一种鉴别鲜食水果是否经过检疫辐照的方法与流程

本发明涉及一种鉴别鲜食水果是否经过检疫辐照的方法，属于果蔬鉴别
技术领域：
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背景技术：
：我国是鲜食水果的生产和进出口大国，年进口量约450万吨，出口量也有400万吨。由于产品的特殊性，鲜活水果携带昆虫等有害生物的风险极高，极易导致外来生物入侵问题，因而是国际社会和各国检疫部门关注的焦点。为保证有害生物不随国际贸易传播，根据国际惯例，在国际贸易中必须对可能携带有害生物的产品实施检疫处理措施。传统对于水果等鲜活植物产品的处理技术主要以熏蒸处理为主。熏蒸处理是指借助于熏蒸剂气体，在可以密闭的空间内经过一定时间将有害生物杀灭的技术或方法。使用熏蒸剂溴甲烷进行熏蒸是国际上最为通用的处理技术，但是由于溴甲烷对臭氧层的破坏作用，根据《蒙特利尔议定书》，必须逐步淘汰。为此，国际社会开发了辐照处理技术作为溴甲烷熏蒸的替代技术。辐照处理是使用高能射线导致有害昆虫不育的处理技术。辐照处理技术可以使用钴源释放的伽马射线、高能x光或高能电子束作为能源，使用的剂量范围一般为100-300gy，其具有清洁、快速、适用于冷藏水果等特点。目前，辐照处理技术在实蝇的检疫处理中的研究和应用最为成熟，国际植物保护公约组织(ippc)颁布了多种实蝇辐照处理剂量的国际标准，并正在审议将150gy作为实蝇辐照处理的通用剂量。辐照处理常常以阻止害虫发育和繁殖作为控制目标，因此，与其他处理方法的最大区别就是处理后有害生物仍继续存活，常常能在口岸检疫查验过程中发现活虫。为了保证国门生物安全，需要判断该批水果是否经过辐照处理，以及是否被处理了足够剂量，因此，需要开展鲜食水果辐照后的检测技术研究。目前，彗星电泳法是辐照食品的通用检测方法，但其是否能用于检测检疫辐照后鲜食水果还存在疑问辐照不仅可以被用于检疫用途，目前更多的是被用于食品加工用途，用来杀虫灭菌。因此，目前虽然还缺乏辐照后鲜食水果的检测方法，但是针对辐照后的食品，已有很多检测方法，包括物理方法、化学方法和生物方法等，当然目前尚不存在某一种方法能够判别所有类别的食品是否经过辐照。由于高能射线辐照会引发基因组dna断裂，产生大量碎片，因此可以通过电泳后，检测基因组dna是否存在拖尾(“彗星”尾部)的方法判定产品是否经过辐照，通过测量“彗星”拖尾的长度、密度等参数可进一步进行定量分析，这就是dna彗星电泳法(dnacometassay)。目前的研究表明，dna彗星电泳法可以对马铃薯、小麦、黄豆、杏仁、杏脯、冷冻鸡肉、新鲜鸡肉、冷冻鳕鱼片、冰鲜鱼片、花椒、桂皮等多种食品是否经过辐照处理进行检测。但使用dna彗星电泳法检测鲜食水果是否经过检疫辐照处理还有一些疑问，主要是食品辐照使用的照射剂量较高，一般为1000gy以上；水果检疫辐照使用的剂量较低，一般不超过300gy；剂量越高，对dna的损伤越大，越能够观察到“彗星”拖尾。技术实现要素：为了解决上述的缺点和不足，本发明的一个目的在于提供一种鉴别鲜食水果是否经过检疫辐照的方法。为了达到以上目的，本发明提供了一种鉴别鲜食水果是否经过检疫辐照的方法，其中，所述方法包括：将未经辐照处理的水果的种子及待测水果的种子分别进行dna彗星电泳法检测，若检测结果显示二者的拖尾长度无显著差异，则表明所述待测水果为未经辐照处理的水果；若检测结果显示二者的拖尾长度存在显著差异，则表明所述待测水果为经辐照处理后的水果。根据本发明具体实施方案，在所述的方法中，本发明所述“显著差异”为统计学概念，其判断标准为：两组样品至少三次重复实验的平均值和标准差经统计分析p<0.05即为二者存在显著性差异，反之，则二者无显著差异。根据本发明具体实施方案，在所述的方法中，经辐照处理后的水果的辐照剂量为50-500gy。根据本发明具体实施方案，在所述的方法中，经辐照处理后的水果的辐照剂量为50-300gy。根据本发明具体实施方案，在所述的方法中，经辐照处理后的水果为于室温下存储3周以内的水果。根据本发明具体实施方案，在所述的方法中，所述鲜食水果包括苹果、脐橙、鸭梨、蜜桔及油桃。根据本发明具体实施方案，在判断所述待测水果为经辐照处理后的水果后，该方法还包括对该待测水果的辐照剂量进行定量检测的操作，具体包括：对经不同辐照剂量辐照处理的水果种子进行dna彗星电泳法检测，测得所述水果种子的拖尾长度；以所述不同辐照剂量为横坐标，以所述水果种子的拖尾长度为纵坐标做二者的线性关系曲线图；再对待测水果的种子进行dna彗星电泳法检测，测得该待测水果的种子的拖尾长度，将该拖尾长度代入所述线性关系曲线中，计算得到所述待测水果的辐照剂量。