用于治疗和/或预防致病性真菌感染和维持微生物群系共生的组合物和方法与流程
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年5月16日提交的美国临时专利申请序列号62/506,902和2017年11月3日提交的美国临时专利申请序列号62/581,358的优先权，所述两个美国临时专利申请序列号均据此通过引用整体并入。
关于联邦基金的声明
本发明是在美国国立卫生研究院授予的dk042086、dk113788和dk105728的政府支持下完成的。政府拥有本发明的某些权利。
本文提供了用于治疗和/或预防致病性真菌感染和维持微生物群系共生的组合物和方法。特别地，本文提供了包含经修饰的肽yy(pyy)肽的组合物及其治疗性和/或预防性使用方法。
技术背景
健康的人肠道微生物区系包含共生的真核真菌。然而，这些相同的共生真菌具有在它们的宿主中引起严重疾病的能力。例如，白色念珠菌(candidaalbicans)可定殖多达70％的成年人，而这种定殖通常不具有任何不良后果。然而，这些相同的白色念珠菌物种可以从无害酵母形式的生长转变为有毒的菌丝形式，其具有侵入性并且过度生长以产生导致疾病的高真菌负载。念珠菌病在免疫功能低下的患者和糖尿病患者中是严重的问题，并且可发生在通常发生念珠菌属定殖的粘膜部位或当念珠菌属物种逃离其正常生态位并在其它器官系统中复制时的侵入部位。念珠菌血症或血流的念珠菌属感染特别严重，死亡率为30-40％。
pyy是在从软骨鱼类到人的脊椎动物物种中产生的高度保守的36残基肽(参考文献1；通过引用整体并入)。自1982年在猪肠和脑中发现pyy以来，已经确定了pyy的多种调控作用，包括控制能量稳态和食物摄入、交感性血管张度、消化、昼夜节律和内分泌以及自主功能(参考文献2-6；通过引用整体并入)。pyy的经典理解调控功能是通过pyy1-36和裂解形式pyy3-36与相应器官组织中的各种受体结合介导的。pyy主要由肠内分泌细胞l细胞的亚组产生，所述细胞亚组在末端回肠和结肠中最丰富，并响应进食而将pyy从基底外侧释放到全身循环中(参考文献7；通过引用整体并入)。还描述了脑干、胰岛和表皮树突状细胞中的pyy表达(参考文献5、8；通过引用整体并入)。
技术实现要素：
本文提供了用于治疗和/或预防致病性真菌感染和维持微生物群系共生的组合物和方法。特别地，本文提供了包含经修饰的肽yy(pyy)肽的组合物及其治疗性和/或预防性使用方法。
在一些实施方案中，本文提供了组合物，其包含相对于seqidno:3和39-46中的一个或多个具有5个或更少(例如，5个、4个、3个、2个、1个、0个)取代并且与seqidno:1、2和/或6具有小于100％(例如，<95％、<90％)序列同一性的肽。在一些实施方案中，肽包含seqidno:seqidno:3和39-46中的一个或多个的100％序列同一性。在一些实施方案中，提供了肽，其中对应于seqidno:3的位置2的位置处的氨基酸为e或d，seqidno:3的位置13为r或k，seqidno:3的位置17为a，seqidno:3的位置22为l，和/或seqidno:3的位置23为a或r。在一些实施方案中，肽包含seqidno:4、5、15-17、26、29、31和/或34-38中的一个或多个的70％或更高(例如，>75％、>80％、>85％、>90％、>95％)序列同一性。在一些实施方案中，肽包含seqidno:4、5、15-17、26、29、31和/或34-38中的一个的100％序列同一性。在一些实施方案中，(i)肽中的氨基酸残基中的一个或多个是d-对映体，(ii)肽包含n末端乙酰基，(iii)肽包含脱酰胺的c末端基团，(iv)肽包含一种或多种非天然氨基酸，(v)肽包含一种或多种氨基酸类似物，和/或(vi)肽包含一种或多种类肽氨基酸。在一些实施方案中，肽或其中的氨基酸包含选自由以下组成的组的修饰：磷酸化、糖基化、遍在蛋白化、s-亚硝基化、甲基化、n-乙酰化、脂化、硫辛酰化(lipoylation)、去亚胺基化、消除化(eliminylation)、二硫键桥接、异天冬氨酸形成、外消旋化、糖化；氨甲酰化、羰基化、异肽键形成、硫酸化、琥珀酰化、s-磺酰化、s-亚硫酰化(s-sulfinylation)、s-亚磺酰化(s-sulfenylation)、s-谷胱甘肽化、焦谷氨酸形成、丙酰化、腺苷酰化、核苷酸加成、碘化、羟化、丙二酰化、丁酰化、酰胺化、脱酰胺、烷基化、酰化、生物素化、氨甲酰化、氧化和聚乙二醇化。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:1、2和6中的一个表现出增强的稳定性。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:1、2和6中的一个表现出增强的抗真菌毒力活性。
在一些实施方案中，本文提供了药物组合物，其包含：(i)前段或本文其它地方描述的pyy肽，和(ii)一种药学上可接受的载体。在一些实施方案中，药物组合物还包含一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂选自由抗生素剂、抗寄生虫剂和抗病毒剂、抗真菌剂以及共生微生物组成的组。在一些实施方案中，药物组合物经配制用于口服、静脉内或直肠施用。
在一些实施方案中，本文提供了用于维持或诱导受试者的健康共生微生物区系的方法，其包括向受试者施用本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，在皮肤上、在肠中、在口腔中或在阴道腔中诱导或维持健康的共生微生物区系。在一些实施方案中，本文提供了治疗或预防受试者的致病性感染的方法，其包括向受试者施用本文所述的药物组合物。本文提供了治疗或预防受试者的胃肠道的炎症性疾病或病患的方法，其包括向受试者施用本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，所述疾病或病患是溃疡性结肠炎或克罗恩病。
在一些实施方案中，本文提供了包含一个或多个涂覆有包含本文所述的pyy肽的组合物的表面的装置。
在一些实施方案中，本文提供了本文所述的组合物用于治疗或预防受试者的致病性感染的用途。在一些实施方案中，本文提供了本文所述的组合物用于制造用于治疗或预防受试者的致病性感染的药物的用途。在一些实施方案中，本文提供了本文所述的组合物用于防止生物膜形成(例如，在表面或装置上)的用途。
在一些实施方案中，本文提供了组合物，其包含对应于pyy的一部分(seqidno:1)诸如位置10-36(例如，起始于位置10、11、12、13、14、15或16并终止于位置33、34、35或(例如14-36、13-36等)的任何合适的肽)并且相对于pyy的所述部分具有8个或更少(例如，1个、2个、3个、4个、5个或其间的范围)取代的肽。本文范围内的肽的实例包括包含以下序列或由以下序列组成的肽：seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13、seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、seqidno:30、seqidno:31、seqidno:32、seqidno:33、seqidno:34、seqidno:35、seqidno:36、seqidno:37、seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42、seqidno:43、seqidno:44、seqidno:45和seqidno:46。在一些实施方案中，本文提供了相对于pyy序列(例如，seqidno:1、seqidno:2、seqidno:6等)具有增强的特征(例如，抗真菌活性、生物膜形成的抑制、表达、稳定性、生物稳定性、生物相容性等)的肽。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:6在选自位置13、15、26、29、30、35和36(位置编号基于seqidno:1)的一个或多个位置处包含取代。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:6在选自位置16、17、19、20、21、22、23、24和34的一个或多个位置处包含取代。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:6在选自位置14、18、26、27、28、29、31、32和33的一个或多个位置处包含取代。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:6包含选自s13l、s13y、e15d、e16q、l17y、l17m、r19k、a22l、y21l、l24s、l24y、h26k、n29r、y20l、y21l、a22t、a22l、s23a、y27l、l28i、l30h、l30a、q34a、r35l、r35y、r35v、r35l、y36a和y36r或其组合的取代。在一些实施方案中，肽包含一种或多种非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或肽氨基酸。
在一些实施方案中，本文提供了组合物，其包含相对于seqidno:3具有5个或更少(例如，1个、2个、3个、4个、5个或其间的范围)取代并且与seqidno:2具有小于100％的序列同一性的肽。在一些实施方案中，所述肽包含与seqidno:3的70％或更高(例如，>70％、>75％、>80％、>85％、>90％、>95％、100％)的序列同一性，并且与seqidno:2的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，seqidno:3的位置2为d，seqidno:3的位置13为k，seqidno:3的位置17为a，seqidno:3的位置22为l，和/或seqidno:3的位置23为a或r。在一些实施方案中，所述肽包含与seqidno:4或5的70％或更高(例如，>70％、>75％、>80％、>85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，并且与seqidno:2的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，所述肽包含与seqidno:9、seqidno:10或seqidno:11的70％或更高(例如，>70％、>75％、>80％、>85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，并且与seqidno:2的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，所述肽包含与seqidno:4或5的70％或更高(例如，>70％、>75％、>80％、>85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，并且与seqidno:2的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，所述肽包含与seqidno:30的100％序列同一性，但与seqidno:2的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含：(i)肽中的氨基酸残基中的一个或多个是d-对映体，(ii)肽包含n末端乙酰基，(iii)肽包含c末端酰胺基；(iv)肽包含一种或多种非天然氨基酸，(v)肽包含一种或多种氨基酸类似物，和/或(vi)肽包含一种或多种类肽氨基酸。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:2表现出增强的稳定性。在一些实施方案中，肽相对于seqidno:2表现出增强的抗真菌毒力活性。在一些实施方案中，肽不是天然存在的序列。
在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述的经修饰的pyy肽和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物还包含一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗剂选自由抗生素剂、抗寄生虫剂、抗病毒剂、抗真菌剂和共生微生物(例如，益生菌)组成的组。在一些实施方案中，药物组合物经配制用于口服、局部、阴道、直肠或注射施用。
在一些实施方案中，本文提供了用于维持或诱导受试者的健康共生微生物区系的方法，其包括向受试者施用包含本文所述的经修饰的pyy肽的药物组合物。在一些实施方案中，在皮肤上、在肠中、在口腔中或在阴道腔中诱导或维持健康的健康共生微生物区系。在一些实施方案中，受试者处于增加的患致病性真菌感染的风险中(例如，免疫受损，已经接受抗生素治疗等)。
在一些实施方案中，本文提供了治疗或预防受试者的致病性感染的方法，其包括向受试者施用包含本文所述的经修饰的pyy肽的药物组合物。在一些实施方案中，受试者处于增加的患致病性真菌感染的风险中(例如，免疫受损，已经接受抗生素治疗等)。在一些实施方案中，受试者患有致病性真菌感染。
在一些实施方案中，本文提供了治疗或预防受试者(例如，胃肠道的)的炎性疾病或病患的方法，其包括向受试者施用包含本文所述的经修饰的pyy肽的药物组合物。在一些实施方案中，所述疾病或病患是溃疡性结肠炎或克罗恩病。
在一些实施方案中，本文提供了包含一个或多个涂覆有包含本文所述的经修饰的pyy肽的组合物的表面的装置。在一些实施方案中，本文提供了保护装置免于真菌生长或生物膜形成的方法，其包括将本文所述的经修饰的pyy肽施用于装置。
在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述的经修饰的pyy肽的药物组合物或药盒用于治疗或预防致病性真菌感染或炎性疾病或病患的用途。在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述的经修饰的pyy肽的药物组合物或药盒用于制造用于治疗或预防致病性真菌感染或炎性疾病或病患的药物的用途。
在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述的修饰的pyy肽的药物组合物或药盒用于建立维持正常或健康微生物群(例如，在皮肤上、在肠中、在口腔中、在血液中、在阴道中)的用途。在一些实施方案中，本文提供了包含本文所述的修饰的pyy肽的药物组合物或药盒用于制造用于建立维持正常或健康微生物群(例如，在皮肤上、在肠中、在口腔中、在血液中、在阴道中)的药物的用途。
附图说明
图1.pyy在小肠潘氏细胞中的证据概述。(a)pyy和溶菌酶免疫荧光染色，以及与dapi核染色的合并图像。比例尺＝20um。(b)在第一pyy抗体的重组pyy淬灭之前(左)和之后(右)的潘氏细胞pyy染色。(c)潘氏细胞中pyy和溶菌酶的超分辨率显微镜检查，显示了pyy与溶菌酶的区室化分隔。比例尺＝20nm。(d)用于隐窝和上皮选择的代表性激光捕获显微镜检查(lcm)。(e)来自lcm隐窝(黑条)和上皮(白条)的粘膜基因的基因表达。pyy的表达与潘氏细胞基因产物的相似性高于与其它经典的肠内分泌细胞产物(前胰高血糖素原和神经降压素)的相似性，并且与刷状缘酶不同。(f)暴露于盐水对照、lps或副交感神经激动剂氨甲酰胆碱(carb)后，从无特定病原体(spf)和无菌(gf)组织释放出鲁米诺pyy。spf组织响应lps和carb释放pyy，而gf仅响应carb释放，这与其它抗菌产品从这些组织中的释放一致。
图2.(a)pyy、爪蟾抗菌肽-2和cathelicithin的肽结构(左)和静电表面(右)。pyy与爪蟾抗菌肽-2共享结构和电荷特征。(b)pyy(左)和爪蟾抗菌肽-2(右)的α螺旋区的螺旋投影显示在疏水性对比亲水性表面定位和总电荷方面的相似。(c)在生长测定中，pyy和α螺旋pyy13-36没有可观察到的杀菌作用。(b)在菌丝诱导条件下，与pyy1-12或乱序肽相比，爪蟾抗菌肽-2、pyy和pyy13-36抑制培养物的生长。(e)与乱序肽对照相比显示的代表性24小时生长培养物的变化。
