本发明涉及化合物提取技术领域，具体涉及一种从刺五加中提取异嗪皮啶的方法。
背景技术：
刺五加广泛分布于我国多个省份和地区，是我国重要的中草药之一。刺五加具有益气健脾、补肾安神之功效，可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外，还可治疗心血管疾病、糖尿病及神经衰弱等症。刺五加的根和茎部分含有多种活性化学成分，其中异嗪皮啶与酚苷类化合物尤为突出。异嗪皮啶为刺五加中重要的活性成分之一，具有镇静、抗炎、抗菌、抗肿瘤及防治心血管等多种药理活性，其含量的高低是评价刺五加质量优劣的指标之一。
目前，提取刺五加中异嗪皮啶的方法通常是将刺五加提取后将提取液直接进行萃取浓缩，再用大孔吸附树脂或硅胶进行分离。这类方法具有如下缺陷：刺五加中除存在游离态异嗪皮啶外，还存在结合态异嗪皮啶；如不对结合态异嗪皮啶进行提取会造成约30％异嗪皮啶的损失，同时，树脂或硅胶分离用的有机溶剂回收负荷大，不能重复利用，造成成本和能量上的浪费。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种从刺五加中提取异嗪皮啶的方法，本发明提供的方法异嗪皮啶的得率高，且成本低。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种从刺五加中提取异嗪皮啶的方法，包括以下步骤：
采用第一乙醇水溶液对刺五加进行提取，得到提取液；
将所述提取液与h+型离子交换树脂和含氯溶剂混合后进行水解原位萃取，得到萃取液；
分离出所述萃取液中的有机相，将所述有机相浓缩至干，采用第二乙醇水溶液对所得物料进行溶解，得到溶解液；
采用大孔吸附树脂对所述溶解液进行富集，采用第三乙醇水溶液对富集后的大孔吸附树脂进行洗脱，去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。
优选地，所述第一乙醇水溶液的体积百分含量为60～90％；所述第二乙醇水溶液的体积百分含量为20～30％；所述第三乙醇水溶液的体积百分含量为75～90％。
优选地，以所述刺五加的绝干质量计，所述刺五加与第一乙醇水溶液的质量比为1：(7～15)。
优选地，所述提取的温度为70～90℃，时间为1～5h。
优选地，所述h+型离子交换树脂在使用前进行预处理，所述预处理的方法包括以下步骤：
(1)采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂进行水洗；
(2)采用碱试剂对所述步骤(1)得到的h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性；
(3)采用酸试剂对所述步骤(2)得到的h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性；
(4)将所述步骤(3)得到的h+型离子交换树脂依次进行步骤(2)和步骤(3)中的处理，得到预处理后的h+型离子交换树脂备用。
优选地，以所述刺五加的绝干质量计，所述h+型离子交换树脂为刺五加质量的0.25～5％。
优选地，所述含氯溶剂包括二氯甲烷、三氯甲烷、1,1-二氯乙烷或1,2-二氯乙烷。
优选地，所述含氯溶剂与提取液的体积比为(0.4～2.5)：1。
优选地，所述水解原位萃取在封闭条件下进行；所述水解原位萃取的温度为75～95℃，时间为1～4h。
优选地，所述富集和洗脱在封闭条件下进行；所述富集过程中上样浓度为0.2～1.0mg/ml。
本发明提供了一种从刺五加中提取异嗪皮啶的方法，采用第一乙醇水溶液对刺五加进行提取，得到提取液；将所述提取液与h+型离子交换树脂和含氯溶剂混合后进行水解原位萃取，得到萃取液；分离出所述萃取液中的有机相，将所述有机相浓缩至干，采用第二乙醇水溶液对所得物料进行溶解，得到溶解液；采用大孔吸附树脂对所述溶解液进行富集，采用第三乙醇水溶液对富集后的大孔吸附树脂进行洗脱，去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。本发明通过所述水解原位萃取，能够使异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，全部转化为游离态异嗪皮啶，从而增加萃取液中异嗪皮啶的含量；其中，所述h+型离子交换树脂是作为催化剂促进结合态异嗪皮啶的水解，所述含氯溶剂是作为萃取剂萃取游离态异嗪皮啶。因此，在水解原位萃取过程中，结合态异嗪皮啶的水解和游离态异嗪皮啶的萃取是同时完成的。同时，本发明提供的水解原位萃取方法又有效地避免了水解与萃取两步操作的繁冗，节省操作工序和溶剂的使用量，生产成本低，异嗪皮啶得率高。实施例的实验结果表明，以提取液中异嗪皮啶的得率为100％计，按照本发明提供的方法得到的异嗪皮啶的得率达142.74％，纯度达34.2％。
