技术简介：
本发明针对传统桑黄多糖提取法存在高温破坏活性、酶解操作复杂等问题，提出一种低温破壁-梯度浸提-混合醇沉淀的新工艺。通过冷冻粉碎、机械破壁降低细胞壁阻力，结合梯度温度浸提提高溶出效率，采用乙醇/正丁醇/甲醇混合沉淀有效去除杂质，最终获得高含量（97%）高纯度（95%）的桑黄多糖，显著提升药用价值。
关键词：桑黄多糖提取,低温破壁技术
本发明涉及天然产物的提取方法，尤其涉及一种桑黄多糖的提取方法。
背景技术：
：桑黄多糖是存在与桑黄中的一种活性物质，是一种螺旋状立体构形物，因此目前提取、提纯桑黄多糖的技术是水提醇沉法，即用大量的水在沸腾回流下长时间蒸煮桑黄原料，使桑黄多糖从细胞内溶解出来，然后加入乙醇，使多糖沉淀，然后过滤得到桑黄多糖。采用高温、高压处理桑黄虽然也能够从桑黄材料中提取出桑黄多糖，能够提高桑黄多糖的溶出度，增加多糖的回收率，但会破坏多糖的立体结构，使其失去活性。桑黄多糖大多存在于桑黄细胞内壁，被厚厚的、坚硬的桑黄细胞壁保护着，因此水很难透过细胞壁，浸入细胞内壁，把多糖溶出来。因此只有把桑黄细胞壁破坏掉，才能方便桑黄多糖的溶出。采用木瓜蛋白酶、果胶酶和纤维素酶来酶解破坏桑黄细胞壁，同时在超声波的强大剪切力下使桑黄细胞壁破裂，加速活性成分多糖的溶出。该工艺提取桑黄多糖得率高于热水浸提法。但超声波辅助复合酶法操作较为繁琐，且超声波的强大剪切力可能会破坏多糖的结构，且酶是一种蛋白质，其反应条件很严格，容易变质而失去活性，导致采用酶解法溶解细胞壁的溶解质量不稳定，使多糖的提取得率受到波动。技术实现要素：为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于本发明的目的之一采用如下技术方案实现：一种桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)取野生桑黄去除杂质后进行粉碎，粉碎至粒度为80-100目；(2)将上述步骤(1)中粉碎后的桑黄进行冷冻后得到冻干粉；(3)对步骤(2)得到的冻干粉进行机械破壁处理得到桑黄粉；(4)向经上述步骤(3)处理后的桑黄粉中加入水进行浸提，过滤后取滤液，减压浓缩得到水提物；(5)向上述步骤(4)的水提物中加入3-5倍体积的乙醇、正丁醇和甲醇的混合物进行沉淀、离心收集沉淀物；(6)将上述沉淀物用有机溶剂洗涤2-3次，干燥后即得桑黄多糖。进一步地，上述步骤(2)中的冷冻温度为-25～-18℃。进一步地，上述步骤(3)中在-15～-10℃下进行破碎。进一步地，上述步骤(3)中破壁处理后的粒子直径为20-30μm。进一步地，上述步骤(4)中浸提过程为在50-60℃浸提30-40min，70-80℃浸提70-90min，90-100℃浸提60-70min。进一步地，上述步骤(4)中桑黄粉和水的质量比为1:30-40。进一步地，上述步骤(5)中乙醇、正丁醇和甲醇的质量比为4：2-3：1-2。进一步地，上述步骤(6)中有机溶剂为丙酮。进一步地，上述步骤(6)中干燥温度为60-70℃。相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供了一种桑黄多糖的制备方法，采用低温破壁方法去除桑黄细胞壁，便于桑黄多糖的浸出，加入水后在梯度加热温度下进行浸提，提高桑黄多糖的含量，采用乙醇、正丁醇和甲醇的混合溶液进行沉淀，有效去除杂质，提高桑黄多糖的纯度，上述方法简便易于操作，进一步提高桑黄的药用价值。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。实施例1一种桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)取1kg野生桑黄去除杂质后用万能粉碎机粉碎至粒度为80目；(2)将上述步骤(1)中粉碎后的桑黄在-25℃冷冻后得到冻干粉；(3)对步骤(2)得到的冻干粉在-15℃环境下机械破壁处理，破碎后粒子直径为20μm；(4)向经上述步骤(3)处理后的桑黄粉中加入水进行浸提，桑黄粉和水的质量比为1:30，浸提过程为在50℃浸提40min，70℃浸提90min，90℃浸提70min，过滤后取滤液，减压浓缩得到水提物；(5)向上述步骤(4)中水提物中加入3倍体积的乙醇、正丁醇和甲醇的混合物进行沉淀、沉淀24h后离心收集沉淀物，其中乙醇、正丁醇和甲醇的用量比例为4：2：1；(6)将上述沉淀物用丙酮洗涤2次，60℃干燥至不含溶剂，即得桑黄多糖。实施例2一种桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)取1kg野生桑黄去除杂质后用万能粉碎机粉碎至粒度为90目；(2)将上述步骤(1)中粉碎后的桑黄在-20℃冷冻后得到冻干粉；(3)对步骤(2)得到的冻干粉在-12℃环境下机械破壁处理，破碎后粒子直径为25μm；(4)向经上述步骤(3)处理后的桑黄粉中加入水进行浸提，桑黄粉和水的质量比为1:35，浸提过程为在55℃浸提35min，75℃浸提80min，95℃浸提65min，过滤后取滤液，减压浓缩得到水提物；(5)向上述步骤(4)中水提物中加入4倍体积的乙醇、正丁醇和甲醇的混合物进行沉淀、沉淀24h后离心收集沉淀物，其中乙醇、正丁醇和甲醇的用量比例为4：3：2；(6)将上述沉淀物用丙酮洗涤3次，65℃干燥至不含溶剂，即得桑黄多糖。