本发明涉及使用一种或多种造血祖细胞标志物(hpc标志物)制备cd8阳性细胞的方法，以及表达所述一种或多种hpc标志物的细胞群等。
背景技术：
：t细胞在抵挡诸如细菌、病毒等外源病原体和诸如癌细胞等异常细胞的免疫系统中发挥关键性作用。尤其是细胞毒性t淋巴细胞(ctl)，通过其细胞表面存在的t细胞受体(tcr)识别来自病毒、肿瘤等的抗原肽，并与抗原呈递细胞的i型主要组织相容性抗原共同呈递，特异地针对将所述抗原肽作为外源物质展示的细胞产生细胞毒活性。大部分ctl是cd8单阳性(sp)的细胞。已知上述cd8sp细胞是在胸腺中，从不表达tcr且没有cd4或cd8(cd4/cd8双阴性(在本说明书中，有时用dn表示双阴性)细胞)的未成熟细胞经表达cd8和cd4的细胞(cd4/cd8双阳性(在本说明书中，有时用dp表示双阳性)细胞)分化而成的。如上文所述，由于t细胞在免疫细胞中发挥关键性作用，因此，如果能够补充或再生t细胞，对于预防或治疗诸如肿瘤、感染、自身免疫功能障碍等疾病就是非常有效的手段。因此，已经在尝试通过从ips细胞诱导造血祖细胞(在本说明书中有时被称为hpc)的方法，进一步诱导cd4/cd8dp细胞的方法等，来获得造血祖细胞和t细胞系细胞。例如，非专利文献1描述了可以通过共培养ips细胞和饲养层细胞(尤其是op9细胞)来诱导cd34/cd43dp细胞。专利文献1和非专利文献2描述了利用cd43和cd34、cd31或cd144的表达作为指标，从含有自人多能干细胞诱导的hpc的细胞群分离hpc的方法，用于将分离的细胞分化成t细胞系细胞的方法，还描述了当将多能干细胞分化成hpc时，所诱导的血系细胞的特性取决于activin/nodal在诱导的早期阶段是否发挥作用。专利文献2描述了在无饲养层的条件下制备cd4/cd8dp的方法。此外，非专利文献3教导了诱导造血祖细胞(包括来自人多能干细胞的造血祖细胞)的多种方法，并提到低诱导效率是体外诱导的血液细胞在临床应用中受阻的理由之一。文献列表专利文献专利文献1：wo2013/075222专利文献2：wo2017/221975非专利文献非专利文献1：choik.d.等人，stemcells，27(2009)；559-567非专利文献2：kennedym.等人，cellreports，2(2012)；1722-1735非专利文献3：lius.等人，cytotherapy，17(2015)；344-358技术实现要素：发明要解决的课题本发明的目的是获得更多的t细胞系细胞(例如，cd8阳性细胞(例如cd4/cd8dp细胞、cd8sp细胞))和/或以更高浓度获得它们(即，提供所述细胞的制备方法)以稳定提供细胞治疗。此外，本发明的目的还包括提供用于解决上述课题的含有造血祖细胞的细胞群。用于解决课题的技术手段为了研究出解决上述问题的制备cd4/cd8dp细胞的方法，本申请的发明人鉴定了在hpc表面表达的标志物(hpc标志物)。本申请的发明人进一步地发现，使用一种或多种所述标志物从含有hpc的细胞群中分离的hpc显示出向cd8阳性细胞(例如，cd4/cd8dp细胞)的高分化效率和高增殖能力，也就是说，通过使用一种或多种上述hpc标志物，能够获得更多cd8阳性细胞，和/或能够在细胞群中获得更高浓度的cd8阳性细胞。此外还发现，通过本发明的制备方法，收率变化较小，能够稳定地提供cd8阳性细胞，从而完成了本发明。即，本发明提供了下述方案。[1]用于制备cd4/cd8双阳性细胞的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1：从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞，和步骤2：将步骤1中分离的细胞分化成cd4/cd8双阳性细胞。[2]根据[1]所述的方法，其中，所述步骤1中选出的细胞不表达cd235a或cd14，但表达cd45、cd34和cd43。[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述步骤1是从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞的步骤。[4]根据[3]所述的方法，其中，所述步骤1中，第一组由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200、cd218a、cd7和cd144组成。[5]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述步骤1是从包含造血祖细胞的细胞群中分离出不表达选自cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞的步骤。[6]根据[5]所述的方法，其中，所述步骤1中，第二组由cd49f、cd51和cd102组成。[7]根据[1]-[6]中任一项所述的方法，其中，所述步骤1中，含有造血祖细胞的细胞群是通过分化诱导多能干细胞获得的。[8]根据[7]所述的方法，其中，所述多能干细胞是人的诱导性多能干细胞。[9-1]制备cd8单阳性细胞的方法，所述方法包括将通过[1]-[8]中任一项所述的方法获得的cd4/cd8双阳性细胞诱导为cd8单阳性细胞的步骤。[9-2]根据[9-1]所述的方法，其中，所述诱导步骤例如包括在存在肾上腺皮质激素、抗体和/或细胞因子时培养cd4/cd8双阳性细胞，优选地，所述肾上腺皮质激素是地塞米松，和/或所述抗体是抗cd3抗体，和/或所述细胞因子是il-2。[10]根据[9-1]或[9-2]所述的方法，其中，所述cd8单阳性细胞是细胞毒性t淋巴细胞。[11]一种细胞群，其是从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325组成的第一组中的一种或多种分子的细胞，和/或不表达选自由cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c组成的第二组中的一种或多种分子的细胞而获得的。[12]根据[11]所述的细胞群，其中，所述分离的细胞不表达cd235a或cd14，但表达cd45、cd34和cd43。[13]根据[11]或[12]所述的细胞群，其中，所述包含造血祖细胞的细胞群是通过诱导多能干细胞分化获得的。[14]根据[13]所述的细胞群，其中，所述多能干细胞是人的诱导性多能干细胞。[15]一种细胞群，其中，表达选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325组成的第一组中的一种或多种分子的造血祖细胞，和/或不表达选自由cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c组成的第二组中的一种或多种分子的造血祖细胞的比例(所述造血祖细胞数/细胞群中的细胞总数)为40％以上。