一种新型非天然抗氧化肽的制备方法与流程

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种新型非天然抗氧化肽的制备方法。

背景技术：

牛磺酸是一种含硫的非蛋白氨基酸，具有广泛的生理活性，能调节机体正常生理活动，如促进婴幼儿脑组织和智力发育、增强细胞抗氧化能力。牛磺酸的分布十分广泛，海洋生物，如海鱼、贝类，如墨鱼、章鱼、虾、牡蛎、海螺、蛤蜊等体内都含有丰富的牛磺酸。牛磺酸在生物体内以游离形式存在，不参与蛋白质合成。通过化学合成的方法可以将牛磺酸与其他氨基酸反应形成新型的非天然多肽，可赋予天然蛋白肽所不具有的生物活性。该领域具有广阔的发展前景。

来自血蛤的三肽trp-pro-pro具有显著的抗氧化活性和抗癌活性。通过化学合成的方法，将氨基酸trp，pro和牛磺酸连接成三肽或四肽，益于合成具有抗氧化或抗癌活性更高的多肽。

现有公开号为cn101230089a的中国发明专利，公开了一种甘氨酰组氨酰赖氨酸的固相合成方法；主要解决其分子中含有2个碱性氨基酸导致人工合成困难的技术问题；然而，该发明存在氨基去保护效率低、多肽合成纯度低的缺点。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种新型非天然抗氧化肽的制备方法，将牛磺酸与血蛤三肽trp-pro-pro反应得到具有抗氧化活性或抗癌活性增强的新型多肽，多肽合成过程中利用氨基脱保护剂以及多肽合成促进剂，实现氨基去保护完全、多肽合成纯度高的目的；同时解决了目前仅通过酶解蛋白制备活性肽过程中盲目和分离困难的缺点，具有广泛的应用前景。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

通过化学合成的方法，将三肽trp-pro-pro与牛磺酸反应得到具有不同结构的三肽或四肽，获得抗氧化活性增强的新型非天然多功能肽。

基于氨基酸之间不同的连接顺序，得到以下新合成的三肽或四肽：

合成结构为tau-trp-pro的三肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic/hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在42-44℃下振荡反应2-3h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-trp(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-trp(trt)-pro(boc)-wangresin去fmoc基团得到h-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-tau-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应0.5-2.5h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-tau-trp-pro-oh。

其中，步骤s1中fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2-3倍；活化剂为hobt和dic或hobt和hbtu的混合物，活化剂的摩尔数为树脂的3-4倍；

去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：10-25vol％哌啶、1-5wt％叔丁醇钾和0.1-3wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.1-1.0％和1-5％；(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的特殊存在，能够使多肽分子活化舒展，加速多肽分子与牛磺酸进行连接反应，且抑制消旋或副产物的形成，提高多肽合成的收率和纯度。

合成结构为trp-tau–pro的三肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic/hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在42-44℃下振荡反应2-3h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-tau-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-trp(boc)-tau-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应0.5-2.5h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-tau–pro-oh。

其中，步骤s1中fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2-3倍；活化剂为hobt和dic或hobt和hbtu的混合物，活化剂的摩尔数为树脂的3-4倍；

去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：10-25vol％哌啶、1-5wt％叔丁醇钾和0.1-3wt％hobt；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.1-1.0％和1-5％。

合成结构为tau-trp-pro-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic/hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在42-44℃下振荡反应2-3h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-tau-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应0.5-2.5h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-tau-trp-pro-pro-oh。

其中，步骤s1中fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2-3倍；活化剂为hobt和dic或hobt和hbtu的混合物，活化剂的摩尔数为树脂的3-4倍；

去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：10-25vol％哌啶、1-5wt％叔丁醇钾和0.1-3wt％hobt；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.1-1.0％和1-5％。

合成结构为trp-tau-pro-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic/hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在42-44℃下振荡反应2-3h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-trp(boc)-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应0.5-2.5h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-tau-pro-pro-oh。

