茚衍生物及其用途的制作方法

发明领域

本发明总体涉及可用于治疗癌症和降低对标准治疗(standardofcare)癌症治疗的抗性的茚衍生物。下文引用或依赖的所有文献均明确地通过引用并入本文。

关于联邦政府赞助的研究或开发的声明

在p20gm103542、ul1tr001450和r41ca213488项下的政府支持下完成了本发明。政府拥有本发明的某些权利。

发明背景

蛋白酶体抑制剂(pi)(例如硼替佐米，bortezomib)和组蛋白脱乙酰基酶(hdac)抑制剂(例如帕比司他，panobinostat)是治疗多发性骨髓瘤(mm)的基础药物。对这些药物的获得性或固有抗性代表了患者中持续和持久反应的重大障碍。本领域中需要新的靶向策略，其靶向并杀灭mm和其他癌细胞类型，以及增强其他疗法在抗性癌细胞中的活性。

发明概述

本发明涉及式(i)化合物：

其中：

r1和r2彼此独立地为氢、羟基、烷基、烷氧基、甲氧基乙酸酯、磷酸酯、缬氨酸、gly-ser、-oc(o)ch2oc(o)ch3、-oc(o)ch2och3、-och2c(o)c(ch3)3、-och2c(o)nh2或–och2c(o)oh；或者r1和r2与它们所连接的碳原子一起形成5至6元环，其中一个或两个环碳独立地被氧或氮取代；

r3为氢、羟基、卤素、氰基、-cooh、-c(o)nh2、-c(o)ch2ch3、-c(o)-烷氧基、烷基、烷氧基、卤代低级烷基、羧基、酰胺、酯或腈；且

r4为烷基或烯基，所述烷基或烯基任选独立地被氢、卤素、羟基、-och2-苯基、环烷基、-och2-卤代苯基或-och2-苯基卤代烷基单取代或双取代，

或其药学上可接受的盐。

本发明还涉及药物组合物，其包含治疗有效量的根据式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

本发明还涉及一种用于治疗癌症并增强标准治疗(standardofcare)癌症剂(在此示例性用于治疗多发性骨髓瘤)，以及用于降低对pi抗性中活性的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据式(i)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

附图简述

图1提供了显示本发明化合物在抗性mm细胞和多种其他癌细胞类型中的蛋白酶体抑制剂再敏化特性的数据。

图2显示了本发明化合物在一组实体和血液癌细胞系中的单一药剂抗肿瘤效力。

图3提供了显示本发明化合物在实体和血液癌细胞系的小组中的hdaci再敏化特性的数据。

图4显示了通过胰岛素聚集测定的e64fc26和e64fc29对pdi活性的抑制。

图5显示了本发明代表性化合物的活性数据。

发明详述

应当理解，已经简化了本发明的描述以说明与清楚理解本发明有关的要素，同时为了清楚起见，省去了典型药物组合物中出现的许多其他要素。本领域普通技术人员将认识到，在实现本发明中其他要素和/或步骤是期望和/或要求的。然而，由于这样的要素和步骤在本领域中是众所周知的，并且因为它们不促进对本发明的更好的理解，因此本文不提供对这样的要素和步骤的讨论。本文的公开内容针对本领域技术人员已知的对这样的要素和方法的所有这样的变型和修改。此外，本文中标识和说明的实施方式仅用于示例性目的，并不意味着其在本发明的描述中是排他性的或限制性的。

本发明涉及例如抑制蛋白质二硫键异构酶(pdi)的化合物。本发明的化合物显示出作为单一药剂的抗肿瘤功效，并增强了其他靶向癌症治疗剂(包括蛋白酶体和hdac抑制剂)的活性。

发明人将pdi鉴定为包括治疗抗性癌症在内的癌症中有希望的靶标。例如，发明人确定了化合物e64fc26：

和e64fc65:

除非另有定义，否则本文中使用的技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。本文参考了本领域技术人员已知的各种方法和材料。阐述药理学一般原理的标准参考著作包括goodman和gilman的thepharmacologicalbasisoftherapeutics，第10版，mcgrawhillcompaniesinc.，newyork(2001)。技术人员已知的任何合适的材料和/或方法均可用于实施本发明。然而，描述了优选的材料和方法。除非另有说明，否则在以下描述和实施例中参考的材料、试剂等可从商业来源获得。

