本发明涉及具有对疫霉属卵菌的抗性的马铃薯(Solanum tuberosum)转基因植物、此类植物的转基因部分、其生产方法以及外部应用于植物的方法。
即使在现在,由致病疫霉(Phytophthora infestans)导致的马铃薯晚疫病仍然是最普遍的且对经济影响巨大的马铃薯疫病。
纵观全球,该病原体带来产量损失超过20%,导致收益损失。这意味着必须使用一些昂贵的化学的植物保护措施,因为马铃薯用于对抗致病疫霉,或减慢并限制其繁殖的自然防御机制不是足够的或者长期的。
已知植物的自然防御机制,例如在侵染部位的过敏反应、细胞壁的木质化、发病机理相关蛋白质的产生以及植物抗毒素的合成等,确实有助于增加抗性,但是对于受影响的植物,也会伴随着能量的损失和收益的损失。
植物的自然防御机制还包括所谓的抗性基因(R基因)的表达,该基因的产物能够与微生物的非病原基因(Avr基因)相互作用(基因对基因假说)并由此诱导特异性防御反应。但是,如果病原体例如致病疫霉可以免除Avr基因的合成,可以阻碍这一抗性,宿主植物也不会出现病原体识别该以及随后的特异性防御反应。
Fire等(1998)的研究已证实双链RNA(dsRNA)可导致同源RNA的序列特异性降解。同时,从该结果出发,利用RNA干扰(RNAi)技术,通过宿主植物诱导的保守且必需的基因(例如来自线虫或鳞翅目和Coleroptera的基因)沉默开发了体内与体外均表现出了对这些害虫的抗性的转基因植物。
此外,宿主植物与致植物病真菌的相互作用构成了宿主诱导的基因沉默(HIGS)的概念的应用以诱导抗性(EP 1 716 238)。
Van West等(1999)首先在疫霉中应用基因沉默方法,以实施对这些卵菌特异性基因的功能分析。
在WO 2006/070227中,第一次描述了,基于双链RNA在真菌细胞外与真菌细胞接触,利用RNA干扰控制病原真菌。它提出了一种可以生产具有病原体抗性的植物的方法。通过这种方式,RNA干扰可以针对一种或者多种病原体的一个或者多个基因。致病疫霉是可能的病原真菌而马铃薯是可能宿主植物。
之前研究给出假说,宿主植物诱导的基因沉默并不能够对每一个基因起作用,因此选择目标基因对于功能性沉默是至关重要的。因此,例如,通过宿主植物诱导的基因沉默,无法充分降低致病疫霉中的细胞膜H+-ATPase PnMA1以赋予有效的针对病原体的保护(Zhang et al.2011)。因此,目标基因的选择对于植物有效的病原体防御是决定性的(Yin et al.2011)。
最近提出的筛选系统有望能够帮助选择合适的寄生基因用于沉默构建体,以产生具有病原体抗性的植物(US 2010/0257634)。作者也提出了鉴定适宜的测试构建体来诱导马铃薯中的植物抗性。就这点而言,目标基因是基于基因组序列的生物信息学分析或必需基因或者来自其他已知模式生物的毒力因子的序列同源性确定的。该文件并没有包含任何本发明公开的用于产生针对疫霉属卵菌的抗性的基因的提示。
在WO 2009/112270文中,描述了一种用于在转基因植物中产生针对多种真菌的广谱抗性的方法。在本发明的方法的一种实施方式中,所述广谱抗性针对葡萄钩丝壳菌(Uncinula necator)、葡萄生轴霜霉(Plasmopora viticola)、单胞锈菌(Uromyces spec.)、豆薯层锈菌(Phakopsora pachyrhizi)、白粉菌(Erysiphe sp.)以及致病疫霉。
此外,在WO 2006/047495中公开了通过RNAi诱导沉默开发具有致病疫霉抗性的马铃薯。一方面,产生携带用于RNA干扰的来自致病疫霉的rRNA基因的基因序列的植物。WO 2006/047495中描述的针对致病疫霉的rRNA基因的沉默构建体包含检索号为AJ854293的碱基对1-600、18S rRNA编码区的32bp以及致枯病原体5.8S rRNA的全部编码区。当选择用于HIGS策略的目标基因时,考虑到适用性,至关重要的是尽可能短或者优选地,在延伸超过17个连续碱基对的长度与非目标生物没有同源性,因为在消费转基因植物或其收获产物的情况下,如果有同源性的话,可以破坏非目标生物的基因表达(“脱靶”效应)。但是,在WO 2006/047495中描述的序列包含了致病疫霉18S rRNA的32bp,其与人(Homo sapiens),猪(Sus scrofa)以及牛(Bos taurus)的18S rRNA基因同源序列有百分之百的相同性。2005年亚洲人类消耗马铃薯量为26kg,北美为58kg,欧洲为96kg(FAOSTAT)。按照马铃薯的人和动物高消费量来看,考虑到安全因素,WO 2006/047495中描述的来自致病疫霉的rRNA序列作为HIGS目标基因对于消费者是不适合的。
另一方面,在WO 2006/047495中,产生了携带用于RNA干扰的来自桃蚜(Myzus persicae)的组织蛋白酶B基因和来自致病疫霉的激发素基因INF1的基因序列的植物,所述植物因此表现出对两种植物病原体的抗性。这里用到的目标基因INF1编码激发子。基于作为致病因子的激发子,的抗性是不利的,因为在致病疫霉侵染马铃薯时,该激发素基因INF1并不总是必需的(Kamoun et al.1998)。
因此,本发明的目的是要提供一种能对疫霉属卵菌具有病原体抗性的,尤其是适于消费的,马铃薯转基因植物。
根据本发明,要达到此目的,双链的第一与第二DNA稳定地整合入转基因植物中,其中所述第一DNA包含(a)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列,(b)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸的片段,(c)与(a)或者(b)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列,或(d)在严格条件下,与(a)、(b)或者(c)的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。
意外地,发现这种类型的第一DNA对通过宿主诱导的基因沉默策略赋予马铃薯植物病原体抗性尤为适合。
第一和第二DNA以一种稳定地方式整合到马铃薯转基因植物的基因组中。优选地,所述DNA以稳定方式整合到植物的染色体中。但其也可以整合到染色体外元件。稳定整合的优点是所述DNA可以传给所述转基因植物的后代。
双链DNA由一条编码链和一条非编码链组成。
此外,第二DNA的编码链的核苷酸序列与第一DNA的编码链反向互补。对于5’-3’方向的核苷酸序列,术语“反向互补反向互补”是指3’-5’方向的核苷酸序列的碱基根据碱基配对规则与第一DNA的碱基对应,并且处于反向/镜像的顺序。例如,如果第一DNA编码链的核苷酸序列为atggttc,则反向互补的第二DNA编码链的核苷酸序列为gaaccat。这也称为核苷酸序列的正义与对应的反义(反向互补)方向反向互补。
特别指出的是,在序列全长范围,第二DNA编码链的核苷酸序列可以与第一DNA编码链的核苷酸序列反向互补的。但是,也可以部分反向互补,也就是在有限长度上反向互补。所述第二DNA的编码链的核苷酸序列也可以在其核苷酸序列的多于一个区域,例如二或三个区域,与第一DNA编码链的核苷酸序列反向互补。
从所述第一和第二DNA的编码链完全或部分反向互补的核苷酸序列开始,合成双链RNA。通过在互补核苷酸之间形成桥连氢键产生RNA双链结构。双链RNA区域可由自身部分互补的核酸单链形成,或者由两条不同且非连续的互补的核酸链形成。因此,桥连氢键可在分子内形成,也在分子间形成。
根据本发明,第一DNA包含根据SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列,其中这些序列来自所选择的来自致病疫霉的目标基因。这些目标基因包括初级代谢与氨基酸合成(尤其是脂肪族氨基酸(缬氨酸,亮氨酸与异亮氨酸)的生物合成,以及谷氨酸盐生物合成)的必需基因、细胞调控和信号转导(如氧化还原调控、钙信号传导、G-蛋白信号传导、MAP-激酶信号传导以及转录因子)的基因,以及翻译组件基因、具有RNA加工功能的基因、编码发育和分化蛋白质(例如具有细胞壁形成功能的蛋白质)的基因,以及编码转运蛋白、通道蛋白和膜蛋白的基因。表1中汇总了这些用于设计宿主诱导的基因沉默的来自疫霉的目标基因。
表1
术语“基因沉默”或沉默描述关闭基因的方法。沉默可以是,例如,转录沉默或者转录后沉默。基因沉默还包括反义技术、RNA干扰以及dsRNA。
基因沉默选择性抑制了致病疫霉中的目标基因的核苷酸序列的表达。在该情况下,目标核苷酸序列也可以是未加工的RNA分子、mRNA或者核糖体RNA序列。
目标基因可通过以下方式鉴定:(i)关于卵菌分化或感染过程的微阵列数据的公开的表达研究,以及关于卵菌分化或感染期间的代谢过程的公开研究数据(Grenville-Briggs et al.2005,Judelson et al.2009a,Judelson et al.2009b)(A),(ii)与传统分析结合的比较生物信息学研究(BioMaxBioinformatic Framework)(B),(iii)代谢途径与传统分析结合的分析(C),以及(iv)关于真核生物中同源基因特征的数据的评估(Roemer et al.1994,Inoue et al.1995,Mazur et al.1995,Lesage et al.2004,Avrova et al.2008,Wang et al.2009,Li et al.2010,Wang et al.2010)(D)。
当选择目标基因时,需要考虑到,这些基因的核苷酸序列是致病疫霉特有的,以避免植物和人类基因的不需要的沉默。为达到此目的,将所选择的目标基因的蛋白质(BlastX)与马铃薯及番茄(Solanum lycopersicum)的蛋白质组进行比较。同时,还将目标基因的核苷酸(BlastN)与马铃薯、番茄基因组以及一般性的BlastN进行比较(条件:BlastN;数据库:人类基因组+转录物;最优化:有点相似的序列(blastn))。当目标基因与马铃薯及番茄没有显示同源性或者与一般性BlastN在短序列段中(<17nt)没有或仅有部分同源性,从而抑制或不发生与内源性植物核苷酸序列的相互作用时,认为该目标基因则是高度合适的。
根据本发明,所使用的核苷酸序列有不同长度。因此,例如,SEQ ID NO:1-43之一的核苷酸序列长度为501-735个核苷酸。
所使用的核苷酸序列也可以是一个或多个SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的一个或多个片段。就此点而言,该片段包含一个或多个SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的至少15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1100、1200或1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400或2500个连续的核苷酸。特别合适的片段是SEQ ID NO:1核苷酸具有290个核苷酸的片段。
在本发明优选的实施方式中,使用相同核苷酸序列(如SEQ ID NO:1)或者不同的核苷酸序列(如SEQ ID NO:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、1、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42或43)的2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个片段的组合。优选的组合包含SEQ ID NO:4、23、27和28的核苷酸序列的片段,这些基因与信号转导有关。更优选的组合包含SEQ ID NO:3、16和17的核苷酸序列的片段,这些是来自致病疫霉谷氨酸盐生物合成基因。进一步有利的组合包含来自细胞壁形成基因(SEQ ID NO:25、36、37)、钙信号传导基因(SEQ ID NO:20、21、22)、初级代谢基因(SEQ ID NO:5、6、7)、氧化还原调控基因(SEQ ID NO:24、25、26)的核苷酸序列或核苷酸序列的片段,或者包含来自SEQ ID NO:39、40、41、42的转运蛋白基因的核苷酸序列或核苷酸序列的片段。进一步优选的组合包含不同目标基因组(例如,G-蛋白信号传导基因、MAP激酶信号传导基因、初级代谢基因和氧化还原调控基因(SEQ ID NO:27、28、4、23))的核苷酸序列或核苷酸序列的片段,。组合若干目标基因意味着避免了转基因植物的抗性被卵菌中的自然突变破坏的可能性。
本发明的引入马铃薯中的双链的第一DNA可以包含在严格条件下与以下核苷酸序列杂交的核苷酸序列:(a)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列,(b)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的片段或至少15个连续核苷酸,(c)与(a)或(b)或(c)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列。严格的条件举例如下:65℃下4×SSC中杂交,然后在65℃下0.1×SSC中洗涤若干次,大约共1小时。此处所用的术语”严格杂交条件也可以是指“68℃下,0.25M磷酸钠、pH为7.2的7%SDS、1mM EDTA和1%BSA中杂交16小时,然后在68℃下,以2×SSC和0.1%SDS中洗涤两次。
特别地,本发明也包括核苷酸序列的这样的片段,其有几个,例如1或2个核苷酸与来自致病疫霉的目标基因序列并不互补。出现在例如卵菌中序列的变异基于基因突变,例如致病疫霉菌株中的增加、缺失、替换或多态性,并且导致在1、2或多个核苷酸的区域的配对错误,只要转基因马铃薯植物形成的RNA仍然可以干扰卵菌形成的目标基因RNA,就可以耐受所述变异。
根据本发明,马铃薯转基因植物具有抵抗疫霉属卵菌的病原体抗性。为了本发明该抗性,比较了转基因马铃薯和对照植物,理想地,所述对照植物与转基因植物具有相同的基因型,并在相同条件下生长,但不含有引入转基因植物的DNA。抗性大小采用目视打分法确定,其中判定得分为0(不易感)到100(非常易感)。一个更好地检测抗性的方法为比较转基因植物相较于控制组而言表面感染减少的百分比,如百分之10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100(详见室外条件下转基因马铃薯抗性测量方法的条件)。
疫霉属包含了多个种,如赤杨衰退病原菌(alni)、恶疫霉(cactorum)、辣椒疫霉(capsici)、樟疫霉(cinnamomi)、柑桔褐腐疫霉(citrophthora)、clandestina、草莓疫霉(fragariae)、hedraiandra、idaei、致病疫霉、ipomoeae、iranica、kernoviae、mirabilis、megakarya、烟草疫霉(nicotianae)、棕榈疫霉(palmivora)、烟草黑胫病菌(parasitica)、phaseoli、栎树猝死病菌(ramorum)、pseuodotsugae、quercina、大豆疫霉(sojae)或tentaculata。
在本发明的优选的实施方式中,转基因马铃薯表现了对致病疫霉的抗性。
在针对实验室和田间条件下,来自致病疫霉的乙酰乳酸合酶的构建体抑制脂肪族缬氨酸、亮氨酸与异亮氨酸的生物合成导致枯萎病感染大量减少,叶的抗性大大增强。通过在一个构建体中组合一些目标基因,例如G蛋白信号传导、MAP激酶信号传导、初级代谢、氨基酸生物合成和氧化还原调控的基因,抗性效果还可以进一步增强,因为通过使用信号传导途径和代谢途径的组合构建体的多作用抑制病原体。
令人意外的是,本发明的马铃薯对具有不同侵袭性的致病疫霉的防御力在某种程度上发生了变化,因此获得了能够高效且永久地保护植物抵御这种最重要病原体的侵染的抗性。
还意外地发现所述抗性没有马铃薯的农学性质的重大缺陷或者负面变化。近田间条件下的栽培实验没有任何对马铃薯品质有害的作用。仔细选择致病疫霉的目标基因,排除任何与来自非目标生物(马铃薯,人类,猪,奶牛)的基因延伸超过17个连续碱基对的同源,意味着对使用所述植物作为饲料和食物没有限制,并且对于播种、培养、收获以及加工农作物没有限制。所述植物可以直接用作农业、食物或饲料植物。
根据优选的实施方式,双链RNA是miRNA或者siRNA。MiRNA是指小的干扰RNA,包括自然产生的miRNA和合成的miRNA,所述合成的miRNA可以通过例如重组或化学合成或者加工初级miRNA产生。
SiRNA是指小的干扰RNA,包括自然产生的siRNA和合成的siRNA,所述合成的siRNA可以通过例如重组或化学合成或者加工dsRNA产生
转基因植物产生来自引入的双链DNA的dsRNA,所述DNA由内源性RNAi或者沉默机制加工来形成siRNA和miRNA。
为了获得dsRNA,可以使用正义方向的双链的第一DNA(其具有根据SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列或其片段)和反义方向的双链的第二DNA,所述第一和第二DNA由内含子分隔开,所述内含子与所考虑的目标基因没有相似性。例如,所述DNA可以是指SEQ ID NO:1的核苷酸序列,其针对致病疫霉的乙酰乳酸合酶基因。根据在植物细胞中的表达,可形成RNA转录物,其因为同义和反义序列区域的同源性可以合并形成dsRNA。由于在内含子区域中碱基对不匹配,dsRNA形成发卡结构。具有发卡结构的dsRNA也可以通过一个具有正义方向的根据SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列和有不同长度的反义方向的第二序列的双链DNA的方式制备。在这方面,正义方向的核苷酸序列比反义方向的核苷酸长大约190个核苷酸,反之亦然。
通过PCR扩增目标基因所选择的核苷酸序列的限定的区域,并且以正义和反义方向克隆到适于合成发卡结构的载体中。就这点而言,一些具有不同目标基因的序列区域的片段可以克隆到载体中以构建组合发卡结构。载体可通过植物生物技术界熟知的转化方法转入到植物细胞中。本领域技术人员会意识到,例如,也可以将目标基因的所选择的核苷酸序列以正义方向克隆进入一个载体,将所述目标基因的所述核苷酸序列以反义方向克隆进入第二载体,然后通过例如共转化导入植物细胞中。
沉默机制由dsRNA引起,例如,发卡RNA结构或者基因双螺旋。所述dsRNA可通过dsRNA特异性核酸内切酶(Dicer)产生小的dsRNA,所述产生通过将较长的核苷酸序列加工成小的dsRNA,优选21-25个碱基对,该过程与“茎环”(初级miRNA)和长互补dsRNA前体类似的。作为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的核心成分,Argonaut蛋白与siRNA和miRNA结合并使其解螺旋(unwind),所述双螺旋的引导链通过碱基配对与mRNA特异性结合并使其降解。通过miRNA方式,RNA干扰也是一种类似的过程,不同在于所产生的miRNA还包含与目标基因不同的部分区域。
当宿主植物感染致病疫霉后,在宿主植物和卵菌之间可以出现在植物中形成的RNA交换,所述RNA针对一个或多个Phytophthora特异的目标序列。在卵菌中,这些RNA可以导致一个或多个目标基因的序列特异性基因沉默。蛋白质及蛋白复合物如dicer,RISC(RNA诱导的沉默复合物)以及RNA依赖性RNA聚合酶(RdRP),可参与到该过程中。
已知当RdRP从降解的mRNA片段中合成新的siRNA时,植物中的siRNA作用会继续。该次级或过渡RNAi可以增强沉默并且也导致共享这些保守序列时的不同转录物的沉默。
在优选的实施方式中,所述第一DNA和第二DNA与至少一个启动子可操作连接。
启动子是非翻译的DNA序列,通常是在编码区的上游片段,含有RNA聚合酶的结合位点并且启动DNA的转录。启动子还含有能够调节基因表达的特殊元件(例如顺式调控元件)。“可操作连接”是指包含完整核苷酸序列的DNA与启动子连接,以允许该核苷酸序列表达。该完整的核苷酸序列也可与下游的终止子信号(作为进一步的元件)连接。
启动子可以来源于植物、动物或者微生物,或者是合成来源的,并且可以例如从选自以下启动子:组成型、诱导型、发育特异的、细胞类型特异的、组织特异的或者器官特异的。组成型启动子在多数情况下是有活性的,诱导性启动子在诱导信号的作用下表达,所述诱导信号可以是,例如,生物胁迫如病原体或者非生物胁迫低温、干燥或化学物质。
启动子的实例是组成型的CaMV 35S启动子(Benfey et al.,1990)和C1启动子,该启动子在绿色组织中是有活性的(Stahl et al.,2004)。
所述第一DNA和第二DNA也可以和双启动子(doppelten Promotor),例如有双向活性的TR1’和TR2’启动子(Saito et al.,1991),可操作连接。
此外,所述第一DNA和第二DNA也可分别与启动子可操作连接。
使用分别位于核酸分子的3’端与5’端侧面的两个启动子,能够分别表达DNA的两条链,其中形成两个互补的RNA,其杂交并形成dsRNA。此外,可以配置两个启动子,这样一个启动子作用于所选择的核苷酸序列的转录,第二个启动子作用于与第一核苷酸序列互补的核苷酸序列的转录。两条核苷酸序列都转录后,dsRNA就形成了。
进一步,可以配置双向启动子,其运行两个方向的两个核苷酸序列的表达,其中一条核苷酸序列从3’方向读取,第二个序列从5’方向读取。只要两条核苷酸序列彼此互补则形成dsRNA。
本发明还关注了马铃薯转基因植物的部分。
在该应用的背景下,转基因植物的“部分”特别是指本发明的植物的种子、根、叶、花和细胞。就这点而言,术语“细胞”应该被理解为例如具有细胞壁的分离的细胞或其聚集体或原生质体。转基因植物的“转基因部分”也包括那些可以收获的部分,如马铃薯块茎。
此外,本发明涉及生产展现针对疫霉属卵菌抗性的马铃薯转基因植物的方法。
在植物生物技术领域,合适植物细胞转化方法是已知的。每种方法都可以用于将核酸(优选在载体中的)插入植物细胞来获得本发明的转基因植物。转化方法可以包括直接和间接的转化方法并且可用于双子叶植物,并且也可以主要用于单子叶植物。合适的直接转化方法包括PEG诱导DNA摄取、脂质体诱导的转化、通过粒子轰击的基因枪方法、电穿孔或显微注射。间接方法的实例包括了农杆菌诱导的转化技术或通过病毒载体的病毒感染。
所采用的优选的方法为使用双元载体的农杆菌诱导的DNA转移。植物细胞转化后,在一个或多个标记物上选择所述细胞,所述标记物与本发明的DNA一起转化植物,并且包含,优选地,诱导抗生素抗性的基因,例如诱导卡那霉素抗性的新霉素磷酸转移酶II基因NPTII,或者诱导潮霉素抗性的潮霉素磷酸转移酶II基因HPTII。
接着,转化细胞再生为完整植物体。在DNA转移和再生后,获得的植物可通过,例如,定量PCR检验本发明中的DNA的存在。随后在体外和温室进行抗致病疫霉的抗性测试。例行的进一步表型研究可由受过合适训练的人员在温室或者室外实施。这些研究下的转化的植物可直接栽培。
本发明的生产显示针对疫霉属卵菌抗性的马铃薯转基因植物的方法包括以下步骤:
(i)产生转化的第一亲本植物,其含有稳定整合到所述亲本植物基因组中的双链的第一DNA,所述第一DNA包含(a)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列,或(b)SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸的片段,或(c)与(a)或(b)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列,或(d)在严格条件下,与(a)、(b)或(c)的核苷酸序列之一杂交的核苷酸序列;
(ii)产生转化的第二亲本植物,其含有稳定整合到所述亲本植物基因组中的双链的第二DNA,其中,所述第一和第二DNA编码链的核苷酸序列彼此部分或完全反向互补;
(iii)将所述第一亲本植物与所述第二亲本植株杂交;
(iv)选择植物,其基因组中稳定整合有双链的第一DNA与双链的第二DNA,由此形成双链RNA,以赋予针对疫霉属卵菌的病原体抗性。
根据本发明,其是根据来自致病疫霉的SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列或核苷酸序列片段。
在本发明的优选的实施方式中,所述双链RNA可以是miRNA或siRNA。
本发明还涉及外部应用于植物的组合物。
该组合物是为植物的外部应用制备的。它含有双链RNA,其中此RNA的一条链对应双链DNA的转录物,所述双链DNA包含(a)根据SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列,或(b)根据SEQ ID NO:1-43的核苷酸序列的至少15个连续核苷酸的片段,或(c)与(a)或(b)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列,或(d)在严格条件下,与(a)、(b)或的c)的核苷酸序列之一杂交的核苷酸序列。
用于生产本发明的组合物的双链RNA可在体外使用本领域技术人员已知的方法产生。例如,双链RNA可通过在体外直接形成RNA来合成。双链RNA也可通过形成mRNA转录物,然后所述转录物形成例如发夹结构而从双链DNA合成。
本发明的组合物可以用作植物或其种子的杀真菌剂。就这点而言,所述组合物用来控制病原体的生长,从而控制病原体的传播或治疗感染的植物。例如,所述组合物可以用作喷雾式杀真菌剂来进行喷洒,或其它本领域技术人员熟悉的常规方法对植物组织进行外用或在植物发芽前后通过喷洒或与栽培基质混合。
在进一步的应用中,本发明的组合物是用来对种子进行预处理的。在这方面,所述组合物最初与运载体基质混合,以双链RNA和运载体基质组合的形式应用于种子,例如,从而所述运载体底物具有RNA-稳定作用。由此,可以通过,例如,化学修饰(如将核糖己糖交换)增强RNA稳定性并因此增强对所选择的致病疫霉的目标基因的作用。封装的RNA分子的脂质体也可以用作RNA稳定剂。
理想地,用所述组合物处理的植物是马铃薯。
上面的关于本发明的植物和方法的讨论也适用于所述组合物。
现在将参考附图和序列来描述本发明:
图1:质粒pRNAi作为可以用于形成针对目标基因的发夹结构的载体的示例性代表。这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码拟南芥(Arabidopsis thaliana)中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图2:质粒pRNAi_PITG_03410作为含有用于形成针对目标基因(这里指的是PITG_03410)的dsRNA的正义-内含子-反义片段的载体的示例性代表。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图3:质粒pRNAi_HIGS_CoA作为含有正义-内含子-抗转录片段中的各种限定的序列的载体的示例性代表,所述片段导致针对各种目标基因的dsRNA的形成。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图4:质粒pGBTV/EcoRI_kan。双元的Ti质粒,可以用作克隆载体。
图5:质粒pGBTV/EcoRI_kan_PITG_03410。双元Ti质粒,可以用于农杆菌诱导的转化。
图6:质粒pAM。可以用作克隆载体。
图7:质粒pAM_HIGS_CoA。可用作克隆载体的质粒的实例。
图8:质粒p95P-Nos。双元Ti质粒,可用作克隆载体。
图9:质粒p95N_HIGS_CoA。双元Ti质粒,可以用于农杆菌诱导的转化。
图10:质粒p95N_HIGS_dPRNAi_PITG_03410,作为用于形成针对目标基因(这里指的是PITG_03410)的dsRNA的双元载体的示例性代表,所述形成使用各位于核酸分子3’和5’端的两个CaMV 35S启动子。
图11:转化后在再生阶段中,选择培养基上的转基因马铃薯芽。
图12:来以双元载体pGBTV/EcoRI_kan_PITG_03410转化后用于测试马铃薯(PR-H4)的转基因性的诊断PCR。检测正义片段(370bp)(引物S334 5’-ATCCCACTATCCTTCGCAAG-3’×S1259 5’-TTGATATCGCGGAAGGCGAGAGACATCG-3’)和反义片段(450bp)(S329 5’-CTAAGGGTTTCTTATATGCTCAAC-3’×S1259 5’-TTGATATCGCGGAAGGCGAGAGACATCG-3’)。混合:PCR-MasterMix、PCR监测。标记:TrackItTM1Kb DNA Ladder。