进一步地，本发明中水解原位萃取、富集和洗脱过程均是在封闭条件下进行，无污染，溶剂均可回收使用；且所述h+型离子交换树脂使用后经再生处理可以循环利用。这进一步降低了生产成本，便于工业规模化生产。
附图说明
图1为实施例1中所得异嗪皮啶(a)和异嗪皮啶标准品(b)的高效液相色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种从刺五加中提取异嗪皮啶的方法，包括以下步骤：
采用第一乙醇水溶液对刺五加进行提取，得到提取液；
将所述提取液与h+型离子交换树脂和含氯溶剂混合后进行水解原位萃取，得到萃取液；
分离出所述萃取液中的有机相，将所述有机相浓缩至干，采用第二乙醇水溶液对所得物料进行溶解，得到溶解液；
采用大孔吸附树脂对所述溶解液进行富集，采用第三乙醇水溶液对富集后的大孔吸附树脂进行洗脱，去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。
本发明采用第一乙醇水溶液对刺五加进行提取，得到提取液。在本发明中，所述第一乙醇水溶液的体积百分含量优选为60～90％，更优选为70～80％。在本发明中，以所述刺五加的绝干质量计，所述刺五加与第一乙醇水溶液的质量比优选为1：(7～15)，更优选为1：(9～12)。
在本发明中，所述刺五加优选为自然风干后的刺五加根；在本发明中，所述刺五加根茎经自然风干后，含水率为20％以下，在使用前不必经任何干燥过程处理。在本发明中，所述刺五加在使用前优选进行粉碎处理，得到粒径为60～100目的刺五加粉末。
在本发明中，所述提取的温度优选为70～90℃，更优选为75～85℃；在本发明的实施例中，所述提取的温度具体为所述第一乙醇水溶液的回流温度。在本发明中，所述提取的时间优选为1～5h，更优选为2～4h。在本发明中，为了保证充分提取出异嗪皮啶，所述提取的次数优选为2～4次，更优选为3次。
完成所述提取后，本发明优选将所得体系进行固液分离，将得到的液体物料作为提取液。本发明对于所述固液分离的方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方式即可，具体如过滤。
本发明采用第一乙醇水溶液对刺五加进行提取，原料不需额外干燥直接使用，能耗少；且异嗪皮啶得率高，火灾安全隐患低；同时，所述第一乙醇水溶液能够去除所述刺五加中的极性较大的成分，如多糖和蛋白质等。
得到提取液后，本发明将所述提取液与h+型离子交换树脂和含氯溶剂混合后进行水解原位萃取，得到萃取液。在本发明中，所述含氯溶剂与提取液的体积比优选为(0.4～2.5)：1，更优选为(1～2)：1。在本发明中，所述含氯溶剂优选包括二氯甲烷、三氯甲烷、1,1-二氯乙烷或1,2-二氯乙烷。
在本发明中，以所述刺五加的绝干质量计，所述h+型离子交换树脂优选为刺五加质量的0.25～5％，更优选为0.5～3％，最优选为1～2％。本发明对于所述h+型离子交换树脂的种类及来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知种类的h+型离子交换树脂的市售商品即可。在本发明中，所述h+型离子交换树脂的型号优选包括sk1b、001*7、d061、d072、110、d113、d151、d152或wk11。
在本发明中，所述h+型离子交换树脂的型号及性质如下表所示：
h+型离子交换树脂的型号及性质
在本发明中，所述h+型离子交换树脂在使用前优选进行预处理，所述预处理的方法优选包括以下步骤：
(1)采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂进行水洗；
(2)采用碱试剂对所述步骤(1)得到的h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性；
