一种莪术双环烯酮的制备方法与流程

本发明属于化学领域，涉及天然产物的分离纯化。

背景技术：

莪术内酯a、莪术内酯b、莪术双环烯酮是存在于莪术中的三种双环型倍半萜类化合物，其中，莪术内酯a、莪术内酯b为一对手性异构体。化学结构式如下。

由于上述三个化合物极性相似，现有的柱色谱虽然通过反复柱层析也能够获得纯度符合要求的单体，但是分离过程繁琐、回收率不高。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高速逆流色谱分离莪术内酯a、莪术内酯b、莪术双环烯酮的方法。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种制备莪术内酯a或莪术双环烯酮的方法，包括如下步骤：

步骤s1，hsccc样品制备：

取温郁金，粉碎，95％乙醇热回流提取，重复提取一次，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，再加3倍体积水进行稀释，脱脂棉过滤，收集滤液作为大孔树脂上样液。

用xda-1b大孔吸附树脂装柱，树脂径高比1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，拌样树脂质量为上样液对应生药质量的1/2，湿法装柱，拌树脂上样；先用5bv的30％乙醇以10bv/h的流速清洗，再用9bv的85％乙醇以10bv/h的流速洗脱并收集8-9bv洗脱液，浓缩至干，干燥保存，作为hsccc样品；

步骤s2，hsccc分离：

配制氯仿/甲醇/正丁醇/ph值为6.2的盐酸水溶液(体积比4:4:3:4)溶剂系统，具体配制方法为：将四种溶剂按比例混合，剧烈震荡后，静置使其完全分层，在漏斗中将上、下相分离，上相用作固定相，下相用作流动相。

分别取上相5ml和下相5ml混合，取200mg上述hsccc样品超声溶解在混合液中，作为高速逆流的样品溶液。

将两相溶剂体系中已超声脱气的上相泵入hsccc分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机转速达800r/min，顺时针旋转，待转速稳定后，以1.5ml/min流速泵入下相，分离温度为35℃；当流动相从主机口流出时，说明体系已达到流体动力学平衡，此时将已准备好的样品溶液注入hsccc仪器，同时开始采集数据，根据色谱图收集莪术内酯a或莪术双环烯酮对应的流份，浓缩干燥。

优选地，1kg药粉使用5l乙醇溶液热回流提取。

优选地，分离前12小时配制溶剂体系。

优选地，上相、下相用前超声半小时。

优选地，上相以20ml/min泵入hsccc分离管。

优选地，hsccc分离的检测波长为225nm。

有益效果：

本发明提供的方法不依赖于反复柱层析，仅使用一次大孔吸附树脂结合高速逆流色谱即可制备高纯度的莪术内酯a、莪术双环烯酮。

附图说明

图1为溶剂体系为氯仿/甲醇/正丁醇/ph值为6.2的盐酸水溶液(体积比4:4:3:4)的hsccc分离图；图2为溶剂体系为氯仿/甲醇/正丁醇/水(体积比4:4:3:4)的hsccc分离图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验仪器和材料

温郁金curcumawenyujiny.h.chenetc.ling购自杭州国新医药药材有限公司，产地浙江瑞安，经鉴定为温郁金curcumawenyujiny.h.chenetc.ling的干燥根茎。

gs10a型高速逆流色谱仪(hsccc，北京艾美林科技)、多层聚四氟乙烯螺旋管(直径2.3mm，分离体积230ml，β值为0.5-0.8)、tbp泵(上海同田生物技术)。

二、实验方法和结果

1、hsccc样品制备

取温郁金，粉碎，95％乙醇热回流提取2h(1kg药粉使用5l乙醇溶液)，重复提取一次，合并提取液，减压回收乙醇至无醇味，再加3倍体积水进行稀释，脱脂棉过滤，收集滤液作为大孔树脂上样液。用xda-1b大孔吸附树脂装柱，树脂径高比1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，拌样树脂质量为上样液对应生药质量的1/2，湿法装柱，拌树脂上样；先用5bv的30％乙醇以10bv/h的流速清洗，再用9bv的85％乙醇以10bv/h的流速洗脱并收集8-9bv洗脱液，浓缩至干，干燥保存，作为hsccc样品。

2、hsccc分离

分离前12小时配制氯仿/甲醇/正丁醇/ph值为6.2的盐酸水溶液(体积比4:4:3:4)溶剂系统，具体配制方法为：将四种溶剂按比例混合，剧烈震荡后，静置12小时使其完全分层，在漏斗中将上、下相分离，上相用作固定相，下相用作流动相，用前超声半小时。

分别取上相5ml和下相5ml混合，取200mg上述hsccc样品超声溶解在混合液中，作为高速逆流的样品溶液。

将两相溶剂体系中已超声脱气的上相(固定相)以20ml/min的流速泵入hsccc分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机转速达800r/min，顺时针旋转，待转速稳定后，以1.5ml/min流速泵入下相(流动相)，分离温度为35℃，检测波长为225nm。当流动相从主机口流出时，说明体系已达到流体动力学平衡，此时将已准备好的10ml样品溶液注入hsccc仪器，同时开始采集数据，根据色谱图收集目标成分，色谱图如图1所示。

分别将莪术内酯a、莪术双环烯酮色谱峰对应的洗脱流份浓缩至干得到莪术内酯a、莪术双环烯酮，hplc纯度分别为98.3％、98.5％。

高速逆流色谱中，溶剂体系的选择至关重要。上述方法中，若使用纯水，即溶剂体系为氯仿/甲醇/正丁醇/水(体积比4:4:3:4)，则莪术内酯a、莪术内酯b、莪术双环烯酮三个化合物共同洗脱，无法分离。色谱图如图2所示。

综上可见，本发明提供的方法不依赖于反复柱层析，仅使用一次大孔吸附树脂结合高速逆流色谱即可制备高纯度的莪术内酯a、莪术双环烯酮。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种莪术双环烯酮的制备方法，包括HSCCC样品制备(XDA‑1B大孔吸附树脂富集目标成分)和HSCCC分离，HSCCC分离的溶剂体系为氯仿/甲醇/正丁醇/pH值为6.2的盐酸水溶液(体积比4:4:3:4)。本发明提供的方法不依赖于反复柱层析，仅使用一次大孔吸附树脂结合高速逆流色谱即可制备高纯度的莪术内酯A、莪术双环烯酮。

技术研发人员：谷阳
受保护的技术使用者：谷阳
技术研发日：2018.08.15
技术公布日：2019.01.04