图13:以双元载体pGBTV/EcoRI_kan_PITG_03410(A)和双元载体p95N_HIGS_PITG_00375(B)转化后,检测转基因马铃薯中的siRNAs。通过用放射性标记的探针dsRNA_PITG03410(A)或放射性标记的探针dsRNA_PITG00375(B)的Northern印迹杂交实施检测。A:各种来自PR-H4_T007和T011品系的样品的多个应用。B:来自PR-H2_T040、T045、T047和T049品系的样品的单一应用。
图14A:质粒pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_00375作为含有融合构建体的载体的示例性代表,所述融合构建体由荧光素酶报告基因和测试HIGS目标片段PITG_00375组成。另外,这个载体含有双CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自萤火虫(Photinus pyralis)的luc基因的编码序列(其编码荧光素酶,由来自马铃薯基因St-LS1的修饰的内含子PIV2分隔开(Eckes et al.1986,Vancanneyt et al.1990))、另一个多克隆位点以及来自根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的Nopalin合酶基因的Nos终止子。
图14B:质粒pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_03410作为含有构建体的载体的示例性代表,所述融合构建体由荧光素酶报告基因和测试HIGS目标片段PITG_00375组成。
图15A:通过载体pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_03410进行基因枪转化后,基因型Baltica的转基因马铃薯品系中的相对荧光素酶活性,所述品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_03410的HIGS_RNAi构建体。B:Baltica(非转基因对照),T003、T005转基因HIGS马铃薯品系。
图15B:转基因HIGS品系上的来自致病疫霉的相对孢子囊产生。为了形成针对致病疫霉基因PITG_03410的dsRNA,以RNAi构建体转化Baltica品种的马铃薯品系。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Baltica品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有4个生物学重复)。B:Baltica(非转基因对照),T003、T005:转基因HIGS马铃薯品系。
图16A:通过载体pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_03410进行基因枪转化后,基因型Hermes的转基因马铃薯品系中的相对荧光素酶活性,所述品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_03410的HIGS_RNAi构建体。H:Hermes(非转基因对照),T004、T011:转基因HIGS马铃薯品系。
图16B:来自转基因HIGS品系上的来自致病疫霉的相对孢子囊产生。为了形成针对致病疫霉基因PITG_03410的dsRNA,以RNAi构建体转化Hermes品种的马铃薯品系。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Hermes品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有4个生物学重复)。H:Hermes(非转基因对照),T004、T011:转基因HIGS马铃薯品系。
图17A:通过载体pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_03410进行基因枪转化后,基因型Desirée的转基因马铃薯品系中的相对荧光素酶活性,所述品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_03410的HIGS_RNAi构建体。D:Desirée(非转基因对照),T098:转基因HIGS马铃薯品系。
图17B:来自转基因HIGS品系上的来自致病疫霉的相对孢子囊产生。为了形成针对致病疫霉基因PITG_03410的dsRNA,以RNAi构建体转化Desirée品种的马铃薯品系。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Desirée品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有4个生物学重复)。D:Desirée(非转基因对照),T098:转基因HIGS马铃薯品系。
图18A:通过载体pABM-70Sluci_dsRNA.PITG_00375进行基因枪转化后,基因型为Desirée的转基因马铃薯品系中的相对荧光素酶活性,所述品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_00375的HIGS_RNAi构建体。D:Desirée(非转基因对照),T042、T044、T047、T049:转基因HIGS马铃薯品系。
图18B:来自转基因HIGS品系上的来自致病疫霉的相对孢子囊产生。为了形成针对致病疫霉基因PITG_00375的dsRNA,以RNAi构建体转化Desirée品种的马铃薯品系。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Desirée品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有4个生物学重复)。D:Desirée(非转基因对照),T042、T044、T047、T049:转基因HIGS马铃薯品系。
图19A:在室外样条件下以致病疫霉感染植物后,,基因型为Hermes的转基因马铃薯品系中的感染水平,所述品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_03410的HIGS_RNAi构建体。有三角形的灰色线:Baltica、Desirée和Russet Burbank(非转基因对照);有方框的黑色线:Hermes基因型的植物;实线:Hermes(非转基因对照);虚线:PR-H-4-7,以及点线:PR-H-4-11,转基因HIGS马铃薯品系。
图19B:与非转基因对照Hermes相比,在室外样条件下以致病疫霉感染植物后,基因型为Hermes的转基因马铃薯品系PR-H-4-7和PR-H-4-11感染程度的图片文档,所述转基因马铃薯品系稳定整合针对来自致病疫霉的基因PITG_03410的HIGS_RNAi构建体。照片摄于感染后32天。
图20:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_03410的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照),H-4-T084、H-4-T096:转基因HIGS马铃薯品系。
图21:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Hermes品种的马铃薯品系以通过双启动子构建体HIGS_dPRNAi_PITG_03410形成针对致病疫霉基因PITG_03410的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Hermes品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Hermes(非转基因对照);H-23-T0003、H-23-T026、H-23-T038、H-23-T062、H-23-T063、H-23-T066:转基因HIGS马铃薯品系。
图22:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体HIGS_CoA转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_00146、PITG_08393、PITG_10447和PITG_00708的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照);H-13-T050、H-13-T053、H-13-T036、H-13-T032:转基因HIGS马铃薯品系。
图23:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_06748的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照),H-15-T008、H-15-T010:转基因HIGS马铃薯品系。
图24:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_09306的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照),H-10-T111:转基因HIGS马铃薯品系。
图25:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_09193的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照),H-12-T194、H-12-T195、H-12-T222、H-12-T239:转基因HIGS马铃薯品系。
图26:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Desirée品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_09193的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Desirée品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Desirée(非转基因对照),H-12-T187、H-12-T216、H-12-T237、H-12-T245:转基因HIGS马铃薯品系。
图27:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Russet Burbank品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_19177的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Russet Burbank品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Russet Burbank(非转基因对照),H-9-T271、H-9-T305、H-9-T308:转基因HIGS马铃薯品系。
图28:转基因HIGS品系上的致病疫霉的相对孢子囊产生。以RNAi构建体转化Desirée品种的马铃薯品系以形成针对致病疫霉基因PITG_19177的dsRNA。在分离叶分析中以致病疫霉感染后,与非转基因的Desirée品种相比,这些品系显示出孢子囊产生的降低(平均有3个生物学重复)。Desirée(非转基因对照),H-9-T280:转基因HIGS马铃薯品系。
图29:质粒p95N_RNAi PITG_06748,作为含有正义-内含子-反义片段以形成针对目标基因(这里指的是PITG_06748)的dsDNA的载体的示例性代表。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码一种拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图30:质粒p95N_RNAi_PITG_09306,作为含有正义-内含子-反义片段以形成针对目标基因(这里指的是PITG_09306)的dsDNA的载体的示例性代表。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码一种拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图31:质粒p95N_RNAi_PITG_09193,作为含有正义-内含子-反义片段以形成针对目标基因(这里指的是PITG_09193)的dsDNA的载体的示例性代表。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码一种拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
图32:质粒p95N_RNAi_PITG_19177,作为含有正义-内含子-反义片段以形成针对目标基因(这里指的是PITG_19177)的dsDNA的载体的示例性代表。此外,这个载体含有CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码一种拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。
实施例
构建体制备
使用PCR扩增所选择的目标基因的明确序列区域,并以正义和反义方向克隆到pRNAi载体里,所述载体适合发夹结构的系统(图2)。通过这种方式,可以将一些具有来自各种目标基因的序列区域的片段克隆到载体中,以形成组合发夹构建体(图3)。
始于致病疫霉基因组DNA,使用PCR扩增来自基因PITG_03410编码区域的290bp的序列区域,经由限制性内切酶位点XhoI和SmaI(通过引物序列插入)切割,并将其克隆至pRNAi载体中(引物1:cgctcgaggctggatctcgcgctgaggt,引物2:ttgatatcgcggaaggcgagagacatcg)。这个载体含有CaMV 35s启动子、多克隆位点、来自基因AtAAP6(编码拟南芥中的氨基酸透性酶)的内含子、另一个多克隆位点以及CaMV 35S终止子。其以XhoI和Ecl136II切割,4.098kb载体部分使用琼脂糖凝胶电泳分离,然后分离出来。在大肠杆菌(E.coli)菌株XL1-blue(Stratagene LaJolla,CA)中转换连接溶液。同一PITG_03410片段按照相反的方向被克隆到质粒pRNAi_PITG_03410_sense。为此,使用PCR从来自致病疫霉的基因组DNA再次扩增所述片段,经由限制性内切酶位点XhoI和SmaI(通过引物序列插入)切割,然后连接到以SmaI-SalI切割并线性化的载体pRNAi_PITG_03410_sense中(图1)。从载体pRNAi切下正义-内含子-反义(RNAi-PITG_03410)基因片段,然后克隆到载体pGBTV/EcoRI_kan中(图4)。为此,pGBTV/EcoRI_kan和pRNAi_PITG_03410都以HindIII切割,然后连接,由此生成质粒pGBTV/EcoRI_kan_PITG_03410(图5)。或者,HIGS-RNAi构建体如HIGS-CoA最初被克隆到载体pAM(DNA Cloning Service e.K.,Hamburg)(图6)。为此,pAM和pRNAi_PITG_03410都以HindIII切割,然后连接,由此生成质粒pAM_HIGS_CoA(图7)。,通过SfiI消化和连接,将HIGS_CoA片段从载体pAM整合到载体p95P-Nos中(DNA Cloning Service e.K.,Hamburg)(图8),由此生成质粒p95N_HIGS_CoA(图9),所述质粒用于马铃薯转化。
除如上所述的适用于合成发夹结构的载体外,可以通过添加两个相反(颠倒)方向的启动子在马铃薯植物中对目标基因编码区域的区段进行表达(图10)。此外,也可以设想通过使用Web microRNA Designer(WMD3)方案的人工微小RNA构建体(amiRNA)进行基因沉默。人工miRNA是21-mer的单链RNA,可以被合成用来特异性负调节植物内所需的基因。就像siRNA,通过mRNA切割进行调节。这些RNAi构建体然后被克隆到双元载体中,并通过马铃薯中的农杆菌诱导的转化而转化。
转化和再生
马铃薯的转化是按照修改的Pel et al(2009)的方案使用抗生素卡那霉素进行的。供体材料在80mLMS(D)(25℃;16h昼/8h夜;2000勒克斯)种植3-4周。为了转化(C1),将节间从供体材料切下,呈大约0.5厘米的外植体。这些外植体在含有10mL MS(D)的培养皿中培养(15-20外植体/皿)中在25℃黑暗中温育2天,所述MS(D)含有70微升在28℃培养过夜的根癌农杆菌,所述农杆菌更早地以HIGS-RNAi构建体作为双元载体(例如p95N)的部分转化。接下来,外植体在滤纸上干燥,并放置在培养皿中在有选择抗生素(400mg/L的特美丁+75mg/L的卡那霉素)的MSW-Medium上,其密封培养2周(25℃;16h昼/8h夜;2000勒克斯)(C2)。这个选择步骤是每2周重复一次直到芽再生(来自C3)。再生芽(图11)在有选择抗生素(250mg/L的特美丁+100mg/L的卡那霉素)的MS(30g/L蔗糖)上温育以引起生根,并通过PCR测试要转化的构建体的整合,从而测试本发明的核酸存在。使用引物Bo2299(5’-GTGGAGAGGCTATTCGGTA-3’)和Bo2300(5’-CCACCATGATATTCGGCAAG-3’)扩增来自细菌NPTII基因的553bp的DNA片段,所述基因编码新霉素磷酸转移酶。此外,使用PCR检测正义和反义片段,以确保构建体完整(图12)。在退火温度55℃,在Multicycler PTC-200(MJ Research,Watertown,USA)中,使用10ng的基因组DNA,引物浓度0.2μM进行PCR。PCR测试为阳性的芽的可在MS+30g/L蔗糖+400mg/L氨苄青霉素上增殖。
加工的双链RNA和siRNA的检测
在转化的植物中,所表达的发夹或双链RNA通过天然植物RNAi机制以某种程度加工,这样这些RNA分子会被降解成小的单链RNA。这些siRNA沉积在卵菌中的相应的目标基因的mRNA上,从而影响这个基因的沉默。因此,植物处于针对攻击性病原体自我保护的位置。借助这一概念,可以产生具有对致病疫霉的增加的抗性的转基因马铃薯植物。
以用于表达发夹或双链RNA的构建体转化马铃薯植物会导致双链RNA加工成siRNA,这优先于天然植物RNAi机制。为了测量dsRNA的片段,使用trizol方法从转基因植物分离总RNA(Chomczynski和Sacchi,1987)。15μg总RNA/样品补充甲酰胺、变性并在具有10%甲醛的1%的琼脂糖凝胶中用1×MOPS缓冲液(DEPC dH2O中的0.2M MOPS(钠盐)、0.05M NaOAc、0.01M EDTA。以氢氧化钠调节为pH7.0)进行电泳分离。在20×SSC缓冲液(盐水-柠檬酸钠缓冲液)中使用Northern印记方法,将分离的RNA从凝胶转移到尼龙膜(带正电)。所述RNA与放射性标记的探针杂交,所述探针与以正义或反义方向存在于转化到植物中的构建体中的的目标基因片段的序列互补。如此,与所述dsRNA片段互补的RNA片段被标记并通过磷光影像分析仪检测。
以用于表达发夹或双链RNA的构建体转化马铃薯植物会导致双链RNA加工成siRNA,这优先于天然植物RNAi机制。为了测量成为siRNA的dsRNA的片段,使用trizol方法从转基因植物分离总RNA(Chomczynski和Sacchi,1987)。15μg总RNA/样品补充甲酰胺、变性并在具有15%Tris/硼酸液/EDTA(TBE)和尿酸的聚丙烯酰胺凝胶中在0.5×TBE中进行电泳分离。在0.5×TBE中使用Tank印记方法,将分离的RNA从凝胶转移到尼龙膜(中性)。所述RNA与放射性标记的探针杂交,所述探针与以正义或反义方向存在于转化到植物中的构建体中的目标基因片段的序列互补。如此,与所述dsRNA片段互补的siRNA片段被标记并通过磷光影像分析仪检测。
在各种转基因马铃薯品系中,例如,PR-H4品系或PR-H2品系,可以被检测到这样的siRNA(图13A、B)。这表明植物中转化的构建体可以被植物RNAi机制识别和加工,这样可以形成针对来自致病疫霉的HIGS目标基因的siRNA,其可实现病原体中该基因的沉默。
分离叶分析中转基因马铃薯植物抗性的测量
为测试转基因马铃薯叶的抗性,转基因植物从试管苗开始在温室5L的盆中栽培。6-8周后,每株植物剪下2片羽片并放置在一个密封的塑料盒内在潮湿的Grodan垫上,这样叶茎在潮湿的Grodan材料中。这确保了高湿度。盒子于18℃温育,使用白天/黑夜程序(阳光,2月-9月)。羽片小叶被接种致病疫霉的游动孢子悬浮液滴(10μL;104游动孢子/mL)。24小时后,稍微打开盒盖,以允许盒子内空气平缓循环。游动孢子的目测打分及定量在6天后进行。目测打分评估羽片叶被致病疫霉感染和破坏的程度。对孢子囊进行计数来定量植物中病原体的繁殖能力。在这方面,以前的感染的羽片叶在Falcon管中的5毫升水中,于摇床上温育2h,从而使孢子囊从叶上脱离。在显微镜下,借助Thoma计数室对孢子囊进行计数。
在通过转化各种马铃薯基因型而生产的各种HIGS马铃薯品系中,在以致病疫霉感染后,可以测定到降低的孢子囊数量(6dpi)(图15B-18B)。这表明转基因植物上的病原体的繁殖能力受到了限制。
使用如图5所示的载体,在马铃薯品种Baltica,Hermes、Desirée以及Russet Burbank的遗传背景下,基因PITG_03410作为HIGS的目标基因被测试。应用于这些Russet Burbank品种的转基因植物的分离叶分析表明,与非转基因对照植物相比,转基因植物中的病原体的繁殖能力受到了限制(图20)。
作为适用于发夹结构的合成的载体的替代物,如图10所示的具有目标基因PITG_03410的载体被引入到Hermes品种的马铃薯上,对转基因马铃薯品系进行了分离叶分析的研究(图21)。在这里再次表明,与非转基因对照植物相比,转基因植物上的致病疫霉的繁殖能力受到了限制。
通过分离叶分析检测,还测试了以图3的针对基因PITG_00146、PITG_00708、PITG_10447和PITG_08363的组合载体转化的Russet Burbank马铃薯品种。观察发现与非转基因对照植物相比,转基因植物上的致病疫霉的繁殖能力受到了限制(图22)。
相似地,分离叶分析表明,当通过以图29、图30、图31或图32的载体转化时,Russet Burbank品种的转基因马铃薯上致病疫霉的繁殖能力会受到限制,所述载体针对基因PITG_06748(图23)、PITG_09306(图24)、PITG_09193(图25)或PITG_19177(图27)。
即使在以图31或图32中所示的针对基因PITG_09193(图25)或PITG_19177(图27)的载体转化的Desirée品种的转基因植物上,分离叶分析也表明,与非转基因对照植物相比,转基因植物中的致病疫霉的繁殖能力受到了限制。
马铃薯叶中的RNAi载体瞬时测试系统
开发根据Birch et al.(2010)的瞬时测试系统以研究针对所选择的致病疫霉目标基因序列的RNAi载体的功能。通过基因枪共转化,靶向目标基因的RNAi载体连同包含荧光素酶报告基因和测试目标片段的融合构建体在马铃薯叶中瞬时表达。如果dsRNA构建体在RNAi载体中加工,然后确保形成dsRNA,并作为结果形成siRNA。这些siRNA不仅使目标基因片段转录物降解,还导致融合报告基因转录物降解,这样用功能性RNAi构建体,可以观察到荧光素酶活性的减少。质粒pABM-70Sluci包含双CaMV 35S启动子、多克隆位点、来自萤火虫的luc基因的编码序列(编码荧光素酶,由来自马铃薯基因St-LS1的修饰的内含子PIV2分开(Eckes et al.1986,Vancanneyt et al.1990))、另一个多克隆位点以及来自根癌农杆菌Nopalin合酶基因的Nos终止子。将所述编码序列区域的PCR-扩增片段,例如PITG_03410基因的PCR-扩增片段,克隆到质粒pABM-70Sluci中,其也克隆到pRNAi载体来产生dsRNA构建体(图14A)。
这种瞬时测试系统不仅可以用于RNAi构建体一般功能的验证,也可用来研究基因不同序列区域的沉默效果,最后可以选择基因最好的序列区域进行最佳的沉默。此外,以RNAi构建体基因枪稳定转化的转基因植物可以用来确定单个转基因HIGS的马铃薯品系的沉默效率,所述品系可以,例如,基本上依据构建体的整合位点区分。在通过转化各种基因型的马铃薯获得的并且在致病疫霉感染后显示孢子囊数量减少的各种转基因HIGS马铃薯品系中,也可以测量出荧光素酶活性的减少(图15A-18A)。这表明加工成siRNA的HIGS构建体的功能,所述功能与转基因植物中目标基因序列沉默有关。
当编码基因序列要和载体pRNAi_HIGS_CoA一起在马铃薯叶中瞬时表达时,所述编码基因序列会由组合构建体如pRNAi_HIGS-CoA沉默,例如,目标基因:PITG_08393、PITG_00146、PITG_10447、PITG_00708,各克隆到载体pABM_70Sluci中,在来自萤火虫的luc基因的编码序列之后(pABM_70Sluci_PITG_08393、pABM_70Sluci_PITG_00146、pABM_70Sluci_PITG_10447、pABM_70Sluci_PITG_00708),组合可以对各种目标基因分析构建体的沉默效率。这也可能通过以RNAi组合构建体和单独的融合构建体基因枪稳定转化转基因植物,所述融合构建体包含荧光素酶报告基因和各种目标基因的测试编码序列。
荧光素酶活性测定借助DualReporter Assay(Promega,Mannheim)进行(Schmidt et al.2004)。
室外条件下转基因马铃薯植物中抗性的测量
为测试在室外条件下转基因马铃薯的抗性,转基因植物最初于年初(3月)从试管苗开始在温室中在多孔垫上栽培3周。接下来,这些植物被种植在温室天然土壤中,温室屋顶为铁丝网,这样植物可接触与田间条件相当的环境条件,例如温度、阳光、降水和湿度。植物被种植在3个地块中,每块6株植物。8周后,通过喷雾接种以致病疫霉接种来自一个地块的2株植物的每一株的一个羽片(750μL;104游动孢子/mL)。放置塑料袋包于这些叶上,以确保高湿度和促进感染。两天之后,塑料袋被移除。对温室中致病疫霉的枯萎病扩散进行目测打分并每周进行照片记录。感染打分的标准最初只对受感染的羽片叶(0:不感染,1:轻微的感染(感染的羽片1/2数量的叶被感染),2:羽片超过1/2的叶感染,3:感染所有的叶),然后感染扩散到植物和整个地块(4:感染也延伸到植物其他的叶子,6:感染也延伸到其他植物,8:感染很大程度也扩展到其他植物,10:10%的植物受感染/破坏,20:20%的植物受感染/破坏,100:100%的植物受感染/破坏)。
与作为转基因植物的精确对照而栽培、种植和感染的用于转化的基因型(Transformationsgenotyp)Hermes的马铃薯植物相比,在通过转化Hermes基因型马铃薯获得的各种转基因HIGS马铃薯品系(PR-H-4-7PR-H-4-11)中,测定到这些植物的感染程度在以致病疫霉的感染期间大大降低。感染的减少程度最初通过在接种的羽片上的病原体的感染能力大大下降来得以反映的(感染21天后打分:PR-H-4-7:3.3;PR-H-4-11:3.2;Hermes:7.6)以及在稍后时间这些植物上的病原体传播能力大幅减少(感染32天后打分:PR-H-4-7:26;PR-H-4-11:15;Hermes:80)(图19A、B)。
通过以上描述的测试,不仅可以证明在转基因马铃薯中将HIGS构建体加工成siRNA,而且可以通过降低的宿主植物上病原体孢子囊产生来定量涉及这些转基因植物目标基因序列沉默的构建体的功能,以及这些植物对致病疫霉增加的抗性。因为在不认真测试其功能,不可能鉴定功能性HIGS目标基因,这些在这里详细描述的分析特别适用于明确在HIGS构建体中以及对生成抗性HIGS植物有效的基因。
参考文献
Avrova AO,Boevink PC,Young V,Grenville-Briggs LJ,van West P,Birch PR,Whisson SC (2008)A novel Phytophthora infestans haustorium-specific membrane protein is required for infection of potato.Cell Microbiol.10(11):2271-84.