(3)采用酸试剂对所述步骤(2)得到的h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性；
(4)将所述步骤(3)得到的h+型离子交换树脂依次进行步骤(2)和步骤(3)中的处理，得到预处理后的h+型离子交换树脂备用。
本发明优选采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂进行水洗。在本发明中，所述浸泡处理的时间优选为10～14h，更优选为12h。在本发明中，所述水洗所采用的水优选为蒸馏水；本发明对于所述水洗没有特殊的限定，能够将浸泡处理后所得h+型离子交换树脂中的乙醇洗净即可。
采用乙醇进行浸泡处理且水洗完成后，本发明优选采用碱试剂对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性。在本发明中，所述碱试剂优选为naoh溶液。本发明对于所述naoh溶液的浓度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓度即可；在本发明的实施例中，所述naoh溶液的浓度具体为0.1mol/l。在本发明中，所述浸泡处理的时间优选为10～14h，更优选为12h。在本发明中，所述水洗所采用的水优选为蒸馏水；本发明对于所述水洗没有特殊的限定，能够将浸泡处理后所得h+型离子交换树脂洗至中性即可。
采用碱试剂进行浸泡处理且水洗完成后，本发明优选采用酸试剂对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性。在本发明中，所述酸试剂优选为hcl溶液。本发明对于所述hcl溶液的浓度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓度即可；在本发明的实施例中，所述hcl溶液的浓度具体为0.1mol/l。在本发明中，所述浸泡处理的时间优选为10～14h，更优选为12h。在本发明中，所述水洗所采用的水优选为蒸馏水；本发明对于所述水洗没有特殊的限定，能够将浸泡处理后所得h+型离子交换树脂洗至中性即可。
采用酸试剂进行浸泡处理且水洗完成后，本发明优选按照上述技术方案采用碱试剂对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性；然后按照上述技术方案采用酸试剂对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理，将所得h+型离子交换树脂水洗至中性，得到预处理后的h+型离子交换树脂备用。
在本发明中，所述h+型离子交换树脂市售商品中常含有少量低聚物和未参加反应的单体，还有铁、铅、铜等无机杂质，当其与其它溶液接触时，上述物质就会转移到溶液中，影响最终产物的质量。因此，对所述h+型离子交换树脂进行预处理可防止其中的可溶性杂质转入溶液中，在使用初期，污染出水的水质。
在本发明中，所述水解原位萃取优选在封闭条件下进行；所述水解原位萃取的温度优选为75～95℃，更优选为80～90℃，最优选为85℃；时间优选为1～4h，更优选为2～3h。本发明通过所述水解原位萃取，能够使异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，全部转化为游离态异嗪皮啶，从而增加萃取液中异嗪皮啶的含量；其中，所述h+型离子交换树脂是作为催化剂促进结合态异嗪皮啶的水解，所述含氯溶剂是作为萃取剂萃取游离态异嗪皮啶。因此，在水解原位萃取过程中，结合态异嗪皮啶的水解和游离态异嗪皮啶的萃取是同时完成的。同时，本发明提供的水解原位萃取方法又有效地避免了水解与萃取两步操作的繁冗，节省操作工序和溶剂的使用量，生产成本低，异嗪皮啶得率高。此外，所述水解原位萃取在封闭条件下进行，无污染，溶剂均可回收使用，所述h+型离子交换树脂使用后经再生处理(与所述h+型离子交换树脂使用前进行的预处理一致，在此不再进行赘述)可以循环利用，便于工业规模化生产。
得到萃取液后，本发明分离出所述萃取液中的有机相，将所述有机相浓缩至干，采用第二乙醇水溶液对所得物料进行溶解，得到溶解液。本发明优选将所述萃取液静置分层，从而分离出有机相。本发明对于所述浓缩没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的浓缩的技术方案即可。在本发明中，所述第二乙醇水溶液的体积百分含量优选为20～30％，更优选为23～27％。在本发明中，以绝干质量计，所述有机相浓缩至干后所得物料与第二乙醇水溶液的质量比优选为1：(25～35)，更优选为1：30。