根据本发明的化合物固有地旨在包含其所有立体化学异构形式。如上文或下文所用的术语“立体化学异构形式”定义了式(i)化合物及其n-氧化物、药学上可接受的盐或生理功能性衍生物可能具有的所有可能的立体异构形式。除非另有说明或指出，否则化合物的化学名称表示所有可能的立体化学异构形式的混合物。特别地，立体发生中心可以具有r-或s-构型。二价环状(部分)饱和基团上的取代基可具有顺式或反式构型。包含双键的化合物在所述双键处可以具有e(entgegen)或z(zusammen)-立体化学。术语顺式、反式、r、s、e和z是本领域技术人员众所周知的。

式(i)化合物的立体化学异构形式显然意图包括在本发明的范围内。特别感兴趣的是立体化学纯的式(i)化合物。

遵循cas命名约定，当分子中存在两个已知绝对构型的立体异构中心时，r或s描述符(基于cahn-ingold-prelog序列规则)分配给编号最小的手性中心，即参考中心。使用相对描述符[r*,r*]或[r*,s*]指示第二立体生成中心的构型，其中r*始终指定为参考中心，[r*,r*]指示相同手性的中心，[r*,s*]指示不同手性的中心。例如，如果分子中编号最低的手性中心具有s构型，而第二个中心为r，则立体描述符将指定为s--[r*,s*]。如果使用“α”和“β”：在具有最低环数的环系统中不对称碳原子上最高优先级的取代基的位置任意地总是在该环系统确定的平均平面的“α”位置。环系统中另一不对称碳原子上最高优先级取代基的位置相对于参考原子上最高优先级取代基的位置用“α”(如果其在由环系统确定的平均平面的同一侧)或“β”表示(如果其在由环系统确定的平均平面的另一侧)。

当指示特定的立体异构形式时，这意味着基本上不含所述形式，即与小于50％，优选小于20％，更优选小于10％，甚至更优选小于5％，进一步优选小于2％，且最优选小于1％的其他异构体相关联。因此，当式(i)的化合物例如被指定为(r,s)时，这意味着该化合物基本上不含(s,r)异构体。

式(i)的化合物可以以对映异构体的混合物，特别是外消旋混合物的形式合成，其可以按照本领域已知的拆分程序彼此分离。通过与合适的手性酸反应，可以将式(i)的外消旋化合物转化成相应的非对映体盐形式。所述非对映体盐形式随后例如通过选择性结晶或分级结晶而分离，并且对映异构体通过碱从其中释放。分离式(i)化合物的对映体形式的另一种方法涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式也可以衍生自适当起始原料的相应纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。优选地，如果需要特定的立体异构体，则所述化合物将通过立体特异性的制备方法合成。这些方法将有利地采用对映体纯的起始原料。

式(i)化合物的互变异构形式意在包括那些式(i)化合物，其中例如烯醇基团转化为酮基(酮-烯醇互变异构)。本发明的范围旨在包括式(i)的化合物或本发明的中间体的互变异构形式。

如本文所用，术语“烷基”表示含有1至20个碳原子的直链或支链的饱和一价烃残基。在一个实施方式中，烷基链中的碳原子数可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子。在另一实施方式中，烷基链中的碳原子数可以为5至16，并且称为“(c5-c16)烷基”。术语“低级烷基”表示包含1至6个碳原子的直链或支链烃残基。如本文所用的“c1-20烷基”是指由1至20个碳组成的烷基，烷基的实例包括但不限于低级烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基十一烷基、十二烷基、十三烷基(tridecyl)和十六烷基。

如本文所用的术语“烯基”表示具有含有至少一个碳-碳双键的结构式的2至24个碳原子的直链或支链的饱和一价烃残基。在一个实施方式中，烯基链中的碳原子数可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个碳原子。在另一实施方式中，烯基链中的碳原子数可以为5至16，并且称为“(c5-c16)烯基”。

当术语“烷基”用作另一术语的后缀时，例如在“苯基烷基”或“羟基烷基”中，其旨在是指被一个至两个选自其他专门命名的组的取代基团取代的如上所定义的烷基。因此，例如“苯基烷基”表示基团r'r"-，其中r'是苯基，并且r”是如本文所定义的亚烷基，其理解为苯基烷基部分的连接点将在亚烷基上。芳基烷基的实例包括但不限于苄基、苯乙基、3-苯丙基。术语“芳基烷基”或“芳烷基”的解释类似，不同的是r'是芳基。术语“(杂)芳基烷基”或“(杂)芳烷基”的解释类似，不同的是r'任选地为芳基或杂芳基。