Birch RG,Shen B,Sawyer BJ,Huttner E,Tucker WQ,Betzner AS(2010)Evaluation and application of a luciferase fusion system for rapid in vivo analysis of RNAi targets and constructs in plants.Plant Biotechnol J.May 1;8(4):465-75.Epub 2010Jan 19
Blackman LM,Arikawa M,Yamada S,Suzaki T,Hardham AR(2011)Identification of a mastigoneme protein from Phytophthora nicotianae.Protist.162(1):100-14.
Benfey,P.N.,Ren,L.,and Chua,N.-H.(1990).Combinatorial and synergistic properties of CaMV 35S enhancer subdomains.EMBO J.(9),1685-1696.
Chomczynski P,Sacchi N.(1987)Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.Anal Biochem.162(1):156-9
Eckes P.,Rosahl S.,Schell J.,Willmitzer L.(1986)Isolation and characterization of a light-inducible,organ-specific gene from potato and analysis of its expression after tagging and transfer into tobacco and potato shoots.Molecular and General Genetics 205(1)14-22,DOI:10.1007/BF02428027
Fire A,Xu S,Montgomery MK,Kostas SA,Driver SE,Mello CC.(1998)Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.Nature Feb19;391(6669):806-11
Grenville-Briggs LJ,Avrova AO,Bruce CR,Williams A,Whisson SC,Birch PR,van West P (2005)Elevated amino acid biosynthesis in Phytophthora infestans during appressorium formation and potato infection.Fungal Genet Biol.42(3):244-56.
Inoue SB,Takewaki N,Takasuka T,Mio T,Adachi M,Fujii Y,Miyamoto C,Arisawa M,Furuichi Y,Watanabe T(1995)Characterization and gene cloning of 1,3-beta-D-glucan synthase from Saccharomyces cerevisiae.Eur J Biochem 231(3):845-54.
Judelson HS,Narayan RD,Ah-Fong AM,Kim KS(2009a)Gene expression changes during asexual sporulation by the late blight agent Phytophthora infestans occur in discrete temporal stages.Mol Genet Genomics.281(2):193-206.
Judelson HS,Tani S,Narayan RD(2009b)Metabolic adaptation of Phytophthora infestans during growth on leaves,tubers and artificial media.Mol Plant Pathol.10(6):843-55.
Kamoun S,van West P,Vleeshouwers VG,de Groot KE,Govers F.(1998).Resistance of nicotiana benthamiana to phytophthora infestans is mediated by the recognition of the elicitor protein INF1.Plant Cell.Sep;10(9):1413-26.
Lesage G,Sdicu AM,Ménard P,Shapiro J,Hussein S,Bussey H(2004)Analysis of beta-1,3-glucan assembly in Saccharomyces cerevisiae using a synthetic interaction network and altered sensitivity to caspofungin.Genetics.May;167(1):35-49
Li A,Wang Y,Tao K,Dong S,Huang Q,Dai T,Zheng X,Wang Y(2010)PsSAK1,a Stress-Activated MAP Kinase of Phytophthora sojae,Is Required for Zoospore Viability and Infection of Soybean.Mol Plant Microbe Interact.23(8):1022-31.
Mazur P,Morin N,Baginsky W,el-Sherbeini M,Clemas JA,Nielsen JB,Foor F(1995)Differential expression and function of two homologous subunits of yeast 1,3-beta-D-glucan synthase.Mol Cell Biol.15(10):5671-81.
Pel MA,Foster SJ,Park TH,Rietman H,van Arkel G,Jones JDG,Van Eck HJ,Jacobsen E,Visser RGF,Van der Vossen EAG(2009)Mapping and cloning of late blight resistance genes from Solanum venturii using an interspecific candidate gene approach.MPMI 22:601–615
Roemer T,Paravicini G,Payton MA,Bussey H(1994)Characterization of the yeast(1-->6)-beta-glucan biosynthetic components,Kre6p and Skn1p,and genetic interactions between the PKC1 pathway and extracellular matrix assembly.J Cell Biol.127(2):567-79.
Saito,K.,Yamazaki,M.,Kaneko,H.,Murakoshi,I.,Fukuda,Y.,and van Montagu,M.(1991).Tissue-specific and stress-enhancing expression of the TR promoter for mannopine synthase in transgenic medicinal plants.Planta 184,40-46.
Schmidt K.,Heberle B.,Kurrasch J.,Nehls R.,Stahl D.J.(2004)Suppression of phenylalanine ammonia lyase expression in sugar beet by the fungal pathogen Cercospora beticola is mediated at the core promoter of the gene.Plant Mol.Biol.,55:835-852.
Stahl D.J.,Kloos,D.U.,and Hehl,R.(2004).Asugar beet chlorophyll a/b binding protein void of G-box like elements confer strong and leaf specific reporter gene expression in transgenic sugar beet.BMC Biotechnology 4;31:12
Vancanneyt G.,Schmidt R.,O'Connor-Sanchez A.,Willmitzer L.,Rocha-Sosa M.(1990)Construction of an intron-containing marker gene:splicing of the intron in transgenic plants and its use in monitoring early events in Agrobacterium-mediated plant transformation.Mol Gen Genet.220(2):245-50
Van West P,Kamoun S,van't Klooster JW,Govers F(1999)Internuclear gene silencing in Phytophthora infestans.Mol Cell.Mar;3(3):339-48.
Wang Y,Dou D,Wang X,Li A,Sheng Y,Hua C,Cheng B,Chen X,Zheng X,Wang Y(2009)The PsCZF1 gene encoding a C2H2 zinc finger protein is required for growth,development and pathogenesis in Phytophthora sojae.Microb Pathog.47(2):78-86.
Wang Y,Li A,Wang X,Zhang X,Zhao W,Dou D,Zheng X,Wang Y(2010)GPR11,a putative seven-transmembrane G protein-coupled receptor,controls zoospore development and virulence of Phytophthora sojae.Eukaryot Cell 9(2):242-50.
Yin C,Jurgenson J E,Hulbert S H(2011)Development of a Host-Induced RNAi System in the Wheat Stripe Rust Fungus Puccinia striiformis f.sp.Tritici.MPMI 24(5):554–561.doi:10.1094/MPMI-10-10-0229.2011 The American Phytopathological Society
Zhang M,Wang Q,Xu K,Meng Y,Quan J,et al.(2011)Production of dsRNASequences in the Host Plant Is Not Sufficient to Initiate Gene Silencing in theColonizing Oomyzete Pathogen Phytophthora parasitica.PLoS ONE 6(11):e28114.
EP 1716238(Bayer S.A.S.)METHOD FOR MODIFYING GENE EXPRESSION OF A PHYTOPATHOGENIC FUNGUS
WO 2006/070227(Devgen N.V.)METHOD FOR DOWN-REGULATING GENE EXPRESSION IN FUNGI
WO 2009/112270(Leibniz-Institut für Pflanzengenetik and Kulturpflanzenforschung)METHOD FOR CREATING BROAD-SPECTRUM RESISTANCE TO FUNGI IN TRANSGENIC PLANTS
US 2010/0257634(Venganza Inc.)BIOASSAY FOR GENE SILENCING CONSTRUCTS
WO 2006/047495(Venganza Inc.)METHODS AND MATERIALS FOR CONFERRING RESISTANCE TO PESTS AND PATHOGENS OF PLANTS
序列表
<110> KWS种子欧洲股份公司
<120> 具有对疫霉的抗性的马铃薯转基因植物
<130> KWS 0199 PCT
<150> DE 10 2012 016 009.7
<151> 2012-08-08
<160> 43
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1042
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 1
cgtcaagatg ctgcggaggt ctgtgctgcc gttggcacgt cgtgccttcc cgcggtccgc 60
ggctagccta gcgccgtcct gtgctgctcc caagtacttt tcacgtgcct tcagcgttgc 120
ggagcagagt cagcggcatg tgatcgccgc gctggttgtc aaccagcctg gttgtctggc 180
cgagatcgcc aacctcttcg ccgctcgagg taactatcga tacgcaaaga cgctggccac 240
aggagatcct aaacatggtg tgatgcaggc tacaatattg acagtctggt tgtgggtcgc 300
acggaggtcg aggagctctc ccgtatgacg gttgtcgtca acggcactgc gcagagtgtt 360
gtcaacgtac gtatagtaat tacagagaca ggagcagtag gtgattgaca ctcaatgtgt 420
ctttgcagat gaagaagcag ctcgaggatg tcgtgtatgt tgctgtggtc aatatcctga 480
gcagtggcaa gaacgctgaa aagaactacg tcgagcgcga cctgatgctg gccaaggtgt 540
ccacggccgg tacgtcggac gctgatctga taccctacca ccaccggaat tcgtgaacat 600
ggacctgacg taaacatttg ctggtgtgtg tgctggctac agaggctgga tctcgcgctg 660
aggtggtgga gcttgccaac ctgttcgacg ccaaggtgat tgacgtgcga ccgcaccagg 720
ttatggtaca actggctggc acccctggtc gcattgaggc atttttggac ctgctaaagc 780
cgctgggtat cacagagatc caccgcagtg gggtcattgc gatggctcgc agcaccagtg 840
tgaccgacga cctgggcgat ctctcgacgt ttgagggcgc cacgcgaacg cttctggacg 900
aggccgatga cgaagagttc gatgtctctc gccttccgcc tggataatat gttggtagag 960
ttatgatcat gccatcacct ttttcttcga taggacttgt gcctgatgac aattgcagca 1020
aggaacgtgc tagcgaagat tg 1042
<210> 2
<211> 3072
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 2
atggtgctcc gagcggttcg gctgatcgtc caggcatctc tgctcctgca agtgctccag 60
tgtggcgcct ccgtaactgg tgctcaagta aatgaaaact ttgagaacac tgagcttacc 120
tcgaacgata aactgggaac agtggctccg gccgacatcc cgtcttcaca agacgagaat 180
ctcaagaaac aggaagagcg tggcttcttt gactggtttg gcaatggcga cgacacgcct 240
gccccggctg ctgacgacaa ctccggtaaa tatgcgacta cgacaccgat ccctggcacg 300
gctgcgcggc cgtctacgag tagtctgatg tcaaagtatg gtagtatgct cggtgacttt 360
actaaagaca cgacgccggc ctcggaagcc gatgagcgca caacgagcgc acgtagcgct 420
gccacccgtg ccacctcgga ctcctcttca ggtagtacct ctggcagcgc ggcagcagaa 480
gtcaagccga agagaaagaa gaccaagaag cctgtggttg ccgccgcgtc tgaaagcgga 540
gagagtgcaa gtgacgacga tgccagcgag gcgagcgctt cgggcagtga ggcaaagccc 600
aagaagagga caaccaagaa gacgaggaag ccggtcgtag ctgctgcgtc gacgtctgaa 660
tccgaggatg cctcgacgtc tgaatccgag gatgcttcgg gcagtgaggc aaagcctaag 720
aagaagacaa ccaagaagac tagaaggccg gtagcagctg ctgcatcgac gtctgaatcg 780
gaggatgctt cgggcagctc ggacgagtcg ggaagcgacg atctgtcgga tctgctcggc 840
agctcggcgg gttccggaag cgaagatgac atgtcggccc ttctcggtag cgcgggaggt 900
tccgggactg acgacgcctt atcagctctg ctggggtcgg gagtcggtgg ctcgggtagt 960
atgcttagtt tcgaagactt tatgaagaat tacggtagca tgttcggttc gggaagtagt 1020
gctgtcgacc tgttcggaga cccgagcacg ccccagaaca acacgattga cgacgaagat 1080
atcatcctcg gcgaactgta cggtggcaag gagcacggcg acgccttctc ggacatcagg 1140
aacatcaagt ttggtcagat gatcctgaac attacagttc gcggtcaaga gcgcgtggat 1200
tccattggta ttacagtgat gactcaagaa gctgttggta accttgtgca cggtggtgaa 1260
ggtggtaccg aaggattcat tgaaccggag atgggtgaca ctattgatac cgtcgaagta 1320
cactgggaca agaacaaggg caagacgtgc atcttctacc tcaagatggc gacttctggc 1380
ggtaagacga ttgcgacggg aacgaagacg gccaacagcg ccgtcatcaa gccgcccaag 1440
ggctaccagc ttgctggatt ccatggtcgt gccagtagtt ctggtatctt ttgtattggt 1500
ggaatcttca ccaagcaaga cgcgacggat ctcgcagtca cggacgtgat ggccatctcc 1560
agtaagggct ctcctgatat ctacaactac gacaccacca ttcgtaactg ggtgggacct 1620
ctagagacag cgagtgacaa cgcctgttac cagaagagag tcgacgtcag cagcaaggga 1680
atgtgtccgt cgggtttcaa caaggacgac gacaggtgca tcacccaatg tcctctcaac 1740
taccccattg actgcttgat ggagtgcatg cctcaaaaca gtgactgcac ccagttgatt 1800
gtcgctaagg tttccgccgt cgttgctgtc gctttaaatg ccgctacgat gggtatcttc 1860
ggtacgctgg tggctgccta cagaaccgct aactttgctc tcacctgcgc catcaacgtt 1920
gtgaacgctg tcaagtcgct gatttactac ctgcgttaca agcagacctt gatcccgact 1980
acggacacgg agaagttgat ggacaaggcg ttccagctgc agattgtcat tcttgacttg 2040
cctctggcta tctgttcttg cctgggcatc aagattcctc ctaagctcca gttctcggct 2100
accattctgg ctgtcgtgtc ggccattgtc atgatggctg tcatggtcgg tgaggccctc 2160
ttcgcgtcgt cgaacaacgt catgctcatg cttcgtgagt cgggcgcttt taacacttct 2220
gctctgaacg gagacaccat tgagcttgat acgttcctca acaccaagaa cggcacgtgt 2280
ggttacgaga tgagaactct cactaaccgc gtcatgggca aggtctacga aatccgtaac 2340
aacacgccga atgctgatgc cgatgatgta cgtgttgagg tgagcaagtc gtccatcatt 2400
acggatgaca tccccattgt gaccaaccac tgcatgggtg atatctggac caacaagacg 2460
ggcgcgtcgt cgtacaagac gcgcaacctg ctgcgtaaga ccctcagtgt aattgttgac 2520
cagctcgttg aggacggtac gaccgatatg ggtaagcatg tgaccaagaa ggagaaggct 2580
ctcgaatact cgaatatggg tcttttcgtg ctgtccatgt tcgatccgac gggtattgcc 2640
tggatggctt ccgagttcgt gcagcccatt tgtggaccca ctgagtacct gggtgagatc 2700
gatgatggta cgctgtacga cgctctgggt ctaaacacgg tcgaccaggc gttcctggga 2760
agctacggtg tgtggaagaa gaagggtgat ggctccgtca cggtttactt cgagagtgtt 2820
gacaagttcc ctgtgtctgt ggtgatcacg tccggtggtg acaagctcaa ggaggtcaag 2880
gtgcctgcta acggcaacgt cacgtggaca tctacggtgg aggagcttgg tgacaagact 2940
ctttaccttg accgctggcg tcctggtctc tttggcctgc ctggtacggg cggtggttcg 3000
ctactgatgt ggatcccgcg atcgtctgag ggtggccagc ttgttcttca tgctcgcttg 3060
aatgttagct aa 3072
<210> 3
<211> 2405
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<220>
<221> misc_feature
<222> (949)..(1048)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 3
atgtcatccg tagacttgag tatcctgcgc aacggcatcc cggccgagct gccggcgcac 60
ccgggcaacc accccgaccc gacgctgccc aaggctccgc accgcaacat cgacggtctg 120
tccaaggacg atctcgtgct ggccgtgcag aacgcgttac ggtacttccc cgagaggttc 180
cacgccactc tggctcccga gttcgcgcag gaactcaagg acgagggcca catctacatg 240
caccgcttcc gtcccgtgca gtacgagatg aaggcgtacc ccattgacca atacccggcc 300
aaatgcaaac aggcagctag tatcatgctt atgatcatga acaacctcga ccgtcgcgtt 360
gcacagttcc ccaaccacct ggtcacttac ggtggcaacg gtagtgtctt ccagaactgg 420
gcacagtact tggtggccat gcgctacctg tccgaactca cggaacagca gacgctcgtc 480
atgtactctg gtcaccctat gggtttgttc cctagtcgtc ctgcagctcc acgtatggta 540
gtgaccaacg gtctaatgat ccccaactac tccacacgcg ctcagtacga caaggcctac 600
gctatgggta acacccagta cggtcagatg actgctggca gctactgcta cattggtccg 660
cagggtattg tacacggtac gaccattact gtactgaaaa cctactgacg aggtctatgg 720
cggttcagat gagagcaatc taccttcctt ctagaaaaat gctaaacaat tccagtggat 780
gttgtatagg tcttgacaat caatattgcc ccctacgatt ttgtcaatat taacaatcag 840
tttatttctt ccaatccctg attttacagt gaggatttcg agagtgggaa cgtggaaaca 900
aaatcattgt caaatttgag cgagcctttc tcgccgatgc cagactggnn nnnnnnnnnn 960
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 1020
nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnngc gtcatctccg gtgtcatctc cgtcactgca 1080
gagatcgacg aatctgcagt gaagaagcgt cacgaacagg gctgggttga cgaggtcgtg 1140
agcgacctgg acgcctgtgt cgttcgtatc cgtgaggcaa aagccaaggg cgaggtggtg 1200
agcttggcgt accacggcaa cgtcgtcact ctttgggaac gtctcgccga cgaggctgaa 1260
gctacgggcg agctgctcgt ggagctcggc tcggaccaga cttccctaca caacccgttc 1320
aacggcggct actacccggt ccagttgtcg ttcgaggagt ctcagcgcgt catggctgaa 1380
gacccggagc gcttccagga actggtacag gagtctctgc gtcgtcacgc tgtcgctatc 1440
aaccgtctga cagccaaggg catgcggttc tgggactacg gtaactcgtt cctattggag 1500
gcacaacgtg ccggcgcgga cgtgttgcgt cccggtgtta agcccgagga ggctgctgtc 1560
tcgactactg cctttaagta ccctagttac gttcaggaca tcatgggcga cattttctcg 1620
cttggtttcg gtccgttccg ctgggtctgt acgtcgggtg accacgcgga cctgcagaag 1680
acagacgcca ttgctgcccg tgtgatgcgc gagctgctgg ccgaaccgga agtgccggac 1740
cgggtcgcgg ctcagctgcg tgacaacttg cgctggattg aggctgcaga ggagaacaaa 1800
ctggtcgtgg gatcggaggc gcgtatcctg tacgctgacc gtgtgggtcg cggcacgatc 1860
gccatggcgt tcaacgccgc tgtggctagc ggcgagctct cggcacccgt cgtgctcagc 1920
cgcgaccacc acgacgtcag cggcaccgac agtccgttcc gtgagacgtc gaatgtgacg 1980
gacggctcgg ctttctgtgc cgatatggcg gtgcagaacg cgctgggcga cgccgctcgc 2040
ggagctacgt ggatcgcact gcacaacggc ggcggtgtcg gctggggcga ggtcatgaac 2100
ggtggcttcg gaatggtact ggacggctcg gatgacgcgc gcgagaaggc ggcgtgcatg 2160
ctcggctggg acgtcaacaa cggcgtggca cgtcgtgcgt gggcgcgcaa cgccaacgcg 2220
cgcttcgcta ttgagcgcga gatgaaggcg gaccctttgg tacgtttgtt tggttacgag 2280
cttgagactt tggaagcgtt agattttaat gtgtgtgtat ctttgtggta ttgcagctga 2340
cggtgacgct ggctaacgag gccgacgacg cgagcgtgcg tgacgctgtg agcaagctct 2400
tctag 2405
<210> 4
<211> 1735
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 4
atgctctcgc agcttaaacg cagattcacc ctgggacgac gttgtcagac cgaagaagaa 60
gaccactcga ggatcaccat gagcctttcc aacagcaaca gtaccagctc cttgccccct 120
gtggacgagc accacggctg tgagtacctg gatacggcgc tgacgatctt tgtaatcggc 180
gcgtcgggcg atctggccaa gaagaagacg tatccgtcgc tctttgcgct ctacaccatg 240
ggctacctgc ctgaacacgc ggtcatcgtg ggctacgctc gcagcgccaa gaatgatgcc 300
gacttccgcg cgcaaattgc gccctggatc aagcctaaga cacccgaggc cgaggctcgc 360
aaggaggcct tcctcaacaa gtgcatctac cgcagcggca aatacgactc aactgaagat 420
gtgggcaagg taagcaagga gatggaggca ttggaagaag cccatggatc gcctgtggcc 480
aaccgcctct tctacttcgc catcccgccc acagtcttcg tgcccatcgg cacgagcatc 540
aagaaggcgg cactgaccac gcgtggttgg aaccgtctca tcgtcgagaa gccatttggc 600
cacgatctcg actcgttcga caagttgtct caggacatgg gcgcgctgta cagcgaagac 660
gagatctacc gtatcgatca ctacttgggc aaggaaatgg tgcagaactt gctcgtgttg 720
cgcttcggca atgcaatctt cgagcccatt tggaaccgca actacgtgtc cagtgtgacc 780
atcactttca aggaagacat cggcactcag ggccgcggtg gctacttcga ctcgttcggt 840
atcatccgtg acgtcatgca gaaccacctg cttcaggtgc tgtcacttgt ggccatggag 900
ccaccaatcc aagctgctgg tgacaactac tccaactata tccgtgatga gaaggtcaag 960
gtgcttaact gcattgagcc tatcaagatc gagaacaccg tcctgggcca gtatgaaggc 1020
agcaaggagc tcaacgagcc gggctacctc gaggacccga cggtgcccaa gggatcagtg 1080
acccccacct tcgccacagc tgttatgtat gtcaacaacc cgcgttggtc tggtgttccg 1140
ttcatcatga aggctggtaa ggccttgaac gaacgcaagg gtgagatccg tgtgcaattc 1200
cgcccgcctc ctggagcgca gcacttgttc ccaggtgtca agatcccagt acaagagttg 1260
gtgctgcgtc tacagccgga ggaagccgtc tacttgaaga tgaacgtcaa gagtcctggt 1320
ctgcagaccc aggcgatctc aagcgagctg gacttgtcgt acgccgagcg ttacgagggt 1380