[16]根据[15]所述的细胞群，其中，所述比例是表达选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200、cd218a、cd7和cd144组成的第一组中的一种或多种分子的造血祖细胞的比例。[17]根据[15]所述的细胞群，其中，所述比例是不表达选自由cd49f、cd51和cd102组成的第二组中的一种或多种分子的造血祖细胞的比例。[18]用于分离造血祖细胞的试剂，所述试剂包含针对选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262、cd325、cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c组成的组中的一种或多种分子每种的抗体。[19]根据[18]所述的试剂，所述试剂还包含针对cd235a、cd14、cd45、cd34和/或cd43的一种或多种抗体。[20]对造血祖细胞表面蛋白质进行检测的方法，所述方法包括使所述造血祖细胞与特异性结合cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262、cd325、cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102、cd109或cd156c的物质接触的步骤。[21]根据[20]所述的方法，所述物质包括抗体或其片段。[22]根据[20]或[21]所述的方法，所述物质还包括荧光团。[23]根据[20]至[22]中任一项所述的方法，还包括使所述造血祖细胞与特异性结合cd34、cd43、cd14或cd235a的物质接触的步骤。[24]对造血祖细胞表面上的复数种蛋白质进行检测的方法，所述方法包括使造血祖细胞与和复数种蛋白质中的每种各自特异性结合的物质接触的步骤，其中，所述复数种蛋白质包括选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262、cd325、cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102、cd109和cd156c中的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28种、或全部29种的任意组合。[25]从含有造血祖细胞的细胞群中选择造血祖细胞的方法，所述方法包括通过[20]至[24]中任一项所述的方法检测细胞表面存在或不存在一种或多种蛋白质的步骤，以及基于所述一种或多种蛋白质的存在或不存在选择所述细胞的步骤，其中，(i)在所述细胞的表面检测到蛋白质cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325中的任意一种或其任意组合时，和/或(ii)在所述细胞的表面没有检测到蛋白质cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102、cd109和cd156c中的任意一种或其任意组合时，选择所述细胞。[26]根据[25]所述的方法，在所述细胞的表面检测到蛋白质cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200、cd218a、cd7和cd144中的任意一种或其任意组合时，选择所述细胞。[27]根据[25]或[26]所述的方法，在所述细胞的表面没有检测到蛋白质cd49f、cd51和cd102中的任意一种或其任意组合时，选择所述细胞。[28]从含有造血祖细胞的细胞群中选择造血祖细胞的方法，所述包括通过[20]至[24]中任一项所述的方法检测细胞表面存在或不存在一种或多种蛋白质的步骤，以及基于所述一种或多种蛋白质的存在或不存在选择所述细胞的步骤，其中，(i)在所述细胞的表面检测到cd45、cd34和/或cd43，并且检测到蛋白质cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325中的任意一种或其任意组合时，和/或(ii)在所述细胞的表面没有检测到cd14和/或cd235a，且也没有检测到蛋白质cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102、cd109和cd156c时，选择所述细胞。发明的技术效果通过本发明的使用一种hpc标志物的制造方法，能够提供更多的cd8阳性细胞(例如，cd4/cd8dp细胞、cd8sp细胞)，和/或能够以更高浓度制备cd8阳性细胞。此外，通过本发明的制备方法，收率变化较小，能够稳定地提供cd8阳性细胞(例如，cd4/cd8dp细胞、cd8sp细胞)。因此，本发明提供了从细胞群分离造血祖细胞的改进方法。这提供了用于制备cd8阳性细胞的改进的细胞供给源。这一新的制备方法是基于本申请发明人令人惊讶且预料不到的发现，即，使用特定的hpc阳性标志物和hpc阴性标志物，可以极大地改善hpc来源的cd8阳性细胞群的品质和/或数量。本发明的上述有利的cd8阳性细胞供给源可以提供用于临床应用(例如细胞疗法、诊断和体外用途)的改进的cd8阳性细胞群。发明详述本发明提供了制备cd8阳性细胞(例如cd4/cd8dp细胞)的方法(下文中简称为“本发明的制备方法”)等，所述方法包括：(步骤1)从含有造血祖细胞的细胞群中分离出表达一种或多种造血祖细胞标志物(在本说明书中有时简称为“hpc标志物”)的细胞和/或不表达一种或多种hpc标志物的细胞，和(步骤2)将步骤1中分离的细胞分化成cd8阳性细胞(例如cd4/cd8dp双阳性细胞(在本说明书中有时简称为“cd4/cd8dp细胞”))。在本发明中，“cd8阳性细胞”是指表达cd8的t细胞。所述细胞可列举例如cd4/cd8dp细胞和cd8单阳性细胞(在本说明书中有时简称为“cd8sp细胞”)。在本发明中，“cd4/cd8dp细胞”是指同时表达cd4和cd8的t细胞。“cd8sp细胞”是指不表达cd4但表达cd8的t细胞。cd8sp细胞可列举例如细胞毒性t淋巴细胞及其前体细胞。此外，在本发明中，“t细胞”是指在其表面表达被称为t细胞受体(tcr)的抗原受体的细胞、及其前体细胞(例如，不表达tcr(tcrαβ)的原t细胞，tcrβ和前tcrα相连的前t细胞)。在本发明中，“造血祖细胞”是指cd34阳性细胞，优选cd34/cd43dp细胞。本发明所使用的造血祖细胞的来源不受限制，例如，可以是通过已知的方法(例如专利文献1、2、非专利文献1至3中所记载的方法)在体外诱导而成的造血祖细胞(例如，通过诱导多能性干细胞分化获得的造血祖细胞)，也可以是通过已知的方法从生物体组织中分离的造血祖细胞。