得到溶解液后，本发明采用大孔吸附树脂对所述溶解液进行富集，采用第三乙醇水溶液对富集后的大孔吸附树脂进行洗脱，去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。本发明对于所述大孔吸附树脂的种类及来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知种类的大孔吸附树脂的市售商品即可。在本发明中，所述大孔吸附树脂的型号优选包括hpd80、hpd100、hpd300、hpd5000、ab-8、d101、hpd-d、dm-130、ads-17、hpd826、ads-7或da-201。
在本发明中，所述大孔吸附树脂的型号及性质如下表所示：
大孔吸附树脂的型号及性质
在本发明中，所述大孔吸附树脂在使用前进行预处理，所述预处理的方法优选包括以下步骤：
将大孔吸附树脂在体积百分含量为90～95％的乙醇中浸泡8～12h，采用蒸馏水对浸泡后的大孔吸附树脂进行洗涤以去除残留的乙醇，氏漏斗过滤，磨口瓶封存22～26h平衡水分，得到预处理后的大孔吸附树脂待用。
在本发明中，所述富集过程中上样浓度优选为0.2～1.0mg/ml，更优选为0.3～0.8mg/ml。在本发明中，所述第三乙醇水溶液的体积百分含量优选为75～90％，更优选为80～85％。
在本发明中，所述富集和洗脱优选在封闭条件下进行，无污染，溶剂均可回收使用，便于工业规模化生产。本发明对于所述富集和洗脱的具体操作方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的富集和洗脱的技术方案即可。本发明优选将大孔吸附树脂灌柱，在封闭条件下，采用所得封闭柱对所述溶解液进行富集，然后采用所述第三乙醇水溶液对富集后的封闭柱进行洗脱。在本发明中，所述封闭柱的径高比优选为1：(18～22)，更优选为1:20；所述溶解液的体积优选为封闭柱体积的3～4倍，更优选为3.5倍；所述第三乙醇水溶液的体积优选为封闭柱体积的15～25倍，更优选为20倍。
本发明对于去除洗脱后所得洗脱液中溶剂的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的去除溶剂的技术方案即可，具体如减压蒸馏。在本发明中，所得洗脱液中的溶剂优选进行回收再利用，以降低生产成本。
去除所得洗脱液中的溶剂后，本发明优选将所得物料进行干燥，得到异嗪皮啶。在本发明中，所述干燥优选为真空干燥；在本发明中，所述真空干燥的温度优选为35～45℃，更优选为40℃；所述时间优选为5～7h，更优选为6h。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将自然风干后的刺五加根进行粉碎处理，得到粒径为70目的刺五加粉末，称取10.0g刺五加粉末(以绝干质量计)放入圆底烧瓶中，然后按刺五加粉末与乙醇水溶液的质量比为1：12计，加入体积百分含量为80％的乙醇水溶液，于85℃水浴中回流提取2h，继续重复进行提取2次，合并提取后所得物料，过滤，将得到的液体物料作为提取液；
对h+型离子交换树脂(型号为001*7)进行预处理，具体是采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水进行水洗；采用0.1mol/l的naoh溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；采用0.1mol/l的hcl溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；重复采用0.1mol/l的naoh溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性和采用0.1mol/l的hcl溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性的步骤，得到预处理后的h+型离子交换树脂；