gcagaggtgc cggacgccta cactcgcttg atcctggacg tgctgcgtgg taagcaggcc 1440
gcattcgtgc gtgatgacga gctccgtgct gcatggaaga tcttcacgcc attgctgaac 1500
gagattgaga cgcagaaggt gaagccgctg cagtatacgt tcggctcgcg tggccccaag 1560
gagagcgacg agctggtgaa cagagctggc ttccagtacc accagggcga ataccagtgg 1620
cagccgcgtg tgcgcactac cagtgcacta taggttgtct ctttggttga gcacaaagat 1680
gcccggaagt ctggcataaa tatgatggtt gagccagcta gtcttcaata aggga 1735
<210> 5
<211> 1245
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 5
gggagcttaa aagtgctaca ggaagtcgct atcatggcgt caagaagtct cgtccgccgc 60
tcggcgcgtc tcgccactgc catcgctact aagcgcagct tcgttcgcgc cgcttccgcg 120
tcggtgaacc tccagtgctt tcagacagca cccgccactc gccagacccg tcttcagagt 180
acgcagacaa gctccagcga tgagccgccc aaaacggagt ccccagtaga cccagagcag 240
ctcattctgg ccaaggctct ggaccatgtg atttcccacg ggtacgttat ggtttaagtg 300
ctataaaagc gaagatatcc taggttgtaa cgctctcgaa tgcaaggtgg gccattgagg 360
ctctagcagc tggcgccacg gatcttggct acccttcggt ggctcacggc atgttccagc 420
gcggagctat tgatttggtg gattatttta tggactcgtg tctcgccaag ctacgcgaga 480
cgctgattgt caacacggaa aagttgcagg ccatgacggt gactgaacgt ctcaagtttg 540
gcgtctgcac gcgtctgcag atgctggagc ctgtgttggc tacatggcca caggctatgg 600
ccattggcgc tctaccgcag aacgcacctg gtactgcaaa gagactggcc cagctctcgg 660
atgaaatctg gtacttcgct ggtgacaagt ccacggatct atcatggtac accaagcgcg 720
ctattctcac gggcatctac gctagcacgg agctgtttat gctgaatgac aagtcgccga 780
acttccagga cacgtgggat ttcttggacc gccgtgtgga cgaaacgatc caactcggag 840
aactgcctca gaacgtacgt gaagctgttt gagtctctta taaggcttag ctgttgacgt 900
gactaactac ttgtgtgctg gtctgtgtct gagcagctga acgatgtggc tgggatggcc 960
agtattgggc tgcagtcggt gttttcggct gtgacgtcgc ttgcgggtcc tctggccagt 1020
cagatcatct cgaactcgcc tttgagtcaa gttccgaacc cgatttcagc tgtgggcagt 1080
gtggttcctc cctcggttgt atcggctgtt gcctctggaa tgccatttag caatcctact 1140
tctgctggac atgacggtat ggcgttcaag tcgaaggatc tggacgaaat taaccaagag 1200
cttgagaagc tcggcggcct tgacgcgagt gaacgacgga actaa 1245
<210> 6
<211> 1461
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 6
ccacgtccag ctcaagccaa ttgccatgct gtccgctact cgccgcctta cgcgatctct 60
gcgtcgccct tctgcactgg gatgccgcct cgagtcctca ttcgctcccc tcactcagct 120
atccgaggag gaaaccatgt tcaaggacac agtcgcccgg ttcgcggctg acgtggtagc 180
tccgaatgtc cgcgccatgg acacagcggg ggagatggac catgctatca cacgaggact 240
attcgagaat ggactgctgt cggtagagat cccagcagac tacggaggta gcgaggcctc 300
gttcatgaac ctctgcttga ctattgagga gctgtccaaa gtggatcccg tcgtgggact 360
gctcgtggat ctacagaaca cagttgtgaa caacgtcttc ctggtgagtg aagagtacga 420
ttggtattct aaattctgta gctgaccatt gtgttgcagg tgcacggcac ggacgagcag 480
aaagaaaagt acctgccgag actcagcgcg gacatggtgc gtgcatcaat atttggaaat 540
attgtgataa tactaatatt gtacggtgtt gtagatcggc agtttctgtt tgtcagaggc 600
tggatcaggt agtgacgcgt tcgcgctgaa gacacgggcg gaggcctcgc cggacgggag 660
ctactactcc atcactggtc agaagatgtg gatctccaac gccgagtact ctggcgtgta 720
cttggtgttc gccaatgtgg acccgtccaa gggctacaag ggtatcacgt gctttatcgt 780
ggaccgagac atggaaggac tggagatcgg taagcccgaa gagaagctcg gcatccgcgc 840
atcgtcgaca tgtcccgtca cactgacgga tgtgaaggtc ccgaaggaga acattctggg 900
agagctgggc aagggataca agatcgcaat cagcacgttg aatgaaggac gcattggcat 960
tgcgtcgcag atgctgggac tggctcaggg agtctacgac cagacgttgc cgtacttgtt 1020
cgagcgccaa cagttcggct ctcccatcgg agagttccag gcgatgcagc accaatatgc 1080
ggaggcagcg ctcgatatcg agacggcgcg tttgttggtg tataacgcag cgcgtctcaa 1140
ggatgctggc caaccgttcg tcaaacaggc tgctatggcg aagcttcatg cctcgcgtgt 1200
ggcagagaag acggcatcca agtgcatcga gctgcttgga ggcattggct ttaccaagta 1260
cttgcttgcg gagaaattct atcgtgacgc aaagatcgga gctatctacg aaggaaccag 1320
taacatgcag ctgacgacga ttgcgaagct tgtgtcggag gaatacaaga ggtaattgaa 1380
tgtcgtgatc ctgtactcag acttgatcct tgtagcaaac caaacaagta acatttccgg 1440
agaacgagcg ttagaaccag a 1461
<210> 7
<211> 1580
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 7
atgctgcgtc gtcttgccct ccgtaccgtg aagccttctg tgcgcaactt cgcctccgcc 60
tcggagctgt acaagaaccc gcgcagctcc aagttcagca tgaccaagat cgtggccact 120
atcggccccg tgtcggagca gctggacatg ctacagaaga tcacggacga aggtttgcgt 180
atcatgcgca ttaacttctc acacgccgag tacgacgagg ccttgctgcg cgtcactaac 240
cttcgtgcct gtcgcggcgt gcacgccgag ggtcaggcca aattcaacct acgtgccgtg 300
ctacacgaca ccaaaggacc cgagatccgt acgggtaaga tgcgtgacgg caagaaaatc 360
acgttagaga gtggcaagtc ggtggtgctc acgaccgacc cggctttcga gcttgagggt 420
accgccgaca agttctacgt tacgtatcag cagttagccg aaaccgttaa ggtgggcgat 480
acagtgttac tatctgacgg ccttatccgt ctcacctgta cgtcagtggg taaggatgag 540
attacgtgcc acatccacaa taccgaggaa atcggtaacc gtaagggtgt aaacctcccg 600
ggtttgatcg tcgagttgcc tgctctatct gataaggaca aacgcgacct ggattggggt 660
gtcgagcacg atatcgactt tatcgcggcc tcgttcatcc gtaaggccag cgacgtgaac 720
tcgatccgtt cgttcgtggg agagtgcgtt aagaaacact ggggtaacca acctggttac 780
attgccccta agatcatctc taagatcgag aacctcgaag gtatccagaa ctttgaggag 840
atcctcgagg cctcggatgg catcatgtgt gcccgtggcg atttgggtgt cgaagtgccg 900
gcacagaagg tcctgacata ccagaagatg atggtggacc gctgtaacgc cgtcggaaag 960
ccggttattg tggcgacgca gatgctcgaa tccatgcaga acaacccgcg ccccacgcgt 1020
gccgaagtgt cggatgtcgg caatgccgtg ctggacggcg cggactgcgt catgctcagt 1080
ggcgagtcgg ctcagggcaa gtacccgatc gagtctgtgg ccacgatgaa cacggtgatc 1140
aaggaggccg accagctcct actcaagcct aactaccagg ccaagttcca gttcgagccg 1200
cccacgtcgg acgtcgagtc agccgtgtcg tcggcagtca agacggccaa cgagatgcac 1260
gcgcagctcc tgattgtgct cacccgtacc ggttacacgg cccgaaaggt cgccaagtac 1320
aaaccgactg tgccggtcat gtgcttcacc accgacctta aggtcggccg tcagctccag 1380
atccaccgcg gtctgtaccc ggtggtgccg gactaccttg accgtgcccc gactaccgcg 1440
gaggccatcg ctcacgccaa gaagatggga tggttgtctg ccggcgaccg tgtcgtcgtg 1500
atcagcggcg acaagctgtc ggacgatctc ggccgggaaa tcctcatcgg cgtcgctgac 1560
gtccagtaag acggagacaa 1580
<210> 8
<211> 900
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 8
atgtggtcga cgatgatcat gcggttccct acgcaggcca agtccgtgtc gcgcagcgcg 60
cttgtggcgg caggtatggc tgcgttcgct gccttctcca gtgtttcctc tactcgctgc 120
gaagaggaga agtccaaggt ggcgttgagc cccaaggagt tccgttcttt cactgtgcgt 180
aaagttgaga ccgtgaacta caacacgaag cgcgtgacgt tcgctcttcc cacacccgag 240
cacgagatgg gtctcacgac gcctagttgc cttatggctc gtgccaaggt agacggcaag 300
acagtggtgc gcccctacac gcctgtcaac gtgaacgacg agaagggttt cttggagctc 360
gtagtcaagg gttacccaca gggaaagctc agcaagcaca tcgtgcagct caaagaagga 420
gactctcttg acatgaaagg tccctttccc aagttcaatt actaccccaa caggtacaag 480
agcatcggca tgatcgctgg cggctccggt atcaccccca tgctgcagct catcaaggcc 540
atttgccgca acccggagga ccgcaccgag atcacgctgc tgtactgcag tgtctcggaa 600
gaagatatca tcctgcgtga agaagtggag gccatgatgt acctgtaccc gcagatctcc 660
gtgatccacg tgctcagcaa cccgtccgcc gagtggaagg gtcttacagg cttcgtgtcc 720
aaggagatga tcgaaaagta catgccggag ccgtcagacg acaacctcgt gtgtgtgtgc 780
ggtcctccgc caatgatgta ccacgtctcg ggtgacaagg cgaaggacag gtctcagggc 840
gaactgcaag gtctgctgaa agacatgaac tacacctcca ctcaagtgtt caagttttaa 900
<210> 9
<211> 1245
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 9
gtcgagcaca agaccaacac tcctgcacca tgactaccct caagatcgtc gtttccggcg 60
ccgccggcca aattgcgtac tcgttgctgc ctctcagtac gtccgtctcc ttccctcttg 120
tgtcttctcc ataccctaac gtctcaccat gttgcagtct gcatcggcca cgtcttcggc 180
cccaaccagc gcgtggagct gcgcctgctg gacatcgaac ccgcccagga agcgcttgag 240
ggcgtcaaga tggagctcca ggactgtgcc ttcaacctag tggacgctat catccccaca 300
gccgatctgg agactgcttt caaggacgcg gacgtcgcaa tcctcgtggg cggcttcccg 360
cgcaagcaag gcatgcagcg caaggatctg attgagaaga atgtagccat ttttaaggct 420
cagggagctg ctatcgacca gttcgccagt cgcgacgtta aggtgcttgt tgtggccaat 480
ccagccaata cgaactgcct cattgccatg gagaacgcac ccagcatccc gcggcgcaat 540
ttctcggcac tgacgcgtct ggaccatgag cgtttgcgct cgttcctagt ggagaaggtc 600
aacgagaccc aaagcccgaa agttacgtcg aaggacgtca acaaggtcgt gatctggggc 660
aatcactcga gcacgcaagt gcccgacgtc acgaacgcag aagtgaaggg ccagccgctt 720
gataagatcg tctcggacaa ggattgggct gagaagaagc tcgtcaagga cgtgcaggag 780
cgcggtgcag ccatcattaa ggctcgcaag ctctcgagcg ccatgtcggc tgccgccgct 840
atcggcgccc acctgcgcga ctggttcaat ggctccaagg acggcgagct cgtgtctatg 900
gccatttgct cggacggcaa caagtacggt gtgcccgagg ggctcattta ctcgttccca 960
gtcaagtgcg cgggcaacgg cgcgtacgag gtggtgaacg gtcttcccat ctcgccgcgt 1020
atcgacgcaa tgatgaaagc cactgcgcag gagctgacag aggagaaggc cgacgctgtg 1080
gagatcctgt cgcgccagtg agcagtattc agctaatagc tggacgatgg caacgtcgtc 1140
tacaccccat tcgatttttt tctcccatta tgagctgctt caatcgttta tttgaccatc 1200
taaaccaatt aatttcttgt tattacgatt tcttattgaa aaaaa 1245
<210> 10
<211> 1280
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 10
atgtcgtctt cattttgtca gctatccaag cgcgtgctgc agtatcttcg acatgagcat 60
ccacatcgtc tatttccctc catcggtcga agacgcaaac tcccaggcat aaacctcgac 120
ggaagatctc agcggtgatg gcgcgtggtt agccgcaagg tgttccgatg cacaccacac 180
actactcgcg aaaacgacca tacttctgtc ggccagggta acctctgggg agctgcacaa 240
cggccgtctt tttagcttat tttagcgagc caacaggttg tgcctcattg gccacgtgtt 300
cacgcacgta cgtcacgtgt gtgctcattt taatattaaa gatcccgttg aagacgaaaa 360
gcttctttgc tggcatcatg cgcttccaga cgttgttgct cgtccttgtc gcactagtca 420
tcgccccgtt tcaggccctg tctccaccca gcgagtccaa cgtgccgttc actcttcggt 480
acgtcccggg cttctttaaa caaggtaccc cgtccgtgga gattccacct tcaaattcaa 540
ggcatctcgg gctacttgac aacgtcacgt ggacggatgt agacgcctac attgctgcac 600
gagccgctca aggcgtggac gtcaagttgt tcctcttctt acgtcatgga gaaggcctcc 660
acaacgtcgc cgaagccact tacggcaccg aagcctggga cagattctac agcaaactag 720
cgaaatatac tgacgccaag ttgacgaaac ttgggatgca acaggctgtc aaagcgtcgg 780
aaaggatcga cgaggagctt aagagaggac tgagcctgga ggaagtcgtg gtttccccgt 840
tggagcgtac actacatacg gcaatgatcg cgtgccagaa tcaccacgag atcccgaagc 900
ggtcgatgga atggccccgc gagaccatcg gcgtctgcac gtgcgactta cgcggcacca 960
tctccgccaa ggccgagctg tacccaagta tcgacttcag tgatatctgg agtgatgcag 1020
acccgtggtg gacgcctgat catcgtgaga ccgagctgca catcaacgac cgcgctcgca 1080
tcttcctgaa ccgcgtcttc tacggtcaca agtcagtgcg tgttggtgtg gtgacgcaca 1140
gtggactaac caccgccgcg atgcgtgtca ttggccatcg taagtacagt gttgcgacgg 1200
cggaagtgat accgttcctg cttgaagaca ccacggtgca cacgatcctg tcgatcttct 1260
ctggtaaaga agacatgtag 1280
<210> 11
<211> 1016
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 11
atgtcgtcct atcgtgctgt ccaagttgta aagttgacta aggacttccg cgccgctacc 60
agaatcgtga gtgtccccga actacccacc gctgggcccg acagcatcgt tgttaagaac 120
cgcttcttgg gaattaactc gaccgacgtc aatcttacga atggcatgta tcatgacaag 180
ctgccgtttc tcgcgggcgt tgaaggtgca ggtctcgtca ctgaggtcgg gagtaacgtc 240
acgactgtga aagtgggcga cgctgtcatg taccagacgc tgggagccta tgcggactac 300
gtacaagtgc ccgtgtcggc cgccatcaag atcccagagc tgtcgaagaa cgctctaccg 360
gttgcagtgg gcggcgtctc tgcgtccatc tgccttgaat gtctcggtga gatgaagtcg 420
aatgagaccg ttcttgtgac tgctgctgct gggggaaccg gacagtttgt cgtacagctc 480
gccaaacttg ctggcaacca tgttatcggc actaccagct ctgacgagaa agtggaggct 540
ttgacgaaac tgggctgcga ccgtgtaata aattacaaca aggagaatgt cggcgatgtg 600
ctaaagaagg agtatccgaa tggagtagac atcgttttcg agtccattgg aggcgacatg 660
ttccgtgctg ctgtcgataa cattgcagtc cgtggtcgta tcatcaagat tggcttcatc 720
tcgcgagtat tggagaccaa agacaagacg actccccaag gccgcctccg ctgctatcgt 780
gggaagcgaa caagaagatt ctgatgaagt ctgcttccat ccgagggctc ttcatgtatc 840
actttgagga acacattcga gagcacacgg agcgattgct gaagctcatt agcgagggca 900
cgttgaagcc tggcgttgac cccactacgt acaagaaatt cgagtccatt ccgaatgcaa 960
tcgaccgcat gttcgcccgt gaaaatgtag gcaaactcat cgtagagctc gagtag 1016
<210> 12
<211> 267
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 12
atgggcaagc acacggagcg agccaaggag agtccattca agcagcagtc gatgatcctc 60
gtgcctatgg acacaccagg cgtgcaggtc gtgaagccca tgcatgtctt tggctacgac 120
gacgcaccgc acggacacat ggatatgctg ttcaaggacg tgcgtgtgcc gttcagcaac 180
gtgttgctcg gtgaaggtcg cggctttgag atcgctcagg atcgtcttgg acctggccgt 240
atccaccact gtatgcgagc catctga 267
<210> 13
<211> 1147
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 13
atgcgcaaaa tattgaatat tgattggtta aaacctggtc ttggcatcct tatgaccaat 60
tacagttatt gagtgcttta agcggggcag acgtccacta cgtcacactc agaatctcca 120
cacaagcaac agaccgacac aatgagcagg tgcgagtggc atcccagcaa cttcgtgcaa 180
atttagcctt gttatattaa ttgtataacg tggcatgttg cagaccgacg atctcagagg 240
ttatcgccga gcggaaggcc aacaacactg cggctttcat caccttcgtg ccctgcggct 300
tcaagactaa ggctgacaca gtggacattc ttctgggact gcagcgcggc ggcgcgaaca 360
tcatagaggt gggcattccg tactcggacc cacaggccga tggcccgacc atccagcgcg 420
cacaccaggt gggcgtggac cagggcatca cgctgcatga cgtcctggcc acagtgagcg 480
aggcgcgaac taagggcctt actacgcctg tggtgcttat gggctactac aacaacattt 540
tgcagtacgg cgaagtcaaa atctgccccg acgcccagaa aggtacgcct gtaatcgacc 600
acaggagaga tttgtgggct caaaaactga caataaacgt atttgtagct ggggtggacg 660
gattcattat tgtggacctg ccgcctgagg aggcaaagac gctcagtgac gacgcagcta 720
agcacggact tgcgtacatc ccgttggtgt ccccaacgac gacggaggag cgtatgaagc 780
tcatcgactc ggtggcacat ggttttgtgt attgcgtgag tctcaccggt gtcacgggcg 840
ctcgtaacga gctgcctccg aacctcgacg cgttcatggc caagagtaag ttgcttttcg 900
cgctttagtt tattttaatt gtcgagctaa cgtggtccct tgattcgctg cagttcgtgc 960
caacgtgaag caccctctcg ctcttggctt cggtctgtcg acccgccagc acttcgttca 1020
agccagcgcg cttgcggacg gcgttgtgat cggctcgaag attgtcaaga tcatcgagga 1080
cgcgcctgac acagccacgc gtgctgccaa tgtggaggca tttgccaaga gcatcgtgaa 1140
cccttag 1147
<210> 14
<211> 1917
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 14
atgggtaaca tcctggagga gatcgcagcg cagcgccgtc tggacgtggc ggccgccaag 60
caggtcatat ccgccgatga tctggccaag aagatcgagc acgcggaggt cgttttcggc 120
tcgaccctgc ccgtgcttga ccgccttaac gcacccacgg tgcgtccggc agtgcaggga 180
atctggagaa gaatctgcgt ctaacgcagc taccgctgta ctgtattttt tccttgtatt 240
tatggcagag agaggggtgg tccgacgtgg ctctggctgc cgagtttaag cgtgcgagcc 300
ccagcaaagg tgacatcgcc acggagctca atctgcgtga gcaagtgcag gcctacgcca 360
acgcaggtgc cagtatgatc tccgtactga cagagcccaa gtggtttaag ggatcgctag 420
acgacatgag ggcagcccgg gaggtggtcg agggcatgag tcagcgtcct gccatcctgc 480
gcaaggattt catcatcgac gtgtaccagt tgctggaggc ccgcgcttac ggagcggatt 540
gcgtgttgct catcgttgcg ctgctgtccc aggagcagct tatcgagctc attgacgtac 600
gtcgccccgc ttgcactaca tgtagtgggt ttactgtaca ctgacaagcc tcttgttggt 660
ttgtaggcca cccacaatct cggtatgtgc gctctggtcg aggtgaacag catccaggag 720
ctggacatcg ctctggctgc gagggctcga ctcattggcg tcaacaaccg cgatctccgc 780
acgtttaagg tagacatgaa cacgacggct cgcgttgcag acgctattcg tgagcgtggg 840
ctttcgctgg gacgtgacgg cgttacgctc tttgctctca gtggcattcg ctcgcacgca 900
gacgtggtca agtacgagaa gtgcggcgcc cggggcatct tggtgggcga gtacttgatg 960
aagagtggtg atattgccgc gacggtgaag gatctcttgc agaatgtgac gcgtcacacc 1020
gagtcgggcg aattcgcttt ggctcctccg cttgccaaag tgtgcggcgt cacgacagtg 1080
gagtacgcgc tggcggcctt gcgtaatggt gccaatatga ttggtatcat catggcggaa 1140
cactcacccc gctatgtcca agtggaggaa gccaaggcca ttgcccaggc tgtgtgggag 1200
tatggggagc gcacgggccc tattctctca gacattgtgg agactcactt ggacggcaag 1260
aacgactggt ttcatagaaa tgtccttgcg ttgcgtgaag cttgctcgcg tgcacctctc 1320
gtggtcggag tgtttgtcaa caagacagct gccgagatga acgcgactgc aaaggaaatc 1380
ggactggact tggtacagct acacggcgac gaggggtttc agatctgcag ggacattaag 1440
taccccacca ttcgcgcgtt gcatctgccc gacaccacgc tctgcgacgg cgtggacgca 1500
gaagccgttc tacagcaggt tcaggaaggc cttgccaact acattctgct tgatacgacc 1560
gtgaagggtc agcagggcgg cactggcgtc acattcgact ggaagattgc agccatcttt 1620
gcgcaggcac gacttccctg cctcatggct ggtggcctta cccctgagaa cgtggtgaag 1680
gctctatcgg tcggtcaccc cgttggggtg gatgttagca gtggagtgga agtgaaaggt 1740
tcacctggtg tgaaggatat ggacaaggtg actgcgttcc taaaggctgt gaaggattac 1800
ctctcgattg ctacgcttaa gatcgaggag gagacggaaa cctagagaga gaccctcgga 1860
gtgttctaat caatgagggc cactaatgaa gtgcttttac gttacgagct tggatgc 1917
<210> 15
<211> 1494
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 15
atggtgcact atcgtagtac tcgcggcggc gtccgcggcc ttagctttga gcaggcggtg 60
ctgacgggct tggcttccga ccgtggcctg ctgatacccg aagctgacga gttccctacg 120
cttccagctg atgcgctgga gaagtgggcg tctctttcgt accaggaatt ggccgtggag 180
gtcatgcgcc ttttcattga cgaaagcgag atctcgcgtg accagctgcg tgagcttgtg 240