所述多能性干细胞可列举例如胚胎干细胞(embryonicstemcell：es细胞)、诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcell：ips细胞)、胚性癌细胞(ec细胞)、胚性生殖干细胞(eg细胞)，优选ips细胞(更优选人ips细胞)。在上述多能性干细胞是es细胞或人胚胎来源的任意细胞的情况下，所述细胞可以是破坏胚胎所制备的细胞，也可以是不破坏胚胎所制备的细胞，优选是不破坏胚胎而制备的细胞。所述ips细胞是可通过将特定的重编程因子以dna或蛋白质的形态导入体细胞而制得的、与es细胞具有大致同等的特性(例如多分化潜能和基于自我复制的增殖能力)的源自体细胞的诱导性干细胞(例如，takahashik.和yamanakas.(2006)cell，126；663-676；takahashik.等人，(2007)cell，131；861-872；yuj.等人，(2007)science，318；1917-1920；nakagawam.等人，(2008)nat.biotechnol.26；101-106)。当使用ips细胞时，所述ips细胞可以是通过本身已知的方法从体细胞制备的，也可以使用已经建系、储藏的ips细胞。对作为本发明中使用的ips细胞来源的体细胞没有限制，优选是末梢血来源的细胞或脐带血来源的细胞。多能性干细胞来源的动物不限，可列举例如小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、狗、猴子、猩猩、黑猩猩、人等哺乳动物，优选人。可通过将上述多能性干细胞供于本身已知的方法，从而来制备造血祖细胞。当所述多能性干细胞是ips细胞时，可以通过例如国际公开号wo2017/221975记载的方法制备造血祖细胞。此外，作为所述生物体组织，只要含有造血祖细胞就没有限制，可列举例如末梢血、淋巴结、骨髓、胸腺、脾脏、脐带血。其中，基于对动物的侵入性低和容易制备的观点，优选末梢血、脐带血。从适用于治疗的观点出发，本发明中使用的造血祖细胞或多能性干细胞优选是符合gmp(goodmanufacturingpractice)标准的细胞。在本发明中，“hpc标志物”是指作为能在造血祖细胞的表面表达的分子的cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325中的任意一种分子(在本说明书中，上述标志物有时被称为“hpc阳性标志物”、“阳性hpc选择标志物”或“阳性hpc标志物”)，或者是作为通常在造血祖细胞表面不表达的分子的cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102、cd109和cd156c中的任意一种分子(在本说明书中，上述标志物有时被称为“hpc阴性标志物”、“阴性hpc选择标志物”或“阴性hpc标志物”)(在本说明书中，hpc阳性标志物和hpc阴性标志物有时被统称为“本发明的hpc标志物”)。本发明的hpc阳性标志物中，优选cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200、cd218a、cd7或cd144，更优选cd90、cd143、cd218a或cd200。在另一些实施方式中，优选cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200或cd218a，更优选cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200或cd218a。此外，在本发明中，表达上述hpc阳性标志物的细胞有时被称为hpc标志物阳性细胞(或hpcmarkerpositive(hpc标志物阳性)细胞)，例如，对表达cd24分子的细胞，有时称其为cd24阳性细胞。本发明的hpc阴性标志物中，优选cd49f、cd51或cd102。在本发明中，不表达上述hpc阴性标志物的细胞有时被称为hpc标志物阴性细胞(或hpcmarkernegative(hpc标志物阴性)细胞)。在典型的实施方式中，cd8阳性细胞(优选cd4/cd8双阳性细胞)是通过从含有造血祖细胞的细胞群中分离出(a)表达cd34和cd43，(b)表达cd62l、cd24、cd90、cd143、cd218a、cd263或notch3中任一种，且(c)不表达cd235a和cd14的细胞而制备的。在典型的实施方式中，cd8阳性细胞(优选cd4/cd8双阳性细胞)是通过从含有造血祖细胞的细胞群中分离出(a)表达cd34和cd43，(b)表达cd90、cd143、cd200、cd218a或cd263中任一种，且(c)不表达cd235a和cd14的细胞而制备的。在典型的实施方式中，cd8阳性细胞(优选cd4/cd8双阳性细胞)是通过从含有造血祖细胞的细胞群中分离出(a)表达cd34和cd43，(b)表达cd7、cd144、cd56、cd226、cd262或cd325中任一种，且(c)不表达cd235a和cd14的细胞而制备的。在典型的实施方案中，cd8阳性细胞(优选cd4/cd8双阳性细胞)是通过从含有造血祖细胞的细胞群中分离出(a)表达cd34和cd43，(b)cd49f、cd51、cd426、cd61、cd62p、cd69或cd156c均不表达，且(c)不表达cd235a和cd14的细胞而制备的。在本发明中，“表达”是指通过分离细胞时使用的方法能够检测到表达，“不表达”是指以分离细胞时使用的方法的检测灵敏度无法检测到。分离细胞时使用的方法可列举利用下文所述的流式细胞仪、质谱仪的方法、磁性细胞分离法等。作为通过所述步骤1分离的细胞，其为表达一种或多种hpc阳性标志物的细胞，或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞。在本发明的一种实施方式中，通过所述步骤1分离的细胞是除了表达一种或多种本发明的hpc阳性标志物之外还表达cd34和/或cd43的细胞，和/或不表达一种或多种本发明的hpc阴性标志物、且表达cd34和/或cd43的细胞。进一步地，所述分离的细胞优选是cd235a阴性、cd14阴性和/或cd45阳性。因此，在本发明的优选的实施方案中，所述步骤1是通过从含有造血祖细胞的细胞群中，分离cd235a阴性、cd14阴性、cd45阳性、cd34阳性和cd43阳性、且一种或多种本发明的hpc阳性标志物阳性和/或一种或多种本发明的hpc阴性标志物阴性的细胞来实施的。在本发明中，“分离细胞”包括选择表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞，并分离所述经选择的细胞的实施方案，以及将所述经选择细胞提供给后续分化步骤的实施方案。在本说明书中使用时，可选地，“包含/含有(comprising/comprises)”这类用语也可与“由……组成(consistingof/consistsof)”替换使用。