图3.(a)白色念珠菌(sc3514)生物膜生长的代表性结果以及相应的肽处理后所得的上清液悬浮液。在白色念珠菌和热带念珠菌(c.tropicalis)的多个菌株中重复该测定，结果相似。结果证明与对照肽或pyy1-12相比，pyy、pyy13-36和爪蟾抗菌肽-2抑制生物膜形成。(b)结晶紫对白色念珠菌生物膜的代表性染色。(c)与肽对照相比，用pyy、pyy13-36或爪蟾抗菌肽-2处理白色念珠菌或热带菌的菌丝形式可抑制呼吸作用。(d)白色念珠菌或热带念珠菌的酵母形式的处理在很大程度上不受pyy或pyy13-36影响，而爪蟾抗菌肽-2抑制活性。专性酵母酿酒酵母同样对肽处理易感。(e)用pyy或pyy13-36处理白色念珠菌的菌丝形式证明了与乱序肽对照相比，许多有毒基因下调。(f)与用碘化丙啶可视化的对于爪蟾抗菌肽-2(12um)观察到的泛渗透性相反，pyy(12um)仅损害白色念珠菌菌丝尖端处的渗透性。(g)在n末端用fitc标记pyy肽证明了菌丝渗透性与标记的肽积累相关。
图4.在长期抗生素易感性模型中，在白色念珠菌在胃肠道定殖后进行外源性pyy施用或内源性表达的体内测试。(a)在长期定殖期间施用了200ug乱序肽、pyy或pyy13-36的野生型小鼠中的总的粪便白色念珠菌菌落形成单位(cfu/mg粪便)。处理组之间的体重没有变化。(b)在长期定殖期间pyy缺陷型和野生型动物中的总的粪便白色念珠菌cfu。组间的体重没有变化。基因型之间的粪便排出量没有变化，消除了作为肠道定植差异的驱动因素的通过时间(transittime)。
图5.与对照相比，单核细胞增生李斯特氏菌(l.mono)、金黄色葡萄球菌(s.aureus)、大肠杆菌(e.coli)和沙门氏菌属(salmonella)在浓度为1.75、3、6.25、12.5和25um的pyy(a)和pyy13-36(b)中的生长。在厌氧和好氧生长条件下选择革兰阴性和阳性物种。在测试的任何物种中均未发现差异。
图6.通过将丙氨酸替换为丙氨酸来修饰pyy电荷。(a)在pyy与用丙氨酸替代修饰的pyy(pyymod)之间未观察到主要的结构差异。(b)具有丙氨酸替代的肽序列。pyy1-36(seqidno:1)、经修饰的pyy1-36(seqidno:47)、pyy1-13(seqidno:48)、pyy14-36(seqidno:2)和经修饰的pyy14-36(seqidno:49)。(c)天然和经修饰的肽在生物膜形成中的代表性变化。精氨酸残基电荷的修饰降低了pyy和pyy13-36对生物膜抑制的抑制作用，表明电荷相互作用在介导抗生物膜活性中的重要性。
图7.(a)在白色念珠菌(菌株sc3514)的菌丝对比酵母对照中发现的毒力基因的诱导。(b)用pyy、pyy13-36或爪蟾抗菌肽-2处理的菌丝中的毒力基因表达表明，与对照相比，pyy和pyy13-36下调了毒力，而对于哺乳动物肠道不是天然的两栖动物肽爪蟾抗菌肽-2诱导了几种毒力基因的表达。
图8.在暴露5分钟内，在(a)1.75um、(b)3um、(c)6.25um、(d)12.5um、(e)25um和(f)50um下，pyy13-36对白色念珠菌菌丝渗透性的剂量响应，其中＝/>3um在该时间点就足以解决视力障碍。
图9.呼吸道真菌病原体曲霉菌属(aspergillus)未显示对浓度为50um的pyy(a、b)或爪蟾抗菌肽-2(c、d)的渗透性易感性。
图10.整个脊椎动物进化过程中结构的肽序列的保守性。(a)人、斑马鱼和鳐中的pyy的肽结构。(b)小鳐，猬白鳐。(c)具有h&e(上图)和pyy免疫荧光(下图)的猬白鳐的小肠的组织学。(d)pyy阳性细胞遍布猬白鳐的整个胃肠道，包括胃、前肠、螺旋肠，但不存在于后肠中。
图11.爪蟾抗菌肽2(左)和pyy13-34的螺旋轮表示(使用heliquest生成的；gautier等bioinformatics.2008年9月15日；24(18):2101-2.；通过引用整体并入本文)。
图12.天然pyy13-36和具有增强的抗真菌活性的经修饰的序列的螺旋轮图。方框表示改变的氨基酸残基，箭头表示疏水性力矩的方向和大小(使用heliquest生成的)。
图13.avpeptide在抑制白色念珠菌sc5314菌株形成生物膜中的作用。在通过用结晶紫染料染色来定量生物膜的测定中测量生物膜的形成。生物膜吸收的染料量与存在的生物膜的量成正相关。通过在600nm(od600)的波长下读取光密度来测量染料的量。在存在或不存在浓度为10、30或40μm的肽的情况下，在24小时内测量生物膜的形成。
图14.pyy13-36可防止白色念珠菌的耐氟康唑菌株形成生物膜。在通过用结晶紫染料染色来定量生物膜的测定中测量生物膜的形成。生物膜吸收的染料量与存在的生物膜的量成正相关。通过在600nm(od600)的波长下读取光密度来测量染料的量。在存在或不存在指定浓度的肽或抗真菌药物的情况下，在24小时内测量白色念珠菌的氟康唑敏感性(sc5314)或抗性(atcc96901,321182)菌株的生物膜形成。
图15.pyy(智人)与神经肽y(智人)(上图)和两栖动物皮肤pyy(双色猴树蛙(phyllomedusabicolor))(下图)的序列比较。
图16.pyy13-36比具有酰胺化的c末端(pyy13-36-nh2)的pyy13-36更有效地抑制白色念珠菌的生物膜形成。在通过用结晶紫染料染色来定量生物膜的测定中测量生物膜的形成。生物膜吸收的染料量与存在的生物膜的量成正相关。通过在600nm(od600)的波长下读取光密度来测量染料的量。呈现的数据是在存在或不存在浓度为30μm或40μm的肽的情况下，在24小时内测量生物膜形成的3个独立生物学重复的平均值。
定义
尽管与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料都可以用于本文描述的实施方案的实践或测试，但本文描述了一些优选方法、组合物、装置和材料。然而，在描述本发明的材料和方法之前，应当理解，本发明不限于本文描述的特定分子、组合物、方法或方案，因为这些可根据常规实验和优化而变化。还应理解，说明书中使用的术语仅出于描述特定形式或实施方案的目的，并不意图限制本文所述的实施方案的范围。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。然而，在有冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。因此，在本文描述的实施方案的上下文中，采用以下定义。
如本文和所附权利要求书中所用，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括复数所指物。因此，例如，“经修饰的pyy肽”是指本领域技术人员已知的一种或多种经修饰的pyy肽及其等同物，等等。
如本文中所用，术语“和/或”包括所列项的任何和所有组合，包括单独列出的任何项。例如，“a、b和/或c”涵盖a、b、c、ab、ac、bc和abc，其每一个将被单独地视为由表述“a、b和/或c”描述。
如本文中所用，术语“包含”及其语言变化形式表示存在所列举的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等，而不排除另外的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等的存在。相反，术语“由……组成”及其语言变化形式表示存在所列举的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等，并且除常规相关杂质外，排除任何未列举的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等。短语“基本上由……组成”表示所列举的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等，以及不会实质性影响组合物、系统或方法的基本性质的任何另外的一个或多个特征、一个或多个要素、一个或多个方法步骤等。使用开放的“包含”语言描述本文的许多实施方案。此类实施方案涵盖了多个封闭的“由实施方案组成”和/或“基本上由实施方案”组成，其可以替代地使用这种语言来要求或描述。
如本文中所用，术语“受试者”广泛地指任何动物，包括但不限于人和非人动物(例如，狗、猫、牛、马、绵羊、家禽、鱼、甲壳动物等)。如本文中所用，术语“患者”通常是指正被治疗疾病或病患的受试者。
如本文中所用，术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性载体的组合，这使得该组合物特别适合于体外、体内或离体的诊断或治疗用途。
如本文中所用，术语“药学上可接受的”或“药理学上可接受的”是指当向受试者施用时基本上不产生不良反应(例如毒性反应、过敏应或免疫反应)的组合物。
如本文中所用，术语“药学上可接受的载体”是指任何标准药物载体，包括但不限于磷酸盐缓冲盐溶液、水、乳剂(例如，油/水或水/油乳剂)，以及各种类型的润湿剂，任何和所有溶剂、分散介质、涂料、十二烷基硫酸钠、等渗和吸收延迟剂、崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)等。组合物还可包含稳定剂和防腐剂。关于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见，例如，martin，remington'spharmaceuticalsciences，第15版，mackpubl.co.,easton,pa.(1975)，通过引用整体并入本文。
如本文中所用，术语“施用”和“施予”是指对受试者或体内、体外或离体细胞、组织和器官给予药物、前药或其它剂或治疗性治疗的行为。针对人体的示例性施用途径可以是通过大脑或脊髓的蛛网膜下的空间(鞘内)、眼睛(眼)、口(口服)、皮肤(局部或经皮)、鼻(经鼻)、肺(吸入剂)、口腔粘膜(颊)、耳、直肠、阴道、通过注射(例如，静脉内、皮下、瘤内、腹膜内等)等。
如本文中所用，术语“共同施用(co-administration\co-administering)”是指对受试者施用至少两种剂(例如，pyy肽和第二剂)或疗法。在一些实施方案中，两种或多种剂或疗法的共同施用是同时的。在其它实施方案中，在第二剂/疗法之前施用第一剂/疗法。本领域技术人员理解所使用的各种剂或疗法的制剂和/或施用途径可以变化。共同施用的合适剂量可以由本领域技术人员容易地确定。在一些实施方案中，当剂或疗法被共同施用时，以比用于其单独施用的适当剂量低的剂量来施用相应的剂或疗法。因此，在剂或疗法的共同施用降低潜在有害(例如，具有毒性的)的一种或多种剂的必需剂量的实施方案中，和/或当两种或更多种剂的共同施用导致受试者对所述剂之一的有益作用致敏(通过另一剂的共同施用)时，尤其需要共同施用。
如本文中所用，术语“有效量”是指足以实现有益或期望的结果的组合物的量。有效量可在一次或多次施用、应用或剂量中施用，并且不旨在限于特定制剂或施用途径。
如本文中所用，术语“治疗”是指抑制受试者的疾病、病症或病患(例如，心肌缺血)。治疗疾病或病患包括改善至少一种症状，减轻严重度，阻碍进展和/或治愈受试者的疾病或病患。
如本文中所用，术语“预防”是指为减少受试者(例如，处于危险中的受试者)染上或患有特定疾病、病症或病患(例如，心肌梗塞)的可能性而采取的预防性步骤。不必将受试者中疾病、病症或病患发生的可能性降低到零来预防发生；相反，如果步骤降低了整个群体的疾病、病症或病患的风险，则所述步骤在本文的范围和含义内预防所述疾病、病症或病患。
除非另有说明，否则术语“氨基酸”是指天然氨基酸、非天然氨基酸和氨基酸类似物，全部为d和l立体异构体(如果它们的结构允许此类立体异构体形式的话)。
天然氨基酸包括丙氨酸(ala或a)、精氨酸(arg或r)、天冬酰胺(asn或n)、天冬氨酸(asp或d)、半胱氨酸(cys或c)、谷氨酰胺(gln或q)、谷氨酸(glu或e)、甘氨酸(gly或g)、组氨酸(his或h)、异亮氨酸(ile或i)、亮氨酸(leu或l)、赖氨酸(lys或k)、甲硫氨酸(met或m)、苯丙氨酸(phe或f)、脯氨酸(pro或p)、丝氨酸(ser或s)、苏氨酸(thr或t)、色氨酸(trp或w)、酪氨酸(tyr或y)和缬氨酸(val或v)。
非天然氨基酸包括但不限于氮杂环丁烷羧酸、2-氨基己二酸、3-氨基己二酸、β-丙氨酸、萘基丙氨酸(“naph”)、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基异丁酸、3-氨基异丁酸、2-氨基庚二酸、叔丁基甘氨酸(“tbug”)、2,4-二氨基异丁酸、锁链素、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、n-乙基甘氨酸、n-乙基天冬酰胺、高脯氨酸(“hpro”或“homop”)、羟基赖氨酸、别-羟基赖氨酸、3-羟基脯氨酸(“3hyp”)、4-羟基脯氨酸(“4hyp”)、异锁链素、别-异亮氨酸、n-甲基丙氨酸(“meala”或“nime”)、包括n-甲基甘氨酸在内的n-烷基甘氨酸(“nag”)、n-甲基异亮氨酸、包括n-甲基戊基甘氨酸在内n-烷基戊基甘氨酸(“napg”)。n-甲基缬氨酸、萘基丙氨酸、正缬氨酸(“norval”)、正亮氨酸(“norleu”)、辛基甘氨酸(“octg”)、鸟氨酸(“orn”)、戊基甘氨酸(“pg”或“pgly”)、哌啶酸、硫代脯氨酸(“thiop”或“tpro”)、高赖氨酸(“hlys”)和高精氨酸(“harg”)。
术语“氨基酸类似物”是指这样的天然或非天然氨基酸，其中c末端羧基、n末端氨基和侧链官能团中的一个或多个已被可逆地或不可逆地化学阻断，或以其它方式修饰成另一种官能团。例如，天冬氨酸-(β-甲基酯)是天冬氨酸的氨基酸类似物；n-乙基甘氨酸是甘氨酸的氨基酸类似物；或者丙氨酸羧酰胺是丙氨酸的氨基酸类似物。其它氨基酸类似物包括甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸砜、s-(羧甲基)-半胱氨酸、s-(羧甲基)-半胱氨酸亚砜和s-(羧甲基)-半胱氨酸砜。
如本文中所用，术语“肽”是指通过肽键连接在一起的氨基酸的寡聚物至短的聚合物。与其它氨基酸聚合物(例如，蛋白质、多肽等)相反，肽的长度通常约为50个氨基酸或更少(例如，50个、45个、40个、35个、30个、25个、20个、15个、10个或更少，或介于其间的范围(例如10个-30个))。肽可包含天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物和/或经修饰的氨基酸。肽可以是天然存在的蛋白质的子序列或非天然(人工)序列。
如本文中所用，术语“类肽”是指其中在肽主链的氮原子上而非在α-碳上对侧链进行了官能化的一类拟肽。
如本文中所用，“保守”氨基酸取代是指用具有相似化学性质(诸如大小或电荷)的另一种氨基酸对肽或多肽中的氨基酸进行的取代。出于本公开的目的，以下八个基团中的每一个均包含彼此为保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(a)和甘氨酸(g)；
2)天冬氨酸(d)和谷氨酸(e)；
3)天冬酰胺(n)和谷氨酰胺(q)；
4)精氨酸(r)和赖氨酸(k)；
5)异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、甲硫氨酸(m)和缬氨酸(v)；
6)苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)和色氨酸(w)；
7)丝氨酸(s)和苏氨酸(t)；以及
8)半胱氨酸(c)和甲硫氨酸(m)。
天然存在的残基可根据共同的侧链特性分为几类，例如：极性正性(或碱性)(组氨酸(h)、赖氨酸(k)和精氨酸(r))；极性负性(或酸性)(天冬氨酸(d)、谷氨酸(e))；极性中性(丝氨酸(s)、苏氨酸(t)、天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q))；非极性脂族(丙氨酸(a)、缬氨酸(v)、亮氨酸(l)、异亮氨酸(i)、甲硫氨酸(m))；非极性芳族(苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w))；脯氨酸和甘氨酸；以及半胱氨酸。如本文中所用，“半保守”氨基酸取代是指用同一类内的另一氨基酸对肽或多肽中的氨基酸进行的取代。
在一些实施方案中，除非另有说明，否则保守或半保守氨基酸取代也可以涵盖具有与天然残基相似的化学性质的非天然存在的氨基酸残基。这些非天然残基通常通过化学肽合成而非通过生物系统中的合成掺入。这些包括但不限于拟肽和氨基酸部分的其它反向或颠倒形式。在一些实施方案中，本文的实施方案可限于天然氨基酸、非天然氨基酸和/或氨基酸类似物。
非保守取代可涉及将一个类别的成员换成另一类别的成员。