accaagagtt acaacgcgac cacgttccgc tccgatgagg tggcgccggt ggtcaaggtg 300
acggatcaaa tgctggtgct tgagctcttc catggcccca cgtttgcctt taaggatatc 360
gctctccagt ttctaggcaa ccttttcgag tttttcttaa agcgcaagaa cgaggcgctg 420
ccttctgacg ctcctaaaca ccagatcaca gtcgtgggcg ccacctcagg cgacaccggt 480
agctcggcca tatacggtct ccgcggcaag gagaacgtcg aggtgttcat cctcttcccc 540
gagggtcgtg tgagcgccat tcagcagcga cagatgacta ctgtattgga ccagaacatc 600
cacaacgtgg ctgtgaaggg cacgttcgac gactgccagg ctatcgtcaa ggaccttttt 660
gccaacgctg acttcaaggc caagtacaac ctaggtgccg tcaactcgat taactttgcg 720
cgtatcttgg cgcagatcgt gtactacgtc tgggcctact tccgtgctca cgacgagggt 780
gttagcggcg aggttgcctt ctccgtccca acaggcaact tcggtgacat ccttgccggt 840
ttctacgcca agaagctcgg tgttcccatt ggcaagctga ttgtggctac caacgagaac 900
gatatcctgc accgcttttt ctccacagga aaataccacc gccgcgacat cgagcacacg 960
atttccccgt ccatggacat ttgcgtgtcg agtaactttg aacgttatct cttcgctctg 1020
tccggcgaga accacgacat tctacgcggc tggatgcagg ctttcgagca gactaatgag 1080
ctcacgatct cgggcgagct gctctccaag gcacaagacg agatggcatc gtatgcggtg 1140
cttcaggagc aggtgcgctc cactattgcg gagtacaaaa cgatgcatca gtacctcttc 1200
gacccgcaca gcgctattgg cgcagcagct gccatgcact ttgtccagga taaccttgca 1260
gacaagccaa actcggcggt agttgtagtc ggcactgccc actacggcaa gttcctcccc 1320
gtggtgtcga aggcactagg tgtcgctgag tcagagattg agcaacaccc gatcctcaag 1380
gcgctggaat cactgcccac ccggctttcc gttgccagca actcgagtga aactgtggct 1440
gagcatattc gcaagattat tgctgagaag aacgacgaag cctgtagtga ttga 1494
<210> 16
<211> 1299
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 16
atgagctcgt tccgtcttcg tattgccaac gcgcgccaga tcgttcaagt ttgtgcgaac 60
ggcgagccgt ttaagaccgg cgcggcccaa aaggatctgg ctgtgctcga gaatgcgtca 120
cttgtcgtgg acaaggcagg taagatcgcc ttcgttggtc ctgccgctga cgtagagaag 180
tggctgagca cgcagctgca gcccgtgagc tttgagaagg acgtggacgc tcgtgacatg 240
gtcgtactgc cgggttttgt ggatgcgcac acgcacccag tgtggagcgg caaccgtgtc 300
aacgagtttg ccatgaagct ggctggcgct acctacatgg aagttcacga gagcggcggc 360
ggcatcaaca acacggtgcg tcacaccaag aagagttcag aaactgagct gttggagctg 420
ctgcgtacgc gactagaccg catgttgcgt agcggtacga cgcttatcga agcgaagagc 480
ggatacggtc tcgagactga cactgagctc aagatgctgc gtgttttaca ctccgcatcg 540
acgggtgaca acgcacaccc tgtggagatc gtgtccaact acctgggtgg tcactcggtt 600
cctgacggca tgactgctgc tgaggccacg gaggatatca tcacgaagca gattcctgct 660
cttgtgcagg ccaagaagga cggcaccatc tcgcccgaat tcatcgacgt gttctgcgag 720
aagggtgtgt tcgagcacaa cgactctcac cgtattctag aggcaggcaa gaaggcggga 780
ttggacatta acttccacgg tgatgagatg tgtccgatgc agtccggtac cttggcggca 840
actctgggcg cccgtgcaat ctcgcactgt gagatgctga ctgctgagga tcttcaggct 900
atggcagcgc acaagccaga gcctgtattc gccgtgcttc tgcctactac caagtatatc 960
ctgaagctgc ccaatccgcc agcacgcgac atgatcgctg ccggtgttcc tgttgctctg 1020
ggcagtgact acaacccgaa cgctcattgc ctttccatgg cactgaccat gaacatggca 1080
tgtgtgctgt tcggtatgac catgaaggag gctcttgtag gcgccaccat caacgccgct 1140
gcctccatca accggtcggc tactcacggc agtctcgagg tcggcaagca gggcgacttg 1200
gtcctgatgc gtgctacgca gtgggagcag atcatctacg aaatgggcga ccctcctatt 1260
gaacacgtag tgaagaaggg agttgtctac acgaagtag 1299
<210> 17
<211> 1846
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 17
gcaacgaaca agtctcttcg ttccacttcc gtttcacctc gtcgtcatgg ccatcgccaa 60
ttcgaacacg aagtctgagc tcgttctgga cggcgagtct ctctgtgctg aagacctggt 120
gcagctgtcc aagggagaca cgagaatctc gctaagtcaa gaagcctgga agcgcgtggc 180
ttgtggccgt gaggtcgtgg acaatatcct caaggacaag actcgtgtgg cgtacggtat 240
taacacgggc ttcggactct tctccaacgt cattatcggc cccgagaagc tcacagagtt 300
gcaggaaaac ctcatccgct cgcactcgtc tggcacaggc gagccgttga cattcgctca 360
gacgcgtatg ctgctcgcgc tgcgtatcaa tgtattggct aagggacact cggggatccg 420
tgtgcacact ctggagcagc taatagacgc ctttaacgcc gactgtctgt ccgtggtgcc 480
agccagaggc actgtgggcg cctcgggcga cttggctccg ctagcacacc ttgcactcgg 540
tatgatgggt gaaggaccca tgtgggataa ggtggatggt cagttcgtca tcagcgaggc 600
ctccaaggtc ctggccaagc acggactgaa gcctgttcag ctcggagcaa aggaaggtct 660
ggctatgatc aacggcacac aactcatcac gtcggtgggt gctgaggcgg ttgtccgtgc 720
tcagaacgtc gctaactgcg ctgatatcgc cgtcgcattg acactcgagg tgctctgcgg 780
tactgtcaac gccttccacc cgcgtattca tgcagcccgt ccgcacactg gccagatgct 840
cgttgcctcg cgtattcgca cactactacg tgctgacaac ccgtccgagc tgttccgtag 900
ccacaactac gaaggaaagg tgcaggacgc ctacactcta cgttgtgcgc ctcaggtgca 960
cggcattgtg cacgacacga tcaacttcgt acgtggtgtg ctggacgtcg agatgaacag 1020
tgccacagac aaccccatgg tcttcacggg tagtgccgag gtcacgacgg atctgtctcc 1080
ttcaattgac acgaatcaag tcaagcccaa catcgaacag gtagaacacg agatcacgga 1140
tctgaatgac gccaaggagg agatcaagcg tcttaaggct cttgttgcac agaagcagaa 1200
gcctgtggaa cacccggcgg cgggtatgaa gcgcacatcg gacacgttct accgtggcgg 1260
cggtggcttt gtcatctctg gcggcaactt ccacggcgag tatccggcta aggtgctgga 1320
ctacctggca attggtatcc acgagattgc tagcgttagt gagcgtcgta ttgagcgtct 1380
agtgaaccca acgctcagca acctgccggc tttcctcgtg ccagagggcg gtctgaactc 1440
gggttttatg attgctcact gtacggcagc cgctctggtt tcggagaaca aggtgctcac 1500
acacccgtcg tcggtggact cgatctctac gagtggagcc aaggaggacc acgtgtcgat 1560
gggaggcttt gctgctcgta aggcgcttac ggttgtggag catgtcgaga ctgtagttgc 1620
tattgagatt ctggcagcgt gtcaagccct tgacttgctg cgtccgctgc gtacgacgga 1680
ggctcttgaa gctgtccacg gactggtacg cacccgcgtg gctaggtttg acaaggatcg 1740
cttcatgaag cccgacattg acgccgtgct ggacctcgtt cgtagtggag ctatctgcga 1800
cgttgtagct ccgttcttgt caaaactgca cgtgtcagga ctttaa 1846
<210> 18
<211> 1218
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 18
ccgcacagag caactgccac taggcatcat gctgcaccga cttggccgcc gctcgactgc 60
cacttccgcc cagcggtcac tgcgccgatc agccatgacg ccaccgcagc gccaatcctt 120
tcatttcagc tcgtcagcac gcaagccggc atctttggat gctcagaacc gcgtagctgg 180
tgctgcctcc tttttcctgg acgccaaggc cgtttgcaag ggcaagcgct gtgcattggg 240
caagaacaac agcggtattg gagctaaccc ggccacatgc ggggaggatt cgttcttcct 300
cacacctgac gtggtgggcg tggctgacgg cgtcggtggt tggaacgaga acggcgtgga 360
tccaggcaag atatcgcgct cgctaatgcg caacgcggca ttatttgtgc agcagcagac 420
ggccaatagc gagagtgcca ccacgcaaca ggttctggct cacggctaca agcaggcgct 480
gctggatgac gaggtggagg cgggtagcac gacagcctgt atcgtgagac tgaagcagtc 540
gtctgagggc aaacccgtgc ttgagtactc gaacctcgga gattctggct tcgtggtcat 600
ccgcaacggc gagataatct tccgcagtaa atttcaggtt cgaattgact gttgggagtg 660
acagtagaag agttactgac ggcgttgctt tagtattatg gacgtgctcc gtaccaactg 720
gcaaagatcc ctctgcggtt taagcagtat ggtgctattg agaatcaccc tgatgatgta 780
agtctgcttc gcatttggat actatttatg ctggagacag tacaatgcta acggttattg 840
ctccaggcgg actcgggtga gattgacgtg caagacggag acctcgttgt actagccact 900
gatggtgttt gggacaactt cgcccccgac ctccagaaag ctccttcgca gttcccggta 960
agattcttta ccgccgtgtt cgagctacct gtaattactg actttgtttc tcgttattgt 1020
ctgctatttc taccgtagcc gatgctctcc tggcgaagat attggtcagg tgaactcgca 1080
tcttttgtgg atgttattgc agagaacccc gacaaggctg ccgaaaatat cgtcctggcc 1140
tcgctccgcc acaaccttaa gcccgacgac atcactgtcg tcgtggcaaa ggtagtcgtg 1200
atggcatcaa agctgtag 1218
<210> 19
<211> 735
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 19
atgaagcagt tactgcagcc gatctcgttc tctggtgctg cgagtgtgtt cgtcgtggtg 60
gcaaagcaac gcaagaaacg ctgccgtgcc aatgacaagg aagatgacgc tgttaaggac 120
gacgaagaga ctgagacagc agaggacgaa ctggacgagg aagaccaacc cacgcgactg 180
tacgtggcca atgtgggcga ctgtcgagct gttttgtgca ctgcagacgc cttagcagtc 240
gacatgacga cggatcacaa ggcgtcgcta ccggctgaac aggagcgtat cgaggcgtca 300
ggtggcttcg tgcacaacgg ccgactggac ggcattctgc agatctcccg tggcttcggt 360
gacttggcgc acaaacagga tggccacttg gtggtcacgc cagatgtggt ggagcatctc 420
gtgaacccgt cggaccagtt cttgctgctt gcaagtgacg ggctcttcga cgtgttgacg 480
tcgcagcaag ctgtcaactt tgtgctgcgt aaacttcaga cccatggaga cgtccaactc 540
gcagctcagg agctggtgct caaggcgcaa gcttacttcg cacacgataa catcagtgtg 600
gtcattgtgg cgttgaacca gaaaggtgac gcgtgaaatg aacagcggct tctattgact 660
acggaagatc ggagaccgac gaagaagcag aaaacccgga gatcaagctc gagatccaag 720
aaattatgaa caaga 735
<210> 20
<211> 1845
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 20
atgcgacgca aggagaccaa ggtgttgttg acgctcgaag aggtgcgcga ggccttcgag 60
cagcagacgc cgctggccgt caaggacgcg ctgggtgtca ttcatgaggc gcagttcatc 120
atgaacctgg agccgaacct tgtggccgtg cggcaaagag cttcaacata tgtttttgga 180
gatatccatg gccagttcta cgacctgatg cagctgatgg acgccgttgg cgttgccgac 240
ttggccgagc gtgatgtcca gctggtgttt ctgggagact acgtggaccg cggggccttc 300
tcgtgcgaag tgatgctcta tctgctactg ctcaagatcc gattttccga caaagttgtt 360
ctcctccgtg gcaatcacga gtgcgaatcg atttcatcct tctacggatt tcgcaacgag 420
tgtaagggga agtacggcat ctcagcctac taccacttct tgtcctgttt ccaatcgatg 480
ccagtggctg cgctgctgtc cacgtcgcgt gggcaagttc tgtgtgtgca cggtggcctc 540
tcacccgagc tgaaaacaat cgaagacatt caaactatgg accgacggcg ggaaatccct 600
accacggggc tgttatgcga ccttttatgg tcggacccga agacttcgca cactcgcgat 660
gtggacgcag aggtggacac tcagccagga tgggagccca atcaggcccg tggatgctcc 720
tactacttca attcggcggc attgttcgag tttttaggca ccaacaagct gctgtcgatg 780
cttcgtgcac atgagttcga ggatgaaggc ttcacgtatc acttcaactc gcaggagtat 840
caagagctgg atactcgagt ggacaagtcc atgcctccac tcattaccgt tttttcggcg 900
ccgaactact gcgacagcta cggcaacacg gccgcctatt tgctcttccg gaatgaacct 960
ttctcgtggg aaatccagca aattaactcc gcgggacatc cagccccacc gattgcgagc 1020
gcagaacgag gatccgacat gtggcgacta ttcaatcaaa cgttgccatt cctcccagca 1080
agcaaggaat tctttgagga agttttgtgg ttagcagaag gacgacgacg tcttacaagt 1140
gaaatgcacc cacaagctat ccgaaagatg ttggatgacg aagtgaacaa atgggaattg 1200
gtagaagaaa cgccaacgcg cagctcgggg ccagcgtctc ctcctcgaat ccaccgcaga 1260
ccttctttga gtaatctgga cgagacccaa acggacgagc gtccaagtct gcttactccg 1320
caagagatgg acacaattaa gctgatgttt tcattaatgg acacggatgg cagcttggaa 1380
ctcagctcga ctaaagtgtc tcagttcatt ctcaatattc tgggtgaaaa aatcagcact 1440
gcggacgcgg aggcttattt ggatgctttg gactacgacc gcaacggagt ggtggatttc 1500
gcggatattc tgtcgtgggt tgccgtgatg aaggcgaatc gcaacaagca cgagtcgagc 1560
cgactcctga gttggccaac tgtacagagc ggtgtgcgca tgttgactcg tgggattttt 1620
tccagtaaag tcttgctatg gctcgcattc ggctgcttac tacgcgatat tatcgtccca 1680
aagcagcgaa aagtgatcaa gtcgtcgtcg atccgagtgc tgggctcagc gtcgctagtc 1740
ctgtacatgg tgggcgtatt gtcagggcga gagcgtggct ggctgcggct tttctctctg 1800
caacgcgctg tcggaattat gacgcagcga ttcgtatcaa agtag 1845
<210> 21
<211> 1489
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 21
atgatgccgc ggggcttacc accacgaggc ccacctggca gtttcccacc tactagtgtt 60
gcggctgtac cccctgcagg cggtgccgct gcagctcgtt tcggcaagct ctctgtgaag 120
gtgttgcgtg cgtttgacct aaaaaagctg ggaatgctgg acactgcaga cccgtatgtg 180
aagctcacga tcggcacgca gaacgtacag actaaggtcc aagcaggcgg tggcaagacg 240
cctgagttta atgagacctt cgacttcaat attgcaaccg agaaggagct cgtggtcgaa 300
gtttgggacc aagaaaaagg aggacaagac cggttcatgg cgcaggcgaa ggtggagatc 360
gtgtcgtggc tatcaaaggg tggctttgaa ggtgacgtcg agctacggga tcgcgagaac 420
agccctgccg ggaagctggc gatcgttgcc aagttcacga agcccgaaat tggcgcgaca 480
ggacccgtca aggctccacc catggcccct ccgatactct caggtcctgc agtggctccg 540
ttgcccccag gagcgaatgc cgtatctgtt cctggtgcgc tgccattggc accgtccgaa 600
ccgcctcgag acccgaacgg caagttcacc gacaaggaga ttctcgaggc atttaaagcc 660
tttgatctgg atcacaataa ctatgtgggt gctgcggaaa tccgccatgt gctaataaat 720
attggcgagg cgcctacaga cgaagaagta gatgaaatga tcaagatggt tgacaaggat 780
ggcgatggcc aggtgagctt tgccgagttt tacgcgatgg ttacgaaagg gaagcagccc 840
ccacccggat tgggtgtcac tacagctctt ccggagaaag ctgcagctcc tggaggtgca 900
gtttcgggcg ctcaggccat tcagcttcgt aatcagcgca aaatggcgct ggaagagttt 960
gcacgcgata acggtatcaa acccgagagt gtgaagaagg cgtacaagcg attccaagcc 1020
acagataaag atggatcggg ccagatcgac tactcggagt tctgcgaggt gctgcaggtg 1080
gatccatcgc cgcagtgcga gaaggtgttc cagttgttcg acaatgacaa gacgggtcgg 1140
atcgacgtcc gggagttcat gattgcgttg tctaatttca cgggtgctga gaaggaggag 1200
aaactaaagt tcgcgttcct cgtgtttgat gaagatggta acggtgtgat cacgcgacaa 1260
gaactgatga agatcctgaa ggcgaaccac atggcctcta gcgaatcgga agttgcgcgc 1320
aaggcggaca ctattatgtc ccaaggggat aaggacggcg acggagttat ctcgttcgac 1380
gagttctcag ttgtgagcaa gaagtttcct aatattttgt tcccagccta cacgctaggt 1440
acggccaaag attagaatac ccgatgaata caatatcctt atctctcgt 1489
<210> 22
<211> 2862
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 22
atggctagca agctcaacgc gttcctggcc gcggtgcctg cgaacgccaa cgtgcccagc 60
ccgcccaaga cagcgccggc cgtgatggcg ttcccgcagc ttgagttcaa ggaagcgccc 120
gagaacgtgg gcgcattcgc ccccaccacg ccgcagccgc ccgtggtgcg tcgtcgccag 180
cgcaaaaata accccagcct caagctggag ctggactcga accaggaaca tgacagacct 240
gaggatgatc gagatatgtc gcgtccttcc cctctaaaga gcttcatggc cgcccaagca 300
gccgccgtta agctgaaggc acagacggag aagcacgata tcccaacacc agacttggcg 360
cgcacaagca gcgggtccga gctggacgcc aagtcggagg cgggacccat gcgcatggcc 420
agcgtacaag gctcgcacca ccgtcgcgtg tccaccgaca caacgctatt taaccggtat 480
ctgcgtcaac aagcagacct ggatattagt cacgacacgg tgcagtattt cgcaaatgtc 540
ccggtcatta ccgccactgc agctgccgtt gatgctctgg aatgcgaaat gagtgtggat 600
aataacgccg acgaggagca cgcgatcatc gtacaggaac ccgaggagat ccttgctgtc 660
ttccgactcg gaggcaccat ccctgtgtcc agtgcgctgg aaattgtacg acgagctacg 720
aacctcatgg cactagagca gaacgtcatc tcgattcgtg cgccgtacac tctagtgggg 780
gatctccacg gccagttcca ggacttgctc gaactcttcc gagtacacgg ctctcctgcc 840
gtggacaacc cgttcttgtt cctaggtgac tatgtggacc gtggcgtgtc ttcgtgcgag 900
ataatcttat tgctcttggc cttcaaagtg gctttcccgg acagtgtcca tttattgcga 960
ggcaatcacg agtgtcggag tttgagtaca ttttacggtt tccgtgccga atgcctcaag 1020
aagtacggac ctgtgctcta taaccgtatg atcaagtgtt tcgagagtat gccactggct 1080
gcacgactcg agacagcgca cggcacgttc ctggctgtac atggcggact gtcgcccgat 1140
attcagttcg tgggggacat taacggacaa gtgaaccgct ttatggagcc tgaaccaaac 1200
ggagctctgt gcgacttgtt gtggtcagat cctgcgaagg gcgaagctca ggagcaggag 1260
tgggcaccca atgggatgcg tggctgctcg ttcacattta atgaacgcgc ctgtcgcgaa 1320
tttctgaagc gcaacaacct cctggccatt gtacgtgctc atgaactgga agaaaatggt 1380
tataaggagc actttcgaca cgaaggagac cgcacagaag aagacgagga cgggaaactg 1440
gctctacctg cggttgtgac ggtgttttca gctccggagt actgcaacac gaaccacaat 1500
gtcggcgcga cgctgaaaat tccctgggaa agacaaaatg gtcgtctgct gcagtatcag 1560
cagcataaac gcagtcaatg ttccgagttt gagttcacgc gagccagcga ggagacggcg 1620
gccaaggcgt ttctggagga gaatttgccg ttcttgccga ttgactttta cgacttggtg 1680
aatgtgtgtc ggcagctgcg gctcactctt gagagagcag cgagtatcac cccagcacct 1740
gcttcagaac ctattcgcaa gctgtcgctt gtgtcgtcgc tgtgtgcgcc agcaactagt 1800
ctggaaacga ggatcgagga ggaagaccca gagcttcccg tgtcgccacc tgcttctgca 1860
ccagcaaatg aagtggagaa ggaagctaca gcaactctga aggcagtggg cgagtcgttg 1920
caggattggg aacttgttga gacgaagagt gtcgaggttg acactaggaa ggtgaagaaa 1980
gacaagaaga aggagaaaaa ggagaaaaaa ctgaaggaga agatcgaaaa gaagaagcaa 2040
aaggacaaga agaagtggga tacgagtcga attgctagcg gttggaagct ctgccctggg 2100
tttgtacgct tctacgaccg ctacttctca agagacagta tgaagaagag cgagccggag 2160
atcacctcag ctcctggcca tctaggcaag cggccgtcgt ggatctcaaa ctacaaaaca 2220
ccttttagac gctcgacttc gaccggcgag gcccccaccg acactgaaac tgtcgacacc 2280
gtcttggact ctaccggtcc tgctcgacgg aagagtatga cggattggat gcccatgccg 2340
tcgttcgagc aggtggcgca gctgacgaac acgcttcagg gtcacattcc cgtgcagtcg 2400
aacggcgtca atgtattcac gaaggcacag tggcaagctc tgaagttgta cttctcgatc 2460
ctggatctgg atggcaatgg cgttttgatg gaagagagct tcgttgttct cctcgcagag 2520
caagacagcg gtgggttgag ttaaagtgaa gtgaggatgt gaatttgttg ctaatttaaa 2580
ttgttgttgg tgttgtgtgc agatgcatac gcgactgaag acgaactgag tctgttgatg 2640
gaagtcatgg actgcaacgc cgacaatatg atcactgagc aagatttctt gctattcgca 2700
taccgagcct tactgcgatg gaaaaaagct ctacatggct ccgactagag tgtgcaggag 2760
cggaatcgaa ctgacgtagc gaagtatgaa caatgccaga ttagaatcca cagtagcgcg 2820
gcatatgccc ataatgaaga acgagaaatc tattagttga aa 2862
<210> 23
<211> 984
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 23
atgtccgcgc cgaccttcca tcgatcattc cgcaatttgc agcttccaag tcaacagtcc 60
aagctccaaa ccgaaacaag agtgatgatc gcaatttcga cagctgagga tttccactct 120
gccgtggccg ctgcgactca gaagccgttg gttgcctgtt tctccgcgcc gtggtgcggc 180
ggttgcaagt tggtggcgcc caaggtggac aagctagccg aggagcttgc cgagaccgtc 240
tcgtttgcca gggtgagtgc tgaggagcac gagacgttat gcgaagaagt ggaagtggac 300
agcttcccgc acttccgcgt gtacagggac ggcaagattg tgggtgacta cacgagctcc 360
aagttcgaca aggtggagtc ctttatccgc ggccatgtgg ctcctaatac tgtgcaggag 420
accgaggaaa cacctgaagg cgaggttacg gaggaaacgg cggagaagga tgctgcgaaa 480
gaggaggaag tgtcagctga ggctgcgacg gaaggctcaa agaagcgcca ggagcgtgaa 540
gaggaggaga cgaatgacga gcaggtggct aagaaggcca agacggagga ggaggcgtcg 600
acggaggctg agaaggctgc aactacggag ccagctgaga aggttgagga agcggcaacg 660
gaggagaccg agacggctga aaaggattca tcagaagaga agatcgaagc tgctcccgtt 720
gagaagtctg aaacggccgg gaaagacact gctccagtcg atgctgctgc tgcttaaacg 780
acactgctct gctttgcatg atgtctaaat cgacggacat cttctgtggg ctagctgggg 840
gctgattgat ccagctgaaa tcaagatgaa acaataaaaa aagaagtatt ttatggcgat 900
tcttttgttt gtgcccgata tcctcgacat gttctgaata catgtacatg tgctctgcct 960
tcttgtcaga acaatgtgga atgc 984
<210> 24
<211> 501
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 24
caagcagtga agctaaggaa caacaagatc aaacaaacca tacacctatc tacgatgcct 60
gtcgagatca acacccccga agagttcaac gccgctatcg gcgagaagaa gctgacggtc 120
gtgcagttct ctgcgccgtg gtgcggcggc tgcaagatgg tggcccccaa ggtgaccaaa 180
ctgatggagt cggacttcgc tgacgtcaag ttcctcaagg tgagcgcgga ggagctagag 240
gatttctgcg aggagatcga cgtcgacagc ttcccaacgt tccgcgtgta caaggacggc 300
gaagtggcgg cgtcttacgt gagctccaag tttgagaagg tagagcagtt catccgtgag 360
aatgcgaagt aagcgtgacg gcgatttgcg accgtctatc aaagctcgcg catggtgatc 420
tacaggcttg atgacctacg ctaagatggt ggagagcgag tgagtttggt ccccggcatt 480
gcgtatcggc agtggactga a 501
<210> 25
<211> 734
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 25
gacaagcagt gaagctaagg aacaacaaga tcaaacaaac catacaccca tctaagatgc 60
ctgtcgagat caacaccccc gaagagttca acgccgctat cggcgagaag aagctgacgg 120
tcgtgcagtt ctctgcgccg tggtgcggcg gctgcaagat ggtggccccc aaggtgacca 180
aactgatgga gtcggacttc gctgacgtca agttcctcaa ggtgagcgcg gaggagctag 240
aggatttctg cgaggagatc gacgtcgaca gcttcccaac gttccgcgtg tacaaggacg 300
gcgaagtggc ggcgtcttac gtgagctcca agtttgagaa ggtagagcag ttcatccgtg 360
agaatgcgaa gtaagcgtga cggcgatttg cgaccgtcta tcaaagctcg cgcatggtga 420
tctacaagct tgatgaccta cgctaagatg gtggagagcg agtgagtttg gtccccggca 480
ttgcgtatcg gcagtggact gaaggatgct actaatatat tgaaatagga aaccatttta 540
acgaagaccc tgagcctcag gctcattctc aaccggaaat atagaccgca tgcggtccca 600
ggaggacaaa tagagtcttc taattggctt acggggtagg tggtcgcatg cgacgaagtt 660
cataaaaaga cgctcatgcg gcaatttgcc cgcatgcgct aaacttgccg cacagtagag 720
tgtaggggtc gagt 734
<210> 26
<211> 1448
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 26
ctcgagccca agcgacaatg gcggcggtga ctggcagtgt ggtaagcgtt cagagtgtgg 60
cgcagttcga cgaggcaacg gcgcgcgagt cgacgctatc cgtgagtttc ttctgggccg 120
aatttcacga ggcctgccgt cccaatggac agctggacgt ggtggtgcgc cagctcgcga 180
ctctgcaccc tcgcatccgc ttcctcaagg tggcggccga ggagattccg gagctctcgg 240
agcgttttca gatcgccgta gtgcccactt tcgtcgtcgc acagggtcgc gccgtgctgg 300
acaaactcga gggcgccaat gtggccgaac tggccaagcg cgtggatgtt ctgagcaaga 360
gcgtggccaa gagcagctcc acatccgcgt ccacagccga ggacgccccg aaaccgctgg 420
atgacgcgct cgaataccgt ctcaagaagc tcatcagcgc gtcacccgtc atgctcttca 480
tgaagggcaa tccgacggag cccaagtgcg gctttagtcg acagatggtg gcgctgttga 540
acgaagaaaa gatccaattc ggcacctttg acatcctcaa tgacgacgaa gtgcgtcaag 600
gactcaagca gttttccaac tggcccactt accctcagct ctatgtgaat ggctcgctca 660
ttggcggact ggacatcgtc aaggagatga agtccgaggg atccatcgtc gagcaactag 720
gactcacgaa gaacgtcgag gaggctgaag ctgccttcca agagagtctc cgtgcactcg 780
tcaactccgc tccagtgctg ctcttcatga aaggccatcc gtccgagccc aaatgcggct 840
ttagcaagaa gacagtcaag ctcctacgtg accaccagat tggcttcagt tcgttcgaca 900
tcttgagtga cgagcaggtg cgtcaaggtc ttaagaagtt ctccaactgg cctacgtacc 960
cgcagctgta cgtcaagggc aaactcgttg gtgggctgga tatcctgaac gagatggcgg 1020
aggacggcga cctcagtgaa cagcttggcg tggagaagaa ggccaagaag gagaacaaat 1080
acgaacagct aatcaaccgc gctcgcgtca tgatcttcat caagggaacg ccccagcagc 1140
cgcagtgtgg cttcagtcgc aagctcgtgg acatcctgga cgccgagggc ttcaagtacg 1200
actactttga catcctcacg gacgacagcg tgcgtcaggg actgaaggag cactcgaact 1260
ggcccacgtt cccgcagctt tacgtcaatg gcgagttgat cggcggactg gacatcgtgc 1320
agcagctgca ggaggacgga gaactcgccg agctcaagga gtagacgacc aggtcatcct 1380
tcgcgtaaaa cgaatacaga aaatcatttc tcttatcctg catgtgtatg ctgggtttga 1440
tggtttaa 1448
<210> 27
<211> 1106
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 27
gtcggaagag gtcgtcggtc gtccatgcag ctgcagacgt tggcgtacgc catctccggc 60
gccttcacgc tgctttccat tatcctttcg ggatggctca tctggacaca cttgctgtac 120
aatccgtcag ccggcatccg caagcacgtg atccgcatcc tcatgatggt ccccatttac 180
gcgctaacgt cctacatggc gctggtattc aacgagtcca aactgttgtt cgagactgtg 240
cgcgatctgt acgaagcctt cgcgctctat tcgtttcact gcttcctggt cgagtatctg 300
ggtggccaat ccgttctagc aagcaccatg cgctccaagc cgcagatgac acacgtcttc 360
cctttctgct gtgtacagcc gtggtccatg ggcggcaagt tcctgcgtca aaccaccatc 420
ggcatcttgc agtacattcc cattaagctg cttatgagca tcgtcatgct catcacgagc 480
ttggcaggtg tatacggaga aggagagctc atgaaccccc tagtgagcta cggctacgtg 540
tgctttatcc tcagtgcgtc gcagacgtgg gcactttact gtctgctgat attcttccac 600
ggagctcacg aggagttgca gcccatgcgg ccatggccca agttcctggc cattaaggca 660
attattttct ttacgtactg gcagtcgatc atgattagtg gacttgtaag tgtcggggtc 720
atctcggaga agtggcatat cggctgtccg gactgctggg acgctcagaa aatcgcctcc 780
gcactgaatg actttgtcat ctgcgtcgag atgctgggct ttgccattgc ccaccactac 840
gccttcgcga ttgaagactt tttgtcgccg tcaggtacgg caggtgttag tgtgccgtct 900
tcgaacgtca aggcaccact gctggccaat tttatggacg ctatcaacgt gacggacgtg 960
tcgacagacc tcaagaactc ccggaacgag attctcacca agaaacaggc gctggctgcc 1020
aagttcgagc gcatgaactc gacttcacct ggtggtggca tgttttaata gcgtcagtta 1080
aaagggagcg atacagtaag cacacg 1106
<210> 28
<211> 2007
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 28
atgagctcac aggacggcgc tggtcgcgca tctgaggaca agaatggaga cggcgtgtac 60
gtgacgaaga accgctcgct cttctccatg tggctgcacg gcaaggcgat tccaagccgt 120
tctggtccgg ccgtggtgtt ccgctcggcc gacgtgatac aggaagggta tttgctcaag 180
cagggcctgc gacttaaaat gtggtcccgc cgctacttta tactgcgact cgaggagcga 240
cacatgactc tagggtatta taccagcaag gactctctga ctttatgctc cgagacgccc 300
atcggaccag gacacttgtt gggacacgtc aacacgacca aatacccgcg tcgtctcgag 360
ttgcgctgcg gtacaaaggt catggtactc gaggcggagg accaaaagtc gtatgaagcc 420
tggaagaacg ccctccaaga agcgatacgc tggaaccacg ccatggtgcc ttcaaaagac 480
ggcagttttg tcacgtacgg gaagcaagcg accgaggata taaaacaaga ggaacgcagt 540
cgcgccgagg cggccaagaa gctgcgagag aagcagcgag cggacgaggc cgccgccgcc 600
gccaacgccg ccaataaacc caaatatctg cccgcgacac gccccgggac gcaatgcttt 660
atgacatcga atacaagatt tgagattccc tctcatttcg aatatgtcaa aaccatcggc 720
tcgggcgcct acggagtcgt catctccgct acgagctcgc aaacaggcac cacggtggca 780
attaagaaca tccagcgcgc gttcgacgac ctgacggacg ccaagcgcat tgtacgcgag 840
attaagctca tgcgccactt gaaccacaag tgcgtgcttg gggtggagga cattttcgag 900
cccgtggcgc tgtccaagtt cgaagacgtg tacattgtgt cccaattgat ggctacagat 960
ctccaccgcg tcatctactc gagacacgcg ctgtcggacg aacacatcgc cttcttcatg 1020
taccagatgc tgtgtgccat gaagtacgtg cactcggcca acgtgatcca ccgagacctg 1080
aagccgtcca acgtcctggt gaacgccaac tgcgagctca agatctgcga cttcggactg 1140
gcgagaggcg ttttccccga agaagagctg gaattgacag aatacgtagt cacaagatgg 1200
taccgagcgc cggagatcat gctggggtgt atgaagtaca ctcgggaggt ggacgtctgg 1260
tccatgggct gtatcttcgc cgagatgatg tcgcgcaagc ctcttttccc gggacaggac 1320
tacattgatc agctgcatct catcatgaac gcgctggggg ctccaaacga ccaggatctc 1380
tactttttga gcaacgcgcg tgctaggaag ttcatgaacg ccgagttcca gaagcgcgga 1440
cccaacccga cgaagcctct ggcgcacatg ttcgcagatt cgcctccaga cgctctggat 1500
ttactgcaga agatgctggt gattgacccg aataagcgga ttagtgtgga cgaggcgctg 1560
gcccatccgt acttggctgc gatccggaat gtggaggacg agacgaccgc cacttcgagc 1620
ttcgattttg actttgagaa cgagaaattg acgaaacccg tgctgcagag actgatctgg 1680
gacgagatga ggcatttcca ccctgaagtg ggcgacgaga cagcgacgga gggagatgac 1740
agcagtgtcg ctaccacgca ggcttctatc acacccgtga cacctgtgac ccccgctacg 1800
gtagagcaag acacaacaga gacgacaagt gacagctcgg acgcccctgt caaggtatcg 1860
acgccaacag cgtcagagga agccaagcca gaagacgaag acggggaaca acacagcacc 1920
aatagcgaca agatccatag gacagacaaa ctgacagacg cacagacgcg acaagaggcc 1980
ggcgaaccag ctcgggaagt cgcataa 2007
<210> 29
<211> 2053
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 29
gctcaagcca gagtccaaac gctcgttcaa cgcccattca acgctcgagc aacggctgat 60
accgacatga accgtaagct ggagctcatg gagctggaca gcggcggcgc cagccctaac 120
agcagcaaca gtggaagccc cagtccgact ctcgacctgc tgcatcgctc tgattcgagt 180
agcagtaacc aggggggtga gatgcctctt gtcggggttg cccacaaccc agacgtacgt 240
cgtctgcctt tctctatttg tagtgatagt attttcacgt agacgtttgt tacagctgag 300
ttatttgagg gcaactgcaa cacatggagg cagcagcacg accagcagca agtatggcag 360
ccccgaggag tcatttggtg aagaggacga ggacaacaac aagaagacgg cgcgtcgcaa 420
gaccgactcc aacagcaagc gtccgtggac acgcgaggag aatgacaagc tcatgcaact 480
cgtcaagcag tacggcgcca agcgctggtc tctcatcgcc atgcacctgc caggccgtgt 540
cggtaagcaa tgccgtgaga gatggcacaa ccacttgaat ccgtcggtcc gcaaggacgc 600
atggacggct gaagaggact atgtcatctt cgagtgccac aagaatgtgg gcaaccaatg 660
ggccgagatt tccaagatgt tgcctggcag gacggacaat gccatcaaaa accgctacta 720
ctcgaccatg cgtcgcatgc agaggcagtc aatccgcaaa aaaggtccca tgcgtgatgg 780
caagagcatc cgcgtggcgt cagtcacgtc gtctcccgtg caaaacaaca accaaatggg 840
tcctgctccc agccagcgat ctttgactgg catgcaacac cagttgccac cgcaacaaca 900
gcttccgcac cgaggggtga gtttccaatc cacatatcaa cggctcttct cggaggcctc 960
tggggacgcc gcacgcgtga gtcccgctgc ttcgaattaa ttggagagga tcgatactaa 1020
ctattatggt gttgatatat aatgcaggat ggcaactcga tagtggactt tgaacgttca 1080
aacatgatgt ccgcatcact acgacaaccc acgatggtct acccgctaaa cggaggtagc 1140
ttttcaaacg ggatgaaccc ggactatagt cgtcccatgt ccatgacgtc gtctccctgc 1200
tcggtgtccc ccgccgatga tctgaatcat aacagccaga acgagacctt tgactacgtt 1260
ccgatgcaat cttcgatcca gcgtgtacgg tcatctagtc cggttgtgat gggcactcct 1320
ccttcgacgt caataggcat gatgaactca ccttacggct cgcctgcaag tcacatccaa 1380
cagcaacagc ctggcaacta catgatggca ggaaacccat attctaacaa caacgtgcgt 1440
gggatgtact ttgggacgtc tgggcttgct cagcaatacc gtcctgatgc ccctgtaaac 1500
gtcccacaca agcgcctcct cgacgtccag ggttcacaac gtgatatgtg gaagaatgat 1560
agccctgtat cggtagcagc accgatattc cgcggtatgc cggcgacgca catgcagcaa 1620
ggtcaagtca gcgaaccgat ggcattgcag cagtccaagc cagcttccat gccactgtat 1680
aggcaagcgc cgaatatggg tcacttcaac agcatggagc aggtatggac ggatgatgca 1740
tatctgtgat tggaccgcca ttgtggcatg ctcctgatag actgcatgaa acaaatttaa 1800
agttattact taccaaagac agtggcttct cttactcttt acttggttaa cttttttcgc 1860
ttgatctaca gcggtttcac gttaggtagc tgtagctcct gatcgagttg cttattaaat 1920
agcaccactt gttgacaggg attgatatta aaatgaattt ttttcagact aatatattag 1980
ctgatattac atgtaccaaa atgtcaaact aatagctgac tattagtttg aaaaaggcgc 2040
caaaacaagc taa 2053
<210> 30
<211> 1173
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 30
atgcttggcg acgtagacag tttcggcggt ctgggtccca ttccgtccat gaacgcggtg 60
ttggagaagc gcacgtcaag tcagttttcc attagctcgc tgctgccccc gtccgtgagt 120
gtctcgagta ctggtgtgtt aaacacaact gttacacgga gcgagagcgc agtgacagat 180
agtgttgaag caactaccga taatgaaggc caaggatctg caccaagggt gtctaccaca 240
actgcagagg ggtctggtgg caacaccaag tacatggacc ccactacggg cgactacatg 300
tacccggaca acgtcaagcc catgagcttc tacgacaaac aacgtcttgt gcagaagatt 360
acgatgcttc ccagtcaata tctgcgtggc ctcatggacg tcatcagcaa gtaccagcca 420
gatactgtac gtcagatcga cgacgatggc tacgcgttcg atctgggtca gatgaacgag 480
aatactgtgt gggctatcag tgactacgta aaggactcga tgattgagct ggatggatac 540
attaaatcac tcaaccaaac tgctattgac cttgctgccg gtgaggatcg acatggagaa 600
actgttctga cggccgcaag tgcggctaca cccaccagca gtgcggttcg ccacttgacc 660
gacactctgg cgatgaacac gtccaagatg tctgtcatca ctaataacga gaatcagaat 720
aaattcctgg aacaggtgga gatgtattcc aaacccaaag tgaccaagtc gcgtgtaaag 780
cccagcaaga agcaccagtg tccgacgtgt aacaagcaat tccgcggacg ctccgagctg 840
cagaaccata tcagaactca cacaggcgag aagccactca aatgctcgta cgcgggatgc 900
acgaagcgat atgcacacag ctcgaatctg cgtgcacacg agcgaacaca cgccggaata 960
aagccgtata catgtcacta cgacggctgc gggaagagct tcgcccactc tgtatcactt 1020
aaggaacata tttggatgca tgcaggattc cagccctacg tgtgtccgta cgagggatgc 1080
cagaagaagt ttacgcaggt ctcaaatttt gcccgacaca agaagacgca cgagaaggaa 1140
gacaacgaac actcgattga gagcgataat tag 1173
<210> 31
<211> 754
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 31
atgattaagc tcgcggccgg tgtgtccaag aaatccgtcg tcgatgtgta tgtcactctc 60
agtgtgcccg acagccccgt acttagcacg gcacagaaga acgtggagct gaacgtcgag 120
aagttcttcg tggtcagcaa gactctgcct gaattgcctt ccaggtagaa gacgctgccc 180
gccccgacgc cttcgtcaag gcaacggatc ctcctacgtg aacgtcggtc tggaggatcg 240
tctcaactcc cgtccgcttg acctgcatac acctgccaac cagtgtatca agcgcatcca 300
ggccgctgtg ggccagctgt tccgtgcatt cctcatccag cgcgacttcg tggagaccca 360
cacacccaag ctggtcgctg gcgcctcggg gagcggagcc aactgcttca cactcaagta 420
cttcgattag gacgtcatct tggctcagag tccgcagaag tacaagcaga tggcgtgtgc 480
tgctgctggt ctcgagcgcg tgttcgagat cggcccggtc ttctgtgctg agaactcgag 540
cacgcaccgt cacatgtgcg agttcgtggg tctggatctg gagatgacta ttaaggagca 600
ctaccacgag gtcctggagg tgttctcgga cctgtacatc tacattttcg atggcttgaa 660
ggaacgttac gccaacgaat tggctactat caacaatcag tacccgttcg agccgctcaa 720
gtacattaag ccgtcgctta tcatcaactt ctag 754
<210> 32
<211> 659
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 32
gggctccatg tcatctgcga ctttggacgg agctctctat tgtagaattc aactgactct 60
agacaagtaa ccatgcagaa cgaggccggc cagtcgatcg acatctacat cccgcgcaag 120
tggtgcgtat tgcgctggtg actttaatac gctcagagct actggagcta actggtgctt 180
gctattgtct gtcatcgtta tatagctcgt ggaccaaccg catcctggcg gccaaggacc 240
acgcctcggt gcagatcaac gtcggccgcg tgaacgccaa cggcgtcttc acgggtgagt 300
cggacacctt cgctcttgct ggctacattc gccaccacgg tgagggcgac atggccatca 360
ccgagctggc tcgccaggcg gacgccaaga actaagcaga ccaagttgtc gtgatcgcgc 420
gctgctgctg cgaagtggag tgtgcgttca tctacgtcta gctggcagtt caggaggctg 480
gtgattacga tatgtatcaa cagatacgtc tgtgatcgct ggcaggaatt gcggtaccgt 540
cgcttatgga gtcggttgtt tgcgggttcg acctcgcctt ttgatttgat cgggtgtagg 600
cttagtattt aactctggcc aacggacgag caagaataaa gtagttcaaa cccgtcaga 659
<210> 33
<211> 1049
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 33
ctcgagcgca agacgatctc cgctatcgcc ccaccatgtt cgccagcttc gccactgccc 60
tcatcgcttc cactctccgg ccctcgagcg cagccgccac caactatgcc ggtggctggc 120
ttccgtcgga ccccaccaac cagtgtgtgg atatttgctc cgctccgtcc aagacgtgcc 180
tcacttcgga cgctgcctgc ctcgccaagt cgatggtccc gggcgacttc gactatatgg 240
tcctggagca gctcttcgtg ccgcagttct gccgtgacct gctaaagggt gtcgactcca 300
ctatttcgca ccaaaacatc gatatgtacc cgaacggcac agcctgcgtg gagagtgtgg 360
tcaagagtga gctcacgatt cacggtctgt ggcccaatta caacgatggc tacgtgagct 420
gctgcaatcc gagctcagcg gtggccaacg acccttataa cgccgctgac ttcgctgccg 480
cccaaagcag cctactcacc accatgggtg agaagtgggt ggacgctacg caagccacta 540
cgtacgaatc gctatgcgag atctacaacc acgagttcca gaagcacggt ctctgctatg 600
ccgctgacga cgctgattac atctcggctg ctgtcacgta cttcactgct acgctgagca 660
cggcggaccg catcagttca gccaccgagc agatcaacaa gtgggcagct cagtcgacgc 720
ctcagacgac tctggccgag attgaggctc tctacggcca cagtgtcatg gtgttgtgct 780
cggctgtgga tggcaacaac caactgtcgg ctatccgtac gtgctacgag aagccgacaa 840
acatcacgag cgagggagcg tccgcgcaga ttgactgcgc agccgcgacg gccacctcct 900
cgttctccgt atgctccggt gactcgccga tcactctgac tgcatacaca gcccccacct 960
cggcttcgat gcaataagct ccgacgatag agcgacggtg cagtctgcta gtataaagtt 1020
caatgcacca gttacttaaa aatgtacca 1049
<210> 34
<211> 1203
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 34
atgaccaagt ggggggttgt agtggcacta acactgctgt tagcgacgcc tagtttagtg 60
ctaggcgcct gccccaacaa gtgttccgga cacggcaaat gcggtctcaa tgacgtctgc 120
caatgcatgc agaactgggt cggcggtgat tgctcgggtc ggcaatgtgc gttcactcgc 180
gcgtggcaag atacagcaca gcgcgacgac gacgcacact accacgcaga atgtggcagc 240
cgcggaacgt gtgatcgagc tactggagaa tgcacatgtg acgcaggatt catcggcagc 300
ggctgtcgac gaatgcagtg tcccaatgac tgcagtggcc acggcacgtg tgagtttatt 360
gaggaattgg cgacggatac ggcccacaag cggattgggg gagtggcagg tcgtaaatac 420
