一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法与流程

技术特征：

1.一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：包括以下步骤：

a.实验试剂：RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒、PCR扩增酶的准备；

b.利用RNA提取试剂盒提取淋巴细胞样本RNA；

c.利用cDNA合成试剂盒将提取出的RNA样本反转录为cDNA；

d.将合成的cDNA样本通过多重PCR和巢式PCR扩增，多重PCR引物为；

e.对扩增后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定、测定其浓度。

2.根据权利要求1所述的一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：所述步骤a中：使用TIANGEN的RNA prep Pure Cell/Bacteria Kit培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒，严格按照说明书中的操作步骤进行淋巴细胞中RNA的提取。

3.根据权利要求1所述的一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：所述步骤b中：需对提取出的RNA进行浓度检测。

4.根据权利要求1所述的一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：所述步骤c中：利用Roche公司cDNA合成试剂盒将提取出的200ngRNA样本反转录为cDNA；

反转录体系为：

RNA 200ng

试剂盒中5或6二选一 2μL

ddH2O 补齐到13μL

在PCR仪中设定65℃×10分钟+4℃×2分钟；

将PCR产物取出，再依次加入：

在反应管中将试剂小心混匀，轻度离心后，在PCR仪中设定55℃×30分钟+85℃×5分钟。

5.根据权利要求1所述的一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：所述步骤d中：将完成的cDNA样本通过多重PCR和巢式PCR扩增；

1)PCR外套体系：

在PCR仪中设定95℃/15分钟+(94℃/30秒+55℃/30秒+72℃/90秒)×30次+72℃/10分钟；

2)PCR内套体系：

在PCR仪中设定95℃/15分钟+(94℃/30秒+62℃/30秒+72℃/60秒)×30次+72℃/10分钟。

6.根据权利要求1所述的一种构建人T淋巴细胞受体β链互补决定区CDR3文库的PCR引物和方法，其特征在于：所述步骤e中：对扩增后的PCR产物，利用1％的琼脂糖凝胶，在90V、100mA的电泳条件下跑电泳30分钟进行鉴定、测定其浓度。