MYB61基因在甘蓝型油菜粒色育种中的应用的制作方法

文档序号:20989729发布日期:2020-06-05 21:34阅读:来源:国知局

技术特征:

1.甘蓝型油菜转录因子myb61在甘蓝型油菜粒色育种中的应用,其特征在于,所述甘蓝型油菜转录因子myb61的核苷酸序列如seqidno:1所示。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述粒色育种为黄籽育种。

3.一种甘蓝型油菜的黄籽种子,其特征在于,所述黄籽种子通过筛选干扰myb61基因表达的甘蓝型油菜植株获得,所述myb61基因的核苷酸序列如seqidno:1所示。

4.一种甘蓝型油菜转录因子myb61的rnai片段,其特征在于,所述片段的核苷酸序列如seqidno:2所示。

5.权利要求4所述rnai片段构建的转基因表达载体。

6.权利要求5所述转基因表达载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)目的片段的克隆:针对权利要求5所述的rnai片段设计rnai引物,以甘蓝型油菜黑籽品系的cdna为模板,pcr扩增获得目的片段;

2)表达载体的构建:将获得的目的片段连接到pmd19-t载体上,转化大肠杆菌感受态细胞,菌液送样测序;测序正确的菌液抽提质粒和pfgc5941m质粒进行完全双酶切,分别回收目的片段和开环的pfgc5941m质粒骨架,用t4dna连接酶连接,获得重组质粒;

3)表达载体的鉴定:步骤2)获得的重组质粒再次转化大肠杆菌感受态细胞,提取质粒,测序,结果正确即为rnai-pfgc5941m转基因表达载体。

7.由权利要求5所述转基因表达载体转化的根癌农杆菌。

8.权利要求7所述的根癌农杆菌转染甘蓝型油菜获得的转基因种子。

9.权利要求5所述的转基因表达载体在甘蓝型油菜粒色育种中的应用。

10.权利要求7所述的根癌农杆菌在甘蓝型油菜粒色育种中的应用。


技术总结
本发明属于基因工程领域,具体涉及一种MYB61基因在甘蓝型油菜粒色育种中的应用。在构建MYB61基因的RNAi表达载体并成功转化甘蓝型油菜ZY821的基础上,以非转基因受体亲本ZY821和RNAi‑MYB61转基因的T3代家系为材料,分析其种子在发育过程中类黄酮及酚类化合物累积的动态变化规律和不同发育时期种皮中相关基因的差异表达模式。结果表明,MYB61基因可能通过参与调控种皮中不溶性原花色素及色素类物质的累积来影响种皮色泽的变化;且MYB61基因参与调控了类黄酮途径相关基因的表达,是该途径上的重要调控因子;MYB61基因是甘蓝型油菜粒色性状形成的调控基因之一。因此,MYB61基因可用于甘蓝型油菜粒色育种中。

技术研发人员:曲存民;李加纳;卢坤;魏丽娟;徐新福;唐章林;王瑞;梁颖;刘列钊
受保护的技术使用者:西南大学
技术研发日:2018.11.27
技术公布日:2020.06.05
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