根据本发明具体实施方案，所用dna彗星电泳法为常规方法，本领域技术人员可以根据已有的dna彗星电泳法进行操作，只要保证可以实现本发明的目的即可。本发明所提供的该方法可以鉴别鲜食水果是否经过检疫辐照并可对待测样品的辐照剂量进行定量测定，同时该方法使用样品少、测量简单、准确性好；此外，本发明所提供的该方法可对辐照处理后3周以内(植物检疫证书的有效期是3周)的水果进行检测并可鉴别该水果是否经辐照处理，从而可以方便地在口岸使用该方法判断进口水果是否经过了足量的检疫辐照处理。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1a为本发明实施例1中对未辐照的苹果进行dna彗星电泳法进行检测所得的结果图；图1b为本发明实施例1中对经300gy辐照剂量辐照处理的苹果进行dna彗星电泳法进行检测所得的结果图；图2为本发明实施例4中所提供的在0-500gy间的辐照剂量和样品“彗星”拖尾长度之间的线性关系示意图。具体实施方式为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合以下具体实施例对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。实施例1本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的苹果和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果(苹果辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者结果图分别如图1a及图1b所示，二者拖尾长度的平均数据如下表1所示。表1样品拖尾长度(μm)未辐照的苹果24.8±3.9a300gy辐照的苹果25.3±3.4a注：上述结果为三次独立分析的平均值，相同小写字母表示无统计性差异。从表1中可以看出，未辐照的苹果和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果二者的拖尾长度无显著差异，表明对整个苹果进行dna彗星电泳法进行检测无法判断其是否经辐照处理。实施例2本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的苹果果肉和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果果肉(苹果辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表2所示。表2样品拖尾长度(μm)未辐照的苹果果肉25.1±2.8a300gy辐照的苹果果肉24.5±3.7a注：上述结果为三次独立分析的平均值，相同小写字母表示无统计性差异。从表2中可以看出，未辐照的苹果果肉和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果果肉二者的拖尾长度无显著差异，表明对苹果果肉进行dna彗星电泳法进行检测无法判断苹果是否经辐照处理。实施例3本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的苹果种子和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果种子(苹果辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表3所示。表3样品拖尾长度(μm)未辐照的苹果种子4.3±1.1a300gy辐照的苹果种子23.2±2.9b注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表3中可以看出，未辐照的苹果种子和经300gy辐照剂量辐照处理的苹果种子二者的拖尾长度存在显著差异，表明对苹果种子进行dna彗星电泳法进行检测可以判断苹果是否经辐照处理。实施例4本实施例首先采用dna彗星电泳法分别对未辐照的苹果种子和经不同辐照剂量(如100gy、200gy、300gy、400gy及500gy)辐照处理的苹果种子(苹果辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得该些样品的拖尾长度的平均数据如下表4所示。