一种抗蝎毒血清的提取方法与流程

文档序号:15853558发布日期:2018-11-07 10:34阅读:738来源:国知局

本发明涉及生物医药领域,尤其涉及一种抗蝎毒血清的提取方法。



背景技术:

人被毒蝎蛰到后,毒液注入人的皮下组织,毒素通过淋巴液吸收,随着血液循环会分布全身,会造成人体主要脏器官的损伤,若不及时救治,严重者会导致死亡,抗蝎毒血清中含有特异性抗体,与相应的毒蝎抗原结合,会产生无毒性的抗原抗体复合物,起到中和毒素的作用。现阶段,我国的抗蝎毒血清生产厂家较少,纯度不高,收率也较低,不能满足市场的需求。

为此,设计一种抗蝎毒血清的提取方法,解决以上问题。



技术实现要素:

本发明为克服以上不足,提供一种抗蝎毒血清的提取方法,包括以下步骤:

第一步:选择适龄、健康、无感染的动物,提供优良的卫生条件,保持动物良好的营养状况;

第二步:免疫用的蝎毒抗原选用无菌的蝎毒或脱毒蝎毒,免疫抗原为配制稀释成一系列一定浓度的蝎毒液;

第三步:前期免疫,所述动物在进行蝎毒免疫前用浓缩破伤风类毒素进行二次前期免疫,以防止后期蝎毒免疫引起的破伤风;

第四步:初次免疫蝎毒抗原0.1~0.5mg,加佐剂皮下注射,3周后,第二次免疫剂量同上,加佐剂皮下注射,5~7天后,检测其抗体效价,当有明显抗体应答反应后进行超免疫,蝎毒抗原量为0.5~5mg,静脉注射;

第五步:在末次免疫的7~10天后,对所述动物采集血样,检测其抗体效价,抗体滴度达到要求后,选择上午在动物空腹时用无菌取血器械抽取动物的动脉血液,加入原血量体积10%抗凝剂,搅拌使抗凝剂混合均匀;

第六步:将所述血液置于消毒灭菌后的离心管中在4℃下以2500rpm转速离心10~15min,取上清于灭菌袋中,加入凝血酶,搅拌均匀,20~37℃条件下温敷0.5~2h;

第七步:使用消毒灭菌后的离心管以8000~12000rpm转速离心10~15min,取上清即为抗血清,置于灭菌袋中;

第八步:采用膜过滤法去除抗血清中的病毒,γ-射线辐照法进行病毒灭活;

第九步:分离的抗蝎毒血清加防腐剂经检验合格后分装和低温保存。

进一步,第一步中所述动物为4-5岁的动物。

进一步,第一步中所述动物为小白鼠。

进一步,第三步中所述抗原浓度为0.1mg/l及1mg/l。

进一步,第三步中所述佐剂为弗氏完全佐剂。

进一步,第四步中所述抗凝剂为4%的柠檬酸钠。

进一步,第七步中所述膜的孔径为0.5um。

进一步,第八步中所述低温的温度范围是3~4℃。

本发明的有益效果为:

相对于现有技术,本发明提出的动物抗蝎毒血清的提取方法,成本低,过程简单,不会引入其它杂质,能稳定提取高品质的抗蝎毒血清。

具体实施方式

以下将结合本发明的实施例进行详细叙述。

一种抗蝎毒血清的提取方法,包括以下步骤:

第一步:选择适龄、健康、无感染的动物,提供优良的卫生条件,保持动物良好的营养状况;

第二步:免疫用的蝎毒抗原选用无菌的蝎毒或脱毒蝎毒,免疫抗原为配制稀释成一系列一定浓度的蝎毒液;

第三步:前期免疫,所述动物在进行蝎毒免疫前用浓缩破伤风类毒素进行二次前期免疫,以防止后期蝎毒免疫引起的破伤风;

第四步:初次免疫蝎毒抗原0.1~0.5mg,加佐剂皮下注射,3周后,第二次免疫剂量同上,加佐剂皮下注射,5~7天后,检测其抗体效价,当有明显抗体应答反应后进行超免疫,蝎毒抗原量为0.5~5mg,静脉注射;

第五步:在末次免疫的7~10天后,对所述动物采集血样,检测其抗体效价,抗体滴度达到要求后,选择上午在动物空腹时用无菌取血器械抽取动物的动脉血液,加入原血量体积10%抗凝剂,搅拌使抗凝剂混合均匀;

第六步:将所述血液置于消毒灭菌后的离心管中在4℃下以2500rpm转速离心10~15min,取上清于灭菌袋中,加入凝血酶,搅拌均匀,20~37℃条件下温敷0.5~2h;

第七步:使用消毒灭菌后的离心管以8000~12000rpm转速离心10~15min,取上清即为抗血清,置于灭菌袋中;

第八步:采用膜过滤法去除抗血清中的病毒,γ-射线辐照法进行病毒灭活;

第九步:分离的抗蝎毒血清加防腐剂经检验合格后分装和低温保存。

进一步,第一步中所述动物为4-5岁的动物。

进一步,第一步中所述动物为牛、马、羊、鹿中的一种。

进一步,第三步中所述抗原浓度为0.1mg/l及1mg/l。

进一步,第三步中所述佐剂为弗氏完全佐剂。

进一步,第四步中所述抗凝剂为4%的柠檬酸钠。

进一步,第七步中所述膜的孔径为0.5um。

进一步,第八步中所述低温的温度范围是3~4℃。

在本发明的描述中,除非另有说明,“多个”的含义是两个或两个以上。需要说明的是,在不冲突的情况下,本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。



技术特征:

技术总结
本发明是一种抗蝎毒血清的提取方法,包括以下步骤:第一步:选择适龄、健康、无感染的动物,提供优良的卫生条件,保持动物良好的营养状况;第二步:免疫用的蝎毒抗原选用无菌的蝎毒或脱毒蝎毒,免疫抗原为配制稀释成一系列一定浓度的蝎毒液;第三步:前期免疫,所述动物在进行蝎毒免疫前用浓缩破伤风类毒素进行二次前期免疫,以防止后期蝎毒免疫引起的破伤风。本发明提出的动物抗蝎毒血清的提取方法,成本低,过程简单,不会引入其它杂质,能稳定提取高品质的抗蝎毒血清。

技术研发人员:陈燕
受保护的技术使用者:天津市正江现代生物技术有限公司
技术研发日:2018.06.13
技术公布日:2018.11.06
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