从含有造血祖细胞的细胞群中分离表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞的方法可列举使用流式细胞仪、质谱仪的方法、磁性细胞分离方法等，上述方法可以使用已知的方法来实施。例如，表达一种或多种hpc阳性标志物的细胞、和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞可以通过包括将所述细胞与特异性结合各hpc标志物的物质(例如抗体)接触的步骤的方法来分离。所述物质包括自身连接有可检测标签(如gfp)的物质和自身没有连接标签的物质。当所述物质自身没有连接标签时，所述分离可以通过进一步使用连接有直接或间接识别所述物质的可检测标签的物质来进行。例如，当所述物质是抗体时，可在所述抗体上直接或间接担载荧光素、金属同位素或珠粒(例如磁珠)，籍此对细胞表面的hpc标志物加以标记，并可基于所述标记来分离细胞。在上述情况下使用的抗体可以是仅一种抗体，或者可以是两种以上的抗体。将从含有造血祖细胞的细胞群中作为表达一种或多种本发明的hpc阳性标志物和/或不表达hpc阴性标志物的细胞而分离的细胞分化为cd8阳性细胞的方法可列举例如已知的方法(例如，国际公开号wo2016/076415，journalofleukocytebiology96(2016)1165-1175，cellreports2(2012)1722-1735，wo2017/221975中记载的方法)。1、cd4/cd8dp细胞的制备方法本发明的制备方法的步骤2中使用的用于细胞培养的基础培养基可列举例如iscove’smodifieddulbecco’smedium(imdm)培养基、medium199培养基、eagle’sminimumessentialmedium(emem)培养基、αmem培养基、dulbecco’smodifiedeagle’smedium(dmem)培养基、ham’sf12培养基、rpmi1640培养基、fischer’s培养基、neurobasalmedium(lifetechnologies)和它们的混合培养基。培养基中可以含有血清，也可以不含血清。必要时，培养基中也可以含有例如维生素c肋(例如抗坏血酸、磷酸维生素c)、白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、硒、脂肪酸、微量元素、2-巯基乙醇、t硫代甘油(hiolglycerol)、脂类、氨基酸、l-谷氨酰胺、非必需氨基酸、维生素、生长因子、小分子化合物、抗生素、抗氧化剂、丙酮酸、缓冲剂、无机盐、细胞因子等中的一种或多种物质。上述培养基优选含有细胞因子。细胞因子可列举il-7、flt-3l、scf、tpo及其组合等。flt-3和il-7是优选的。培养基中的il-7的浓度优选是1ng/ml～50ng/ml(例如，1ng/ml、2ng/ml、3ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml)，其中，优选5ng/ml。培养基中的flt-3的浓度优选是1ng/ml～100ng/ml(例如，1ng/ml、2ng/ml、3ng/ml、4ng/ml、5ng/ml、6ng/ml、7ng/ml、8ng/ml、9ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)，其中，优选10ng/ml。本领域技术人员可以基于培养条件等，适当地决定其他细胞因子的浓度。此外，培养基优选含有notch配体(例如dll1、dll4、dll1或dll4与fc的融合蛋白)。当使用notch配体时，可以添加在培养基中，也可以包被培养容器。此外，也可以使用表达notch配体的饲养层细胞。在本发明的制备方法中，可以对通过步骤1获得的造血祖细胞进行贴壁培养或悬浮培养。当贴壁培养时，可以使用经包被的培养容器，也可以与饲养层细胞等共培养。从适用于治疗的观点出发，优选不使用饲养层。包被培养容器的情况，基材可列举例如纤连蛋白片段(例如retronectin)、pronectin、波连蛋白、matrigel(bd)、i型胶原蛋白、iv型胶原蛋白、明胶、层连蛋白、肝素硫酸蛋白多糖、巢蛋白及其组合。此外，共培养的饲养层细胞可列举例如骨髓间质细胞系op9细胞、小鼠间充质细胞系10t1/2、tst-4。当使用饲养层细胞时，优选适当地更换所述饲养层细胞进行培养。饲养层细胞的更换可以通过将培养中的对象细胞移动到提前接种的饲养层细胞上来进行。所述更换优选每2至5天进行一次。在本发明中，培养造血祖细胞并诱导cd4/cd8dp细胞时的培养温度条件没有特别限制，优选37℃～42℃左右，更优选37～39℃左右。此外，关于培养时间，本领域技术人员可以在监控cd4/cd8dp细胞数量等的同时适当地确定培养时间。只要可以获得cd4/cd8dp细胞，从造血祖细胞诱导cd4/cd8dp细胞的培养天数没有特别限制，优选10天以上(例如12天、14天、16天、18天、20天及其以上)，此外，优选在60天以下。如下文的实施例所示，在特定的实施方式中，可通过21天～28天的培养大量高效地获得cd4/cd8dp细胞。在本发明中，所获得的cd4/cd8dp细胞可以经过分离后使用，也可以作为含有其他细胞类型(例如，cd8sp细胞)的细胞群使用。在分离的情况下，可以以cd4、cd8、cd3、cd45分子等为指标来分离。所述分离方法可以使用本领域技术人员公知的方法，可列举例如，通过针对作为指标的分子的抗体来标记，使用上述流式细胞仪或质谱仪的方法、磁性细胞分离法、或使用固定有期望的抗原的亲和层析柱等进行纯化的方法。2、cd8单阳性细胞的制备方法可通过将利用本发明的制备方法获得的cd4/cd8dp细胞用于分化诱导为cd8sp细胞的步骤，来制备cd8sp细胞(这类制备cd8sp细胞的方法有时被简称为“本发明的cd8sp细胞的制备方法”)。关于cd4/cd8dp细胞的制备方法如“1、”中所记载。用于本发明的cd8sp细胞的制备方法中的基础培养基和培养基，可列举与“1、”中所记载的基础培养基和培养基相同的基础培养基和培养基。所述培养基可以含有肾上腺皮质激素。肾上腺皮质激素可列举例如糖皮质激素及其衍生物，所述糖皮质激素可列举例如醋酸可的松、氢化可的松、醋酸氟氢可的松、泼尼松龙、曲安奈德、甲基泼尼松龙、地塞米松、倍他米松和丙酸倍氯米松。其中，优选地塞米松。因此，在一种实施方式中，制备cd8单阳性细胞的方法包括：通过在存在肾上腺皮质激素(优选地塞米松)的情况下培养cd4/cd8dp细胞、以诱导所述cd4/cd8dp细胞成为cd8单阳性细胞的步骤。作为肾上腺皮质激素使用地塞米松时，其在培养液中的浓度优选是1nm～100nm(例如，1nm、5nm、10nm、20nm、30nm、40nm、50nm、60nm、70nm、80nm、90nm、100nm)，其中，优选10nm。上述培养基可以含有抗体(例如，抗cd3抗体、抗cd28抗体、抗cd2抗体)、细胞因子(例如，il-7、il-2、il-15)等。