将所述提取液与预处理后的h+型离子交换树脂1.0g和30ml1,2-二氯乙烷混合，在封闭条件下，于90℃水浴中回流进行水解原位萃取2h，得到萃取液；
将所述萃取液静置分层，分离出有机相，将所述有机相浓缩至干，然后按所得物料(以绝干质量计)与乙醇水溶液的质量比为1：30计，加入体积百分含量为25％的乙醇水溶液，使所述有机相浓缩至干后所得物料溶解，得到溶解液；
将大孔吸附树脂(型号为ab-8)在体积百分含量为95％的乙醇中浸泡10h，采用蒸馏水对浸泡后的大孔吸附树脂进行洗涤以去除残留的乙醇，氏漏斗过滤，磨口瓶封存24h平衡水分，将所得预处理后的大孔吸附树脂灌柱，在封闭条件下，采用所得封闭柱(径高比1：20，体积为11.8ml)对所述溶解液进行富集，所述富集过程中上样浓度为1.0mg/ml；然后采用体积百分含量为80％的乙醇水溶液(体积为封闭柱体积的20倍)对富集后的封闭柱进行洗脱，减压蒸馏去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。
测定提取液中异嗪皮啶的含量，计算得率；同时，计算按照实施例1中方法所得异嗪皮啶的得率。结果表明，以提取液中异嗪皮啶的得率为100％计，按照实施例1中方法得到的异嗪皮啶的得率为128.68％。这说明在水解原位萃取过程中，异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，转化为游离态异嗪皮啶，从而提高了异嗪皮啶的得率。对按照实施例1中方法所得异嗪皮啶进行纯度分析，结果表明，所得异嗪皮啶的纯度达33.5％。其中，所述异嗪皮啶的含量和纯度均是通过高效液相色谱检测并计算得出的，具体如图1所示。
按照对h+型离子交换树脂进行预处理的方法，将进行水解原位萃取后的h+型离子交换树脂进行再生。结果表明，将再生后的h+型离子交换树脂重复使用4次，水解效率为初次水解效率的86.52％。
实施例2
将自然风干后的刺五加根进行粉碎处理，得到粒径为60目的刺五加粉末，称取100.0g刺五加粉末(以绝干质量计)放入圆底烧瓶中，然后按刺五加粉末与乙醇水溶液的质量比为1：15计，加入体积百分含量为85％的乙醇水溶液，于75℃水浴中回流提取2.5h，继续重复进行提取2次，合并提取后所得物料，过滤，将得到的液体物料作为提取液；
对h+型离子交换树脂(型号为001*7)进行预处理，具体是采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水进行水洗；采用0.1mol/l的naoh溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；采用0.1mol/l的hcl溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；重复采用0.1mol/l的naoh溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性和采用0.1mol/l的hcl溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性的步骤，得到预处理后的h+型离子交换树脂；
将所述提取液与预处理后的h+型离子交换树脂1.0g和30ml1,2-二氯乙烷混合，在封闭条件下，于90℃水浴中回流进行水解原位萃取3.5h，得到萃取液；
将所述萃取液静置分层，分离出有机相，将所述有机相浓缩至干，然后按所得物料(以绝干质量计)与乙醇水溶液的质量比为1：25计，加入体积百分含量为30％的乙醇水溶液，使所述有机相浓缩至干后所得物料溶解，得到溶解液；
将大孔吸附树脂(型号为ab-8)在体积百分含量为95％的乙醇中浸泡10h，采用蒸馏水对浸泡后的大孔吸附树脂进行洗涤以去除残留的乙醇，氏漏斗过滤，磨口瓶封存24h平衡水分，将所得预处理后的大孔吸附树脂灌柱，在封闭条件下，采用所得封闭柱(径高比1：20，体积为11.8ml)对所述溶解液进行富集，所述富集过程中上样浓度为1.0mg/ml；然后采用体积百分含量为90％的乙醇水溶液(体积为封闭柱体积的20倍)对富集后的封闭柱进行洗脱，减压蒸馏去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。