如本文中所用，术语“序列同一性”是指两个聚合物序列(例如，肽、多肽、核酸等)具有相同顺序的单体亚单位组成的程度。术语“序列相似性”是指两个聚合物序列(例如，肽、多肽、核酸等)仅通过保守和/或半保守氨基酸取代而相异的程度。“序列同一性百分比”(或“序列相似性百分比”)通过以下方式计算：(1)在比较窗口(例如，较长序列的长度，较短序列的长度，指定的窗口等)中比较两个最佳比对的序列，(2)确定包含相同(或相似)单体(例如，两个序列中都存在的相同氨基酸，两个序列中都存在的相似氨基酸)的位置的数目以产生匹配位置的数目，(3)将匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数(例如，较长序列的长度，较短序列的长度，指定的窗口)，以及(4)将结果乘以100以生成序列同一性百分比或序列相似性百分比。例如，如果肽a和肽b的长度均为20个氨基酸，并且除1个位置外在所有位置处具有相同的氨基酸，则肽a和肽b具有95％的序列同一性。如果在非相同位置处的氨基酸共有相同的生物物理特性(例如，两者均为酸性的)，则肽a和肽b将具有100％的序列相似性。再举一例，如果肽c的长度为20个氨基酸并且肽d的长度为15个氨基酸，并且肽d的15个氨基酸中有14个与肽c的一部分的氨基酸相同，则肽c和肽d具有70％序列同一性，但肽d与肽c的最佳比较窗口具有93.3％序列同一性。出于计算本文中的“百分比序列同一性”(或“百分比序列相似性”)的目的，将比对序列中的任何缺口均视为该位置处的不匹配。
在本文描述中描述为与参考序列id号具有特定百分比序列同一性或相似性(例如，至少70％)的任何多肽也可以表示为相对于该参考序列具有最大数目的取代(或末端缺失)。例如，“与seqidno:z具有至少y％序列同一性”的序列相对于seqidno:z可具有多达x个取代，因此也可以表示为“相对于seqidno:z具有x个或更少的取代”。
如本文中所用，术语“野生型”是指具有从天然存在的来源分离的基因或基因产物的特征(例如，序列)的该基因或基因产物(例如，蛋白质)，并且在群体中最常被观察到。相反地，术语“突变体”是指当与野生型基因或基因产物相比时在序列上显示出修饰的基因或基因产物。注意，“天然存在的突变体”是自然界中存在的，但当与野生型基因或基因产物相比，具有改变的序列的基因或基因产物；它们不是最常见的序列。“合成”突变体是当与野生型基因或基因产物相比具有改变的序列，并且在自然界中不存在的基因或基因产物。突变基因或基因产物可以是存在于自然界中的天然存在的序列，但不是通过人或实验干预产生的该基因或基因产物的最常见变体或“合成”。
如本文中所用，术语“pyy肽”是指野生型pyy序列(seqidno:1)、其天然存在的突变体形式以及其合成或修饰的(即非天然存在的)形式。
如本文中所用，术语“抗微生物剂”用于描述治疗微生物感染(例如，由细菌、病毒、原生动物或真菌引起的感染)的治疗性化合物或生物活性剂。抗微生物剂可以是抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂或抗原生动物或抗寄生虫剂(其也可用于治疗多细胞寄生虫)。
如本文中所用，术语“抗生素”和“抗菌剂”是指具有抗细菌活性的化学剂。通常，抗生素是杀死或抑制细菌生长的物质或化合物。抗菌抗生素可根据其靶标特异性进行分类：“窄谱”抗生素靶向特定类型的细菌，诸如革兰阴性或革兰阳性细菌，而广谱抗生素会影响多种细菌。靶向细菌细胞壁(例如，青霉素、头孢菌素、头孢烯)或细胞膜(例如，多粘菌素)或干扰必需细菌酶(例如，喹诺酮、磺胺类)的抗生素通常性质上是杀菌性的。靶向蛋白质合成那些抗生素(诸如氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类)通常具有抑菌作用。三种更新类别的抗生素包括：环脂肽(例如，达托霉素)、甘氨酰环素(例如，替加环素)和噁唑烷酮类(例如,利奈唑胺)。替加环素是广谱抗生素，而另外两种对革兰阳性感染有用。
如本文中所用，术语“抗病毒剂”是指用于治疗病毒感染的化学剂。抗病毒药是一类专门用于治疗病毒感染的药物，特定的抗病毒药可用于治疗特定病毒的感染。抗病毒药通常仅抑制病毒发展。
如本文中所用，术语“抗真菌剂”是指可用于治疗患者的真菌感染的治疗性化合物或生物活性剂。抗真菌药是用于抑制真菌生长或破坏真菌的药物。抗真菌剂包括，例如，多烯抗真菌剂、咪唑、三唑和噻唑抗真菌剂、烯丙胺、棘孢菌素、灰黄霉素，氟胞嘧啶、十一烯酸等。
如本文中所用，术语“抗寄生虫剂”是指用于治疗包括线虫、绦虫、吸虫、传染性原生动物和变形虫在内的寄生虫病的治疗性化合物或生物活性剂。示例性抗寄生虫剂包括：杀线虫药(例如，甲苯咪唑、双羟萘酸噻嘧啶、噻菌灵、二乙基卡巴嗪)、杀绦虫药(例如，氯硝柳胺、吡喹酮)、抗吸虫药(例如，吡喹酮)、抗阿米巴药(例如，利福平和两性霉素b)、抗原生动物药(例如，美拉胂醇、依氟鸟氨酸、甲硝唑和替硝唑)，等等。
如本文中所用，术语“微生物群”是指定位至不同环境的微生物的集合。微生物群可包括例如栖于特定环境中的各种细菌、真核生物(例如，真菌)和/或古细菌的群体。例如，“肠道微生物群”、“阴道微生物群”和“口腔微生物群”是指分别定位于或存在于肠、阴道或口腔中的一种或多种微生物的集合。
“正常微生物群”是指以正常状态、非病理状态，非毒力状态定位在特定环境中的微生物群体。“正常微生物群”具有正常的成员资格和正常的相对丰度。
“异常微生物群”是指定位在患有病理状态或有患病理状态风险的受试者中的特定环境中的各种微生物(或微生物形式)的群体。异常微生物群在各种微生物的身份(例如，成员资格)、绝对量或相对量(例如，相对丰度)方面不同于正常微生物群。
如本文中所用，术语“共生微生物”或“共生形式”是指对宿主无致病性并且是宿主的正常微生物群的一部分的微生物(例如，真菌)或其形式(例如，菌丝形式)。
如本文中所用，术语“微生物剂”、“共生微生物剂”和“益生菌”是指用于向受试者施用的包含微生物或多种不同微生物的群体的组合物。
具体实施方式
本文提供了用于治疗和/或预防致病性真菌感染和维持微生物群系共生的组合物和方法。特别地，本文提供了包含经修饰的肽yy(pyy)肽的组合物及其治疗性和/或预防性使用方法。在一些实施方案中，本文提供了经修饰的pyy肽，其表现出增强的抗真菌活性、增强的生物稳定性、增强的生物利用度、改变的抗微生物特性等中的一种或多种。
在本文的实施方案的开发期间中进行的实验表明，pyy也存在于人和鼠的潘氏细胞的离散致密核心颗粒中。潘氏细胞是肠道抗微生物肽(amp)(包括溶菌酶、spla2-iia和防御素(和鼠隐窝素))的主要生产者(参考文献9；通过引用整体并入)，所述抗微生物肽在顶端被释放到肠腔中。先天性免疫和胆碱能刺激后，pyy被释放到肠腔中，这与抗微生物肽(amp)的作用一致。
在结构上，pyy类似于一类amp，包括两个反平行螺旋、延伸14个残基的n末端聚脯氨酸螺旋，以及延伸最后22个残基的两亲性c末端聚阳离子α-螺旋。α-螺旋片段类似于其它阳离子抗微生物化合物，包括两栖动物爪蟾抗菌肽-2和哺乳动物cathelicidin(图11)。
与其它amp相比，pyy几乎没有抗菌活性，并且对共生酵母形式的影响也很小。然而，在本文的实施方案的开发期间进行的实验表明，pyy替代地靶向多态性真菌(polyphenicfungi)(例如，白色念珠菌)的强毒形式，通过透化末端菌丝细胞并抑制毒力基因表达和生物膜形成而损害细胞完整性。
在本文实施方案的开发期间进行的实验还证明，长期白念珠菌定殖在pyy缺陷型小鼠(pyy-/-小鼠)中更大，但被pyy的施用阻断，并且pyy是进化上保守的抗微生物肽，其在控制多态性真菌(例如，白色念珠菌)的毒力和维持肠道内的真菌共生方面起作用。pyy可透化念珠菌属菌丝尖，同时允许念珠菌属的酵母形式不受抑制地继续生长，这是用于控制共生真菌扩散的精致系统。与其它已知的抗微生物肽(其通过非特异性地靶向细菌来消除细菌)相反，pyy区分同一菌株的共生形式和强毒形式。这使pyy能够根据其功能/表型状态而不是其基因组身份来靶向物种。当与其它白色念珠菌细胞相比时，白色念珠菌的末端菌丝细胞在其细胞壁的组成上有所不同。白色念珠菌从菌丝的顶端分泌导致生物膜形成的蛋白酶。另外，菌丝尖端表现出向触性，并且从菌丝尖端开始发生菌丝的生长。构成末端菌丝尖端的细胞壁的壳多糖和葡聚糖链的纤维没有像其余细胞壁中那样交联。
结合白色念珠菌描述了本文的一些实施方案；然而，本文的实施方案不限于此。相反，本文所述的实施方案可以更广泛地用于治疗或预防由真菌引起的感染和/或发病机制，包括双态性真菌或其它多态性真菌(例如，能够采用菌丝形式的真菌)，例如但不限于耳念珠菌(candidaauris)、新型隐球菌(cryptococcusneoformans)、罗伦特隐球菌(crypotococcuslaurentii)、浅白隐球菌(cryptococcusalbidus)、格特隐球菌(cryptococcusgattii)、杰氏肺囊虫(pneumocystisjirovecii)、黑葡萄穗霉(stachybotrychartarum)、粗球霉菌(coccidioidesimmitis)、巴西芽生菌(paracoccidioidesbrasiliensis)、玉米黑粉菌(ustilagomaydis)、皮炎芽生菌(blastomycesdermatitidis)、荚膜组织胞浆菌(histoplasmacapsulatum)、申克氏孢子丝菌(sporothrixschenckii)和金孢子菌属某种(emmonsiasp)。在一些实施方案中，真菌对一种或多种抗真菌化合物具有抗性，所述抗真菌化合物包括但不限于克霉唑、益康唑、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、泊沙康唑、伏立康唑、咪康唑、噻康唑、特比萘芬和阿莫罗芬。应将在本文中描述为特别地涉及白色念珠菌的实施方案理解为更广泛地应用于通常涵盖多态性真菌、双态性真菌和/或致病性真菌的实施方案。举例来说，下面提供白色念珠菌的更多细节。
白色念珠菌是造成人宿主的念珠菌病的机会性真菌病原体。白色念珠菌以几种不同的形态学形式(从单细胞芽殖酵母到具有平行侧壁的真菌丝不等)生长。白色念珠菌在胃肠道和泌尿生殖道中作为无害共生菌生活。然而，这些生物体的过度生长、各种毒力因子的表达或至毒力形式的转化导致疾病。发病机理最常见地于免疫功能低下的个体(诸如感染hiv的受害者、移植受者、化疗患者和婴儿(例如，低出生体重的婴儿))中发生。由白色念珠菌引起的疾病的三种主要形式是口咽念珠菌病、外阴阴道念珠菌病和侵袭性念珠菌病。对于口咽念珠菌病，感染发生在口腔或喉咙中，并通过口腔粘膜上的白斑生长来鉴定。外阴念珠菌病或“酵母菌感染”是白色念珠菌在阴道中过度生长，并导致皮疹、发痒，以及从生殖器区域的排出。最后，侵袭性念珠菌病是在真菌病原体进入血流时发生的，并且可容易地扩散到全身的器官。致病性白色念珠菌感染通常始于正常微生物区系中的白色念珠菌的共生群体。念珠菌病是由白色念珠菌的异常生长引起的，这可能由环境(例如，肠)的变化或微生物群的失衡所致。可引发失衡的事件包括抗生素的使用(例如，乳杆菌属细菌量的减少、其它感染、免疫系统受损、饮食变化以及其它疾病或病患。
白色念珠菌是多态性真菌，其可以以几种不同的形式(主要是酵母、假菌丝和菌丝)生长。菌丝形式在感染中更普遍(例如，更强的毒力，更具致病性)，而酵母形式在白色念珠菌在个体之间的传递中更常见。几个因素可导致形态发生变化，诸如ph值差异、温度变化、二氧化碳水平、饥饿和群体感应分子(法尼醇、酪醇和十二烷醇)。
白色念珠菌具有糖基磷脂酰肌醇(gpi)连接的细胞表面糖蛋白的特殊组，所述糖蛋白可使其能够粘附至微生物表面。粘附基因在口腔和阴道上皮细胞感染期间被上调，并且还可与白色念珠菌侵入宿主上皮细胞和内皮细胞相关。侵袭基因介导与宿主配体诸如上皮细胞上的e-钙粘蛋白和内皮细胞上的n-钙粘蛋白的结合，并它诱导宿主细胞吞噬真菌病原体。入侵的另一种方法是白色念珠菌菌丝主动渗透到宿主细胞中。
白色念珠菌在有生命和无生命的表面(诸如粘膜和医疗设备(例如，导管、外科器械、植入物、支架、医疗管等))上形成生物膜。酵母细胞粘附到表面后，菌丝细胞在生物膜表面发育。
白色念珠菌分泌3种主要的水解酶：蛋白酶、磷脂酶和脂肪酶，所述酶促进病原体主动渗透进入宿主细胞并从环境中摄取细胞外营养物。
白色念珠菌通常存在于健康个体的胃肠道微生物群系中，在这种环境中，营养物水平相对较高。然而，在感染过程中生态位变化期间，可用营养物水平也会变化。因此，真菌迅速经历了代谢适应，诸如它们的糖酵解、糖异生和饥饿响应。白色念珠菌可通过血流感染人宿主的几乎每个器官，从而使念珠菌血症的死亡率升高。
组合物(例如pyy肽)、治疗和预防感染的方法以及维持或建立健康/正常微生物群(例如，在肠中、在阴道中、在口腔中、在皮肤上、在血液中等)的方法与例如多种酵母中的任一种的传染性真菌微生物一起使用，所述酵母是诸如念珠菌属物种的真菌(例如，白色念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌(candidaparapsilosis)、光滑念珠菌(candidaglabrata)、克鲁斯念珠菌(candidakrusei)、拟热带念珠菌(candidapseudotropicalis)、葡萄牙念珠菌(candidalusitaniae)、金念珠菌(candidaauris)或吉利蒙氏念珠菌(candidaguilliermondi))、隐球菌属物种真菌(例如，新隐球菌(cryptococcusneoformans))或双态性或多态性真菌的菌丝相。双态性和多态性真菌包括念珠菌属物种，荚膜组织胞浆菌(histoplasmacapsulatum)、皮炎芽生菌、巴西芽生菌、粗球霉菌、申克氏孢子丝菌等。在一些实施方案中，真菌对一种或多种抗真菌化合物(包括但不限于克霉唑、益康唑、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、泊沙康唑、伏立康唑、咪康唑、噻康唑、特比萘芬和阿莫罗芬)具有抗性。在一些实施方案中，用本文的方法和组合物治疗/预防单态性真菌感染。
在一些实施方案中，本文提供了pyy肽(例如，经修饰的pyy肽(例如，与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6具有小于100％的序列同一性))，及其用于以下方面的使用方法：(i)治疗致病性感染(例如，真菌感染、多态性真菌感染、白色念珠菌致病性感染等)的治疗，(ii)预防致病性感染(例如，在健康受试者中，在有真菌感染的危险的受试者中，等等)，(iii)在受试者中维持健康/正常的微生物群(例如，允许真菌的无毒力形式定殖，同时防止毒力形式(例如，菌丝)形成和/或扩散)，和/或(iv)在受试者中建立/重建健康/正常的微生物群。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:3的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:3的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:3包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:4的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:4的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:4包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:5的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:5的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2、seqidno:6的少于100％序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:5包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的x1的位置处的氨基酸不是e。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的x2的位置处的氨基酸不是h。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的x3的位置处的氨基酸不是l。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的x4的位置处的氨基酸不是r。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的x5的位置处的氨基酸不是y。