本发明使用的抗cd3抗体只要特异性识别cd3即可，没有特别限制，可列举例如从okt3克隆产生的抗体。抗cd3抗体也可以是与磁珠等结合的，此外，作为将所述抗cd3抗体添加到培养基中的替代性方式，也可以通过在表面结合有抗cd3抗体的培养容器上将所述t细胞培养一定时间来施加刺激。抗cd3抗体在培养基中的浓度优选是10ng/ml～1000ng/ml(例如，10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、700ng/ml、800ng/ml、900ng/ml、1000ng/ml)，其中优选500ng/ml。本领域技术人员可以基于培养条件等，适当地决定其他抗体的浓度。因此，在一种实施方式中，制备cd8单阳性细胞的方法包括：通过在存在抗体(优选抗cd3抗体)的情况下培养cd4/cd8双阳性细胞、以诱导所述cd4/cd8双阳性细胞成为cd8单阳性细胞的步骤。用于本发明的il-2在培养基中的浓度优选是10u/ml～1000u/ml(例如，10u/ml、20u/ml、30u/ml、40u/ml、50u/ml、60u/ml、70u/ml、80u/ml、90u/ml、100u/ml、500u/ml、1000u/ml)，其中优选100u/ml。用于本发明的il-7或il-15在培养基中的浓度优选是1ng/ml～100ng/ml(例如，1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml)，其中优选10ng/ml。因此，在一种实施方式中，cd8单阳性细胞的制备方法包括：通过在存在细胞因子(优选il-2)的情况下培养cd4/cd8双阳性细胞、以诱导所述cd4/cd8双阳性细胞成为cd8单阳性细胞的步骤。在本发明的cd8sp细胞的制备方法中，对培养cd4/cd8dp细胞时的温度条件没有特别限制，优选37℃～42℃左右，更优选37～39℃左右。此外，关于培养时间，本领域技术人员可以在监控cd8阳性t细胞数量等的同时适当地确定培养时间。只要可以获得cd8sp细胞即可，对天数没有特别限制，优选1天以上、3天以上、7天以上，优选60天以下。通过本发明的制备方法制备的cd8sp细胞不限于从cd4/cd8dp细胞分化获得的细胞(例如通过上述“2、”获得的细胞)。因此，从自含有造血祖细胞的细胞群中作为本发明的表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞而分离的细胞，不经cd4/cd8dp细胞而诱导得到的cd8sp细胞也包括在通过本发明的制备方法制备的cd8sp细胞中。3、含有表达一种或多种hpc标志物的造血祖细胞的细胞群本发明提供了以高频度含有表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的造血祖细胞的细胞群(下文简称为“本发明的细胞群”)。所述细胞群可以是例如从含有造血祖细胞的细胞群中、使用上文记载的分离方法分离表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞而获得的。hpc标志物的定义、具体的分子、以及造血祖细胞的定义参见上文所述。本发明的细胞群只要是其中表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的造血祖细胞的比例(所述造血祖细胞数/包含在细胞群中的总细胞数)高于以往方法(例如，以cd34阳性、cd34阳性和cd43阳性、或cd43阳性和cd34、cd31或cd144阳性为指标分离的方法)所获得的造血祖细胞群所含的比例即可，没有特别限制，优选比例在40％以上(例如50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％)。本发明的细胞群可以是通过本发明的制备方法的步骤1中记载的方法获得的。可以通过流式细胞仪测量表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的造血祖细胞的比例。如下文实施例所示，本发明的细胞群与不分离表达一种或多种hpc阳性标志物和/或不表达一种或多种hpc阴性标志物的细胞群相比，向cd4/cd8dp细胞和cd8sp细胞分化的效率更高，增殖能力也更优异。4、用于分离“本发明的细胞群”的试剂本发明还提供了用于分离本发明的细胞群的试剂(下文简称为“本发明的试剂”)，其包含针对本发明的hpc标志物(即，选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd32、cd39、cd49a、cd164、cd317、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd56、cd226、cd262、cd325、cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c，优选选自由cd24、cd62l、cd90、cd143、cd263、notch3、cd200、cd218a、cd7、cd144、cd49f、cd51和cd102组成的组中的一种或多种标志物)每种的抗体。当本发明的试剂含有针对2种以上的hpc标志物的抗体时，所述试剂可以作为将各种抗体包含在独立试剂中的试剂盒提供。根据用于本发明的制备方法的步骤1中的分离手段，本发明的试剂中所含的抗体可以以与荧光素、金属同位素或珠粒(例如磁珠)结合的形式提供。此外，本发明的试剂还可包含抗cd4抗体和/或抗cd8抗体，以及根据需要，包含针对已知在cd4/cd8dp细胞和/或cd8sp细胞上表达或不表达的其他细胞表面标志物(例如cd3、cd45、cd235a、cd14、cd45、cd34、cd43)的一种或多种抗体，并且，可以作为用于分离从本发明的细胞群分化诱导得到的cd4/cd8dp细胞或cd8sp细胞的试剂而使用。本发明的试剂还可以包含用于将造血祖细胞分化诱导成cd4/cd8dp细胞、进而分化诱导成cd8sp细胞的试剂(例如基础培养基、培养基添加物等)，所述试剂可同样的列举出上述“1、”和上述“2、”中示例的物质。下面列举实施例来进一步具体说明本发明，但其仅作为举例，本发明不限于这些实施例。实施例实施例1(使用tkt3v1-7细胞株进行的研究)作为含有造血祖细胞(下文有时称为hpc)的细胞群，使用根据公知方法(例如，cellreports2(2012)1722-1735或wo2017/221975中记载的方法)使ips细胞分化得到的悬浮细胞群。具体而言，将tkt3v1-7细胞株按3x105个/孔接种在经过超低贴壁处理的6孔板中(第0天)，在eb培养基(向stempro34中加入10μg/ml人胰岛素、5.5μg/ml人转铁蛋白、5ng/ml亚硒酸钠、2mml-谷氨酰胺、45mmα-一硫代甘油和50μg/ml抗坏血酸)中加入10ng/mlbmp4、5ng/mlbfgf、15ng/mlvegf、2μmsb431542，在低氧条件下(5％o2)下培养5天(第5天)。