如本文所用的术语“烷氧基”是指-o-烷基，其中烷基如上文所定义，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基，包括其异构体。如本文所用，“低级烷氧基”表示具有如先前所定义的“低级烷基”基团的烷氧基。如本文所用的“c1-10烷氧基”是指-o-烷基，其中烷基是c1-10。

如本文所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。在一个实施方式中，卤素可以是氟或溴。

“患者”是哺乳动物，例如人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪或非人灵长类动物，例如猴、黑猩猩、狒狒或恒河猴，且术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用。

如本公开中所用的术语“载体”涵盖载体、赋形剂和稀释剂，并且是指涉及运载或运输药剂从机体的一个器官或部分至机体的另一器官或部分的材料、组合物或媒介物，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。关于受试者的术语“治疗”是指改善受试者病症的至少一种症状。治疗可以是治愈、改善或至少部分缓解该病症。

除非另有说明，否则术语“病症”在本公开中用于表示术语疾病、病症或病，并且可以与术语疾病、病症或病互换使用。

如本公开中使用的术语“施用(administer)”、“施用(administering)”或“施用(administeration)”是指直接向受试者施用化合物或化合物的药学上可接受的盐或组合物，或向受试者施用化合物或化合物的药学上可接受的盐的前药衍生物或类似物或组合物，其可以在受试者体内形成等量的活性化合物。

如本公开中使用的术语“任选地被取代”是指合适的取代基可以代替与碳、氮或氧结合的氢。当取代基是氧代(即＝o)时，原子上的2个氢被单个o取代。在一个实施方式中，烷基或低级烷基可被例如–n3，-c≡ch，苯基或oh取代。对于含有一个或多个取代基的任何基团，本领域技术人员将理解，这些基团无意引入在空间上不切实际，合成上不可行和/或固有地不稳定的任何取代或取代模式。此外，仅当本文所代表的任何式中的取代基和/或变量的组合导致稳定的化合物或有用的合成中间体时，这样的组合才是允许的，其中稳定表示在生理条件下合理的药理学相关的半衰期。

剂量和施用：

本发明的化合物可以配制成多种口服施用剂型和载体。口服施用可以为片剂、包衣片剂、糖衣丸、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂、糖浆或悬浮液的形式。当通过其他施用途径施用时，本发明的化合物是有效的，所述施用途径包括连续(静脉滴注)局部肠胃外、肌肉内、静脉内、皮下、透皮(其可包括渗透增强剂)、颊、鼻、吸入和栓剂施用，以及其他施用途径。优选的施用方式通常是使用方便的每日给药方案口服，该给药方案可以根据患病程度和患者对活性成分的反应进行调整。

可以将本发明的一种或多种化合物以及它们的可药用盐与一种或多种常规赋形剂、载体或稀释剂一起制成药物组合物和单位剂量的形式。药物组合物和单位剂型可以按常规比例由常规成分组成，可以有或没有其他活性化合物或原理，并且单位剂型可以包含任何合适有效量的活性成分，其与预期的待使用日剂量范围相称。药物组合物可以固体形式(例如片剂或填充胶囊、半固体、粉剂、持续释放制剂)，或以液体形式(例如用于口服使用的溶液、悬浮液、乳剂、酏剂或填充胶囊)以口服使用；或以栓剂的形式用于直肠或阴道施用；或以无菌注射液形式用于肠胃外使用。典型的制剂将含有约5％至约95％的活性化合物(w/w)。术语“制剂”或“剂型”旨在包括活性化合物的固体和液体制剂，并且本领域技术人员将认识到，取决于靶器官或组织以及取决于所需剂量和药代动力学参数，活性成分可以存在于不同的制剂中。

如本文所用的术语“赋形剂”是指可用于制备药物组合物的化合物，其通常是安全、无毒的并且在生物学上或其他方面都不是不期望的，并且包括兽医学以及人类药学上可接受的赋形剂。本发明的化合物可以单独施用，但通常将与根据预期施用途径和标准药学实践选择的一种或多种合适的药物赋形剂、稀释剂或载体混合施用。