在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的位置2(x1)的位置处的氨基酸为d。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的位置13(x2)的位置处的氨基酸为k。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的位置17(x3)的位置处的氨基酸为a。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的位置22(x4)的位置处的氨基酸为l。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:3的位置23(x5)的位置处的氨基酸为a或r。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:9的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:9的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:9包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:10的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:10的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:10包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:11的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:11的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:11包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:26的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:26的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:26包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:29的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:29的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:29包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:31的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:31的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:31包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:34的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:34的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:34包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:35的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:35的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:35包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:36的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:36的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:36包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:37的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:37的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:37包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:38的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:38的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:38包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:24-38的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:24-38的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:24-38包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:39的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:39的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:39包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:39独中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:39的一个或多个“x”残基选自特定的组或类别的氨基酸残基(例如，非极性的、带电荷的等)。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x1的位置处的氨基酸不是s。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x2的位置处的氨基酸不是e。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x3的位置处的氨基酸不是h。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x4的位置处的氨基酸不是n。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x5的位置处的氨基酸不是l。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x6的位置处的氨基酸不是r。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:39的x7的位置处的氨基酸不是y。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:40的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:40的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:40包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:40中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:40的一个或多个“x”残基选自特定的组或类别的氨基酸残基(例如，非极性的、带电荷的等)。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x1的位置处的氨基酸不是s。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x2的位置处的氨基酸不是e。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x3的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x4的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x5的位置处的氨基酸不是a。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x6的位置处的氨基酸不是s。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x7的位置处的氨基酸不是h。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x8的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x9的位置处的氨基酸不是l。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:40的x10的位置处的氨基酸不是r。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:41的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:41的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:41包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:41中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:41的一个或多个“x”残基选自特定的组或类别的氨基酸残基(例如，非极性的、带电荷的等)。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x1的位置处的氨基酸不是s。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x2的位置处的氨基酸不是e。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x3的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x4的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x5的位置处的氨基酸不是a。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x6的位置处的氨基酸不是s。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x7的位置处的氨基酸不是h。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x8的位置处的氨基酸不是y。在一些实施方案中，pyy肽在相对于seqidno:41的x9的位置处的氨基酸不是l。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:42的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:42的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:42包含1-7个取代。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:43的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:43的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:43包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:43中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:43的一个或多个“x”残基选自特定的一组或一类氨基酸残基(例如，非极性的，带电荷的等)。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:44的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:44的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:44包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:44中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:44的一个或多个“x”残基选自特定的组或类别的氨基酸残基(例如，非极性的、带电荷的等)。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:45的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:45的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:45包含1-7个取代。在一些实施方案中，seqidno:45中的每个“x”残基独立地选自任何氨基酸(例如，天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、经修饰的氨基酸等)。在一些实施方案中，seqidno:45的一个或多个“x”残基选自特定的组或类别的氨基酸残基(例如，非极性的、带电荷的等)。
在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:46的至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列同一性，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽包含与seqidno:46至少70％(例如，>70％、>75％、>80％、<85％、>90％、>95％、100％)序列相似性(例如，保守的或半保守的)，但与seqidno:1、seqidno:2和/或seqidno:6的小于100％的序列同一性。在一些实施方案中，pyy肽相对于seqidno:46包含1-7个取代。
在一些实施方案中，相对于seqno:3-46中的一个的任何取代独立地是保守的、半保守的或非保守的取代。在一些实施方案中，相对于seqno:3-46中的一个的所有取代是保守的或半保守的取代。
在一些实施方案中，相对于pyy与两栖动物皮肤pyy(seqidno:43)、神经肽y(npy)(seqidno:44)或两者(seqidno:45)之间的进化保守序列，pyy肽的一个或多个位置是相同的或为保守的取代。
在一些实施方案中，pyy肽的长度为10-50个氨基酸(例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个、37个、38个、39个、40个、41个、42个、43个、44个、45个、46个、47个、48个、49个、50个，以及其中的任何范围)。在一些实施方案中，pyy肽在肽的长度上包含来自野生型或天然pyy肽序列的至少1个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个，以及其中的任何范围)突变。在一些实施方案中，pyy肽在肽的长度上包含来自野生型或天然pyy肽序列的至少1个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个或更多个，以及其中的任何范围)非保守突变。在一些实施方案中，pyy肽在肽的长度上包含来自野生型或天然pyy肽序列的至少1个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个，以及其中的任何范围)保守突变。在一些实施方案中，pyy肽在肽的长度上包含来自野生型或pyy肽序列的至少1个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个、32个、33个、34个、35个、36个，以及其中的任何范围)半保守突变。
