一种微生物显色剂及其制备方法、以及活菌数检测装置及其制作方法和检测方法与流程

本发明涉及微生物检测领域，特别涉及一种微生物显色剂及其制备方法、以及活菌数检测装置及其制作方法和检测方法。

背景技术：

目前,活菌数的常规检测方法,包括制样、培养、计数等环节;具体操作为:把样品制备为适当浓度的菌液后，再用合适的固体培养基把单个细菌培养成肉眼可见的单菌落，这些过程离不开实验室操作，并且培养时间需要48小时。

美国3m公司生产的petrifilm菌落总数测试片（以及国内生产的其他品牌的菌落总数测试片）,可用于测试样品活菌数，把固体培养基预制并涂抹在纸片或胶片上，使用时把制备好的菌液滴加在测试片上,然后压平,且在36℃恒温静置培养；由于测试片底色与菌落颜色色差较大，需要培养24小时就可以计数，一定程度上简化了培养环节的实验操作。

上述petrifilm菌落总数测试片的使用操作，仍存在以下不足之处：（1）制样环节针对物体表面和液体两类样品，要分别购买不同的采样耗材——采样滴管或采样棒，制样麻烦；（2）培养时间仍需24小时，对家庭消费者来说测试周期过长；（3）测试片容易被微生物污染，导致保质期短。

技术实现要素：

本发明的第一目的在于提供一种通过颜色变化反映细菌的代谢活性，从而检测样品活菌数的微生物显色剂。

本发明的第二目的在于提供一种操作简易、快速的微生物显色剂的制备方法。

本发明的第三目的在于提供一种检测简单、使用方便的活菌数检测装置。

本发明的第四目的在于提供一种检测简单，操作容易，耗时短的活菌数检测装置的制作方法。

本发明的第五目的在于提供一种将微生物检测操作简化，使之可以不依赖实验室条件，消费者在家里就可以方便地完成检测，而且测试周期短的活菌数检测装置的检测方法。

本发明的第一目的是这样实现的：

一种微生物显色剂，包括以下组份及其质量比：碳源和氧化还原指示剂，它们质量比为100~1000：1~5。

本发明的上述第一目的还可以采用以下技术措施解决：

进一步地，还包括有氮源和增稠剂，所述碳源、氧化还原指示剂、氮源和增稠剂的质量比为100~1000：1~5：0.1~5000：0.1~5000。

进一步地，所述碳源为葡萄糖或牛肉膏，所述氧化还原剂为刃天青或亚甲蓝的一种或两种组合，所述氮源为蛋白胨或酵母提取物，所述增稠剂为琼脂或卡拉胶或淀粉或聚丙烯酸钠。

本发明的第二目的是这样实现的：

一种微生物显色剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤一，配制培养基：称取碳源，加入蒸馏水煮沸溶解；

步骤二，冷却培养基，控制培养基的温度在60-70℃之间，然后加入氧化还原指示剂，制得微生物显色剂；

步骤三，对微生物显色剂进行无菌包装，然后冷却到室温。

本发明的上述第二目的还可以采用以下技术措施解决：

进一步地，所述步骤一中还可以加入氮源和增稠剂。

进一步地，所述微生物显色剂经过冷冻干燥后形成微生物显色剂粉末。

本发明的第三目的是这样实现的：

一种活菌数检测装置，包括微生物显色剂、检测部和手持部，所述检测部和手持部连接，检测部吸附有微生物显色剂。

本发明的上述第三目的还可以采用以下技术措施解决：

进一步地，所述手持部还设置有用于润湿检测部的储液腔，所述储液腔储存有无菌缓冲液。

本发明的第四目的是这样实现的：

一种活菌数检测装置的制作方法，包括如下步骤：

步骤一，将检测部浸泡入微生物显色剂中，润湿后取出；

步骤二，将上述润湿后的检测部冷冻干燥；

步骤三，将活菌数检测装置进行无菌密封包装。

本发明的第五目的是这样实现的：

一种活菌数检测装置的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，将活菌数检测装置的检测部浸泡在被检溶液中润湿或将活菌数检测装置的检测部，采用无菌缓冲液润湿后擦拭被检物的表面；