然后，加入50ng/mlscf、30ng/mltpo、10ng/mlflt3l，再培养5至9天(约第14天)，获得悬浮细胞群。在培养过程中，每2天或3天更换培养基。用以下抗体组合对含有hpc的上述悬浮细胞群按样品组分别进行染色。【表1】将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。从上述各样品组获得的细胞级分如下所示。【表2】样品组获得的细胞级分1级分a、级分b和级分c2级分d和级分e3级分f和级分g4级分h和级分i5级分j和级分k6级分l和级分m7级分n和级分o在上表中，级分a～g分别如下所示。级分a：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性级分b：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd62l阳性级分c：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd62l阴性级分d：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd24阳性级分e：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd24阴性级分f：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd90阳性级分g：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd90阴性级分h：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd143阳性级分i：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd143阴性级分j：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd218a阳性级分k：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd218a阴性级分l：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd263阳性级分m：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd263阴性级分n：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、notch3阳性级分o：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、notch3阴性根据公知方法(例如，journalofleukocytebiology96(2016)1165-1175或国际公开号wo2017/221975中记载的方法)，使含有上述级分a～o的细胞分化成淋巴细胞。具体而言，将级分a～o的各细胞群按2000个/孔接种在用recombinath-dll4/fcchimera(sinobiological)和retronectin(takarabioinc.)包被的48孔板中，在5％co2、37℃的条件下培养。在培养过程中，每2天或3天更换培养基。需要说明，作为培养基，使用添加了50ng/mlscf、50ng/mlil-7、50ng/mlflt3l、100ng/mltpo、15μmsb203580、30ng/mlsdf-1α的op9培养基(含有15％fbs、2mml-谷氨酰胺、100uml青霉素、100ng/ml链霉素、55μm2-巯基乙醇、50μg/ml抗坏血酸、10μg/ml人胰岛素、5.5μg/ml人转铁蛋白、5ng/ml亚硒酸钠)。开始培养后，第7天和第14天在经同样包被的48孔板中传代。开始培养后的第21天回收所有的细胞，在用血球计数板计算细胞数量后，使用以下抗体组合染色。【表3】抗体组合制造商抗体结合的荧光分子抗cd3抗体biolegendapc/cy7抗cd45抗体biolegendbrilliantviolet510抗tcrab抗体ebiosciencefitc抗cd8b抗体beckmanpe抗cd7抗体biolegendapc抗cd5抗体ebiosciencepe/cy7抗cd8a抗体biolegendpercp/cy5.5抗cd4抗体biolegendbv421将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。通过上述分选获得细胞级分如下所示。需要说明，本说明书中，淋巴细胞级分是指与cytometry(communicationsinclinicalcytometry)18(1994)199-208记载的方法同样以fsc(前向角散射)和ssc(侧向角散射)为指标分离的级分。级分p：淋巴细胞级分级分q：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性级分r：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阳性级分s：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阴性表4显示了在开始培养后的第21天时来自级分a～o的各样品中的细胞数(与来自级分a的样品中的细胞数的比值)。【表4】根据表4，与来自级分a的样品中包含的细胞群相比，来自级分b(cd62l阳性)、级分d(cd24阳性)、级分f(cd90阳性)、级分h(cd143阳性)、级分j(cd218a阳性)、级分l(cd263阳性)和级分n(notch3阳性)的样品中包含的细胞群都表现出更优秀的增殖能力。表5显示了在培养的第21天时通过facsaria分选获得的细胞级分p～s的细胞数(与来自级分a的样品中细胞级分p～s的细胞数的比例)【表5】级分p级分q级分r级分s来自级分a1111来自级分f4.2-7.919-6226-22223-69来自级分h6.4-9.242-83143-45846-67来自级分j6.1-7.931-50191-45520-28结果显示，与使用来自级分g或级分a的细胞的情况相比，使用来自级分f的细胞能够制备出以更高比例含有(a)cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阳性的细胞，或(b)cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阴性的细胞的细胞群。