在一些实施方案中，pyy肽内的所有氨基酸都是天然氨基酸。在一些实施方案中，pyy肽包含天然氨基酸、非天然氨基酸、氨基酸类似物、d-氨基酸和/或类肽氨基酸的组合。在一些实施方案中，pyy肽包含一个或多个修饰，诸如乙酰化、与棕榈酸的缀合、酰胺化、环化、磷酸化、peg化、脂化、酯化、糖基化等。
pyy已被研究为肠肽激素。肠道激素经常在它们的c末端被酰胺化，其中常规羧基被酰胺替代。实际上，pyy最早在搜索c末端酰胺化肽时被鉴定的(tatemoto和mutt,nature.1980；285(5764):417-8；通过引用整体并入本文)。小肠l细胞产生的胃肠激素(诸如pyy)的酰胺化是通过肽基甘氨酸α-酰胺化单加氧酶(pam)完成的。经常需要pam对胃肠激素的c末端酰胺化来实现它们的激素功能。然而，在本文的实施方案的开发期间进行的实验表明，pyy肽的c-末端酰胺化降低了抗真菌活性。
在一些实施方案中，pyy肽包含一个或多个修饰(例如，翻译后修饰、合成后修饰、包含修饰的氨基酸的掺入等)。示例性修饰(例如，体内或体外)包括但不限于：磷酸化(例如，丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等的可逆磷酸化、磷酸化)；糖基化(例如，天冬酰胺连接的(n-连接的)、丝氨酸/苏氨酸连接的(o-连接的)等)，诸如n-糖基化、o-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化、c-糖基化、磷酸糖基化等；遍在蛋白化(例如，赖氨酸的遍在蛋白化)；s-亚硝基化(例如，形成s-硝基硫醇(sno)的游离半胱氨酸残基的s-亚硝基化)；甲基化(例如，(n-甲基化、o-甲基化等)；n-乙酰化(例如，在n末端甲硫氨酸处、在赖氨酸的ε-nh2处，等)、脂化(例如，c末端糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚、n末端肉豆蔻酰化、s-肉豆蔻酰化、s-异戊烯化、s-棕榈酰化等)；硫辛酰化、去亚胺基化(例如，精氨酸转变为瓜氨酸的去亚胺基化)、脱酰胺(例如，谷氨酰胺至谷氨酸的转化、天冬酰胺至天冬氨酸的转化、c末端羧基对c末端酰胺基的替代等)；消除化(例如，磷酸苏氨酸和磷酸丝氨酸通过β-消除转化为烯烃，苏氨酸和丝氨酸的脱水，等)；二硫键桥接；蛋白水解裂解；异天冬氨酸形成(例如，通过天冬酰胺或天冬氨酸氨基酸残基的环化)；外消旋(例如，丝氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸等的外消旋)；蛋白质剪接(例如，内含肽的自我催化去除)；糖化；氨甲酰化(例如，异氰酸至n末端或赖氨酸侧链上的添加)；羰基化；异肽键形成；硫酸化(例如，硫酸根基团至酪氨酸的添加)；琥珀酰化(例如，琥珀酰基至赖氨酸的添加)；s-磺酰化(例如，三个氧原子至半胱氨酸的巯基的共价添加)；s-亚硫酰化(例如，两个氧原子至半胱氨酸残基的巯基的共价添加)；s-亚磺酰化(例如，一个氧原子至半胱氨酸残基的巯基的共价添加)；s-谷胱甘肽化；焦谷氨酸形成；丙酰化；腺苷酰化(例如，腺苷基部分(例如，至酪氨酸(o-连接)或组氨酸和赖氨酸(n-连接)等)的添加)；核苷酸添加(例如，adp-核糖基化等)；碘化(例如，碘原子至酪氨酸残基的芳环的添加)；羟基化(例如，氧原子至pro或lys残基的侧链的添加)；丙二酰化；丁酰化；酰胺化(例如，c端末端)；烷基化(例如，乙基的添加)；酰化(例如，o-酰化(酯)、n-酰化(酰胺)、s-酰化作用(硫酯)等)；生物素化；氨甲酰化；氧化(例如，一个或多个氧原子至易感侧链(例如，met、trp、his或cys残基)的添加)；聚乙二醇化等。
在一些实施方案中，pyy肽的丝氨酸和/或苏氨酸残基中的一个或多个(例如1个、2个、3个、4个等)包含o-连接的糖基化。
如通过生物膜测定所评估的，c末端酰胺化的pyy肽表现出显著的功效降低。在一些实施方案中，使本文所述的肽在c末端处脱酰胺。
在一些实施方案中，修饰本文所述的pyy肽的氨基和/或羧基末端。末端修饰可用于例如降低对蛋白酶消化的易感性，因此可用于延长肽在溶液中的半衰期，特别是在其中可能存在蛋白酶的生物流体中的半衰期。
氨基末端修饰包括甲基化(例如，-nhch3或-n(ch3)2)、乙酰化(例如，用乙酸或其卤代衍生物，诸如α-氯乙酸、α-溴乙酸或α-碘乙酸)、添加苄氧羰基(cbz)基团，或用包含由rcoo-定义的羧酸酯官能度或由r-so2-定义的磺酰基官能度的任何封闭基团封闭氨基末端，其中r选自烷基、芳基、杂芳基、烷基芳基等，和类似的基团。在一些实施方案中，在n末端处添加脱氨基酸(替代n末端氨基)以降低对蛋白酶的易感性或限制肽的构象。在某些实施方案中，用乙酸或乙酸酐乙酰化n末端。
羧基末端修饰包括用甲酰胺基团替代游离酸或在羧基末端形成环状内酰胺以引入结构约束。在一些实施方案中，将本文所述的肽环化。在一些实施方案中，在肽的末端添加或掺入脱氨基或脱羧基残基(例如，替代末端羧基)以降低对蛋白酶的易感性或限制肽的构象。环状肽合成的方法在本领域中，例如在美国专利申请号20090035814；muralidharan和muir,2006,natmethods,3:429-38；以及lockless和muir,2009,procnatlacadsciusa.june18,epub(通过引用整体并入)中是已知的。本文所述的pyy肽的c末端官能团包括酰胺、酰胺低级烷基、酰胺二(低级烷基)、低级烷氧基、羟基和羧基，及其低级酯衍生物，及其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，pyy肽的一个或多个氨基酸侧链被基团(诸如支链或直链烷基1-6链、环状4-元、5-元、6-元至7-元烷基、酰胺基、烷氧基、羟基、羧基、酯、4-元、5-元、6-元至7-元杂环等)修饰。在特定实施方案中，脯氨酸经修饰以显示4元、6元或7元环(例如，选自c、n、o和s)的大小。在一些实施方案中，环状基团是饱和或不饱和的，并且如果是不饱和的，则为芳族或非芳族的。杂环基团可包含一个或多个氮、氧和/或硫杂原子。此类基团的实例包括呋咱基、呋喃基、咪唑烷基、咪唑基、咪唑啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基(例如，吗啉代)、噁唑基、哌嗪基(例如，1-哌嗪基)、哌啶基(例如，1-哌啶基、哌啶子基)、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基(例如，1-吡咯烷基)、吡咯啉基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、硫代吗啉基(例如，硫代吗啉代)和三唑基。在一些实施方案中，这些杂环基团是取代的或未取代的。在一些实施方案中，当基团被取代时，如果没有另外说明，则取代基选自烷基、卤素、cf3、oh、sh、nh2、cn、取代或未取代的苯基或其它常见的有机基团。肽修饰的其它方法描述于例如hruby等(1990)biochemj.268:249-262(通过引用整体并入)中。
在一些实施方案中，相对于野生型pyy，经修饰的pyy肽表现出增强的特性。在一些实施方案中，经修饰的pyy肽表现出增强的溶解度、生物利用度、抗真菌活性(例如，抗白色念珠菌活性)、对抗真菌(例如，白色念珠菌)的菌丝形式的活性、结构稳定性、生物稳定性、生物利用度等。
如本文中所论述的，在一些实施方案中，提供了与天然pyy和/或本文所述序列相异的pyy肽。实施方案不受本文所述的特定序列和/或取代限制。在一些实施方案中，满足本文所述限制(例如，抗真菌毒力活性、抗微生物活性、抗真菌活性等)并具有未明确描述的取代的肽在本文实施方案的范围内。在一些实施方案中，本文所述的pyy肽被进一步修饰(例如，标准氨基酸的取代、缺失或添加；化学修饰等)。本领域中理解的修饰包括n-末端修饰、c-末端修饰(其保护肽免受蛋白水解降解)、酰胺基的烷基化、烃“装订”(hydrocarbon“stapling”)(例如，以稳定活性构象)。在一些实施方案中，本文所述的pyy肽可通过保守或半保守残基取代来修饰。在一些实施方案中，此类取代在保留残基的局部环境的同时提供了细微的变化。末端羧基的修饰包括但不限于酰胺、低级烷基酰胺、受约束的烷基(例如，支链、环状、稠合的金刚烷基)烷基、二烷基酰胺和低级烷基酯修饰。低级烷基为c1-c4烷基。此外，一个或多个侧基或末端基团可被具有普通技能的肽化学家已知的保护基团保护。氨基酸的α-碳可被单甲基化或二甲基化。
在一些实施方案中，本文描述的任何实施方案可包含对应于本文描述的pyy肽的具有本领域中理解的各种修饰的拟肽。在一些实施方案中，本文所述的pyy肽序列中的残基可被具有相似特征(例如，疏水性对疏水性、中性对中性等)或具有其它所需特征(例如，更酸、更加疏水、体积更小、体积更大)的氨基酸取代。在一些实施方案中，对非天然氨基酸(或除标准20个氨基酸外的天然氨基酸)进行取代以实现所需的性质。在一些实施方案中，具有在生理条件下带正电的侧链的残基或需要带正电的侧链的残基被残基取代，所述残基包括但不限于：赖氨酸、高赖氨酸、δ-羟基赖氨酸、高精氨酸、2,4-二氨基丁酸、3-高精氨酸、d-精氨酸、氨醛(精氨酸中的-cooh被-cho取代)、2-氨基-3-胍基丙酸、硝基精氨酸(n(g)-硝基精氨酸)、亚硝基精氨酸(n(g)-亚硝基精氨酸)、甲基精氨酸(n-甲基-精氨酸)、ε-n-甲基赖氨酸、别-羟基赖氨酸、2,3-二氨基丙酸、2,2'-二氨基庚二酸、鸟氨酸、对称-二甲基精氨酸、不对称-二甲基精氨酸、2,6-二氨基己酸、对氨基苯甲酸和3-氨基酪氨酸以及组氨酸、1-甲基组氨酸和3-甲基组氨酸。
中性残基是具有在生理条件下不带电荷的侧链的残基。极性残基优选在侧链中具有至少一个极性基团。在一些实施方案中，极性基团选自羟基、巯基、胺、酰胺和酯基团或允许形成氢桥的其它基团。在一些实施方案中，具有在生理条件下为中性/极性的侧链的残基或其中需要中性侧链的残基被包括但不限于以下残基的残基取代：天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、瓜氨酸、n-甲基丝氨酸、高丝氨酸、别-苏氨酸和3,5-二硝基酪氨酸和β-高丝氨酸。具有非极性、疏水性侧链的残基是在生理条件下不带电荷的残基，优选具有大于0、特别是大于3的亲水指数。在一些实施方案中，非极性疏水性侧链选自具有1至10个、优选2至6个碳原子的烷基、亚烷基、烷氧基、链烯氧基、烷基硫烷基和烯基硫烷基残基或具有5至12个碳原子的芳基残基。在一些实施方案中，具有非极性疏水性侧链的残基或其中需要非极性、疏水性侧链的残基被包括但不限于以下残基的残基取代：亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、n-甲基亮氨酸、叔丁基甘氨酸、辛基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、1-氨基环己基羧酸、n-甲基异亮氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸和n-甲基缬氨酸。
在一些实施方案中，分离和/或纯化(或基本上分离和/或基本上纯化)pyy肽。因此，在此类实施方案中，以基本上分离的形式提供pyy肽。在一些实施方案中，例如，从其它肽和/或由固相肽合成产生的肽分离出pyy肽。或者，在来自重组生产的细胞裂解后，可从其它蛋白质基本上分离出pyy肽。可采用蛋白质纯化的标准方法(例如，hplc)来基本上纯化pyy肽。
在一些实施方案中，取决于所需用途，可将pyy肽配制成许多不同的制剂。例如，在基本上分离肽(或什至几乎完全与其它蛋白质分离)的情况下，可将其配制在合适的培养基溶液中以进行储存(例如，在冷藏条件下或在冷冻条件下)。此类制剂可包含保护剂，诸如缓冲剂、防腐剂、防冻剂(例如，诸如海藻糖的糖)等。此类制剂的形式可以是溶液、凝胶等。在一些实施方案中，pyy肽以冻干形式制备。此外，此类制剂可包括其它所需的剂，诸如小分子或其它肽、多肽或蛋白质。实际上，可以提供包含本文所述的肽和/或多肽的不同实施方案的混合物的这种制剂。
在一些实施方案中，本文提供了本文所述的肽序列或其变体的拟肽形式。在一些实施方案中，拟肽的特征在于保留其肽等同物的极性(或非极性、疏水性等)、三维尺寸和功能性(生物活性)，但其中全部或部分肽键已被替换(例如，被更稳定的键联)的实体。在一些实施方案中，“稳定的”是指对化学降解或水解酶的酶促降解更具抗性。在一些实施方案中，替换酰胺键的键(例如酰胺键替代物)保留了酰胺键的一些性质(例如构象、空间体积、静电特性、氢键结合能力等)。“drugdesignanddevelopment”,krogsgaard,larsen,liljefors和madsen(编辑)1996,horwoodacad.publishers的第14章提供了用于拟肽设计和合成的技术的一般性论述，并且通过引用整体并入本文。合适的酰胺键替代物包括但不限于：n-烷基化((schmidt,r.等，int.j.peptideproteinres.,1995,46,47；通过引用整体并入本文)、逆-反酰胺(chorev,m.和goodman,m.,acc.chem.res,1993,26,266；通过引用整体并入本文)、硫代酰胺(shermand.b.和spatola,a.f.j.am.chem.soc.,1990,112,433；通过引用整体并入本文)、硫酯、膦酸酯、酮亚甲基(ketomethylene)(hoffman,r.v.和kim,h.o.j.org.chem.,1995,60,5107；通过引用整体并入本文)、羟基亚甲基、氟乙烯基((allmendinger,t.等，tetrahydronlett.,1990,31,7297；通过引用整体并入本文)、乙烯基、亚甲基氨基(sasaki,y和abe,j.chem.pharm.bull.199745,13；通过引用整体并入本文)、亚甲硫基(spatola,a.f.,methodsneurosci,1993,13,19；通过引用整体并入本文)、烷烃lavielle,s.等，int.j.peptideproteinres.,1993,42,270；通过引用整体并入本文)和磺酰胺基(luisi,g.等tetrahedronlett.1993,34,2391；通过引用整体并入本文)。
除了酰胺键替换以外，拟肽可涉及用二或三拟肽结构替换较大的结构部分，在这种情况下，涉及肽键的模拟部分(诸如唑衍生的模拟物)可用作二肽替换。合适的拟肽包括还原的肽，其中酰胺键已通过用还原剂(例如硼烷或氢化物试剂诸如氢化铝锂)处理而还原为亚甲基胺；这种还原具有增加分子的整体阳离子性的附加有利方面。
其它拟肽包括例如通过逐步合成酰胺官能化的多聚甘氨酸而形成的类肽。一些拟肽骨架可从它们的肽前体(诸如已被全甲基化的肽)中容易地获得，合适的方法由ostresh,j.m.等在proc.natl.acad.sci.usa(1994)91,11138-11142；通过引用整体并入本文)。
在各种实施方案中，通过与一种或多种聚合物或小分子取代基缀合来衍生本文公开的pyy肽。
在这些实施方案的某些实施方案中，通过偶联至聚乙二醇(peg)来衍生本文所述的pyy肽。可使用已知方法来执行偶联。参见，int.j.hematology,68:1(1998)；bioconjugatechem.,6:150(1995)；和crit.rev.therap.drugcarriersys.,9:249(1992)，所述参考文献全部通过引用整体并入本文。因此，本领域技术人员将能够利用此类公知的技术将一个或多个聚乙二醇聚合物与本文所述的pyy肽连接。合适的聚乙二醇聚合物通常是商购可得的，或者可以通过本领域技术人员公知的技术制备。聚乙二醇聚合物优选具有500至20,000的分子量，并且可以是支链或直链聚合物。
peg与本文所述的pyy肽的连接可以通过偶联至氨基、羧基或巯团来实现。这些基团通常是n-末端和c-末端，并且在诸如赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸和半胱氨酸之类的天然存在的氨基酸的侧链上。由于可通过固相肽化学技术来制备本公开的pyy肽，因此可以引入包含具有正交保护基团的二氨基和二羧酸基团的多种部分以与peg缀合。
本公开还提供了本文所述的pyy肽与除聚乙二醇外的一种或多种聚合物的缀合。
