技术特征:
技术总结
本发明公开了一种羧肽酶B分泌表达的方法,所述方法包括如下步骤:(1)以信号肽OmpA、PelB、Endoxylanase和OmpT序列为出发序列,分别进行定点突变;(2)制备核苷酸序列SDB‑pCPB‑6×His;(3)制备重组表达载体;(4)将重组表达载体转化至宿主大肠杆菌E.coli BL21并诱导表达pCPB;(5)酶切上述pCPB并纯化CPB。本发明通过对信号肽的改造,能够将羧肽酶原B直接分泌到培养基中,相比于胞内和周质表达,不需要破碎细胞,回收与纯化更能容易操作。另外,培养基中空间足够大,利于重组蛋白的过量表达。
技术研发人员:张梁;於瑞梅;辛瑜;顾正华;李由然;丁重阳;石贵阳
受保护的技术使用者:江南大学
技术研发日:2018.09.07
技术公布日:2019.01.04