同样地，与使用来自级分i或级分a的细胞的情况相比，使用来自级分h的细胞能够制备出以更高比例含有(a)cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阳性的细胞，或(b)cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阴性的细胞的细胞群。此外，与使用来自级分k或级分a的细胞的情况相比，使用来自级分j的细胞能够制备出以更高比例含有cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阳性的细胞的细胞群。即，显示了将表达cd90、cd143或cd218a的细胞作为含有造血祖细胞的细胞群分离，使分离后的细胞分化，可以制备出含有更高比例的cd4/cd8双阳性细胞(或cd8单阳性细胞)的细胞群。实施例2(使用ff-i01s04细胞株进行的研究)作为含有造血祖细胞(下文有时也称为hpc)的细胞群，使用针对ips细胞(ff-i01s04细胞株)进行实施例1记载的方法而获得的悬浮细胞群。用实施例1中记载的抗体组合3、4、5、6(在本实施例中分别表述为3b、4b、5b、6b)或下文所示的抗体组合8b，对含有hpc的细胞群按样品组分别进行染色。【表6】将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。从上述各样品组获得的细胞级分如下所示。【表7】样品组获得的细胞级分3b级分f和级分g8b级分t和级分u4b级分h和级分i5b级分j和级分k6b级分l和级分m在上表中，级分f-m、t和u分别如下所示。级分f：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd90阳性级分g：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd90阴性级分h：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd143阳性级分i：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd143阴性级分j：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd218a阳性级分k：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd218a阴性级分l：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd263阳性级分m：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd263阴性级分t：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd200阳性级分u：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd200阴性根据实施例1记载的方法，使含有上述级分f～m、t和u的细胞分化成淋巴细胞。开始培养后的第28天回收所有的细胞，使用以下抗体组合染色。【表8】抗体组合制造商抗体结合的荧光分子cd3biolegendapc/cy7cd45biolegendbrilliantviolet510tcrabebiosciencefitccd8bbeckmanpecd7biolegendapccd5ebiosciencepe/cy7cd8abiolegendpercp/cy5.5cd4biolegendbv421将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。通过上述分选获得细胞级分如下所示。级分p：淋巴细胞级分级分q：淋巴细胞级分、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性级分r：淋巴细胞级分、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阳性级分s：淋巴细胞级分、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阴性表9显示了在开始培养后的第28天时来自级分f～m、t和u的各样品中的细胞数(与开始培养时的细胞数的比值)。【表9】根据表9可知，级分f比级分g、级分h比级分i、级分j比级分k、级分l比级分m、级分t比级分u的增殖能力均更优异。即，可知，包含在来自cd90阳性、cd143阳性、cd218a阳性、cd263阳性或cd200阳性的样品中的细胞群的增殖能力均更优异。表10显示了将包含在级分f～m、t和u中的细胞按1000个/孔接种的情况下，在培养的第28天，通过facsaria分选获得的细胞级分p～s的细胞数。【表10】级分p级分q级分r级分s来自级分f208125139860755340626来自级分g12085000来自级分h151700968011870481257来自级分i11216000来自级分j40950032208883093228521来自级分k4430000来自级分l41935225711322019277591来自级分m832526831593992来自级分t34255026248059781125477来自级分u2569000分析表10所示的培养第28天时的facs可知，与使用各标志物阴性的细胞来源的细胞相比，当使用各标志物阳性的细胞来源的细胞时，能够以更高的收率制备(a)cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阳性的细胞，或(b)cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性、cd8a阳性和cd4阴性的细胞的细胞。上述结果显示，将表达cd90、cd143、cd200、cd218a或cd263的细胞作为含有造血祖细胞的细胞群分离，使分离后的细胞分化，可以制备出含有更高比例的cd8阳性细胞(例如，cd4/cd8dp细胞、cd8sp细胞)的细胞群。实施例3(使用ff-i01s04细胞株进行的研究)作为含有造血祖细胞(下文有时也称为hpc)的细胞群，使用针对ips细胞(ff-i01s04细胞株)进行实施例1记载的方法而获得的悬浮细胞群。用以下抗体组合，对含有hpc的上述悬浮细胞群按样品组分别进行染色。【表11-1】【表11-2】将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。从上述各样品获得的细胞级分如下所示。