实施例3一种桑黄多糖的制备方法，包括以下步骤：(1)取1kg野生桑黄去除杂质后用万能粉碎机粉碎至粒度为100目；(2)将上述步骤(1)中粉碎后的桑黄在-18℃冷冻后得到冻干粉；(3)对步骤(2)得到的冻干粉在-10℃环境下机械破壁处理，破碎后粒子直径为30μm；(4)向经上述步骤(3)处理后的桑黄粉中加入水进行浸提，桑黄粉和水的质量比为1:40，浸提过程为在60℃浸提30min，80℃浸提70min，100℃浸提60min，过滤后取滤液，减压浓缩得到水提物；(5)向上述步骤(4)中水提物中加入5倍体积的乙醇、正丁醇和甲醇的混合物进行沉淀、沉淀24h后离心收集沉淀物，其中乙醇、正丁醇和甲醇的用量比例为4：3：1；(6)将上述沉淀物用丙酮洗涤3次，70℃干燥至不含溶剂，即得桑黄多糖。对比例1对比例1提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为，省去步骤(3)，将桑黄冻干粉直接加水进行浸提，其余均和实施例1相同。对比例2对比例2提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：浸提过程为50℃，浸提200min，其余均和实施例1相同。对比例3对比例3提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：浸提过程为70℃，浸提200min，其余均和实施例1相同。对比例4对比例4提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：浸提过程为90℃，浸提200min，其余均和实施例1相同。对比例5对比例5提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：浸提过程为70℃浸提90min，50℃浸提40min，90℃浸提70min，其余均和实施例1相同。对比例6对比例6提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：步骤(5)中加入3倍体积的乙醇进行沉淀，其余均和实施例1相同。对比例7对比例7提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：步骤(5)中加入3倍体积的正丁醇进行沉淀，其余均和实施例1相同。对比例8对比例8提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：步骤(5)中加入3倍体积的甲醇进行沉淀，其余均和实施例1相同。对比例9对比例9提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：省去步骤(5)中的正丁醇，加入3倍体积的乙醇和甲醇的混合液，其余均和实施例1相同。对比例10对比例10提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：省去步骤(5)中的甲醇，加入3倍体积的乙醇和正丁醇的混合液，其余均和实施例1相同。对比例11对比例11提供一种桑黄多糖的制备方法，和实施例1的区别为：省去步骤(5)中的乙醇，加入3倍体积的甲醇和正丁醇的混合液，其余均和实施例1相同。多糖含量的测定：采用硫酸-苯酚法测定桑黄多糖的含量：根据多糖在浓硫酸水解作用下产生单糖，并与苯酚发生显色反应的原理测定多糖浓度，以葡萄糖作为标准溶液，采用紫外可见分光光度计测量其在490nm处的吸收值，从而得出桑黄多糖的含量，并计算其纯度，结果如表1和表2所示。表1表2样品纯度/g实施例197实施例296实施例397对比例675对比例773对比例874对比例970对比例1069对比例1172由表1可以看出实施例1至3的桑黄多糖含量显著高于对比例1至5，对比例1不经过低温破碎，直接加水进行浸提，由于桑黄多糖大多存在于桑黄细胞内壁，水很难透过细胞壁，因此桑黄多糖溶出的较少，桑黄多糖的含量也就较低，对比例2至5调整了浸提过程，对应调整了浸提的温度和时间，可以看出，在保持浸提时间不变时，采用恒温浸提的方式桑黄多糖的含量明显低于本申请的实施例，将本申请浸提过程温度顺序调整后其桑黄多糖的含量也明显降低，说明本发明采用的浸提过程，温度梯度变化，提高桑黄多糖在水中的浸出率，进而提高桑黄多糖的含量。由表2可以看出，本发明实施例1至3的桑黄多糖的纯度均在95％以上，对比例6至11为调整了醇的组成，沉淀后得到桑黄多糖的纯度仅在70％左右，说明本发明采用乙醇、正丁醇和甲醇的混合溶液用来沉淀桑黄多糖，有效去除其中的杂质，提高桑黄多糖的纯度，进一步提高其药用价值。上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。当前第1页12