本发明属于胶原蛋白纤维体加工技术领域，尤其涉及一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法。
背景技术：
我国是水产大国，水产品拥有广泛的国际市场，被农业部列为重点产业化开发项目。每年我国水产品总产量可达万吨，因此推动了水产品深加工技术的迅速发展，主要包括冷冻干制品、各种鱼糜制品、水产罐头及腌制品等。加工过程产生大量的下脚料，如鱼骨、鱼皮、鱼鳍及一些边角料，约占鱼体重量的30％～50％，其中废弃鱼骨在总废弃物中所占比例最高，约30％～60％。我国每年生产的鱼副产物中，下脚料大约可达到几十万吨，然而这些下脚料并没有得到很好的利用，每年约有万吨的下脚料作为废弃物被丢弃，这不仅造成了资源的浪费，也对环境造成了污染。因此对水产品下脚料的开发利用备受关注。
下脚料并不是废物，其中含有大量的蛋白质和钙盐，如骨骼中含有丰富的蛋白、多肽、氨基酸及钙、磷、镁、铁等物质；鱼鳞中富含胶原蛋白。其中蛋白质主要是胶原蛋白，约占20％-40％，同时，由于下脚料中脂质含量少，因此这样的化学组成比传统的皮类原料更适合于提取胶原蛋白。即可以有效的提高水产品加工的经济效益，同时也解决了口蹄疫、疯牛病可能带来的胶原蛋白安全问题。
技术实现要素：
本发明针对上述技术问题，提供了一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法。
本发明所采用的技术方案为：一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为1～3:1，搅拌，每2～4h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于25～45℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2～3d，期间每3-4h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.5～1mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.000-3.500nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为20～100:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌24～96h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为33～167:1，静置1～10h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心10～30min，转数为4000～10000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为4～5mol/l，搅拌12～24h后，静置12～24h，以转数5000～10000r/min离心20～40min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.2～7.6，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:20～50g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为1.7～2.4mol/l，静置12h，以转数5000～10000r/min，离心30～60min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:10～50g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析3～7d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
优选地，所述s1中，分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中20min，去除部分腥味。
优选地，所述s3中，烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2.5d，期间每3.5h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪。
优选地，所述s4中，将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.75mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.250nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为70:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌60h，得海产品下脚料的酸酶提取液。
优选地，所述s5中，将海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为33～167:1，静置5.5h。
优选地，所述s6中，将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心20min，转数为7000r/min，合并收集上清液。
优选地，所述s7中，nacl浓度为4.5mol/l，搅拌17h后，静置18h，以转数7000r/min离心30min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中。
优选地，所述s8中，将透析袋浸入蒸馏水中透析5d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生。
本发明公开的制备方法的有益效果为：
1、采用海产品下脚料为原料，提取出胶原蛋白后，使用温和溶剂，不添加任何高聚物，将其溶解于醋酸中进行电纺，制备出海产品下脚料胶原蛋白纤维体；
2、克服了现有技术中胶原蛋白提取原料复杂，难以保证安全性，以及因胶原蛋白粉颗粒体积较大而不易被人体组织吸收的缺点；
3、根据本方法制备的海产品下脚料胶原蛋白微粉的粒径范围为200nm—3000nm，颗粒体积小且粒度均匀，安全无毒、易于被人体皮肤吸收。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1
一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述增强型天然纤维制备工艺包括以下步骤：
所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10～30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为2:1，搅拌，每3h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于30℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2.2d，期间每3.5h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.7mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.250nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为30:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌24～96h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为50:1，静置2h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心20min，转数为6000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为4.2mol/l，搅拌15h后，静置12～24h，以转数6000r/min离心30min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.3，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:30g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为1.8mol/l，静置12h，以转数6000r/min，离心30～60min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:20g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析4d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
实施例2