在一些实施方案中，可通过将各种长度的多聚氨基酸(例如，多聚组氨酸、多聚精氨酸、多聚赖氨酸等)和/或脂肪酸链与n末端或c末端或氨基酸残基侧链缀合或键联或附接来衍生本文所述的pyy肽。在某些实施方案中，通过添加聚酰胺链，特别是具有精确长度的聚酰胺链来衍生本文所述的pyy肽，如美国专利第6,552,167号(其通过引用整体并入)中所描述的。在其它实施方案中，如美国专利第5,359,030号和第5,681,811号(所述美国专利通过引用整体并入)中所述，通过添加烷基peg部分来修饰肽和多肽。
在某些实施方案中，通过与包括白蛋白和明胶的聚合物缀合来衍生本文公开的pyy肽。参见，gombotz和pettit,bioconjugatechem.,6:332-351,1995，其通过引用整体并入本文。
在另外的实施方案中，将本文公开的pyy肽与免疫球蛋白或免疫球蛋白片段(诸如抗体fc区)缀合或融合。
在各种实施方案中，通过连接小分子取代基来衍生本文所述的pyy肽，所述取代基包括短链烷基和受约束的烷基(例如，支链、环状、稠合金刚烷基)和芳族基团。
在某些实施方案中，本文所述的pyy肽包含烷基甘氨酸氨基酸类似物，其包含c5-c9直链或支链烷基侧链或环烷基。在一个实施方案中，pyy肽包含含有c6-c8直链或支链烷基侧链的烷基甘氨酸。在另一个实施方案中，pyy肽包含含有c8直链烷基侧链的辛基甘氨酸(辛基-甘氨酸)。
本文所述的pyy肽可被制备为与各种无机和有机酸和碱形成的盐。此类盐包括用有机和无机酸制备的盐，所述有机和无机酸例如用hcl、hbr、h2so4、h3po4、三氟乙酸、乙酸、甲酸、甲磺酸、甲苯磺酸、马来酸、富马酸和樟脑磺酸。用碱制备的盐包括铵盐、碱金属盐，例如钠盐和钾盐、碱土金属盐，例如钙盐、镁盐和锌盐。盐可以通过常规方式形成，诸如通过使产物的游离酸或碱形式与一个或多个当量的合适的碱或酸在所述盐不溶于其中的溶剂或介质中，或在随后可在真空中或通过冷冻干燥或通过将现有盐的离子与合适的离子交换树脂上的另一种离子交换而除去的溶剂(诸如水)中反应形成。
在一些实施方案中，在使用前对pyy肽进行处理或条件化。例如，在使用前，可将pyy肽与递送媒介物诸如脂蛋白、纳米颗粒、脂质体等一起孵育。
在一些实施方案中，本文提供了药物制剂，其包含：(a)本文所述的pyy肽；(b)生理上可接受的缓冲液或载体。在一些实施方案中，药物制剂还包含其它治疗剂(例如，抗生素、抗真菌剂，益生菌等)。
在一些实施方案中，本文提供了融合肽或多肽，其包含：(a)本文所述的pyy肽，和(ii)功能性肽或多肽区段。在一些实施方案中，功能性肽或多肽区段包含信号传导部分、治疗性部分(例如，抗生素或抗真菌小分子)、定位部分(例如，细胞导入信号、核定位信号等)、可检测的部分(例如，荧光部分、造影剂)或分离/纯化部分(例如，链霉抗生物素蛋白、his6等)。此类融合物可以从编码pyy肽和另外的肽/多肽的重组dna表达，或者可通过化学合成形成。例如，融合物可包含pyy肽和目标酶、萤光素酶、rnasin或rna酶和/或通道蛋白(例如，离子通道蛋白)、受体、膜蛋白、胞质蛋白、核蛋白、结构蛋白、磷蛋白、激酶、信号传导蛋白、代谢蛋白、线粒体蛋白、受体相关蛋白、荧光蛋白、酶底物、转录因子、选择标记蛋白、核酸结合蛋白、细胞外基质蛋白、分泌蛋白、受体配体、血清蛋白、具有反应性半胱氨酸的蛋白、转运蛋白、靶向序列(例如，肉豆蔻酰化序列)、线粒体定位序列或核定位序列。可将另外的肽/多肽可以与pyy肽的n末端和/或c末端融合。在一个实施方案中，融合蛋白在pyy肽的n末端处包含第一肽/多肽，并且在c末端处包含另一个(不同的)肽/多肽。任选地，融合物中的元件被连接体(connector)序列(例如，优选具有至少2个氨基酸，诸如具有13个和至多40个或50个氨基酸残基的连接体序列)隔开。在一些实施方案中，本发明的融合蛋白中连接体序列的存在相对于每个单独元件的功能而言基本上不改变融合物中任一个元件(例如，pyy肽)的功能，这可能归因于连接体序列为融合物中的每个元素提供灵活性(自主性)。在某些实施方案中，连接体序列是被酶识别的序列或是可光裂解的。例如，连接体序列可包括蛋白酶识别位点。
在一些实施方案中，本文提供了编码本文描述的pyy肽(或pyy肽融合物)的多核苷酸。在一些实施方案中，本文提供了包含编码本文所述的pyy肽(或pyy肽融合物)的多核苷酸的核酸载体(例如，质粒、杆粒(bacmid)、病毒载体(例如，aav))。在一些实施方案中，载体还包含启动子和/或一个或多个表达元件(例如，转录增强子、翻译起始位点、内部核糖体进入位点等)。在一些实施方案中，提供了包括向受试者或样品施用本文所述的多核苷酸或载体(例如，用于治疗或预防真菌感染或与真菌毒力相关的疾病，用于建立和/或维持健康/正常的微生物群等)的方法。
在一些实施方案中，本文提供了治疗真菌感染或与真菌毒力相关的疾病的方法，所述方法包括向患有真菌感染或与真菌毒力相关的疾病的受试者施用本文所述的pyy肽。
在一些实施方案中，本文提供了预防真菌感染、真菌毒力、真菌菌丝形成或与真菌毒力相关的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本文所述的pyy肽。在一些实施方案中，所述受试者发生真菌感染、真菌毒力、真菌菌丝或与真菌毒力相关的疾病的风险增加(例如，相对于一般群体)。在一些实施方案中，受试者是感染了hiv、正在接受或最近已接受抗生素的年老的移植接受者，以及患有癌症或正在接受癌症治疗的婴儿等。
在一些实施方案中，本文提供在受试者中建立健康和/或正常微生物群的方法，所述方法包括向具有微环境(例如，血液、肠、阴道、口腔、皮肤等)的环境的受试者施用本文所述的pyy肽，所述微环境包含异常的(例如，致病性的，潜在致病性的)微生物群(例如，微生物失衡(例如，健康微生物(例如，乳杆菌属)与二态性或其它多态性真菌的失衡等))。在一些实施方案中，受试者是感染了hiv、正在接受或最近已接受抗生素的年老的移植接受者，以及患有癌症或正在接受癌症治疗的婴儿等。
在一些实施方案中，本文提供了在受试者中维持健康和/或正常微生物群的方法，所述方法包括向具有健康和/或正常微生物群的受试者施用本文所述的pyy肽。
该pyy具有对抗强毒念珠菌属物种的活性，并被潘氏细胞分泌到肠腔中，对回肠克罗恩病(icd)的病理学具有特殊意义。icd是炎性肠病(ibd)的亚组，其特征在于小肠末端回肠的炎症、透壁病变以及慢性腹泻\腹痛和体重减轻。潘氏细胞功能障碍与icd的发病机制相关，实际上，现在认为icd是潘氏细胞疾病。人的潘氏细胞异常与通过全基因组关联研究鉴定的icd风险等位基因的存在相关，并且潘氏细胞功能障碍与icd中更严重的疾病结果相关。还已知icd患者的肠道中真菌负载增加，并且针对真菌蛋白甘露聚糖的血清抗体(称为asca抗体)的存在预示着这些患者的疾病严重度增加。因此，这些患者的潘氏细胞功能障碍将导致小肠腔内pyy减少，导致有毒真菌物种过度生长并引发或增强疾病。具有导致潘氏细胞功能异常的遗传易感性的患者，由于特定抗真菌肽pyy的产生受损，因此较难经受天气环境刺激，所述天气环境刺激可能触发共生真菌形式的菌丝生长。
免疫功能低下的患者，包括hiv/aids个体以及经历化学疗法或器官移植的那些个体，在免疫功能受损时发生念珠菌病的风险为6-30％。然而，由于念珠菌病经常具有严峻的副作用以及它们去除真菌的毒力和共生形式的作用机制不明确，因此目前用于治疗念珠菌病的疗法并不十分适合于预防性治疗。专门针对真菌的毒力形式的预防性抗真菌pyy肽用于该群体。在一些实施方案中，将pyy肽配制(例如，用于口服递送)为用于类受试者的预防性疗法。
在一些实施方案中，本文提供了包含pyy肽和药学上可接受的载体的药物组合物。可提供活性剂的任何载体都是合适的载体，并且此类载体在本领域中是公知的。在一些实施方案中，将组合物配制成通过任何合适的途径施用，所述途径包括但不限于口服(例如，诸如以片剂、胶囊、颗粒剂或粉剂的形式)、舌下、经颊、肠胃外(诸如通过皮下、静脉内、肌内、皮内或胸骨内注射或输注)(例如，作为无菌注射用水溶液或非水性溶液或混悬液)、经鼻(包括诸如通过鼻腔喷雾向鼻膜施用)、局部(例如以乳膏或软膏形式)、经皮(诸如通过透皮贴剂)或直肠(诸如以栓剂形式)等。在一些实施方案中，药物组合物被全身性或局部递送至患者。
根据良好的药物实践，药物组合物可以以与药学上可接受的载体和任选的赋形剂、佐剂等配制的形式施用。药物组合物可呈固体、半固体或液体剂型的形式：诸如粉剂、溶液、酏剂、糖浆剂、混悬剂、乳膏、滴剂、糊剂和喷雾剂。如本领域技术人员将认识到的，取决于选择的施用途径(例如，丸剂、注射剂等)，确定组合物的形式。通常，优选使用单位剂型以实现活性药物肽或多肽的容易和准确的施用。通常，治疗上有效的剂(例如，pyy肽)以这样的剂型存在，其浓度水平按重量计占总组合物的约0.5％至约99％(例如，例如以足以提供所需单位剂量的量)。在一些实施方案中，药物组合物可以以单剂量或多剂量施用。具体的施用途径和剂量方案将由本领域技术人员根据待治疗个体的状况和所述个体对治疗的响应来确定。如上所述，可以与此类材料组合以产生单一剂型的活性成分(例如，pyy肽)的量将会变化。如药学领域中可用的，多种材料可用作本发明组合物中的载体、佐剂和媒介物。
在一些实施方案中，将药物组合物(例如，包含pyy肽)与一种或多种另外的治疗剂共同施用(同时或顺序地)。另外的治疗剂可包含其它抗微生物剂(例如，抗生素、抗真菌剂、抗寄生虫剂、抗病毒剂等)。在一些实施方案中，共同施用的剂是共同配制的。在其它实施方案中，剂是单独配制的。共同施用可以同时发生或顺序发生。为了同时施用，可以将剂共同配制或单独配制。在一些实施方案中，通过相同的施用途径或通过分开的施用途径来施用剂。对于顺序施用，施用之间可存在任何合适的时间间隔，例如1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时、1周、2周、4周或更长时间，或其间的范围。
在一些实施方案中，药物组合物(例如，包含pyy肽)作为药盒的一部分(例如，包含其它治疗剂、包装、一个或多个容器、说明书、施用装置等)提供。
在一些实施方案中，用于施用/共同施用的药物组合物和/或药盒包含pyy肽和一种或多种治疗剂。
在一些实施方案中，将pyy肽与一种或多种抗生素共同施用。在一些实施方案中，此类制剂/共同施用用于治疗/预防多种类型的致病性感染和/或用于建立/恢复/维持正常微生物群。在一些实施方案中，抗生素可抑制细胞壁合成、蛋白质合成、核酸合成或改变细胞膜功能。可与本文其它的实施方案结合使用的抗生素类别包括但不限于大环内酯(即，红霉素)、青霉素(即，萘夫西林)、头孢菌素(即，头孢唑啉)、碳青霉烯类(即，亚胺培南、氨曲南)、其它β-内酰胺类抗生素、β-内酰胺抑制剂(即，舒巴坦)、唑烷(oxaline)(即，利奈唑胺)、氨基糖苷(即，庆大霉素)、氯霉素、磺胺(即，磺胺甲噁唑)、糖肽(即，万古霉素)、喹诺酮(即，环丙沙星)、四环素(即，米诺环素)、夫西地酸、甲氧苄啶、甲硝唑、克林霉素、莫匹罗星、利福霉素(即，利福平)、链霉菌素(即，奎奴普汀和达福普汀)、脂蛋白(即，达托霉素)、聚烯(即，两性霉素b)、唑(即，氟康唑)和棘白菌素(即，醋酸卡泊芬净)。可使用的特定抗生素的实例包括但不限于：红霉素、萘夫西林、头孢唑林、亚胺培南、氨曲南、庆大霉素、磺胺甲噁唑、万古霉素、环丙沙星、甲氧苄啶、利福平、甲硝唑、克林霉素、替考拉宁、莫匹罗星、阿奇霉素、克拉霉素、氧氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星、萘啶酸、司帕沙星、培氟沙星、氨氟沙星、加替沙星、莫西沙星、吉米沙星、依诺沙星、氟罗沙星、米诺环素、利奈唑胺、替马沙星、托氟沙星、克林沙星、舒巴坦、克拉维酸、两性霉素b、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑和制霉菌素。
在一些实施方案中，将pyy肽与一种或多种有益细菌和/或益生菌共同施用。在一些实施方案中，此类制剂/共同施用可用于治疗/预防多种类型的致病性感染和/或用于建立/恢复/维持正常微生物群。在一些实施方案中，用于本文的实施方案的有益细菌和/或益生菌包括但不限于乳杆菌属(lactobacillus)、酵母菌属、肠球菌(enterococcus)、链球菌属(streptococcus)、片球菌属(pediococcus)、明串珠菌属(leuconostoc)、芽孢杆菌属(bacillus)、大肠杆菌和双歧杆菌属(bifidobacterium)的益生菌株。任何有益细菌和/或益生菌可用于本文的实施方案。
在一些实施方案中，将pyy肽与一种或多种抗病毒剂或治疗共同施用。在一些实施方案中，此类制剂/共同施用用于治疗/预防多种类型的致病性感染和/或用于建立/恢复/维持正常微生物群。在一些实施方案中，将pyy肽与局部抗真菌剂(诸如克霉唑、益康唑、酮康唑、咪康唑、噻康唑、特比萘芬和阿莫罗芬)共同施用。此类剂可以以乳膏、洗发剂、肥皂、液体、喷雾剂等形式施用，并且可以与pyy肽共同配制或可以单独配制。在一些实施方案中，将pyy肽与口服抗真菌剂(诸如咪康唑、制霉菌素、特比萘芬、伊曲康唑、氟康唑、泊沙康唑和伏立康唑)共同施用。此类剂可以以口服凝胶、液体、胶囊、片剂等施用，并且可与pyy肽共同配制或可单独配制。在一些实施方案中，将pyy肽与抗真菌注射剂(诸如两性霉素、氟胞嘧啶、伊曲康唑、伏立康唑、阿尼芬净、卡泊芬净和米卡芬净)共同施用。
前述剂的任何合适的制剂或共同制剂(与pyy肽)可用于本文的实施方案。在单独配制的情况下，可通过相同的施用途径或通过分开的施用途径来施用pyy肽和另外的剂。
在一些实施方案中，本文所述的pyy肽可用于消除、减少和/或预防在非生物表面、仪器、装置等上的真菌生长、真菌粘附和/或真菌生物膜形成。在一些实施方案中，提供了其中将包含pyy肽的组合物单独地或与其它剂(例如，抗真菌剂、抗生素、防腐剂、去垢剂、清洁剂、肥皂、酒精等)一起施用于非生物表面、仪器、装置等的方法。用本文所述的pyy肽处理的非生物表面、仪器、装置等的实例包括医疗装置、手术器械、导管、医用管、植入物、支架、瓣膜等。本文所述的用于配制药物组合物和/或向受试者施用的合适的实施方案也将适用于非生物环境(如果适用的话)。
以下列出和/或本文提供的所有出版物和专利均通过引用整体并入。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，所描述的本发明的组合物和方法的各种修改和变化对本领域技术人员而言是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方案描述了本发明，但是应当理解，所要求保护的本发明不应不适当地限制于此类特定的实施方案。实际上，对于相关领域的技术人员来说显而易见的是，所描述的用于实施本发明的模式的各种修改都在本发明的范围内。
实验性
实施例1
材料和方法
动物和念珠菌属攻击模型
所有动物实验方案均得到芝加哥大学(universityofchicago)的iacuc批准。动物是基于c57bl/6背景繁育的野生型(wt)或pyy-/-基因缺陷小鼠，并在芝加哥大学的标准12:12光照/黑暗条件下饲养。将无菌动物维持在我们的定菌设施中的无菌隔离器中。对于使用念珠菌属某些种的研究，将动物维持在单个bsl2笼中，并在口服念珠菌属攻击前2天施用克林霉素(po管饲，25mg)和头孢西丁(im，50mg)。攻击前1天，使小鼠禁食并对其施用克林霉素(25mg)和醋酸可的松(sq)。早晨给小鼠管饲200ul1.0od600白色念珠菌(sc3514)，并在4小时后提供食物。在第0天、第2天、第4天、第6天和第8天施用克林霉素(250mg/kgbw)直至处死。在检查口服肽施用的研究中，将肽(200ug)悬浮在无菌pbs(100ul)中，并在第2天、第3天、第4天和第8天进行管饲。在第-2天、第0天、第2天、第4天、第6天和第8天收集粪便沉淀，称重，重悬于无菌pbs中，在30℃下以一式两份铺在含有庆大霉素(0.1mg/ml)和万古霉素(0.01mg/ml)的ypd板上，以防止细菌生长。对动物进行人道安乐死，并取小肠和大肠组织的区域进行细胞因子分析。
免疫荧光和表位封闭
将粘膜组织在4℃下于4％福尔马林/pbs中固定过夜。切成五微米的切片，将所述切片脱蜡，再水化，并在pbs中洗涤。通过在柠檬酸钠(ph6.0)中煮沸10分钟并冷却至室温来进行抗原回收。切片用蛋白质封闭剂(proteinblock)(dako)封闭45分钟，然后在4℃下用一抗(1:1000兔抗pyy，#ab22663,abcam)和(1:400山羊抗溶菌酶，#c-19,santacruz)孵育过夜。洗涤样品，并在室温下施加缀合有alexafluor的二抗(1:1000，555驴抗兔，invitrogenlifescience；1:1000，647驴抗山羊，invitrogenlifescience)，持续1小时。用dapi对载玻片进行复染，并用leicadm2500显微镜(leicamicrosystems,wetzlar,germany)通过20x物镜使用imagepro-plus软件(mediacybernetics,silversprings,md,usa)图像捕获来进行可视化。为了确认表位特异性，在染色前将全长重组免疫肽添加到抗pyy一抗中，然后按照说明进行其余方案。