其中，步骤s1中fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2-3倍；活化剂为hobt和dic或hobt和hbtu的混合物，活化剂的摩尔数为树脂的3-4倍；

去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：10-25vol％哌啶、1-5wt％叔丁醇钾和0.1-3wt％hobt；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.1-1.0％和1-5％。

合成结构为trp-pro-tau-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic/hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在42-44℃下振荡反应2-3h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-tau-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，25-45℃反应30-60min，得到fmoc-trp(boc)-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应0.5-2.5h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-pro-tau-pro-oh。

其中，步骤s1中fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2-3倍；活化剂为hobt和dic或hobt和hbtu的混合物，活化剂的摩尔数为树脂的3-4倍；

去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：10-25vol％哌啶、1-5wt％叔丁醇钾和0.1-3wt％hobt；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.1-1.0％和1-5％。

本发明中一些常用的缩写表示的含义如下：

fmoc：芴甲氧羰基；

wangresin：王树脂；

boc：叔丁氧羰基；

trt：三苯甲基；

hobt：1-羟基苯并三唑；

dic：n,n'-二异丙基碳二亚胺；

hbtu：o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯；

dmf：n,n-二甲基甲酰胺；

tfa：三氟乙酸；

trp：色氨酸；

pro：脯氨酸；

tau：牛磺酸。

本发明的有益效果为：

1)本发明将牛磺酸与血蛤三肽trp-pro-pro反应得到包括tau-trp-pro，trp-tau–pro，tau-trp-pro-pro，trp-pro-tau-pro，trp-tau-pro-pro结构的多肽；通过对这些新型多肽进行活性筛选，有利于获得抗氧化活性或抗癌活性增强的新型多肽；且多肽合成过程中利用氨基脱保护剂以及多肽合成促进剂，实现氨基去保护完全、多肽合成纯度高的目的；同时解决了目前仅通过酶解蛋白制备活性肽过程中盲目和分离困难的缺点，具有广泛的应用前景；

2)在多肽合成过程中，利用(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的特殊存在，使多肽分子活化舒展，加速多肽分子与牛磺酸进行连接反应，且抑制消旋或副产物的形成，提高多肽合成的收率和纯度。

本发明采用了上述技术方案提供范文，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。

附图说明

图1为新型多肽对hepg-2和hek293细胞抗h2o2氧化损伤活性分析图；a)为hepg-2细胞；b)为hek293细胞。

附图标记说明：s1：trp-pro-tau-pro；s2：trp-tau-pro-pro；s3：trp-tau–pro；s4：tau-trp-pro；s5：tau-trp-pro-pro。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：

实施例1：

合成结构为tau-trp-pro的三肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin按比例混合，加入hobt和dic的活化剂，以dmf为溶剂在43℃下振荡反应2.5h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；其中，fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2.2倍；活化剂的摩尔数为树脂的3.4倍；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin(取树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫，则表明fmoc基团已去除)；然后加入fmoc-trp(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-trp(trt)-pro(boc)-wangresin去fmoc基团得到h-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-tau-trp(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应2h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-tau-trp-pro-oh。

其中，去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：23vol％哌啶、4.2wt％叔丁醇钾和1.6wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.56％和3.8％；(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的特殊存在，能够使多肽分子活化舒展，加速多肽分子与牛磺酸进行连接反应，且抑制消旋或副产物的形成，提高多肽合成的收率和纯度。

实施例2：

合成结构为trp-tau–pro的三肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在43℃下振荡反应2.5h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；其中，fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2.2倍；活化剂的摩尔数为树脂的3.4倍；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin(取树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫，则表明fmoc基团已去除)；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-tau-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-trp(boc)-tau-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应2h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-tau–pro-oh。

其中，去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：23vol％哌啶、4.2wt％叔丁醇钾和1.6wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.56％和3.8％。