一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中10min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为1:1，搅拌，每2h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于25℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2d，期间每3h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.5mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.000nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为20:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌24h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为33:1，静置1h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心10min，转数为4000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为4mol/l，搅拌12h后，静置12h，以转数5000r/min离心20min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.2，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:20g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为1.7mol/l，静置12h，以转数5000r/min，离心30min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:10g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析3d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
实施例3
一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中20min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为2:1，搅拌，每3h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于33℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌2.5d，期间每3.5h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.75mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.250nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为60:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌50h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为100:1，静置5h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心10～30min，转数为7000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为4.5mol/l，搅拌18h后，静置17h，以转数7500r/min离心30min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.4，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:40g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为2mol/l，静置12h，以转数7500r/min，离心45min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:30g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析5d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
实施例4
一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中30min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为3:1，搅拌，每4h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于45℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌3d，期间每4h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入0.75mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.5nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为70:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌60h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为100:1，静置7h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心10～30min，转数为6000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为4.5mol/l，搅拌18h后，静置18h，以转数7000r/min离心30min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.8，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:30g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为2mol/l，静置12h，以转数7000r/min，离心40min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:50g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析7d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
实施例5
一种从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法，所述从海产品下脚料提取胶原蛋白纤维体的方法包括以下步骤：
s1、初处理：将新鲜的鱼皮或解冻的冷冻鱼皮分拣，将鱼鳞和鱼骨与鱼皮分离；分离后的鱼鳞和鱼骨浸泡在50℃温水中20min，去除部分腥味，用清水反复冲洗至无浮液并沥干，之后用柠檬酸浸泡、振荡脱钙2小时，之后用清水冲洗至中性，沥干粉碎，备用；
s2、脱色：将经过步骤s1粉碎后下脚料用水浸泡至舒展变软后，加入到0.05mol/l的naoh水溶液和1%w/v双氧水水溶液的混合溶液中浸没静置，其中naoh水溶液与双氧水水溶液的体积比为1:1，搅拌，每3h更换一次混合溶液，直至溶液中无可见色素产生，将海产品下脚料用蒸馏水清洗，于30℃烘干；
s3、脱脂：将经过步骤s2烘干后的下脚料放入丙酮中浸没静置，恒温25±10℃，搅拌3d，期间每4h更换一次丙酮，以蒸馏水洗去下脚料上的残余脂肪；
s4、酸酶提取：将脱脂、脱色处理后的下脚料放入1mol/l乙酸水溶液中，海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:100g/ml，并加入规格为3.500nfu/mg的胃蛋白酶，海产品下脚料与胃蛋白酶的质量比为70:1，置于35±10℃恒温水浴中，搅拌70h，得海产品下脚料的酸酶提取液；
s5、乙二胺四乙酸灭酶活：向下脚料的酸酶提取液中加入乙二胺四乙酸，其中海产品下脚料与乙二胺四乙酸质量比为120:1，静置7h；
s6、离心：将静置后的海产品下脚料酸酶提取液离心25min，转数为10000r/min，合并收集上清液；
s7、盐析：向上述上清液中加入nacl，使nacl浓度为5mol/l，搅拌18h后，静置19h，以转数6000r/min离心30min，除去上清液，取沉淀溶于三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中，其中每1l缓冲溶液中含有nacl1mol和三羟甲基氨基甲烷0.1mol，并加入hcl调节ph值至7.5，且海产品下脚料与缓冲溶液的质量体积比为1:50g/ml，向上述缓冲溶液加入nacl，使nacl的浓度为2.4mol/l，静置12h，以转数10000r/min，离心60min，得沉淀；
s8、透析：将上述沉淀溶于1%w/v乙酸水溶液中，且海产品下脚料与乙酸水溶液的质量体积比为1:50g/ml，将乙酸水溶液装入透析袋中，再将透析袋浸入蒸馏水中透析7d，更换蒸馏水至其中无氯离子产生；
s9、聚乙二醇20000浓缩：将上述透析袋埋到固体聚乙二醇20000中，更换浸湿的聚乙二醇20000，至透析袋中的溶液浓缩至原体积的1/2；
s10、冷冻干燥：将上述浓缩后的溶液经预冻后，放入冻干机中真空冷冻干燥，制得海产品下脚料胶原蛋白纤维体。
本发明中采用海产品下脚料为原料，提取出胶原蛋白后，使用温和溶剂，不添加任何高聚物，将其溶解于醋酸中进行电纺，制备出海产品下脚料胶原蛋白纤维体；克服了现有技术中胶原蛋白提取原料复杂，难以保证安全性，以及因胶原蛋白粉颗粒体积较大而不易被人体组织吸收的缺点；根据本方法制备的海产品下脚料胶原蛋白微粉的粒径范围为200nm—3000nm，颗粒体积小且粒度均匀，安全无毒、易于被人体皮肤吸收。
以上对本发明的5个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。