表4样品拖尾长度(μm)未辐照的苹果种子4.3±1.1100gy辐照的苹果种子12.5±1.8200gy辐照的苹果种子17.7±1.9300gy辐照的苹果种子23.2±2.9400gy辐照的苹果种子32.9±3.4500gy辐照的苹果种子38.4±4.1注：上述结果均为三次独立分析的平均值。以不同辐照剂量为横坐标，以苹果种子的拖尾长度为纵坐标做二者的关系曲线图；如图2所示，从图2中可以看出，在0-500gy间的辐照剂量和样品“彗星”拖尾长度存在线性关系，该线性关系为：y＝0.0678x+4.5571，这表明本发明所提供的该方法可用于苹果辐照剂量的定量检测。再对待测苹果的种子进行dna彗星电泳法检测，测得该待测苹果的种子的拖尾长度，为15.6±2.1μm，将该拖尾长度代入所述线性关系曲线y＝0.0678x+4.5571中，计算得到所述待测苹果的辐照剂量为163gy。实施例5本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的苹果种子和经200gy辐照剂量辐照处理后储存不同时间的苹果种子(苹果辐照后室温存储1天、1周、2周及3周)进行检测，检测所得各样品的拖尾长度的平均数据如下表5所示。表5注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表5中可以看出，采用本发明所提供的该方法对辐照后储存不同天数的苹果种子进行检测，发现该方法对于辐照后储存3周以内的苹果也有很好的检测效果，即采用本发明所提供的该方法可以鉴别辐照处理后储存3周以内的水果是否经过辐照处理。实施例6本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的脐橙种子和经200gy辐照剂量辐照处理的脐橙种子(脐橙辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表6所示。表6样品拖尾长度(μm)未辐照的脐橙种子8.2±3.0a200gy辐照的脐橙种子18.4±2.5b注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表6中可以看出，未辐照的脐橙种子和经200gy辐照剂量辐照处理的脐橙种子二者的拖尾长度存在显著差异，表明对脐橙种子进行dna彗星电泳法进行检测可以判断脐橙是否经辐照处理。实施例7本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的鸭梨种子和经200gy辐照剂量辐照处理的鸭梨种子(鸭梨辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表7所示。表7样品拖尾长度(μm)未辐照的鸭梨种子5.4±2.1a200gy辐照的鸭梨种子14.6±1.6b注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表7中可以看出，未辐照的鸭梨种子和经200gy辐照剂量辐照处理的鸭梨种子二者的拖尾长度存在显著差异，表明对鸭梨种子进行dna彗星电泳法进行检测可以判断鸭梨是否经辐照处理。实施例8本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的南丰蜜桔种子和经200gy辐照剂量辐照处理的南丰蜜桔种子(南丰蜜桔辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表8所示。表8样品拖尾长度(μm)未辐照的南丰蜜桔种子8.7±2.4a200gy辐照的南丰蜜桔种子19.5±3.2b注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表8中可以看出，未辐照的南丰蜜桔种子和经200gy辐照剂量辐照处理的南丰蜜桔种子二者的拖尾长度存在显著差异，表明对南丰蜜桔种子进行dna彗星电泳法进行检测可以判断南丰蜜桔是否经辐照处理。实施例9本实施例采用dna彗星电泳法分别对未辐照的油桃种子和经200gy辐照剂量辐照处理的油桃种子(油桃辐照后室温存储1天)进行检测，检测所得二者拖尾长度的平均数据如下表9所示。表9样品拖尾长度(μm)未辐照的油桃种子3.1±2.5a200gy辐照的油桃种子17.7±1.8b注：上述结果为三次独立分析的平均值，不同小写字母a、b表示存在统计性差异。从表9中可以看出，未辐照的油桃种子和经200gy辐照剂量辐照处理的油桃种子二者的拖尾长度存在显著差异，表明对油桃种子进行dna彗星电泳法进行检测可以判断油桃是否经辐照处理。当前第1页12