实施例3：

合成结构为tau-trp-pro-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在43℃下振荡反应2.5h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；其中，fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2.2倍；活化剂的摩尔数为树脂的3.4倍；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin(取树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫，则表明fmoc基团已去除)；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-tau-trp(boc)-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应2h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-tau-trp-pro-pro-oh。

其中，去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：23vol％哌啶、4.2wt％叔丁醇钾和1.6wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.56％和3.8％。

实施例4：

合成结构为trp-tau-pro-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和dic的活化剂，以dmf为溶剂在43℃下振荡反应2.5h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；其中，fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2.2倍；活化剂的摩尔数为树脂的3.4倍；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin(取树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫，则表明fmoc基团已去除)；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-trp(boc)-tau-pro(trt)-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应2h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-tau-pro-pro-oh。

其中，去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：23vol％哌啶、4.2wt％叔丁醇钾和1.6wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.56％和3.8％。

实施例5：

合成结构为trp-pro-tau-pro的四肽，包括以下步骤：

s1.将fmoc-pro(boc)-oh与wangresin(王树脂)按比例混合，加入hobt和hbtu的活化剂，以dmf为溶剂在43℃下振荡反应2.5h，反应产物经过滤、dmf和乙醇洗涤后得到fmoc-pro(boc)-wangresin；其中，fmoc-pro(boc)-oh的摩尔数为树脂的2.2倍；活化剂的摩尔数为树脂的3.4倍；

s2.将步骤s1得到的fmoc-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(boc)-wangresin(取树脂用茚三酮显色剂验色，颜色为深蓝或蓝紫，则表明fmoc基团已去除)；然后加入fmoc-tau-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-tau-pro(boc)-wangresin；

s3.将步骤s2得到的fmoc-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-tau-pro(boc)-wangresin；然后加入fmoc-pro(trt)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin；

s4.将步骤s3得到的fmoc-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin，去fmoc基团得到h-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin，然后加入fmoc-trp(boc)-oh，再加入(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚，30℃反应45min，得到fmoc-trp(boc)-pro(trt)-tau-pro(boc)-wangresin；

s5.将步骤s4的产物，去fmoc基团，加tfa，振荡反应2h后过滤，产物分别用dmf和乙醇洗涤，冻干可得h-trp-pro-tau-pro-oh。

其中，去fmoc基团，采用脱保护剂组合为：23vol％哌啶、4.2wt％叔丁醇钾和1.6wt％hobt；哌啶在hobt的活化作用，以及叔丁醇钾适当的碱性作用下，更易去除氨基保护基，且去除效率高；

(s)-(+)-3-(1-萘氧基)-1-苯基-1-丙醇和乙二醇单苯醚的添加量分别为反应混合体系的质量百分比0.56％和3.8％。

实施例6：

对实施例1-5合成的几种新型多肽进行活性检测：检测细胞水平的抗氧化活性，利用人肝癌细胞hepg-2、人胚肾细胞hek293，开展新型多肽的细胞毒性及抗h2o2氧化损伤能力检测分析；采用浓度为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的多肽进行细胞培养实验，加h2o2浓度至1.0mm，以浓度为0.1mg/ml还原型谷胱甘肽(gsh)为阳性对照品，检测多肽抗h2o2氧化损伤能力，以细胞存活率表示细胞活性，检测结果如图1所示；

由图1可知，采用本发明合成的新型多肽对hepg-2及hek293细胞抗h2o2氧化损伤能力具有明显的加强作用，几种不同结构的多肽活性分别为tau-trp-pro-pro活性最佳，其次是tau-trp-pro、trp-tau–pro、trp-tau-pro-pro和trp-pro-tau-pro；同时，0.1mg/ml阳性对照品gsh培养下，hepg-2及hek293细胞存活率分别为62.1％及55.8％，与本发明合成的活性最佳的多肽相比，其细胞存活率分别为68.0％及64.7％，表明本发明合成的新型多肽具有较强的抗氧化活性。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。