【表12】样品组获得的细胞级分1c级分ac和级分bc2c级分cc3c级分dc4c级分ec5c级分fc6c级分gc7c级分hc8c级分ic9c级分jc10c级分kc11c级分lc12c级分mc13c级分nc14c级分oc15c级分pc在上表中，级分ac-pc分别如下所示。级分ac：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性级分bc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd7阳性级分cc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd144阳性级分dc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd56阳性级分ec：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd226阳性级分fc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd262阳性级分gc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd325阳性级分hc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd49f阳性级分ic：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd51阳性级分jc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd102阳性级分kc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd42b阳性级分lc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd61阳性级分mc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd62p阳性级分nc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd69阳性级分oc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd102阳性级分pc：cd235a阴性、cd14阴性、cd34阳性、cd43阳性、cd156c阳性根据实施例1记载的方法，使含有上述级分ac～pc的细胞分化成淋巴细胞。开始培养后的第21天回收所有的细胞，用血球计数板计算比数量后，使用以下抗体组合染色。【表13】抗体组合制造商抗体结合的荧光分子抗cd3抗体biolegendapc/cy7抗cd45抗体biolegendbrilliantviolet510抗tcrab抗体ebiosciencefitc抗cd8b抗体beckmanpe抗cd7抗体biolegendapc抗cd5抗体ebiosciencepe/cy7抗cd8a抗体biolegendpercp/cy5.5抗cd4抗体biolegendbv421将进行了上述染色的细胞群，通过facsaria进行分选。通过上述分选获得细胞级分如下所示。级分qc：淋巴细胞级分级分rc：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd5阳性、cd7阳性级分sc：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阳性级分tc：淋巴细胞级分、cd3阳性、cd45阳性、cd7阳性、cd8a阳性、cd4阴性表14显示了在开始培养后的第21天时来自级分ac～pc的各样品中的细胞数(与来自级分ac的样品的细胞数的比值)。【表14】级分ac级分bc级分cc级分dc13.13.51.2级分gc级分hc级分ic级分jc1.800.21.0级分mc级分nc级分oc级分pc00.11.00.2根据表14可知，与来自级分ac的样品中包含的细胞群相比，来自级分bc(cd7阳性)、级分cc(cd262阳性)、级分dc(cd56阳性)、级分ec(cd226阳性)、级分fc(cd262阳性)和级分gc(cd325阳性)的样品中包含的细胞群的增殖能力均更优异。此外还可知，级分hc(cd49f阳性)、级分ic(cd51阳性)、级分kc(cd42b阳性)、级分lc(cd61阳性)、级分mc(cd62p阳性)、级分nc(cd69阳性)和级分pc(cd156c阳性)的样品中包含的细胞群的增殖能力均更差。表15显示了在培养的第21天时通过facsaria分选获得的细胞级分qc～tc的细胞数(与来自级分ac的样品中的细胞级分qc～tc的细胞数的比例)【表15】级分qc级分rc级分sc级分tc来自级分bc3.33.73.12.6来自级分cc3.84.37.02.4来自级分dc1.31.42.20.9来自级分ec0.91.01.70.7来自级分fc4.14.76.52.9来自级分gc2.12.43.11.7来自级分hc0000来自级分ic0.20.100.2来自级分jc1.20.70.30.6来自级分kc0.80.70.30.8来自级分lc0.30.30.50.3来自级分mc0000来自级分nc0000来自级分oc1.20.70.30.6来自级分pc0.10.10.10.1结果显示，与使用来自级分ac的细胞相比，使用来自级分bc、级分cc、级分dc、级分ec、级分fc或级分gc的细胞能够制备出以高比例含有cd3阳性cd45阳性cd7阳性cd8a阳性cd4阳性的细胞、或cd3阳性cd45阳性cd7阳性cd8a阳性cd4阴性的细胞的细胞群。此外，与使用来自级分ac的细胞相比，使用来自级分hc、级分ic、级分jc、级分kc、级分lc、级分mc、级分nc、级分oc或级分pc的细胞能够制备出以低比例含有cd3阳性cd45阳性cd7阳性cd8a阳性cd4阳性的细胞、或cd3阳性cd45阳性cd7阳性cd8a阳性cd4阴性的细胞的细胞群。即，显示了将表达cd7、cd144、cd56、cd226、cd262和cd325中的任意一种或多种的细胞，或不表达cd49f、cd51、cd102、cd42b、cd61、cd62p、cd69、cd102和cd156c中的任意一种或多种的细胞作为含有造血祖细胞的细胞群分离，使分离后的细胞分化，可以制备出以高比例含有cd4/cd8双阳性细胞(或cd8单阳性细胞)的细胞群。本申请以日本申请特愿2017-087723(申请日：2017年04月26日)为基础，其内容全文整合到本说明书中。工业上利用的可能性通过本发明，可以获得更多和/或以更高浓度获得未成熟t细胞和/或成熟t细胞，由此获得的细胞可用于预防或治疗肿瘤、感染、自身免疫功能障碍等疾病。当前第1页1 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