步骤二，使活菌数检测装置在25-37℃的范围内反应2-6小时；

步骤三，将检测部的颜色与液体活菌数比色卡或物体活菌数比色卡的颜色进行比对，读取被检溶液或被检物的菌落总数值。

本发明的有益效果如下：

（1）本发明配比微生物代谢所需的营养物质以及指示代谢反应的氧化还原指示剂，通过氧化还原指示剂的变色来反映细菌的代谢活性从而检测样品活菌数，而不是直接数菌落，操作简单而且检测时间短。

（2）本发明微生物显色剂，制备方法简易、快速，而且微生物显色剂可以制备成粉末状态，便于存储。

（3）本发明活菌数检测装置，制备方法简单，而且活菌数检测装置通过无菌密封包装后可以进行存储，无需重新制作，用户使用更方便。

（4）本发明活菌数检测装置，包括检测部和手持部，上述检测部吸附有微生物显色剂，使用时，用户握住手持部，将检测部浸泡在被检溶液中润湿或将检测部采用无菌缓冲液润湿后擦拭被检物表面，即可采集到微生物，操作简单，使用方便。

（5）本发明活菌数检测装置的制作方法，用户采集到微生物，经过反应后，导致检测部颜色产生变化，用户根据检测部的颜色与相应的比色卡的颜色进行比对，从而获知被检物的菌落总数值，检测简单，操作容易，耗时短，大大提高活菌数检测装置的实用性。

（6）本发明活菌数检测装置的检测方法，将微生物检测操作简化，使之可以不依赖实验室条件，消费者在家里就可以方便地完成检测，而且测试周期短，整个检测只需2~6小时就可以读取结果，检测周期比常规实验室方法缩短8倍。

附图说明

图1为本发明实施例一的活菌数检测装置的示意图。

图2为本发明实施例二的活菌数检测装置的示意图。

图3为本发明液体活菌数比色卡示意图。

图4为本发明物体活菌数比色卡示意图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

一种微生物显色剂，包括以下组份及其质量比：碳源、氧化还原指示剂、氮源和增稠剂，它们之间的质量比为100~1000：1~5：0.1~5000：0.1~5000。

其中，所述碳源为葡萄糖或牛肉膏，所述氧化还原剂为刃天青或亚甲蓝的一种或两种组合，所述氮源为蛋白胨或酵母提取物，所述增稠剂为琼脂或卡拉胶或淀粉或聚丙烯酸钠。

一种微生物显色剂的制备方法：

步骤一：配制培养基：称取牛肉膏0.3g、蛋白胨1g、氯化钠0.5g、琼脂0.03g，加蒸馏水煮沸溶解；

步骤二：冷却培养基，控制培养基的温度在65度，加入0.05%（m/m）刃天青溶液2ml，制得微生物显色剂溶液；

步骤三：趁热对微生物显色剂进行无菌包装，然后冷却到室温。

为了便于保存，可以将所述微生物显色剂溶液经过冷冻干燥后形成微生物显色剂粉末，从而实现便于存储的目的。

一种活菌数检测装置及其制作方法：

实施例一，结合图1所示，一种活菌数检测装置3，包括微生物显色剂、检测部1和手持部2，所述检测部1为亲水且吸附性强的棉拭子，手持部2为木棒，所述棉拭子缠绕在木棒一端部，检测部1吸附有微生物显色剂。

实施例二，结合图2所示，所述活菌数检测装置的手持部1还设置有用于润湿检测部的储液腔11，所述储液腔11储存有无菌缓冲液，所述无菌缓冲液为纯净水。

一种活菌数检测装置的制作方法：

步骤一：将检测部1浸泡入微生物显色剂溶液中，润湿后取出；

步骤二：将润湿后的检测部1冷冻干燥；

步骤三：将活菌数检测装置3进行无菌密封包装。

制作液体活菌数比色卡和制作物体表面活菌数比色卡：

结合图3所示，一种液体活菌数比色卡制备方法：

步骤一：配制营养肉汤100ml于250ml锥形瓶中，接种大肠杆菌斜面培养物3环；

步骤二：在37℃中培养24小时，制得原菌液；

步骤三：将原菌液按10倍梯度稀释，分别得到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5稀释梯度菌液；