超分辨率显微镜检查
对于超分辨率显微镜检查，将170um盖玻片用多聚l-赖氨酸涂覆过夜。接下来，切割5微米的组织切片并置于载玻片上，使其干燥。如上所述进行脱蜡，再水化，抗原回收，封闭和一抗步骤，但使用较高的一抗浓度；抗体稀释剂(dako)中的1:100兔抗pyy和1:100驴抗溶菌酶。接下来，将载玻片在pbs中洗涤5次(5分钟)。在室温下将样品在4％多聚甲醛中固定20分钟，然后在pbs中洗涤3次。如上添加二抗1小时，并在pbs中洗涤3次。将载玻片保存在pbs中并封固，然后立即在leica超分辨率系统(srgsd3d)上成像，并用雷暴(thunderstorm)软件进行分析(ovesny等bioinformatics30:2389–2390,2014.；通过引用整体并入)。具体而言，对隐窝基底进行成像以可视化包含溶菌酶的单个潘氏细胞，并且包含不含溶菌酶的绒毛l细胞。
激光捕获显微切割
为了研究潘氏细胞区室中是否存在pyymrna表达，进行了激光捕获显微切割(lcm)。将oct冷冻的组织切成8um厚并将其置于leica(cat.#11505158)的冷冻pen载玻片上。快速处理载玻片，在卡诺伊溶液中进行30秒，在70％乙醇中进行1分钟，在ddh20中浸泡10次。将切片用阿尔辛蓝染色1分钟，浸入ddh20中，并置于核固红中30秒。将载玻片浸入梯度乙醇中；70％、90％、95％和100％以及无水乙醇。在leicadm6000b显微镜上进行lcm。分离如通过潘氏细胞颗粒的存在所显现的绒毛上皮或隐窝基底区域，并分别将其收集到rnalater标记的绒毛和隐窝rna级分中。
肽建模
为了预测包括pyy、爪蟾抗菌肽2和皮肤pyy在内的肽的结构，使用了蛋白质同源/相似识别引擎(kelley&sternberg.natprotoc4:363–371,2009.；通过引用整体并入)。
重组肽
为了在体外和在体内在长期念珠菌属攻击的鼠模型中研究肽对念珠菌属的作用，从genscript获得了肽(图5)。
离体组织培养和elisa
从常规或无菌wt小鼠中收获组织。从肠系膜切取3厘米的远端回肠段，并在一端结扎。接下来，将krebs缓冲液(ph7.4)用lps(100ng/ml)或氨甲酰胆碱(10um)接种，并密封在回肠段中，然后在37℃在krebs中孵育30分钟。接下来，取出管腔溶液并以3000xg离心3分钟以除去颗粒。按照制造商的说明，将所得的上清液按1:25稀释，并用于pyyelisa(eia-pyy-1，raybiotech)。
细菌生长曲线
将在37℃下在摇动(230rpm)的bhi中生长的单核细胞增生李斯特氏菌egd(listeriamonocytogenesegd)和金黄色葡萄球菌纽曼(staphylococcusaureusneuman)以及在37℃下静态生长在lb中的大肠杆菌(etec)和鼠伤寒沙门氏菌(salmonellaenterica)的过夜培养物传代至5ml的新鲜培养基(1/100)中，以制备用于生长曲线的接种物。将水中稀释的pyy或pyy片段在96孔板的适当培养基中连续稀释，最终浓度为25um、12.5um、6.25um、3.75um和1.76um。将100ul稀释的接种物一式两份添加到每个孔中，并在37℃下静态生长。使用versamax板读数器读取od600。将细菌接种物连续稀释到pbs中，然后铺在bhi或lb琼脂平板上，以测定cfu/孔。
真菌培养和体外测定
将白色念珠菌(romanowski等plosone7:e30119,2012中引述的sc3514；通过引用整体并入)和热带假丝酵母(atcc#13803)保持在-80℃的冷冻甘油原液中，并在使用前在30℃下在酵母-蛋白胨-葡萄糖(ypd)琼脂平板上划线，持续48小时。选择单个菌落并在30℃下于ypd培养基中培养。在10-20um的相应的肽存在的情况下，使用结晶紫染色进行生物膜测定(taff等medmycol50:214–218,2012.；通过引用整体并入)。为了诱导菌丝生长，将菌株在37℃下置于ypd+5％fbs或rpmi培养基中4小时。为了对菌丝膜破裂进行成像，将结合dna的荧光染料碘化丙啶(pi)添加到存在肽的孔菌株中，并在明场和远红色荧光条件下成像。为了确认pyy在菌丝尖端的定位，在pi测定期间添加了荧光(n末端fitc)标记的pyy，并在488激发发射下成像。为了使用pi测定研究pyy对形成菌丝的非念珠菌属物种的作用，从芝加哥大学医院病原实验室(universityofchicagohospitalpathogenlaboratory)获得了黄曲霉菌(aspergillusflavus)，并在37c下于rpmi中生长过夜，然后用pi和各种浓度的肽进行处理。为了研究白色念珠菌毒力基因表达，将10ul的1.0od600培养物置于37℃的1mlrpmi中，并振荡8小时。将培养物以3000xg离心5分钟，并如下所述进行rna分离。
小鼠和酵母rna分离以及定量pcr
用trizol(ambion)和氯仿方法分离鼠rna。按照制造商的方案，使用ribopurerna酵母试剂盒(am1924,invitrogenlifescience)分离酵母rna，所述分离包括dna酶处理步骤。通过uv分光光度法测定rna浓度和质量。使用锚定的寡核苷酸(dt)和随机六聚体引物对rna进行反转录。在rt(转录因子逆转录酶反应缓冲液5x；保护性rna酶抑制剂40u/μl；脱氧核苷酸混合物，10mm；转录因子逆转录酶20u/μl)后，使用制造商的方案(rocheappliedscience)，在
结果
小鼠和人潘氏细胞产生pyy肽
在本文实施方案开发期间进行的实验(研究小肠中的肽产生)中，对鼠小肠切片中的pyy进行免疫荧光。在整个小肠粘膜中观察到肠内分泌l细胞中的pyy免疫染色的梯度，这在远端回肠中特别明显(图1a)。然而，在潘氏细胞中也观察到了pyy免疫染色，这已在组织学上得以鉴定以及通过抗微生物肽溶菌酶的免疫荧光得以鉴定(参考文献9；通过引用整体并入)(图1a)。在染色前向一抗中添加重组pyy肽来阻断所有随后的潘氏细胞和l细胞特异性染色，但不会阻断其它非特异性背景(图1b)，从而支持潘氏细胞中pyy的表位特异性识别。为了确定人潘氏细胞是否产生pyy，获得了健康的人回肠活检物。这些活检物的切片和免疫荧光染色也证明了pyy对含溶菌酶和spla2的潘氏细胞具有特异性。
由于仅已知pyy由小肠中的绒毛l细胞表达，因此使用激光捕获显微切割从远端回肠的隐窝基底分离潘氏细胞(图1d)。提取总rna进行qrt-pcr，以测定pyy和编码潘氏细胞、杯形细胞、刷状缘或肠内分泌特异性转录物的其它基因的基因表达水平(图1e)。这些发现与免疫荧光图像一致，显示了隐窝基底标本中稳健的pyy转录物水平，所述隐窝基底标本高度富集潘氏细胞标志物(与最少呈现的绒毛细胞标志物相反)。最后，对回肠粘膜进行受激发射损耗(sted)显微镜检查以获得高分辨率免疫定位，以确定pyy是否被包装到潘氏细胞的分泌颗粒中。如图1f所示，pyy定位于不同于含溶菌酶的那些分泌颗粒的细胞内小致密核心分泌颗粒，表明分离的区室化和可能的调控。
潘氏细胞生物学的标志是分泌内容物向腔室的矢量分泌，这可通过暴露于微生物产品(诸如lps)或胆碱能刺激物(诸如氨甲酰胆碱)来刺激。用这些剂进行腔刺激后，如通过elisa所测定的，在离体肠环中观察到pyy的腔分泌增加(图1f)。来自无菌小鼠的回肠环仅响应于胆碱能刺激而产生pyy(图1f)。
pyy是具有非常特异的靶向特性的抗真菌肽
潘氏细胞产生多种类型的amp，以对抗致病性微生物并控制共生肠道菌群。发现存在于潘氏细胞的离散分泌颗粒中和受激分泌至腔室中的pyy增加了pyy具有除了通过肠内分泌l细胞介导的和参与饱腹感和代谢调控的那些功能以外的附加功能的可能性。pyy的预测结构具有类似于许多抗微生物肽(包括存在于先天免疫细胞中的哺乳动物cathelicidin)的α-螺旋结构和电荷分布(图2a)。由于许多amp具有对抗细菌物种的广泛活性，因此通过向生长培养基中添加pyy来进行体外细菌生长测定。令人惊讶的是，当以一定范围的浓度添加时，pyy不会抑制大肠杆菌的生长(图2c)。当用多种革兰阳性和革兰阴性细菌进一步测试时，pyy对它们的增殖没有作用(图5)。
在本文实施方案的开发期间进行的实验用于重新检查pyy的预测结构，并发现它也与爪蟾抗菌肽-2(图2a、图2b)的结构紧密匹配，爪蟾抗菌肽-2是一种据报道具有强效的抗真菌和抗菌特性的两栖动物肽。为了确定它潜在的抗真菌特性，将pyy肽添加到白色念珠菌的生长培养基中，所述念珠菌是人肠道微生物群的常见成员，可在许多健康成人的胃肠道中均检测到它。如图2d、图2e所示，pyy显著减少真菌生长。产生了两种pyy肽，一种由氨基酸1-13(pyy1-13)组成，另一种由氨基酸13-36(pyy13-36)组成。发现pyy1-13没有显示出抗真菌特性，而pyy13-36足以抑制白色念珠菌的生长(图2d、图2e)。
pyy特异性靶向白色念珠菌的毒力形式的末端菌丝细胞
尽管pyy抑制白色念珠菌在含有血清的肉汤培养物中的生长(图2d、图2e)，但它对无血清培养基中生长的白色念珠菌没有作用。将血清添加到白色念珠菌的生长培养基中会诱导毒力菌丝形式的生长，而在无血清生长培养基中的白色念珠菌会以无毒的酵母形式生长。在本文实施方案的开发期间进行了实验，以检查pyy是否可能特异性地靶向白色念珠菌的毒力形式。白色念珠菌的菌丝生长对于生物膜的形成是必需的。通过结晶紫生物膜染色测定法测定pyy是否能够抑制生物膜形成。pyy和pyy13-36，而不是乱序肽对照或pyy1-12，能够阻断白色念珠菌形成生物膜(图3a、图3b)。pyy抑制生物膜形成的能力取决于它的带电状态，因为带正电荷的氨基酸精氨酸向中性氨基酸丙氨酸的突变消除了pyy阻断白色念珠菌生物膜形成的能力(图6)。
在本文实施方案的开发期间进行的实验通过测量呼吸来直接测试pyy对白色念珠菌生存力的作用。发现pyy和pyy13-36抑制以菌丝形式生长的白色念珠菌的呼吸，但不抑制以酵母形式生长的白色念珠菌的呼吸(图3c、图3d)。这种作用对白色念珠菌没有特异性，因为念珠菌属物种热带念珠菌的呼吸在菌丝生长期间也被pyy和pyy13-36抑制(图3c、图3d)。此外，pyy对无菌丝形成的好氧真菌烟曲霉(aspergillusfumigatus)没有作用。在本文实施方案的开发期间进行的实验通过在37℃下于rpmi培养基中生长来确定pyy对白色念珠菌毒力基因的作用，所述毒力基因在感测到某些环境因素后失调，并有促成由白色念珠菌感染导致的发病机理。通过对在pyy和pyy13-36存在或不存在的情况下体外生长的白色念珠菌中的基因进行qrt-pcr来检查转录物水平。发现两种肽均导致这些毒力基因的下调(图3e、图7)。
爪蟾抗菌肽-2通过插入并透化真菌细胞壁而削弱真菌生长。为了确定pyy是否以相同的方式发挥作用，用爪蟾抗菌肽-2或pyy处理以菌丝状态生长的白色念珠菌。通过摄取碘化丙锭(pi)来确定真菌细胞壁的透化，所述碘化丙锭是一种被完整活细胞排除的染料。用爪蟾抗菌肽-2处理，沿着菌丝的整个长度观察到了指示细胞壁透化的pi摄取(图3f、小图1)。相反地，pyy处理特异地靶向末端菌丝细胞(图3f、小图2)，以剂量依赖性方式使它们透化(图8)。菌丝和酵母体的更近端细胞保持完整。使用fitc标记的pyy，还可观察到pyy仅定位于摄取pi的同一末端菌丝细胞(图3g)。因此，这些数据表明pyy的不同和选择性作用，其中仅靶向毒力白色念珠菌菌丝的末端细胞，所述作用是一种与生物膜形成受损、毒力基因的下调和细胞死亡相关的作用。白色念珠菌的末端菌丝细胞不同于更近端的那些菌丝细胞，因为它们代谢更加活跃，功能多样(附着和生物膜形成)，并且具有不同的细胞壁组成。
pyy在体内抑制白色念珠菌的毒力和定植
在本文实施方案的开发期间进行了实验，以通过长期肠道白色念珠菌定殖的小鼠模型确定通过口服给予的pyy是否在体内影响真菌群体。发现向这些小鼠口服施用pyy或pyy13-36显著降低它们的粪便颗粒中的白色念珠菌真菌负载，而不会改变它们的体重(图4a)。另外，通过在pyy缺陷小鼠(pyy-ko)中利用这种相同的长期肠道白色念珠菌定殖模型，与它们的野生型对应物相比，观察到高得多的白念珠菌负载(图4b)。pyy-ko与野生型小鼠之间的粪便总排出量没有变化，这表明研究组之间白色念珠菌定殖的差异不太可能是肠道运输改变的结果(图4c)。总之，这些数据表明pyy在体内抑制白色念珠菌定殖，在肠道微生物群中用作真菌控制的机制。
实施例2
设想了pyy通过插入白色念珠菌菌丝尖端的膜中并随后通过形成孔使这些膜透化而阻止白色念珠菌生物膜形成，以及α-螺旋的两亲性质对于这个孔的形成是重要的。因此，avpeptide9-11、23和25(seqidno:15-17、29和31)被设计成通过从疏水面上去除极性或带电氨基酸残基并将它们替换为非极性残基来增加α-螺旋的疏水力矩(图12)。在本文实施方案的开发期间进行的实验表明，这些肽在低于pyy13-36的浓度下大大抑制了白色念珠菌的生物膜形成。通过进行基于结晶紫的生物膜测定法测试了本申请中描述的肽的抗真菌活性。在此测定中，在存在或不存在肽的情况下，在96孔板中诱导白色念珠菌形成生物膜持续24小时。通过结晶紫染色和增溶，然后读取光密度来定量生物膜形成。所附数据表描述了这些测定在一系列肽浓度下的结果。数据是针对实验媒介物对照内的适当值标准化的od600值。通过双因素anova和测试后多重比较进行统计分析。显著性表示为：*＝p<0.05；**＝p<0.01；***＝p<0.001；****＝p<0.0001。ns＝不显著。相对于pyy13-36，测试的其它肽导致功效降低或基本上没有改变功效。图13和表1a-c证明了示例性肽的取代对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用的作用。avpeptide25在亲水面上引入了另外的突变，以增加肽的稳定性。因此，avpeptide28、29、30和31(seqidno:34-37)是基于智人的pyy与由双色猴树蛙产生的进化上相关肽皮肤pyy之间的序列比对设计的。两栖动物皮肤pyy还具有抗真菌特性，并且与pyy具有高度的序列同源性。avpeptide28、29、30和31中的突变基于这种相似性。avpeptide9-11、23、25和28-31以及avpeptide20和32(seqidno:26和38)中的每一种相对于pyy13-36(seqidno:6)表现出对白色念珠菌的生物膜形成的抑制作用增强。
表1a.生物膜形成的avpeptide抑制(10μm肽)
“*”表示显著性程度
“+”表示在生物膜形成的抑制方面的阳性变化程度
“-”表示在生物膜形成的抑制方面的阴性变化程度
“ns”不显著
“na”不适用
表1b.生物膜形成的avpeptide抑制(30μm肽)
“*”表示显著性程度
“+”表示在生物膜形成的抑制方面的阳性变化程度
“-”表示在生物膜形成的抑制方面的阴性变化程度
“ns”不显著
“na”不适用
表1c.生物膜形成的avpeptide抑制(40μm肽)
“*”表示显著性程度
“+”表示在生物膜形成的抑制方面的阳性变化程度
“-”表示在生物膜形成的抑制方面的阴性变化程度
“ns”不显著
“na”不适用
相对于pyy13-36，在抑制白色念珠菌的体外生物膜形成方面表现出功效降低的pyy变体包括avpeptide2-4、6、8、15-17、19和24。然而，这些变体和/或它们所包含的取代可以赋予其它所需性状，并且在本文的一些实施方案中可以出现在pyy变体中。
相对于pyy13-36，在抑制白色念珠菌的体外生物膜形成方面表现出相似功效的pyy变体包括avpeptide1、5、7、12-14、18、21、22和27。然而，这些变体和/或它们所包含的取代可以赋予其它所需性状，并且在本文的一些实施方案中可以出现在pyy变体中。
实施例3
在本文实施方案的开发期间进行了实验，以证明基于pyy的肽作为白色念珠菌耐药菌株的预防剂或治疗剂的用途(图14)。
参考资料
以下参考文献(其中一些参考文献在上面通过数字被引用)通过引用整体并入本文。
1.conlonjm.theoriginandevolutionofpeptideyy(pyy)andpancreaticpolypeptide(pp).peptides.20002；23(2)：269-78.pubmedpmid：i1825642.