“药学上可接受的”是指其可用于制备通常安全、无毒且在生物学上或其他方面均不是不期望的药物组合物，并且包括其在兽医学以及人类药用方面是可接受的。

活性成分的“药学上可接受的盐”形式还可以最初赋予活性成分以非盐形式所不存在的期望的药代动力学性质，甚至就其机体内的治疗活性而言甚至可以积极地影响活性成分的药效学。化合物的短语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的并且具有母体化合物的所需药理活性的盐。这样的盐包括：(1)与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成的酸加成盐；或(2)当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子如碱金属离子、碱土离子或铝离子替代时形成的盐；或与有机碱如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、n-甲基葡糖胺等配位时形成的盐。

固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和分散性颗粒剂。固体载体可以是还可以用作稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包囊材料的一种或多种物质。在粉剂中，载体通常是细分的固体，其是与细分的活性成分的混合物。在片剂中，通常将活性成分与具有必要结合能力的载体以合适的比例混合，并压制成所需的形状和大小。合适的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。固体形式的制剂除活性成分外还可包含着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

液体制剂也适用于口服施用，其包括液体制剂，包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、水悬浮液。这些包括固体形式的制剂，其旨在在即用前转变成液体形式的制剂。乳液可以在溶液中，例如在丙二醇水溶液中制备，或者可以包含乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯树胶。可以通过将活性成分溶解在水中并添加合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备水溶液。可以通过将细分的活性成分与粘性物质(例如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其他众所周知的悬浮剂)分散在水中来制备水悬浮液。

本发明的化合物可以配制用于肠胃外施用(例如通过注射，例如推注注射或连续输注)，并且可以连同添加的防腐剂以单位剂型存在于安瓿、预填充注射器、小体积输注或多剂量容器中。该组合物可以采取诸如在油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)，并且可能包含诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。或者，活性成分可以为粉末形式，其通过无菌分离无菌固体或通过从溶液中冻干而得，用于在使用前采用合适的媒介物例如无菌、无热原的水构筑。

本发明的化合物可以配制成软膏剂、乳膏剂或乳液或配制成透皮贴剂以用于局部施用于表皮。例如，软膏剂和乳膏剂可以采用水性或油性基质配制，并添加合适的增稠剂和/或胶凝剂。乳液可以采用水性或油性基质配制，并且通常将还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适于在口腔内局部施用的制剂包括在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄芪胶)中包含活性剂的锭剂；在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含活性成分的药片；和在适当的液体载体中包含活性成分的漱口水。

本发明的化合物可以配制成栓剂施用。首先熔融低熔点蜡，例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，并且例如通过搅拌将活性成分均匀分散。然后将熔化的均匀混合物倒入大小合适的模具中，使其冷却并固化。

可以配制本发明的化合物用于阴道施用。除了活性成分外还包含本领域已知合适的此类载体的阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂是适当的。

本发明的化合物可以配制用于鼻腔施用。溶液或悬浮液可以通过常规方式，例如用滴管，移液管或喷雾器直接施用于鼻腔。制剂可以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或移液器的后一种情况下，这可以通过患者施用适当的预定体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾的情况下，这可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。

本发明的化合物可以配制成用于气雾剂施用，特别是向呼吸道施用，包括鼻内施用。该化合物将通常具有较小的粒径，例如五(5)微米或更小量级。这样的粒径可以通过本领域已知的方法获得，例如通过微粉化。活性成分以加压包装的形式提供有合适的推进剂，例如氯氟烃(cfc)，例如，二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其他合适的气体。气雾剂还可方便地包含表面活性剂，例如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀来控制。或者，可以以干燥粉末的形式提供活性成分，例如化合物在合适的粉末基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(pvp)中的粉末混合物。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂型存在，例如在例如明胶或泡罩包装的胶囊或药筒中，可以通过吸入器从中施用粉末。

当需要时，可以用适于持续或控制释放施用活性成分的肠溶衣制备制剂。例如，可以在透皮或皮下药物递送装置中配制本发明的化合物。当需要化合物的持续释放并且当患者对治疗方案的依从性至关重要时，这些递送系统是有利的。透皮递送系统中的化合物经常附着在皮肤粘附性固体支持物上。感兴趣的化合物也可以与渗透增强剂例如氮酮(1-十二烷基杂氮-环庚-2-酮)组合。通过手术或注射将持续释放递送系统皮下插入皮下层。皮下植入物将化合物包封在脂溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物例如聚乳酸中。

合适的制剂以及药物载体、稀释剂和赋形剂在remington:thescienceandpracticeofpharmacy1995，e.w.martin编，mackpublishingcompany，第19版，easton，pennsylvania中描述。熟练的制剂科学家可以在说明书的教导范围内修改制剂，以提供用于特定施用途径的多种制剂，而不会使本发明的组合物不稳定或损害其治疗活性。

本发明化合物的以使其更易溶于水或其他媒介物中的修饰，例如，可以通过较小的修饰(盐配制，酯化等)容易地完成，这在本领域普通技术人员的能力范围内。改变特定化合物的施用途径和剂量方案以控制本发明化合物的药代动力学以在患者中获得最大的有益效果，这也是在本领域普通技术人员的能力范围内。

如本文所用的术语“治疗有效量”是指减轻个体中疾病症状所需的量。在每种特定情况下，剂量将根据个体需要进行调整。该剂量可以在很宽的范围内变化，这取决于许多因素，例如待治疗疾病的严重程度，患者的年龄和总体健康状况，正在治疗患者的其他药物，施用途径和形式以及所涉医生的偏爱和经验。对于口服施用，在单一疗法和/或联合疗法中，每天约0.01至约1000mg/kg体重之间的日剂量应为合适的。优选的日剂量为每天约0.1至约500mg/kg体重之间，更优选0.1至约100mg/kg体重，最优选1.0至约15mg/kg体重。因此，对于向70kg的人施用，在一个实施方式中的剂量范围将为每天约70mg至.7g。日剂量可以单剂量或分剂量施用，通常每天1-5次。通常，以小于化合物最佳剂量的较小剂量开始治疗。此后，以小增量增加剂量，直至达到个体患者的最佳效果。在不进行过度实验且不依赖个人知识、经验和本申请公开内容的情况下，治疗本文所述疾病的普通技术人员将能够确定对于给定疾病和患者而言治疗有效量的本发明化合物。

药物制剂优选为单位剂型。在这种形式中，将制剂细分为包含适当量的活性成分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装包含离散量的制剂，例如包装的片剂、胶囊剂和小瓶或安瓿中的粉剂。同样，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者可以是适当数量的任何这些的包装形式。

本发明的化合物可以由可商购的起始原料开始并且利用本领域技术人员已知的一般合成技术和程序来制备。可以从诸如sigmaaldrich，argonauttechnologies，vwr和lancaster的公司购买化学品。色谱供应品和设备可以从诸如以下公司购买，例如analogix，inc，burlington，wis.；biotageab，charlottesville，va.；analyticalsalesandservices，inc.，pomptonplains，n.j.；teledyneisco，lincoln，nebr.；vwrinternational，bridgeport，n.j.；和waterscorporation，milford，ma。biotage色谱柱、isco色谱柱和analogix色谱柱是用于标准色谱的预装硅胶柱。

实施例

以下实施例进一步描述和证明了本发明范围内的特定实施方式。技术和配方通常可在remington'spharmaceuticalsciences(mackpublishingco.，easton，pa.)中找到。通过以下实施例进一步说明本公开，这些实施例不应解释为将本公开的范围或精神限制于本文所述的具体程序。应当理解，提供这些实施例是为了举例说明某些实施方式，并且并不意图由此限制本公开的范围。还应理解的是，在不脱离本公开的精神和/或所附权利要求的范围的情况下，可以向本领域技术人员提出各种其他实施方式、修改及其等同物。