步骤四：用倾注平板法检测原菌液以及梯度稀释菌液的活菌数，完成标准浓度菌液的标定，测得原菌液及各稀释梯度菌液的活菌数分别为10000cfu/ml、1000cfu/ml、100cfu/ml、10cfu/ml、1cfu/ml、0.1cfu/ml；

步骤五：将活菌数检测装置3的检测部1分别浸泡在不同活菌数的菌液中1秒，然后取出；

步骤六：将活菌数检测装置3在25℃范围内反应3小时，然后拍照检测部1并提取检测部1颜色值；

步骤七：将浸泡在不同活菌数的菌液中的检测部1的颜色与其菌落数对应起来，制作不同颜色的比色卡。

结合图4所示，一种物体表面活菌数比色卡制备方法：

步骤一：接种金黄色葡萄球菌到斜面营养琼脂斜面培养基；

步骤二：在37℃中培养24小时，制得斜面培养物；

步骤三：配制含淀粉0.5%、氯化钠0.5%的淀粉盐溶液；

步骤四：用2ml淀粉盐溶液将金黄色葡萄球菌斜面培养物洗下，然后补充淀粉盐溶液至100ml，得原菌液；

步骤五：将原菌液用淀粉盐溶液按10倍梯度稀释，分别得到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5梯度稀释菌液；

步骤六：裁2.5cm×4cm哑面pvc塑料片36片，6片一组，6组分别浸泡6个浓度梯度的菌液中1分钟，然后取出晾干；

步骤七：每组菌片分别取3片用无菌生理盐水润湿的无菌棉拭子擦拭，然后每个棉拭子分别投入10ml无菌生理盐水中，振荡1分钟，然后取1ml振荡液用倾注平板法检测活菌数，完成标准菌片的标定：6组菌片的活菌数分别等于10000cfu/dm²、1000cfu/dm²、100cfu/dm²、10cfu/dm²、1cfu/dm²、0.1cfu/dm²

步骤八：将活菌数检测装置的检测部用纯净水润湿并均匀擦拭各标准菌片，每组菌片测试3片；

步骤九：活菌数检测装置3在25℃温度范围内反应3小时，然后拍照检测部1，提取检测部1的颜色值，然后将擦拭在不同活菌数的菌片中的检测部1颜色与其菌落数对应起来，制作不同颜色的比色卡。

一种微生物显色剂对活菌数进行检测的方法：

步骤一：将活菌数检测装置3的检测部1浸泡在被检溶液中润湿；

步骤二：将活菌数检测装置3在25-37℃的范围内反应2-6小时；

步骤三：将检测部1的颜色与液体活菌数比色卡的颜色进行比对，读取被检溶液的菌落总数值。

以检测直饮水机水样的活菌数为例，其方法如下：

步骤一：用干净一次性塑料杯从直饮水机取一杯水；

步骤二：手持活菌数检测装置3的手持部2，将检测部1浸入水流中润湿，然后取出；

步骤三：将活菌数检测装置3在30℃的温度下反应3小时；

步骤四：将检测部的颜色与液体活菌数比色卡的颜色进行，若发现检测部1的颜色与活菌数为10cfu/ml的颜色相同，即可判断出直饮水机水样的活菌数为10cfu/ml。

检测物体表面活菌数的方法：

步骤一：将活菌数检测装置3的检测部1采用无菌纯净水润湿后擦拭被检物的表面；

步骤二：将活菌数检测装置3在25-37℃的范围内反应2-3小时；

步骤三：将检测部1的颜色与物体表面活菌数比色卡的颜色进行比对，读取被检物的菌落总数值。

实施例4，检测门把手表面的活菌数：

步骤一：手持活菌数检测装置3的手持部2，用无菌纯净水润湿检测部1；

步骤二：用检测部均匀擦拭门把手上10dm²的表面积；

步骤三：将活菌数检测装置3在30℃的温度下反应3小时；

步骤四：将检测部1的颜色与物体活菌数比色卡的颜色进行，发现检测部1的颜色与活菌数为100cfu/dm²的颜色相同，即可判断出门把手表面的活菌数为100cfu/dm²。

检测原理：

本发明配比微生物代谢所需的营养物质以及指示代谢反应的氧化还原指示剂，通过氧化还原指示剂的变色来反映细菌的代谢活性从而检测样品活菌数，而不是直接数菌落，操作简单而且检测时间短。