测定提取液中异嗪皮啶的含量，计算得率；同时，计算按照实施例2中方法所得异嗪皮啶的得率。结果表明，以提取液中异嗪皮啶的得率为100％计，按照实施例2中方法所得异嗪皮啶的得率为142.74％。这说明在水解原位萃取过程中，异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，转化为游离态异嗪皮啶，从而提高了异嗪皮啶的得率。
对按照实施例2中方法所得异嗪皮啶进行纯度分析，结果表明，所得异嗪皮啶的纯度达34.2％。
按照对h+型离子交换树脂进行预处理的方法，将进行水解原位萃取后的h+型离子交换树脂进行再生。结果表明，将再生后的h+型离子交换树脂重复使用4次，水解效率为初次水解效率的88.22％。
实施例3
将自然风干后的刺五加根进行粉碎处理，得到粒径为70目的刺五加粉末，称取1000.0g刺五加粉末(以绝干质量计)放入中试圆底烧瓶中，然后按刺五加粉末与乙醇水溶液的质量比为1：10计，加入体积百分含量为85％的乙醇水溶液，于90℃水浴中回流提取2.5h，继续重复进行提取2次，合并提取后所得物料，过滤，将得到的液体物料作为提取液；
对h+型离子交换树脂(型号为001*7)进行预处理，具体是采用乙醇对h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水进行水洗；采用0.1mol/l的naoh溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；采用0.1mol/l的hcl溶液对所得h+型离子交换树脂进行浸泡处理12h，将所得h+型离子交换树脂采用蒸馏水洗至中性；重复采用0.1mol/l的naoh溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性和采用0.1mol/l的hcl溶液进行浸泡处理、蒸馏水洗至中性的步骤，得到预处理后的h+型离子交换树脂；
将所述提取液与预处理后的h+型离子交换树脂1.0g和30ml1,2-二氯乙烷混合，在封闭条件下，于80℃水浴中回流进行水解原位萃取2h，得到萃取液；
将所述萃取液静置分层，分离出有机相，将所述有机相浓缩至干，然后按所得物料(以绝干质量计)与乙醇水溶液的质量比为1：30计，加入体积百分含量为20％的乙醇水溶液，使所述有机相浓缩至干后所得物料溶解，得到溶解液；
将大孔吸附树脂(型号为ab-8)在体积百分含量为95％的乙醇中浸泡10h，采用蒸馏水对浸泡后的大孔吸附树脂进行洗涤以去除残留的乙醇，氏漏斗过滤，磨口瓶封存24h平衡水分，将所得预处理后的大孔吸附树脂灌柱，在封闭条件下，采用所得封闭柱(径高比1：20，体积为11.8ml)对所述溶解液进行富集，所述富集过程中上样浓度为1.0mg/ml；然后采用体积百分含量为80％的乙醇水溶液(体积为封闭柱体积的20倍)对富集后的封闭柱进行洗脱，减压蒸馏去除所得洗脱液中的溶剂，得到异嗪皮啶。
测定提取液中异嗪皮啶的含量，计算得率；同时，计算按照实施例3中方法所得异嗪皮啶的得率。结果表明，以提取液中异嗪皮啶的得率为100％计，按照实施例3中方法所得异嗪皮啶的得率为134.56％。这说明在水解原位萃取过程中，异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，转化为游离态异嗪皮啶，从而提高了异嗪皮啶的得率。
对按照实施例3中方法所得异嗪皮啶进行纯度分析，结果表明，所得异嗪皮啶的纯度达32.6％。
按照对h+型离子交换树脂进行预处理的方法，将进行水解原位萃取后的h+型离子交换树脂进行再生。结果表明，将再生后的h+型离子交换树脂重复使用4次，水解效率为初次水解效率的85.44％。
由以上实施例可知，本发明通过所述水解原位萃取，能够使异嗪皮啶与葡萄糖结合而成的苷类化合物，即结合态异嗪皮啶，全部转化为游离态异嗪皮啶，从而增加萃取液中异嗪皮啶的含量；其中，所述h+型离子交换树脂是作为催化剂促进结合态异嗪皮啶的水解，所述含氯溶剂是作为萃取剂萃取游离态异嗪皮啶。因此，在水解原位萃取过程中，结合态异嗪皮啶的水解和游离态异嗪皮啶的萃取是同时完成的。同时，本发明提供的水解原位萃取方法又有效地避免了水解与萃取两步操作的繁冗，节省操作工序和溶剂的使用量，生产成本低，异嗪皮啶得率高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。