2.batterhamrl，ffytchedh，rosenthaljm，zelayafo，barkergj，withersdj，williamssc.pyymodulationofcorticalandhypothalamicbrainareaspredictsfeedingbehaviourinhumans.nature.2007；450(7166)：106-9.doi：10.1038/nature06212pubmedpmid：17934448.
3.glavasmm，graysonbe，allensf，coppdr，smithms，cowleyma，grovekl.characterizationofbrainstempeptideyy(pyy)neurons.jcompneurol.2008；506(2)：194-210.doi：10.1002/cne.21543.pubmedpmid：18022952.
4.hillbr，desouzamj，williamsni.characterizationofthediurnalrhythmofpeptideyyanditsassociationwithenergybalanceparametersinnormal-weightpremenopausalwomen.amjphysiolendocrinolmetab.2011；301(2)：e409-15.doi：10.1152/ajpendo.00171.2011.pubmedpmid：21610227；pmcid：pmc3154533.
5.holzerp，reichmannf，farzia.neuropeptidey，peptideyyandpancreaticpolypeptideinthegut-brainaxisneuropeptides.2012；46(6)：261-74.doi：10.1016j.npep.2012.08.005.pubmedpmid：22979996；pmcid：pmc3516703.
6.tatemotok.isolationandcharacterizationofpeptideyy(pyy)，acandidateguthormonethatinhibitspancreaticexocrinesecretion.procnatlacadsciusa.1982；79(8)：2514-8.pubmedpmid：6953409；pmcid：pmc346229.
7.gunawardenear，corfebm，statonca.classificationandfunctionsofenteroendocrinecellsofthelowergastrointestinaltract.intjexppathol.2011；92(4)：219-31.doi：10.1111/j.1365-2613.2011.00767.x.pubmedpmid：21518048；pmcid：pmc3144510.
8.lambertrw，camptonk，dingw，ozawah，gransteinrd.langerhanscellexpressionofneuropeptideyandpeptideyy.neuropeptides.2002；36(4)：246-51.pubmedpmid：12372697.
9.clevershc，bevinscl.panethcells：maestrosofthesmallintestinalcrypts.annurevphysiol.2013；75：289-311.doi：10.1146/annurev-physiol-030212-183744.pubmedpmid：23398152.
10.vouldoukisi，shaiy，nicolasp，mora.broadspectrumantibioticactivityoftheskin-pyy.febslett.1996；380(3)：237-40.pubmedpmid：8601432.
序列
seqidno：1(pyy)-ypikpeapgedaspeelnryyaslrhylnlvtrqry
seqidno:2(pyy14-36)–peelnryyaslrhylnlvtrqry
seqidno:3px1elnryyaslrx2ylnx3vtrqx4x5(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:4pdelnryyaslrkylnavtrqla
seqidno:5pdelnryyaslrkylnavtrqlr
seqidno:6(pyy13-36)–speelnryyaslrhylnlvtrqry
seqidno:7avpeptide1–peelnryyaslrhylnlvtrqly(14-36；r35l)
seqidno:8avpeptide2–peelnryyaslrhylnavtrqry(14-36,l30a)
seqidno:9avpeptide3–peelnryyaslrhylnlvtrqra(14-36,y36a)
seqidno:10avpeptide4–peelnryyaslrhylnavtrqla(14-36,l30a；r35l；y36a)
seqidno:11avpeptide5–speelnryyaslrhylnlvtrqrr(y36r)
seqidno:12avpeptide6–speelnryyaslrhylnlvtrqlr
seqidno:13avpeptide7-speelnryyaslrhylnlvtrqyy(r35y)
seqidno:14avpeptide8–speelnryyaslrhylnlvtrqvy(r35v)
seqidno:15avpeptide9(n29r；r35l):speelnryyaslrhylrlvtrqly
seqidno:16avpeptide10(s13l):lpeelnryyaslrhylnlvtrqry
seqidno:17avpeptide11(s13l；r35l):lpeelnryyaslrhylnlvtrqly
seqidno:18avpeptide12–speelnryyaslrhyynlvtrqry(l28y)
seqidno:19avpeptide13–speqlnryyaslrhylnlvtrery(e16q,q34a)
seqidno:20avpeptide14-spdelnryyaslrkylnlvtrqry(e15d,h26k)
seqidno:21avpeptide15–speelnryyaslrhylnlvtrq(13-34)
seqidno:22avpeptide16–ypeeynryyasyrhylnhvtrqry(s13yl17yl24yl30h)
seqidno:23avpeptide17–ypeeynryyasyrhylnlvtrqry(s13yl17yl24y)
seqidno:24avpeptide18–aspeelnryyaslrhylnlvtrqry(12-36)
seqidno:25avpeptide19–speelnryyassrhylnlvtrqry(l24s)
seqidno:26avpeptide20–speelnryylslrhylnlvtrqry(a22l)
seqidno:27avpeptide21–speelnryyaslrhylnlvtrqly(r35l)
seqidno:28avpeptide22–speelnryyaslrhylrlvtrqry(n29r)
seqidno:29avpeptide23–lpeelnryyaslrhylrlvtrqly(s13l,n29r,r35l)
seqidno:30avpeptide24–speelnryyaslrhylnlvtrqr(pyy13-35)
seqidno:31avpeptide25–lpdelnryyaslrkylnlvtrqry(s13l,e15d,h26k)
seqidno:32avpeptide26–speemnryyaslrhylnlvtrqry(l17m)
seqidno:33avpeptide27–speelnkyyaslrhylnlvtrqry(r19k)
seqidno:34avpeptide28–speelnrylaslrhylnlvtrqry(y21l)
seqidno:35avpeptide29–speelnryyaslrhyinlvtrqry(l28i)
seqidno:36avpeptide30–speelnryytalrhylnlvtrqry(a22t,s23a)
seqidno:37avpeptide31–speelnryylalrhylnlvtrqry(a22l,s23a)
seqidno:38avpeptide32–speelnrllaslrhllnlvtrqry(y20l,y21l,y27l)
seqidno:39x1px2elnryyaslrx3ylx4x5vtrqx6x7(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:40x1px2elnrx3x4x5x6lrx7x8x9nlvtrqx10y(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:41x1px2elnrx3x4x5x6lrx7x8x9nlvtrqry(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:42lp(e/d)elnrlllalrkl(r/i)nlvtrqly
seqidno:43x1x2e(d/e)(m/l)x3ryy(s/a)(s/a)lrhy(i/l)nl(i/v)trqry(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:44spee(m/l)n(k/r)yx1x2(s/a)lrhy(i/l)nlvtrqry(其中每个xx独立选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:45x1x2e(d/e)(m/l)x3(k/r)yx4x5(s/a)lrhy(i/l)nl(i/v)trqry
(其中每个xx独立地选自任何天然或非天然氨基酸)
seqidno:46lp(e/d)(e/d)(m/l)n(k/r)lll(s/a)lrkl(r/i/l)nl(i/v)trqly.
序列表
<110>芝加哥大学(theuniversityofchicago)
<120>用于治疗和或预防致病性真菌感染和维持微生物群系共生的组合物和方法
<130>uchi-35185/wo-1/ord
<150>us62/581,358
<151>2017-11-03
<150>us62/506,902
<151>2017-05-16
<160>46
<170>patentin3.5版
<210>1
<211>36
<212>prt
<213>智人(homosapiens)
<400>1
tyrproilelysproglualaproglygluaspalaserprogluglu
151015
leuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasnleuvalthr
202530
argglnargtyr
35
<210>2
<211>23
<212>prt
<213>智人(homosapiens)
<400>2
proglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasn
151015
leuvalthrargglnargtyr
20
<210>3
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(13)..(13)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(17)..(17)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(22)..(23)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<400>3
proxaagluleuasnargtyrtyralaserleuargxaatyrleuasn
151015
xaavalthrargglnxaaxaa
20
<210>4
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>4
proaspgluleuasnargtyrtyralaserleuarglystyrleuasn
151015
alavalthrargglnleuala
20
<210>5
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>5
proaspgluleuasnargtyrtyralaserleuarglystyrleuasn
151015
alavalthrargglnleuarg
20
<210>6
<211>24
<212>prt
<213>智人(homosapiens)
<400>6
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>7
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>7
proglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasn
151015
leuvalthrargglnleutyr
20
<210>8
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>8
proglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasn
151015
alavalthrargglnargtyr
20
<210>9
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>9
proglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasn
151015
leuvalthrargglnargala
20
<210>10
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>10
proglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleuasn
151015
alavalthrargglnleuala
20
<210>11
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>11
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargarg
20
<210>12
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>12
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnleuarg
20
<210>13
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>13
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglntyrtyr
20
<210>14
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>14
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnvaltyr
20
<210>15
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>15
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
argleuvalthrargglnleutyr
20
<210>16
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>16
leuproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>17
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>17
leuproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnleutyr
20
<210>18
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>18
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrtyr
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>19
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>19
serprogluglnleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrarggluargtyr
20
<210>20
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>20
serproaspgluleuasnargtyrtyralaserleuarglystyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>21
<211>22
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>21
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrarggln
20
<210>22
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>22
tyrprogluglutyrasnargtyrtyralasertyrarghistyrleu
151015
asnhisvalthrargglnargtyr
20
<210>23
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>23
tyrprogluglutyrasnargtyrtyralasertyrarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>24
<211>25
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>24
alaserproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyr
151015
leuasnleuvalthrargglnargtyr
2025
<210>25
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>25
serproglugluleuasnargtyrtyralaserserarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>26
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>26
serproglugluleuasnargtyrtyrleuserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>27
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>27
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnleutyr
20
<210>28
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>28
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
argleuvalthrargglnargtyr
20
<210>29
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>29
leuproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
argleuvalthrargglnleutyr
20
<210>30
<211>23
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>30
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnarg
20
<210>31
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>31
leuproaspgluleuasnargtyrtyralaserleuarglystyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>32
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>32
serprogluglumetasnargtyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>33
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>33
serproglugluleuasnlystyrtyralaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>34
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>34
serproglugluleuasnargtyrleualaserleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>35
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>35
serproglugluleuasnargtyrtyralaserleuarghistyrile
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>36
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>36
serproglugluleuasnargtyrtyrthralaleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>37
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>37
serproglugluleuasnargtyrtyrleualaleuarghistyrleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>38
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<400>38
serproglugluleuasnargleuleualaserleuarghisleuleu
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>39
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(14)..(14)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(17)..(18)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(23)..(24)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<400>39
xaaproxaagluleuasnargtyrtyralaserleuargxaatyrleu
151015
xaaxaavalthrargglnxaaxaa
20
<210>40
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(11)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(14)..(16)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(23)..(23)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<400>40
xaaproxaagluleuasnargxaaxaaxaaxaaleuargxaaxaaxaa
151015
asnleuvalthrargglnxaatyr
20
<210>41
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(1)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(8)..(11)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(14)..(16)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<400>41
xaaproxaagluleuasnargxaaxaaxaaxaaleuargxaaxaaxaa
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>42
<211>48
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(3)
<223>xaa=glu或asp
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>xaa=arg或ile
<220>
<221>misc_feature
<222>(25)..(26)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(28)..(30)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(35)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(40)..(40)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(43)..(43)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<400>42
leuproxaagluleuasnargleuleuleualaleuarglysleuxaa
151015
asnleuvalthrargglnleutyrxaaxaagluxaaxaaxaaargtyr
202530
tyrxaaxaaleuarghistyrxaaasnleuxaathrargglnargtyr
354045
<210>43
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(2)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(4)..(4)
<223>xaa=asp或glu
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>xaa=met或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(6)..(6)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(10)..(11)
<223>xaa=ser或ala
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>xaa=ile或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(19)..(19)
<223>xaa=ile或val
<400>43
xaaxaagluxaaxaaxaaargtyrtyrxaaxaaleuarghistyrxaa
151015
asnleuxaathrargglnargtyr
20
<210>44
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>xaa=met或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>xaa=lys或arg
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(10)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>xaa=ser或ala
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>xaa=ile或leu
<400>44
serproglugluxaaasnxaatyrxaaxaaxaaleuarghistyrxaa
151015
asnleuvalthrargglnargtyr
20
<210>45
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(1)..(2)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(4)..(4)
<223>xaa=asp或glu
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>xaa=met或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(6)..(6)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>xaa=lys或arg
<220>
<221>misc_feature
<222>(9)..(10)
<223>xaa可以是任何天然或天然存在的氨基酸
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>xaa=ser或ala
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>xaa=ile或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(19)..(19)
<223>xaa=ile或val
<400>45
xaaxaagluxaaxaaxaaxaatyrxaaxaaxaaleuarghistyrxaa
151015
asnleuxaathrargglnargtyr
20
<210>46
<211>24
<212>prt
<213>人工序列(artificialsequence)
<220>
<223>合成肽
<220>
<221>misc_feature
<222>(3)..(4)
<223>xaa=glu或asp
<220>
<221>misc_feature
<222>(5)..(5)
<223>xaa=met或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(7)..(7)
<223>xaa=lys或arg
<220>
<221>misc_feature
<222>(11)..(11)
<223>xaa=ser或ala
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>xaa=arg、ile或leu
<220>
<221>misc_feature
<222>(19)..(19)
<223>xaa=ile或val
<400>46
leuproxaaxaaxaaasnxaaleuleuleuxaaleuarglysleuxaa
151015
asnleuxaathrargglnleutyr
20
- 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞！