一种提高小麦粒重相关蛋白Tc105及其基因和应用的制作方法

文档序号:15358955发布日期:2018-09-05 00:23阅读:271来源:国知局

本发明涉及基因工程领域,具体涉及一种提高小麦粒重相关蛋白tc105及其基因和应用。



背景技术:

小麦是全球重要的粮食作物,粒重是小麦产量的构成因子之一,增加粒重对提高水稻产量具有重要作用。千粒重是小麦产量三要素之一,由粒长、粒宽和粒厚等要素组成,其高低与小麦产量直接相关。在小麦高产育种中,千粒重是人们关注的重要的目标性状之一。因此,通过现代分子生物学手段研究控制小麦籽粒大小的遗传基础、克隆粒重构成要素的相关基因、发掘优异等位变异并开发其功能标记对我国高产育种具有重要意义。

nac转录因子家族是植物特有的一类转录因子,主要特征是其n端有一个保守的dna结合域,称为nac域,以及一个高度分化的c端。nac转录因子能特异结合nacrs(nacrecognizedsequence,核心序列:acacgcatgtg)。水稻种子中nac转录因子影响水稻的抗逆性、谷粒灌浆及产量。osnac9和osnac10两个基因可以改变水稻的根系结构,增强抗旱性。osnac23基因在受粉后3d和7d的水稻种子中特异表达,以其为诱饵通过酵母双杂交技术,调取到21个与之结合的蛋白,其中有2个谷蛋白编码基因。小麦nam家族中多个基因影响种子谷粒蛋白含量。



技术实现要素:

本发明的目的是提供一种植物粒重相关蛋白tc105。

本发明的再一目的是提供编码上述植物粒重相关蛋白tc105的基因。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。

本发明的另一目的提供上述植物粒重相关蛋白tc105的应用。

本发明的另一目的提供上述植物粒重相关蛋白tc105编码基因的应用。

本发明的另一个目的是提供一种培育理想小麦株型的方法。

本发明所提供的粒重相关蛋白tc105,长度328aa,来源于小麦s301,其氨基酸序列如seqidno.1所示。

seqidno.1:

madhlqvqqqhqhqlelpsgfrfhptdeeiitsylvpkvlnptftaiaiaevdlnrndpyelpkkakmgekewyfycqkdrkyptgiqtnratkagyskatgkdkelfhplptligmkktlvfykgraprgektnwvmheyrleiskqaaygpstaiakaaainasskkervvckifhknigvkkvvtpsyamhmpmfiggeqqqgslnsctfppsmdygaslslapplflsedssyqlhaarvglamtgslvlpmvnnphhemmggnpmvsyqqqqmmqmqmqmgadqcfmvgvepgsesssmvsregvdrlgnnvqgngatttids

根据本发明的tc105基因编码上述蛋白,可具有如seqidno.2所示核苷酸序列,tc105开放阅读框(orf)长度为987bp。

seqidno.2:

atggcagaccaccttcaagttcaacaacaacaccaacaccaactagagctcccttcggggtttaggttccaccctaccgatgaggagatcatcacctcgtacctggtccccaaggtgctcaacccaaccttcaccgcgatagcgatcgcggaggtggatctgaataggaacgacccgtatgagctccccaagaaggcaaagatgggggagaaggagtggtacttctactgtcagaaggaccgcaagtatcccacggggatacagaccaaccgagccacgaaagccggctactcgaaggccactggcaaggacaaggagctcttccacccactgcccactctcatcggcatgaagaagacgctcgtgttctataagggcagggcgcctaggggggagaagaccaactgggtcatgcacgagtacaggcttgagatcagcaagcaggctgcatatggcccatctaccgccatcgccaaagctgccgccattaatgcatcttccaagaaggagcgagtggtttgcaaaatcttccataagaacattggagtcaagaaggtggtgaccccgtcgtacgccatgcacatgcccatgttcataggaggagagcagcaacagggctccctcaactcatgtacgttcccgccttccatggactacggcgcatcgttgtcgctggcgcctccgttgtttctatctgaagattcttcgtaccaattgcatgccgccagagtcggcttggcgatgacgggcagcttggtgctccccatggtgaacaacccccaccacgagatgatgggcggcaacccaatggtgtcctaccaacaacaacagatgatgcagatgcagatgcaaatgggtgcagaccagtgcttcatggttggggttgagcctgggagcgagtcgtcgtccatggtgtccagagagggcgttgaccggctgggcaacaacgtccaaggcaatggcgccacaacaaccattgacagttaa

本发明还提供了包含上述tc105基因的重组表达载体。

本发明还提供了包含上述tc105基因的重组细胞。

实验结果表明,利用小麦不同组织的特性,分析小麦tc105在不同组织中的表达差异分析,发现tc105在未成熟种子等中特异表达,其在小麦种子发育过程发挥着重要的作用。

根据本发明的新nac基因tc105的过量表达能够提高小千粒重增加,导致小麦产量增加达20%,因此,这对作物育种和农业生产会产生巨大推动作用和经济效益。

因此,本发明的tc105基因可以作为在作物育种中的优质候选基因,对作物育种以及提高产量、加速分子育种进程,以及世界粮食安全具有十分重要的理论和实际意义。

附图说明

图1显示tc105在不同组织表达模式;

图2-1显示过量表达oe-jing18转基因植株与对照的穗子对比;

图2-2显示过量表达oe-jing18转基因植株与对照的籽粒相比;

图2-3显示过量表达oe-jing18转基因植株与对照千粒重的比较

图2-4显示过量表达oe-jing18转基因植株与对照的产量对比。

具体实施方式

实施例1、tc105基因的克隆及序列基序分析

小麦s301种植于北京田间,分别取开花后10天的根(root),茎(stem),叶(leaf)、种子(seed)和穗(spike)取样,迅速置于液氮冷冻,-80℃保存备用。根据rna提取试剂盒(北京天根生化科技有限公司)完成植物叶片组织的总rna提取,之后以提取的总rna为模板,以tc105-f1-f/r序列为引物,用反转录酶(m-mlv)进行反转录,得到用于后续实验的cdna模板。设计一对引物:

tc105-f1atggcagaccaccttcaa

tc105-r1aattgacagttaccaacaac

本发明得到的基因tc105的开放阅读框(orf)长度987bp,编码328个氨基酸,该基因是一个编码nac基因家族,与其它作物同源性极低,证明tc105为首次在小麦中克隆一个新基因。

实施例2:tc105不同组织表达特征分析。

如图1所示,对小麦s301分别取开花后10天的根(root),茎(stem),叶(leaf)、种子(seed)和穗(spike)取样,将上述各种胁迫处理材料的rna反转录为cdna,作为模板,利用rt-pcr分析不同组织的表达模式,综上所述tc105基因在未成熟种子中高效表达,预示该基因可能在种子发育发挥着重要作用。

实施例3:tc105转基因小功能鉴定

将tc105构建到过量表达pcambia3300载体中,利用农杆菌介导法,将该基因转化到京冬18中,目前已经获得t2代转基因株系(oe-18:oe-2,oe-3),经过分子检测,获得阳性转基因植株,转tc105基因株型小麦oe-2,oe-3等品系,3次重复,小区面积为0.02亩。如图2-1所示,过量表达oe-jing18转基因植株与对照穗子,转基因材料穗长明显提高;如图2-2所示,过量表达oe-jing18转基因植株与对照相比,籽粒明显增大;如图2-3所示,过量表达oe-jing18转基因植株与对照千粒重比较,千粒重明显增加20%以上;如图2-4所示,过量表达oe-jing18转基因植株与对照的产量比较,转基因材料产量提高达到20%以上。

因此,tc105作为在作物育种以高产优质候选基因,对作物育种以及提高产量、加速分子育种进程、世界粮食安全具有十分重要的理论和实际意义。

序列表

<110>北京市农林科学院

<120>一种提高小麦粒重相关蛋白tc105及其基因和应用

<160>2

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>328

<212>prt

<213>triticumaestivuml.

<400>1

metalaasphisleuglnvalglnglnglnhisglnhisglnleuglu

151015

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