acgctttggg accaagagaa gatcatgggc tgcgtatgtg acgccaacta cgaaggtcac 480
gattgctcga tgcgctcgtg tcctagaggc gacgatcctc tgaccccgaa tcaatacgac 540
atggtgcaag ctattattct tgataaggct ggcggtgagg ggtacttgac gtactatgat 600
ccgtacggca atgcgtatac tacggagaaa atcacgcttg gtggaacgct gagtgtcgct 660
tttcaaccaa cagacgatga taccacatgt gcaaacattc agaaggcgct ccgccgttta 720
ccgaacaacg tgctcaacac agtcactgtg gtagctgttg acaggtttta tgccttcaag 780
cgctctgacc caacggactc gttggggtat ggaacgttaa acaaaattgt aaatgacgac 840
gctgcagcgt acgcaggaac cggaactcaa attaaagcga tgtgcgaggt gatttttacg 900
tcggagccgg gcactacggg gtatcagaat ttgctggatt gcaatgttgc cgcgcatggc 960
gatactaagg gccagcaccc gcttactact ggtgtaacgt ctggcacttg cgtcgttaaa 1020
gaagtctatc cggtgacgct tggcacgagc aacatgcttg ccgaagatac tccagcgtat 1080
cgtccattga ccgagctcac cgagtgtgct ggtcgcggca cctgcgacta cgacacagga 1140
acatgcgagt gcttcgcggg ccacatgggc ttggcatgcc agaagcagga agcgctcgtc 1200
tag 1203
<210> 35
<211> 7947
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 35
atggcgcgcg ctccggcaca attggcgcag cttttactag cggcgctgct gctgtcagcg 60
atgtgtgagg cgttattgcc tatcacgaac gcgctgcagc gtgcccgcca aaacctcacg 120
gccttgcagc ggcaatggat cgatccggac acggacccca agttctacaa catatcagtc 180
cccaagggtg ccttcaactt cggtggcaac tcgagctaca acaacgagta caagctcatc 240
ttctcggacg agtttaatag ctccaagcgc acgttcgagt cgggtttcga ctccaaatgg 300
acggcagtca acctccgcga taccaccaac atggggcagc actacttttt gccccaggct 360
gtgcagatcg acaagggcaa cctcatcatc acgacctcca agcccaaaca gcgctaccgt 420
ggcactaagt acgtcagcgg tgctgtgcag acatggaaca agttctgtta caccggcggc 480
tacgtcgagg taagggccat tctgcccggc aagtggggta tccccggcac gtggcctgct 540
atctggatca tgggcaatat cggccgtgcg ccattcctcg gatcccagga cggtacgtgg 600
ccgtggagct tcgactattg cgccccctac gtggagaagg ccgagaaggt caagcagaag 660
atcaatgcct gtggcaatct gaccaacaaa cacgacaagg aatcgtatcc agagatgtac 720
ggcttgaacc cctttcaggg tcgtggagcc acggaaatcg atgtgattga agcgcagatt 780
cgtgctcgtg atgagcctgc attcatctcc acgtccctgc agatccgtcc cagtctgtac 840
gatgatatgc gcccggcttc agagtcgctc cctgctcctg gacaatggta ccagggtctc 900
aagtttggtg agttcacgaa aatcaatagc gactactacg gtgagatggg cctcgactcc 960
atttcggctc tgacacagct cgagtccaat gcgttcaagt cgttccactt gttccgcctg 1020
gactggtctc ctggtcccga aggttacatt cgatggtgga tggacaacag cttcgtgttc 1080
gaaatccctg gatccgcgct gaataagtgg gtaggtgctg tcccccctcg ccagatcccc 1140
gtggagccta gttatctcat tctgagtacg gctgtttcgg agaagttctc tccaccgtgc 1200
gatgggcaga tttgtaactc gctatggccc tccaacttta cgatcgacta cgtacgcgtc 1260
tatcaaggca acccgaaccg gtatacttcg gtgggatgca atccggaagc ctacccgacg 1320
aaagattgga tctacgccca cccagtggaa tacggtctcc cgtggtatgt ttcactacgt 1380
gtggacatcg gtctgctgca tcttttcgct gtggttaatg cgctgctggg tctcttcatg 1440
gcgttccgtg gcacgtccca accgaagatg ttgtcagcgt acgccagctc gttgtggctg 1500
actgcagcct tttatggagc tcttagttca agcgcccccg tagaccttgc ttggattcag 1560
actgcgcttg cgtgtctgtg cgggctggta cttggcggtc tttgttgctt ggtgtacccg 1620
gtttcgcttg gtgcaatgct tggactgtat ggcggggtga tagctagcca attcgtgcct 1680
ttgctgtcta cgcgcgtgat cactgcatta ctggttggtg tgggaatcgc gctaggatct 1740
gctccacaga tcgacacgaa gcacgttgtg attctgtcga cctctttgct tggtagtttg 1800
gcgtttctgc tctctgtatc gctgtgggtg agtgaaggcg atattgctga gaatgcgtgg 1860
aatctcgctg gcttcatttt caatggtaac aacgatgacc acgtgggttt ctgcacgaaa 1920
tattgcctgg cgatgtatat tctgcttgtc gtactcagtg cggtgagcac tacgtatgga 1980
tacctccgta tgcgtggcgt gacgctgcgc accaacccgc gtgaggccaa gttccccgcg 2040
gtgtcagcaa gttctgacgc gcgggcttgg agacctgatg atgatgcggg cgtggagaag 2100
actacggtga attttttctc gccatccaag ctgccgtaca acatgcagca gttcagtacc 2160
atcttccgta tcgctgtgaa cgtgcagcgc tcgtttggct tccaacttga caacttccgc 2220
aaccagacgg aacacgttgt ggtgcttctc accaacaact cgcgaaagag cggaaatcct 2280
taccgcaagc tgcacgattt ggtgttttcc aactacaaca actggtgctg caagcttaag 2340
atccagcctc tgaactgggg cgagcagcga ccaccgcagg gtggtctcac aatggtggac 2400
gagatgtcgg tggacttgtg tctgttcttc tttatctggg gtgaggccag caacctgcgt 2460
cactcgcctg agttcctgtg tttcctgttt cacaagatga aagaagagtt cccgtccgtc 2520
cgtcactcag agcgcgaggc tggatacttt ttggatacgg tggtgacacc tgtctacggc 2580
ttgctgaagg ctgagatgac ttcaaagtac gaccatgagg accgtcacaa ctacgacgac 2640
ttcaacgagt tcttctggac gaagagatgt ctgaagtatg actacaaaca cgaagaggtc 2700
attgatttgg cgtcacccaa tccggctatg atctacaaac agaagcagca gcaacgtcaa 2760
ggtctgactg gccttggagc ccaaaaggct cgaggtggac tcaacggtgg ctcgaacggc 2820
tccaacttgt tcaacaagcg tcaaagtatt gccgagggat tcaccgagtc tgccaagacg 2880
ttcgttgaga agcgtacgtg gctgctaccg ctgcgcgctt tcaaccgtat cttcaacttc 2940
cacgtcatcg cgttccactt cttggcaatg ctcgcgttcg cgaatgagca agagatggac 3000
ttccaggacg cctgcaagat tatctcgagc actttgatat ctcacttctt gctggacatt 3060
ttacgtgatg gactcgacat tttcgctgtt tacgacgagc accggaaagt attctcaatg 3120
gcgcgttccg tgatgcgtgt gtttctgcat ctggctcttg tggtggtcac gtcgatgtta 3180
tactggtatg cgtgggcgta cggtggtgcc tggtggcagt cgtactacgt gaccgcggtg 3240
ctattccacg tgccaggcct gattaactgc gtcatgcaag tgatgcctgg tcttaccaac 3300
tggacacggc gcacggcgtt tgctcctgtt gcatttatcc gtgacattgt gagtccgatg 3360
aaccgcttat acgtgggtga caacgtgctg gatccggagt cgatgagcgt aggctaccag 3420
ttcttctgga tgtcgctatt ggcttggaag ttatacttcg gctacgagtt tgagatctac 3480
ccgcttgtgg tgccgagctt tctgctgtat gctgaccacg tggagaacaa cgtgagcatg 3540
attacgacag tgttcctcat cttcctaaac tggatgccgt tcttcttggt gttctgcgtt 3600
gacattacga tttggaactc gatctggatg gcattcacgg gtacgttcgt tggcttttcg 3660
tcgcgcattg gtgagattcg caacttcacc cgcgttcgat ctgcgttcag tcgtgctgtg 3720
gatgcattta acgcaaaggt gattgcgcga agctccaaga cgggacttca actctcggac 3780
agcaatggca cgtcgtatgg atcgacatca gtaggtcacg aggtgcttga tcgtgttgcc 3840
ggtggtgcgg atccgacgtc ccgcctcctg ttgcagcgcc ggacatcagc ccatgacgac 3900
gagactccgt tactgtcttt ctcgcgtcgc aaacagacgc ctacggagcg ccaagctgct 3960
cgtcgccgca agtggttctc gttctctgtg gcctgggaca ctatcatcga tagcatgcgc 4020
gcggatgatt tgatctcaaa caaggagaaa tctctgcttc atttccaccg tcttgacggc 4080
taccagcgcg aaatttacct gccgcagttc caacttgctg gttgcttcga gaactttacg 4140
tcgcacattc ttgatattta ctcgtcgaac aacggcaagg tctcggagcg tgtgctgcaa 4200
gacaaactac tggaaattct cagtgataac ccaatggtgg aggagtcact tgaagagata 4260
tgggagcttg cgaactgggt gctggttaat gtgcttggtc cctgtcacgc gaatgatgtg 4320
aagtacatca catgtgtgct caactcgtgg gccgctcgtg gtgtgttccg tgcgctgaac 4380
ttgcaaaagg tggctccatg tggccgcgct ttggcgggtt tgatctcgct cttgaaggcc 4440
aacgtccgag gatggaagag caacgccaag gttatccctg ttcgcaaaga cccatccgac 4500
tacgcttcgt acgagtttcc gcaacagtct agctcctacc gtccttcgtc ggggcttact 4560
aagtctgcaa gtacgacagg tctgtcgtcg ttgggtctcg aaccacctcg tcgtagtcgt 4620
ggctctggtg ttgcgcgtat tgcacgtatg cagcagcaga cgcacaaacc agctgtcaac 4680
aatggcaagc ttactcattc tatctccagc tctcacatca tgcagattcg cgagcgcgtg 4740
cgtacgttcc tgaatcttgg aaaggagatt ctggcccacg tccacgagca agaccccgtg 4800
ttcgctgaaa gcaagggaat ttcggatcgg ttgacgtgga ttcttacaca ggagcgtggt 4860
tttatgtggg acgataatta tacgggtgaa caaatcactc tcacagcgtt tgagagccac 4920
accgatgtgg tgttatcgca tctgcacgga cttttgacct tgcagaagat tgatgcggag 4980
ccccagtcgt acgatgctcg tcgccgcttg ctgttcttcg tgaattcgct gttcatggac 5040
atgccgcttg ctccgctgct cgaggaaatg aagtcgtgga gcgtcatcac tccgttctat 5100
gccgaagacg ttctgtactc cagaaaggat ttggaaagca aacaggacgg tctggacgtg 5160
cacacgctgt tgttcttgca gacgctgtac aagcgagact gggagaactt cttggagcgt 5220
gtgaagccta agaagaacat ctggaaagac ccggagactg cgatcgagtt gcgtatgtgg 5280
gcttctctgc gtggccagac actgtcacgt acggtgcagg gtatgatgta cggtgaagct 5340
gccattcgtt tgctggctga gatcgaacaa gttccccaac agaaacttga ggagttgatc 5400
aacacaaagt tcacgtacgt ggtggcctgc caaatttatg gacgtcagaa gaagaacaac 5460
gacccgaagg cgagtgacat tgagtttttg ctgcaccgat tccctaactt gcgcgtggca 5520
tacatcgatg aggtccgtgt gaactaccaa aaggaacagt catacttctc ggtgctcatc 5580
aagggcggcg aggaactcgg ctcagttcac gagatctacc gcgtgcgtct gcctggcaat 5640
cctatcttgg gcgagggcaa acctgagaac cagaacgcag ccattgtttt cactcgcggt 5700
gaaaatctgc aggctatcga tatgaaccag gatggatatc ttgaagagaa cttgaagatg 5760
cgaaacctac tcgaagagtt tgacaagggt acggcagacc ggccgtacac gatcgtgggt 5820
atcccggagc acatattcac gggtagtgtg agctcgctgg caaactacat ggcgctgcag 5880
gagacgtcgt ttgtgacgct aagtcaacgt acgttggcgc gtccgctgcg tagccgtctg 5940
cactacggtc atcccgatgt gttcaacaaa cttttcttca taacgcgtgg cggtattagc 6000
aaggccagta agggtatcaa cctcagtgaa gatatctttg ctggctacaa caattgtatg 6060
cgtggcggtt ccgtgacttt cccggagtac accaagtgcg gcaagggacg tgatgtggga 6120
atgcagcaga tctacaagtt cgaggcaaag ttagcgcagg gtgcagctga gcaatcgcta 6180
tcgcgtgacg tgtaccgtat tagccagcgt ctcgactttt tcaagttgtt gtcgttctac 6240
tacaaccatg tgggcttcta cctggcgatg tcaatcatca tctggactgt gtactttctg 6300
ctgtactgca acttattgcg tgcactgctg tcggttgagg gtgttggcgg tcgtgaaccg 6360
gtattgctaa gtaagctgca gttgatgctt ggatcggtgg cattcttcac tactgcgcca 6420
ctgctggcga cgatttcagt cgagcgtggc tttaaggcgg cgttgaacga gatcattgtc 6480
ctgttcgtga ctggaggccc gctgtacttc cttttccaca ttggcacgaa atggttctac 6540
ttcggacaga cgattcttgc tggtggcgcc aagtatcgtg cgaccggccg tggattcgtg 6600
acaaagcact cttcttttga tgagctttat cgtttctacg ctagcagcca cctctatgct 6660
gcagtggaga ttgccattgg gctttccgtt tactacaagt tcacggtcgg caatcagtac 6720
ttcgcgctga catggtcgct atggcttgtg ttcgtgtcat ggtactggtc gccgttctgg 6780
ttcaacccac tggcgttcga atggtctgac gttatggagg acttccgtct atggttcaaa 6840
tggatgcgtg gtgacggtgg taaccctgat caatcgtggg aggcgtggtt caaagaggag 6900
aacgcgtact tttcgacgct tcgaccgtgg tccaaggcgt gcattacgat caagggcgtg 6960
ctgttcgcgt tgatcgccgt ctctatctct tcgacgagtg acaaatatca ctcgatcttg 7020
acggaaacca cgtggcttcc gctgcttatc tgcttatcga tggccgcggt gtatcttagt 7080
gcagaggctg tcttcttcac ctcgtcgcgt tcgggcgaga ccgggcttgt tcgcttcctg 7140
aagctccttc tggtgattgt gctgggcgct ggtctgattc tcgctttcat ctacgcggac 7200
ggtatgtggc agatgctgct gagtatggga tatctcgctg cagctatggg ctgttgggcg 7260
cttgtgatcc ttggtagcaa ctcgcgcttt gttggaacgc tttacttcgt tcatgacgcc 7320
gtgctgggtt tggtttcgct gagtctcatt ctgttgctct cggcgctcta cgttccgggc 7380
aagatccaga catggctact gtacaataat gctttgagtc gtggcgtggt gattgaagat 7440
attctgcgag ccaactcgag caatgatgaa cgcgatgatg atctgtcagt gcagcagatg 7500
cgctccatca tccttgagca gcagcgtttc atcaacgctc tgactgctag cggcagcgag 7560
actgacatcc gcggtgctgg tcctgggaag aaagaagatc taatgcacgc tatgagcgac 7620
aacacgctga acgcggtact gaggaatatg tcggagtcgg aactcagtgc gctgcaggac 7680
tcgtcgattc gtctgcaggc catcatgtcg gaggaggagc gcaaggccgc acaacgcaag 7740
cagcaacaag aagagcagag actcaccgag gcaggaatga actcgtcgtt gtcgcgcacg 7800
cgtcgtgcct tctccacgag cgatttctcc gccatcccgc tgaatgctag cccctacagt 7860
cttgctccta ctcaggatgg ttccgctgca cccgtcaacc gccccactaa cggttctgct 7920
gctcacggag cttatcctga tgtgtag 7947
<210> 36
<211> 6744
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 36
atggccacga cgcccggcgg caagatggac cggcgccgcg ccggctccaa ctacttccag 60
ctcgatgcgg accgcaagcg caacacgtcc aacaaccgca gcaactacgg cgacggccgt 120
ggcaccttcg gagaccgctt gagcttgatg gaggtgcttc ctcccaacac acagggcggc 180
aaccagatgc gcggcggtgg cttacagggc gactttgcgg acgaagtgtc gatcgatttt 240
tgctgcgagg tactgtacaa caagttcggc ttccagtcag gcagtgtgga caaccagcgc 300
gagcacgtgc tgctgctatt ggccaattcc aaggcgcgtg ccaagcccca ggaccctccg 360
ggacaccacg tcgtcacgct gcacaaaaag ctcatgagca actacacgga atggtgccag 420
ttcatcggcg ttcccagcat ctcgtactcg ggacagccac agggagacct caagaaccct 480
ctgcacatgg acattatgct cttcctgttg ctatggggag aggctggtaa cttgaggcat 540
atgcctgagt gcctctgcta cttgtaccac cagtcgctaa acttgctgaa ccaggacttc 600
ctcggtcagc agaaagtacc tgaaggttgg tacttaaggc aggtggtgcg ccccatctgg 660
aaggaggcgt ctaacatgca gaggaagaac agcttgggca agaacttgga gcacacccaa 720
gtgcgcaact acgacgatat caacgagtat ttctggaaaa aatactgtct taacgtggat 780
gtcacgcaga tcggcgagga gctgaccaag aagcacacca agacatacta cgagcaccgc 840
agtatcttca cgctcgtact gaactactac cgtatttttc agttcaacat gatgttcatg 900
atggtcctga tggcgatcgg ctttatctcg gccatctcgc ctagcggagg acagcagtgg 960
ttcgctcagt tcgggtctat gggagaagtg gttgagcctt accagaaaca ggacgttaag 1020
ctgacctacg tggggattgt gttcgccctc tcctcgatgg gattctgcaa gaccgtcctc 1080
gaagcgtgtc acggatggca cttactcact gccagtgagt cgtcacagac gtcgtctcgt 1140
tcgttcaact acggtggtgc ccttgtggtt cgaatgctct ggaatggcgc gttcgctggc 1200
attttcggct tgatgatcta caccccgttg atcacgagca agaacacaga actgctcgat 1260
aaggctgcac cggcgtctgt tgcctacatc ctgcctggcg cacttattat cgtcgtgcag 1320
gcctttgctc catcggttgt aaccaaatcg tttgcggcca agtttatccg tgagggagaa 1380
acgtgctacg ttggccgcaa catggcgcct ccactgagct accagctcaa gtacatcact 1440
ttctggatca ttctgtgggc gctgaaggcg ttcgtctcat acttcattct agttcgccca 1500
ttggttctcc cgtcgctggc catttacgag atggagctcg agtacggtag caatgttgtt 1560
tcgttccaca acttcggagt catcgctgcg ctgtggctgc ctgtgatctt catcttcaac 1620
tacgataccc agatttactt taccgtgttc caggctacac ttggtggcgt tcagggtctc 1680
atcatgaaga ctggcgagat tcacggcatc aaggagatta ccaaggcttt ccgtgtggct 1740
ccacaactct ttgaccagaa ggttgtgacc aatctggctc gctcgaacga cgctgcggct 1800
gacggatctg ctgctgcata ccagtcgcaa atgatgctgc gcttcgtggt cgtctggaac 1860
gagattgtca actcgttccg cgaaggtgac ctggtggacg acaaggaggc tgccatcctg 1920
cagtatgaca tccagagctc gggcgacgtg ttcgaacctg tgttcctttc ggcgggtaaa 1980
ctgatggaag ctctggacta cacggttaag attgccaagg aaggtaaggg cgactcgcag 2040
cttcaagtgt acatggtgca gaaggattgt ctatcggctg tgcgcagctt cttcacagcc 2100
agcatgtacg tgatggaggc tctgctgggc agtgacgatg cagacattct tgatgcgctg 2160
cgtcaaatgg aggcgattgc tgcgaacagc agtttcatga gcacgtttga cgccaagagt 2220
ctagtgcagc tgcgcacagt ctcgatggag ttcctggaag ctgtgatgga tctgcccgac 2280
ccggatgcgc agtcctcgca catgacatcg tctcgagtgc acaccatggg agttgtgcgt 2340
aacttcgtga ccaagatgga aaacctgctc aacgctattc gcattttcgc caaccgcccg 2400
gagctcgctg ccaagttcag caactctaag ttctgctcga gcgccaacgg ctacgtgttt 2460
gctgctcgtg gcctcgtgaa cctgttccac aacgacactg cgatgggtgc tgctacccgt 2520
gcgtacctct tgatgtcgct cgagaaggcc gatgctatgc cccgtgtgcc tgaggctcaa 2580
cgtcgtcttg gttttttcat gaagtctctt ttgatggaca tcccgcagtt gacgtctgtg 2640
aaggagatgc actcgttctc cgtcgtgacg ccgttctaca gtgaaagtgt gttgatctca 2700
ttgtcggagc tgaacgatcc gctggccaac cacccggtct tccagaaggt ggaggagaag 2760
ggcaagaaca ttactattct gaagtatctg attaccatcc accccgagga gtgggagaac 2820
tttttggaac gtattgatgt gagcactgca gaggaagcac aagccaacta cccgctggaa 2880
atccgtctgt gggcgtcgta ccgtggtcaa accctggcac gtactgttca aggtatgatg 2940
ctgtacgagg atgctatcaa gattcttcac tggcttgaga ttggttcaag tcccggcaag 3000
tcggcggagc agaagcaggc tcaacttgag gacatggtgc gtctgaagtt ctcgtacatt 3060
tgtgcgtgtc aggtgtacgg taagcatcgc gcagagggca aggcccaggc cgatgatatc 3120
gactatctgc tcaagacgta cccgaacctg cgtgttgcct acgtcgacac catcgtgatg 3180
gacggtggca agcagttcga cacggtgttg atcaagagtg aaggcaatga aattgccgaa 3240
gtttaccgct acgagctgcc tggagacccg attcttggtg aaggtaagcc cgagaaccag 3300
aacaacgcgc ttccattcac gcgtggcgaa tacctccaga cgattgatat gaaccagcag 3360
cactacttcg aggagtgtct gaagatgccg cagcttctgg tgactgctga cctgcaccct 3420
tccaagaaac ctgtgtccat tattggtatg cgtgagcaca ttttcacggg taacgcttca 3480
tcgctgtcaa agtttaagtc gtggcaggag ctggtgttcg tgacgctgtc tcagcgtgtg 3540
ctggccgacc cgctgtatgt tcgtatgcac tacggtcacc ccgatatttt cgacaagatc 3600
attgctatgc ctcgtggtgg agtgtccaag gcttccaagg gcattaactt gtctgaggat 3660
gtgttcgctg gttttaactc gacgcttcgt ggtggtgtgg tgacgcacgt ggagttcatg 3720
cagtgtggta agggtcgtga tgtggctctg tcgcagattt ccatgttcga gggtaagctg 3780
gctaacggtg ctggcgagac gtctctcgct cgtgaggctc atcgtatggg ccagttcatg 3840
gacttcttcc gtctgaactc catgtactac tcgcacacgg gtttctactt cgccacgtgg 3900
atgacaattg tcacgacctt cgtgtacatg tactgcaagg tgtacttggc tctagcgggt 3960
gtgcagcagc agattgtgta cgatatgaac acgaccgctg tgatcaccga gaacatcgca 4020
aacaacttcg acgggcgtgt gttcaccgat ctgaaggctg tgctgaacac gcagttctac 4080
atccaagccg gtactttcct catgcttccg ctcatgtgtg tgtacttcgg tgaaggaggc 4140
ttcgtgcgcg gtatgactcg attcatcgac atgatcatca cgctgggccc tgccttcttc 4200
gtgttccagg tcggtacgac gatgcactac ttcgacaaca acatcgtgca cggtggcgcc 4260
aagtatcagg ctacaggtcg tggcttcaag atttcccgtg agacgctggt gctgctgtac 4320
aaggcgtatg caagctccca ctatcgaaag gcctgggagc tcatcgggtt gtgtcttgtg 4380
tacatggcgt tcggtaattt ttacatctgt cggaccgatg cggctgccaa cgacaacact 4440
tttgcgtccg actactgtga gactgctcag gcttacgggg tgcagacgtt ctcggtgtgg 4500
ttcatctcca tcttgtgggt ggtgggtccg ttcctcttca acagtgacgg tctggactac 4560
aggaaaacca aggtggatat ccagcagtgg tgcatgtgga tgtttgcccc cgaagactac 4620
aaggacgacg acccggccaa caagggaggc tgggtaggct ggtggaaggg cgatctggag 4680
cagctgcacg gctccaacat gatctcgcgc gtcacggtca tcctccgcga gtgtcgccac 4740
ttcctgctca tgttctacgt ggctacactc gagacgtccg acgtcatgta cgtggcgtac 4800
tcgttcggtg ctgcggtcgc gacgattgtt ctgcttggcg tgttccatgg ctttggtatg 4860
ggcatgcgct ccatgagccc ggtgacgcgc gctgtgatct acatggggac cgtcgcagcc 4920
atcgtgacgg cctacttctt ggccacttgg atcgtgctgg actggaaatt caagtacgcc 4980
atgtcgctct ggttcgccta cgtggctgcg ctctacggta tcaacgagtg cttccgcatg 5040
tggagtttcc caagctcgtc gatcgctggc attgctgtgt tccagcagct acagttcctc 5100
ttcgacttta tcttctgcat tggtatgatc atcccgcttg tggtcatgtc gtgcatcccg 5160
ttcctgaaca tcatccagac gcgtatgatg tacaacgaag gcttctccaa ggtcatgtct 5220
gcttcttcgc agtatgcctt ctctctggca gccttcatgg gaatcctggg cggtatcggt 5280
gtcggctggc tgttcaactt gctgtcaacg ctggagcagt ctgcgagttt cgcaagttac 5340
gtcgtcacgt acgatggcgt cctaagtgga aacgtgggcg atggcaccac gacgtacatg 5400
ctctacggtg cctgtgtggt gggtacgatc atcgctggct tcctcaactt cttcctgggt 5460
cgtcgtctgg ctattgttgc gggtggtctc ttcagtacgc tcggtatggt ggctgtcagt 5520
gccaacgacg atctccgttc gacgctgctg atgcctggta tcggtctgct tggagcctcg 5580
tgcggtattc tgctaccgtc gttggccatc tacatcttcg agatctcgac caaggagatg 5640
cgaggcaaag ccatgttgtt gctgggaatc ggcttcatca tcggcagttt gctgggcggc 5700
attttcgcga ccgtgaacca gctgggatgg atctggcaga cgtttgctgc ctgcatcgtg 5760
atcgccctgg tcacgccagt cgtcaatgtg ttcccagaga gtccgtactg ggtgctggat 5820
cgcaagggct gggacgcctg tgaagcctgt ctcgttatcc tgcgtcgtaa acctgatgtc 5880
caagaggagc tcaaggtcat gcgagaagag gaaacggcag atgaaggcgg cgccggcgcc 5940
tacaagttcc tcatcggtct cttcctcatg ctcgtgtcct ctctgactac tggtttcctc 6000
aacgccttca tcagctacaa gggagcgagc gagtacacgg accaagacca gctgttcgtg 6060
aacgcgatgg cgctgcagat ctccggtgct gcgatcgcca tcttctacat cgacaagctg 6120
gaccacaagt cgattctctt cggaacgttg atccctatcg ctatctgtgc tggcattctg 6180
ggcttcaacg agaactcaga gatgctggga gacaaagagg gctcgggtct gtacctcagt 6240
cttgtagtca tgctcatgta cttcttcatg gggctgggca cgagctctgc tctgtggtcc 6300
gcatgcgtcg gcatgttcaa tactcgcggc cgcgcctcgt ccaccaccat gctgttcgct 6360
atcttcttcc tggcggatat gggctacgtc tacttgcaca cggacgactc gatgatgcag 6420
aacgaatatt cctatctcta cgccatcgca ggcttcagtg tcgtcgccct ggtgctgtta 6480
atgggcgcag gcaccaagaa gaacggcgtc atctgtacca agtcagaagc tcagcgcgat 6540
cgcgaccgta tcgctcgtat gcgtgccgaa cgtgcaagtc gcaacacgcg gacgcctgga 6600
actgcgcgcc agcggaatct cagtcgcgtg cggtccaagt cgaacgctgg cggccagcgg 6660
ggcaacgcgg cgcatggcgg tggctaccaa atgtacgaaa cacccgccaa cgctgcgccg 6720
ccgctcatgc acgcgcgccc gtag 6744
<210> 37
<211> 2462
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 37
attcgagaga tttttcgaac tctgacatcg ttgcaaccat aacttgcctg cattaaggtg 60
ctcctcaact gtacccatgc cgagcaccca tcgactctgc cagtacgatg cttcaccaaa 120
gttttagtcc acaagaaaag ccgaaacgta catgtcgtaa cggaagccgt gcgacctttt 180
accgttcgtg cgctggtctc acgtagcttc attctccttc ttccctagcc agcaaaggcg 240
tctcccaaga tatcccagca attgtctatc ggttaagatc aaggagtaaa atgcactcgg 300
cgctgttctc gtgctcaact ttggctttga tcacgagttt ggtctcctca gagcgtgccg 360
actcgatgat caaatctcgg tctggattga gcccctgggt ggacgttgac acccccgaga 420
gtgcactcaa cgtcacgtcg tcgcgtggag atacgtggac gttggtcatg agcgacgaat 480
ttaacgttcc tgggcgtaat tttacgcccg gttcggatca catgtggacg gcgttagaaa 540
tgcccgacgg tgtcaatgca gctctcgaat actacagctt caatatgacc gataccgtaa 600
cggaatcgga cggtcgtggt gtcttccgga taaagattat ggaagaggac aacatcacct 660
acacggtgtg gaacacgtac gctaagcctg cgggtttcga gacccatcac atgtactacc 720
gagccggtat ggtgcaatcc tggaacaaat tctgtttcca aggaggaagg atggaagtgg 780
tggctcaatt accagcaaca accagctcta gtaaccccga tatgggtgac atcaaaggtc 840
gcgtcaagac gaacagcttc tatcccacgt ggcctggtat ttggcttcta ggaaatctag 900
gacgagctct attctcccaa tcgaccagtc ggatgtggcc ttggagttac gacgaatgtg 960
acgaaaaatt cgaatccagt caaagaatca gtgcgtgtga cggtaatcca ggaagtggat 1020
tgaatgctca tcaaggacga ggagcgccgg aaatagatct actggaagga ggaggtgtag 1080
ccatctccac aagtatccag gtcgctcctg gaatgcccga taaattccgt atcattgctc 1140
ccacggatga taaaagtccc ttctgcgtct tcacggccga gtgtactact attggtgcta 1200
actttcctgg gatcccagcc aaagcgtacg aagctcgaga ttatgaaagc tggtatcaag 1260
gactacggta cgctccaaat actctttgta gcccagttgg cagcttgatg caagatccca 1320
aaacggtgct tgcaaatgcc gagaaaggct tcacttctaa tacgtgtaaa ggagtcaatg 1380
cgtgtccagc ttcgggtgac ggatactccg atttaggctt gatcgacggg aaagggcctg 1440
attactgggg ggttaacaaa gaaggcggct gtatgccggt tattaacgga tacacgggag 1500
ctttcctatg tgaccctgac agttccaaca aaaaatgttc ctctccgtta ggtgcggaag 1560
aacccaagag taaagttatg gaaccattcg agtatcagat ggacgccctg tccgctaatt 1620
ggccagttca gctcgcagca tatacaagtt atgtgaaata ccaagtcgaa tgggtcatgg 1680
gctcacaagg ttacattcgc tggatggtcg aggatattgt gatttttgaa attccagccg 1740
agtcggtcga gaatgttcca caagatgctg ccaagtccaa ccctaagaaa ctcatgttgg 1800
aagaacccat gtacgtgatt ttcaacgtcg ctctgtcaac tagttggggt accacgccac 1860
cgaatccagg gtcgccatgt cgtggagatg ggagcaatgc gcaacataac gctatttgtg 1920
acggtttccc catgttcatg aagatcgact acattcgtat ctatcaggat ctctcttcca 1980
actccacgat ggctatcggg tgtgacccgt ctactcatcc gactaaacaa tggatcgagg 2040
atcacattga tgagtatgag acgacggaga ataaatggat tgaggttcac ggtggagcca 2100
attgcaagac tgataacgac tgtacggtca gtacttctca cattttgacg gggaaatgta 2160
gcaagaaaca tcgctgtaga tgcggatctt ccggtgcttg gggtggtcca cgttgcacaa 2220
ctccactagc tgatacagcg aatggagaag gcttcggacc accaacagtt attacgagct 2280
tggttggtgc attcgtcatt gtgcttttgg tctttgtggt gtacaagata atggaccaac 2340
gcagcaagaa ggcgatggtg ggagctggga ttactcaacc agcaattctc tccaagatcg 2400
agatggacga catcccacgt tcaaataaaa gccagagcgg ctcggaggat aaggtggtgt 2460
ag 2462
<210> 38
<211> 942
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 38
atggctccac tgccatccgc aaccttgacc acacccgacg tggctcctgt cacagctacc 60
accgcctcgc agcccttcga cgacctagtt gacaaggtcg agagtggcta tgcggctatg 120
cctaccaccc caaaggcggt ggctcccttc ccaacctcca aaccgcaagg tctccagcgt 180
ttcgccgttc agagcgtgca cctgcgcgag tgcttcgccg agttcctcgg caccttcgtc 240
atgatcgtct tcggtatggg cgtcaacaac caagtgacca actcacacga cgccaacggc 300
acgtggctca gcatcaatat gtgctggggg attggtgtac tcatcggcgt ctactgctcc 360
gagggcatca gtggtgctaa cctcaacaca gccgtgacgt tggcacattg cgtgtacggc 420
cgtctaccat ggtggaaagc acccggttac atgatctcac agctattggg cgccttctgt 480
ggagctttca ttatctacgt catgcagtac cagaacctca acgtcattga cccgtatcgc 540
gagaccacac agagcagctt ctcgacgtat ccgagcgaca acatctccaa ctacacagcc 600
ttctacaccg agttcatcgg tactgctatg cttgtgctca gtatctacgc catcacggac 660
aagcgcaaca gatctgccgg tctcgtgggt tctcccttcg ccttctgtct aatgatcatg 720
gcgttgggca tggcctttgg catgaacacg ggctacgctg tgaaccctgc acgtgacttc 780
ggcccccgca tcttcacggc catcgcgggc tggggctcca aggtctttac cactcggaac 840
tactacttct ggatcccgat cgtggccgat tctatgggcg gaattgctgg tgctggactc 900
tatcggctgc ttgtggagat ccaccaccca cccctctcgt ag 942
<210> 39
<211> 1636
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 39
atgtccgacg accaagtgcc accgttttcg ctcggtacga aacaccttac acgcatgacg 60
tgcagcgcac agttcagaga tgactaactg gccatgctgc cgctacgtgt atttaccaga 120
taagccgcgc cacgatactt cgacgtacgt cggtcggtgg cgtaagtttg cggagctcgt 180
gtcgccaaag tacgtcaaac aaggtagacg atggaaaaag tgtggctcta aacatcatgc 240
tggggcttta ggtggctctt tctaagctcg gagcagattc agcacgcgac gcagactctg 300
gaggacttcc gcaacggtaa aatcgcccct ggtcagttca aggatgcgga actttggaat 360
cttcgccagg gtacgaaaca atgcgacagg atggtaccaa cttgtggttt ttgctgacgt 420
tttggtgata attgaatcga tatgtagcgt acgaggctgc cgtgcaccct cagactggcg 480
agacagttcc ggctgtgttt cggctgtcgg ctttcgtgcc tgtgaacatt cccatttgcg 540
ttggcatgct gctcgctcct gccacggtat gtaaagtctt gctgcacttg taacaatagc 600
tttattttaa tttaaatgct cacttaaata tgcttacagt tgggaaacac gatcttctgg 660
caatgggtta accagagcta cagcgccggt ttcaactacg ctaaccgcaa cgccagcagt 720
gaacaggaca actccaccat cttcagtacg aagttctcga tgctaatggc cttctttcag 780
cgttctaaca cggctctttg catcgtatca cagagtcgta cgctaccgcg acgctcgtgt 840
cttgctcgac tgccgttggt ctgggtaaga tggtggagaa agccaagaga ctttctccca 900
gcacgcgttc cttcctcgga aaggttaaaa ctgctaaatg ccgaatgctg tgctccttat 960
gtgactgaat ttttgggctg caacttgatc agatggttcc tttcgttgct gtcgcgagcg 1020
caggtgcttt caacgccgtg tcgatgcgct tcaacgagtt ccagtacgtg tagagtgtct 1080
tgcactggaa atatgatgct gttgtgctca ttggagtgtg gtgatgcgtt acagagaggg 1140
aattgatatc atggacgagc acggagatgt tcacgggcgt tcagttgccg ctggacgtca 1200
gtcgcttggc caagtggcac tcacgcgtat tgcgctaccc atgcccagta cgtcctcgca 1260
ttgacaagct cttcttgggt gaattatgtc taatattggt ggacttggac agttttgctg 1320
ctcccgccgt acctgtatga gatcatgaag aaaaccaaca tcatgcccaa ggccaagtac 1380
ccgaagcttg ctgcggagct cggtacgtgc attatttctg ccatagtccg cggtaatgag 1440
ctaacttatt gcgtctctgc ctgcatctat gatagtcgtg ttaacgatgt gtctgtgggg 1500
tgccatgccc agcgctgtgg cgctcttccc gcagttggga acgatttcgg ctgacagcgt 1560
tgaggaggaa ttccgatctc gggtggatcg caacggccag cccattcgtc acttcatcta 1620
caacaaggga atctga 1636
<210> 40
<211> 960
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 40
atgagcaccg ccaataaaga agcatctccc tttgtggagc ttcgccgtct taactttgcg 60
ttcgccaaag ttactatcgg tggccaactc atcaatcgct tgcagcatga ccccgctact 120
gctgacgcca tggaagacga cgatcgagtc ctgcgtgacg tgaatctaac gctgcagtct 180
ggtcagcgcc tgttggtcgt gggtggtaat ggagctggca aaagcacgct actcagtatc 240
ttggctggca agcacctgac ggctgacgac acggcgctga tcttcggtcg agacagcttc 300
cgtgacacga cactcaacgc tttaaggact ttcgttagtg ccgactgggg gcagcgctcg 360
gtggcgttcg caacgcacgc aatggcttac tcggctgaca tggcggtgga agaaatgatg 420
acgaaactgc agagtgaaca cccggagcga cgccaaaagt tactgaaggt gttgcgtatt 480
gacccaaagt ggcgtttaca tcgcctgtcg gacggtcaac gtcgccgcgt tcagctcttt 540
ctggcgctac tgagaccttc gcagctcatc gtactggacg aagtgctggg aatgctcgac 600
atcatctcgc gcgaaaacgt actggcattc ctaaaggagg aaacagagac tcgacaagcc 660
acggtgttgc tagccacgca catcttcgat gggacggacg tctgggcatc tcatgtgctg 720
tatattcgtc gcggtactgt tgggttctat ggtccgattc agcagtgtac tgatggaggg 780
aagatcccga tgtataaggt ggtggaacac tggctacgtg aggaattggc cgacgacgac 840
cgtgtggaat gcgaggcggt gggcccaagt ggtgagttcg acctgggcaa cgcgcagaac 900
cgcgcaggag ggtatgccga cggtcgactg ggtggtgtcg atgtcaccac atcgttttaa 960
<210> 41
<211> 510
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 41
atgagcgacg gtactaagct cattgccgtg atcggagacg aagacaccgt cacgggcttt 60
atcctcgcgg gtgtcggcca tcgaacggcc gagggaacca actttctcgt cgtcaaaccc 120
tgtgcgtcgg cattcccgaa aggatttttt taaagcttag attaactact aacacgcgtc 180
acatacgacg gtgctgcagc tactccaatc tccgctattg aggccagttt ccggacgctc 240
tcgagccgtg acgatatcgc aattatcctc atcaaccagc acgtacggca tcctagttag 300
aacccactct gaggtataag cctttatgtt tttctcactc gcttgatatt attgtttggg 360
caggttgctg aggagatccg tcaccttctc aacacgtacg acaagaccat tcccacggtg 420
ctagagatcc cgagcaaaga ctcgccttac gacccagcta aggactatat catgaagcgc 480
gtgaatctca tgcttggagg agagtcgtga 510
<210> 42
<211> 1491
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 42
atggtcgctg aagacgcggt gttcacggaa gcgaagacgc ccaaggccgg cgatgtccag 60
gccggcagat ccgtcccgct ctcgccgacc ttctggttca gcctcgcggt gctgctcctg 120
ctccccttcc agttcggctg gtcggtcggc cagctcaacc tcacgacctt caacgacgaa 180
gacgagtgca acgcgcgacc tctagtcgac ggaacgtgcc tcatgtttcc cggtcatagc 240
agcacggaat ggaccttgat cgtgaacgcg tggattgtag gcggtatgat cgggagtctc 300
ggttgtggcg ttatctccga acgtttcggt cgcaagaagg tattgctggc gaacgccgtc 360
gtcatgttgg ccggcgctgt cattcaagcg agtacgtcga gtatctcggt ttttatggtc 420
gggcgtatcg tcgccggtat cgcgtcgggt tgtgcgacgg gtatggtggg tggctacatc 480
agtgagatta cacccccgag tctccgtaac tcgtacggca cgttcatgca ggtatctctc 540
tctgccggta tcttagtagt gaccatcagt tttttcttcg cggataccag tagcggctgg 600
aggtacatcg ccgcatttcc cgttcttaac gccggtttct tcttggcgtt cgcaccgttc 660
gttcttgtag agagtcccgc gtggcttttg gaaaagggcg accgggagca tgcggagcgg 720
gagatcgcca gactttacgg cttcgatttc gtcccagtag cactgacgtg gatggaacca 780
ggtatcaata ctgacctgga gtcagaggaa ctgtgcggcg aacagcacga aggcggcaca 840
ttgtcgctgc tgttttcgcc gctctttatc aagcaactgc ttgtggctct tggtgtatca 900
gctgcgcaac aacttacggg tatcaacgcg gtgtgctatt actcgtccga tatcttctcg 960
gatgcaggga tgtcggatgg tcgtgtgggt ggcgtcatcg tgtacgtgct gatgttacta 1020
ccgacgatgg ctgttgcgcg attgtcggag cgattcggca accgacggct tctgcttact 1080
ggactggccg ggatgtttat tagtgctacg ggtataactt tggcgcttgc gttgtcggtc 1140
gaggtactct ctatcgtctt catgggtaca ttcgttgcgt tcttctctgc gagcgtgggg 1200
ccgcttatct agcctatcac ggccgcgctg ttcacggact cggtacgcgc cactgccgtc 1260
tctatgtgca tctttatcaa ttgggtatgc aacttgatca ttggcgtctg cttcccgtac 1320
gtctcggatg cgctagacga gtacaagttt gtccccttta tggtgaccac cgctgcgttt 1380
ttcttcttca ctcagttttg gatcccggag actgcaggta agagcaccga ggagatccaa 1440
gccacgttcc gatctaggaa agctcagaag ccggtggtgg tgttaagctg a 1491
<210> 43
<211> 2462
<212> DNA
<213> Phytophthora infestans
<400> 43
ttgtgctact cgagtgcctt cttctccatg acgcagcaag acgttcgcca ggcgctggac 60
gcccccgcat tagcagccta catccactcg cgactgggtg catcgcacgg cgccatcgcg 120
tccatccgtc agttccagca tggccagtcc aacccgacgt acctcttgac aatggccggc 180
tcgaaagcca agtgggtgtt gcgtaagaag ccgcacggtc agatcctgcc gtcagctcac 240
gccgtagagc gcgaatatcg tgttctagag gctctggagc actcggaggt gcccgttccc 300
cgcgctgtgt tgctatgtga agaccccaaa gtcattggca cacctttcta cctcatggaa 360
tacatacatg gtcgtatctt ccaagaccca tcgctgcctg gcattaaacc tatgtatcgc 420
tacgccatgt acagctcggc agtagacgcg ttggttaagt tgcacgagct ggactacaag 480
aagatcggac tggccgactt cggtcgcccc gagaagtact gccaccgtgt cgtgacgcgc 540
tggagtcgac aagtccaaag tggccagaag gtctttagtg aagctggagt gaaggagaac 600
ccgaagatga cgcagctgca acgttggctg gagcagaacg ccgacgacgc cgagaaggcc 660
acgaccagtg ccgagggagc gagtatcgtc cacggagact tccgcattga caacatgatc 720
ttccacccga cggagcctcg tgtgttggcc attctggact gggagctgtg tactatcggc 780
aatccgttct cggatgtagc cacattggcg tcggcctaca gactgccact ggacaactcg 840
aacacaatca tgacgcctgg tctctcggat gctccgttga agacactcgg catcccatcg 900
gagagtgaat tgttgctagg ctactgtcgt cgtgccagac ggttccctct acccactcag 960
acgtggcatt ttttcatggg gatgatcgta taccgcttcg cagccatctg ccacggtgta 1020
tacgcccgcg cactgctcgg caacgcgtcg tcggccaacg cagcatgtgc caagacgacg 1080
atggaccgac tcttggccat gagcgacgac atcatggacg catcggctga tatttacccg 1140
gagccggagc tgacgcacat tctgccgttc ccgatccgtc ctcatgctct gcagatgtac 1200
aagaagctgc taaagttttg ccagaaccga gtgtaccccg ctgagtccgt ccacattgct 1260
cagatcgcca aggcgagaga agaaggacgg gagtggcaga gtgtgcctcc tgttattgaa 1320
gagctcaaga cggaagccaa ggcgctggga ctctggaacc tcttcctgcc tcagtgtgtg 1380
gtgccagctc tggatggcaa tggaccagac gtcaactacg gtggagacct gacgaatctc 1440
gagtacggac tcatgtgtga ggtcatggga cgctccattg tgttggctcc ggaggttttc 1500
aactgctcag cacccgatac cggcaacatg gagatcttga cgcggttctg cactgtggag 1560
cagaagcatc agtggcttgt tcctcttctt caaggtgaga tccgatcgtg tttcgcgatg 1620
acggagaagc gtgtggcttc gtcggatgcg acgaacatcg agacgcgcat tgtacgcgac 1680
gaacagcgtc aagaatacgt catcaatggc cacaagttct acatctctgg agctggagac 1740
ccacgatgca agatcattgt gctcatgggc aagcacacgg aacgagccaa ggagagtcca 1800
ttcaagcagc agtcgatgat cctcgtgcct atggacacac ccggcgtgca ggtcgtgaag 1860
cccatgcatg tctttggcta cgacgacgca ccgcacggac acatggagat gctgttcaag 1920
gacgtgcgtg tgccgttcag caacgtgttg ctcggtgaag gtcgcggctt tgagatcgct 1980
caggctcgtc ttggacctgg ccgtatccac cactgtatgc gagccatcgg agctgctgag 2040
cgttgtcttg agctgatggt gcagcgagcc aagacacgca cagcgttcaa gcagctcctg 2100
gccgagaatc cgctcgtgtg ttcgcagatt gccaagtcgc gttgtgaatt ggacagcgcg 2160
cgcttgttga cgctccaggc tgcacatcag atggacaagc acggcaacaa ggtggcgcaa 2220
caggccatcg ctatgatcaa gatcgtggcg cctaacatgg cactggacgt ctgcgaccga 2280
gccatccaga tccacggcgc ttctggcgtg agtcaggact ttgtcctgtc ttacttgtac 2340
gccgccctgc gcacgctacg tatcgccgac ggaccggatg aagtgcacat gcggaccatc 2400
gcaaaactcg agctgagcca ctcgaagttg taagagaaat gtaaggcaaa agcaagcgtg 2460
aa 2462