5的相对结合活性及耐化学性均为a评价，具有充分的抗体结合性及耐化学性。由此，可以说具有固定化官能团的氨基酸残基可以存在于n末端侧及c末端侧中的任一末端侧。
《全体》
包含经由三唑环(三唑键)的交联结构的环肽(实施例1～10)的抗体结合性和耐化学性优异。并且，包含经由酰胺键的交联结构的环肽(比较例1及比较例2)虽然抗体结合性差，但是耐化学性充分。抗体结合性差的原因虽然不明确，但是认为酰胺键所具有的刚直性对其产生很大的影响。并且，包含经由二硫醚键的交联结构的环肽(比较例3)的耐化学性差。认为这是因为形成交联结构时的环的应变大而变得不稳定，从而耐化学性差。
<血浆中稳定性>
实施例1的环肽1、实施例2的环肽2及实施例4的环肽4的血浆中稳定性为a评价，但比较例1的环肽17及比较例2的环肽18的血浆中稳定性为e评价。
这种血浆中稳定性的差异起因于是由三唑键构成交联结构(实施例1、2及4)还是由酰胺键构成交联结构(比较例1及2)而产生。
本发明的环肽的血浆中稳定性高，因此耐酶性优异，能够在血液中使用，尤其能够用作抗体标记用连接体或抗体药物复合体用连接体。并且，即使在细胞内的还原环境下也能够稳定地使用。