实施例1

e64fc26的合成方案

步骤1：1,1,1-三氟-2-羟基-2-(3,4-二甲氧基苯基)十三-4-酮(1).将十一-2-酮(306mg，1.8mmol)在thf(8ml)中的溶液冷却至-78℃，然后缓慢加入lda(2mthf溶液，1.05ml，2.1mmol)。将混合物在-78℃下搅拌45分钟。缓慢加入2,2,2-三氟-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙酮(234mg，1.0mmol)在thf(2ml)中的溶液。-78℃下搅拌4小时后，将混合物加温至室温30分钟。加入20ml饱和nh4cl水溶液。将该混合物用乙醚(30ml)萃取两次。将合并的醚层用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥并真空浓缩。将残余物通过isco快速色谱(0—10％乙酸乙酯/己烷)纯化以得到标题化合物404mg(100％)。lc/ms:rf＝6.88min，纯度>95％，(m+h)⁺＝404.68.¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.13-7.22(m，1h)，6.91-7.05(m，1h)，6.83(d，j＝8.50hz，1h)，3.85(s，3h)，3.86(s，3h)，3.05-3.36(m，2h)，2.28-2.58(m，2h)，1.40-1.61(m，2h)，1.22(br.s.，12h)，0.86(t，j＝6.45hz，3h)。

步骤2：(z)-3-(三氟甲基)-5,6-二甲氧基-1-亚壬基-1h-茚(2)和(e)-3-(三氟甲基)-5,6-二甲氧基-1-亚壬基-1h-茚(3)将在甲苯(3ml)中的1(202mg，0.5mmol)、tsoh(48mg，0.25mmol)的混合物在100℃下加热5小时。反应完成后，将混合物浓缩。将残余物通过采用0—10％乙酸乙酯/己烷洗脱的isco纯化以得到异构体(2:34mg；3:138mg)。lc/ms:rf2＝8.42min，纯度>95％，(m+h)2⁺＝369.66.¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.29-7.40(m，1h)，6.96-7.04(m，1h)，6.72(s，1h)，6.41-6.60(m，1h)，3.92-4.03(m，6h)，2.73-2.92(m，2h)，1.58-1.81(m，2h)，1.24-1.56(m，10h)，0.77-1.02(m，3h)；rf3＝8.27min，纯度>95％，(m+h)⁺＝369.66.¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.14-7.26(m，1h)，7.07(br.s.，1h)，6.98(s，1h)，6.81(t，j＝7.91hz，1h)，3.93-4.05(m，6h)，2.60(q，j＝7.42hz，2h)，1.51-1.72(m，2h)，1.20-1.50(m，10h)，0.76-1.07(m，3h)。

步骤3-1：(z)-3-(三氟甲基)-1-亚壬基-1h-茚-5,6-二醇(fc-7947).-78℃下向2(41mg，0.11mmol)在ch2cl2(1ml)中的溶液中加入0.33ml1mbbr3的ch2cl2溶液，并保持在-78℃下1小时。然后将混合物加温至-20℃1.5小时。tlc指示反应完成。加入4mlnh4cl和5.0ml醚。分离有机层，干燥，浓缩。纯化残余物以得到fc-7947(25mg，67％收率)。lc/ms:rf＝6.93min，纯度>95％，(m+h)⁺＝341.64。¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.32-7.50(m，1h)，6.94-7.13(m，1h)，6.61-6.81(m，1h)，6.38-6.60(m，1h)，5.25-5.68(m，2h)，2.54-2.85(m，2h)，1.56-1.79(m，2h)，1.17-1.52(m，10h)，0.76-1.04(m，3h)。

步骤3-2:(e)-3-(三氟甲基)-1-亚壬基-1h-茚-5,6-二醇(fc-7362).-78℃下向3(158mg，0.43mmol)在ch2cl2(5ml)中的溶液中加入1.3ml1mbbr3的ch2cl2溶液，并在-78℃下搅拌1小时。然后将混合物加温至-20℃1.5小时。tlc指示反应完成。加入15mlnh4cl和30ml醚。分离有机层，干燥，浓缩。将残余物通过isco纯化以得到fc-7947(96mg，65％收率)。lc/ms:rf＝6.93min，纯度>95％，(m+h)⁺＝341.64。¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.10-7.23(m，1h)，7.00-7.09(m，1h)，6.98(d，j＝1.17hz，1h)，6.62-6.77(m，1h)，2.46-2.65(m，2h)，1.46-1.68(m，2h)，1.20-1.45(m，10h)，0.79-1.02(m，3h)。

实施例2

e64fc65的合成方案

步骤1：2-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-6-基)-1,1,1-三氟-2-羟基十一-4-酮(4).将壬-2-酮(983mg，6.9mmol)在thf(50ml)中的溶液冷却至-78℃，然后缓慢加入lda(2mthf溶液，4.0ml，7.8mmol)。将混合物在-78℃下搅拌45分钟。缓慢加入1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-6-基)-2,2,2-三氟乙酮(1.0g，4.6mmol)在thf(5ml)中的溶液。-78℃下搅拌4小时后，将混合物加温至室温30分钟。加入100ml饱和nh4cl水溶液。将该混合物用乙醚(100ml)萃取两次。将合并的醚层用盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥并真空浓缩。将残余物通过isco快速色谱(0—10％乙酸乙酯/己烷)纯化以得到标题化合物1.62g(98％)。lc/ms:rf＝6.70min，纯度>95％，(m)⁺＝360.61。

步骤2:(5z)-7-(三氟甲基)-5-亚庚基-5h-茚并[5,6-d][1,3]二恶唑(fc-9377)和(5e)-7-(三氟甲基)-5-亚庚基-5h-茚并[5,6-d][1,3]二恶唑(fc-8975，e64fc65)将4(1.62g，4.5mmol)、tsoh(387mg，2.25mmol)在甲苯(25ml)中的混合物在125℃下加热1.5小时。反应完成后，将混合物浓缩。将残余物通过采用0—10％乙酸乙酯/己烷洗脱的isco纯化以得到混合物(557mg)。将该混合物通过gilson(75—100％mecn/h2o)进一步纯化以得到标题化合物(fc-8975，288mg)和(fc-9377，14mg)。lc/ms:rf1＝7.86min，纯度>95％，(m+h)1⁺＝325.59。¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.04-7.14(m，2h)，7.01-7.07(m，1h)，6.86-6.99(m，1h)，6.65-6.82(m，1h)，5.99(s，2h)，2.46-2.68(m，2h)，1.47-1.70(m，2h)，1.17-1.46(m，7h)，0.79-0.99(m，3h)

rf2＝7.94min，纯度>95％，(m)⁺＝324.64.¹hnmr(300mhz，cdcl3)δ7.09(s，1h)，6.94(s，1h)，6.68-6.69(m，1h)，6.49(t，j＝7.32hz，1h)，6.00(s，2h)，2.70(q，2h)，1.59-1.66(m，2h)，1.30-1.35(m，6h)，0.87-0.92(m，3h)

实施例3

本发明的其他化合物的合成方案

使用以上实施例1和2中的程序，还制备了以下化合物：

实施例4

生物测定

本发明的代表性化合物的蛋白酶体抑制剂敏化特性

参考图1。(a)示出了新型衍生物e64fc26和e64fc65的结构。(b)采用500nm浓度的e64fc26和一定剂量范围的pi硼替佐米(bortezomib,btz)处理对蛋白酶体抑制剂(pi)具有抗性的mm.1sbzr细胞。处理24小时后测量细胞活力。与用e64fc26共同处理过的细胞的ec50(4.7nm)相比，用dmso媒介物处理的对照细胞的经计算btzec50为45.5nm，btz敏感性的增加为9.7倍。(c)采用终浓度为1μm的所示衍生物和一定剂量范围的btz处理panc-1胰腺癌细胞。在48小时的处理时间后测量细胞活力。在dmso媒介物对照的存在下，btzec50为83.5nm，相比之下，在e64fc26的存在下为9.1nm，在e64fc65的存在下为1.8nm，分别对应于9.2倍和46.4倍的btz敏感性增加。(d)采用e64fc26和一定剂量范围的第二代蛋白酶体抑制剂卡非佐米(carfilzomib,crflz)，使用与以上针对图(b)和(c)所述相似的方案处理胰腺、卵巢、胶质瘤、多发性骨髓瘤和正常细胞的小组。从存在和不存在e64fc26的情况下进行的剂量曲线外推crflzec50值，并计算倍数变化。每个数据点代表每个所测细胞系的倍数变化或crflz增强程度。

本发明代表性化合物的广谱单一药剂抗肿瘤功效

参考图2。用1μme64fc26处理源自所示肿瘤类型的细胞系。处理48小时后，测量细胞活力。数据代表相对于dmso处理的对照细胞培养物的存活细胞％。

本发明代表性化合物的hdac抑制剂敏化特性

参考图3。(a)在panc-1胰腺癌细胞中，在存在和不存在1μme64fc26的情况下评估每种所示hdac抑制剂的细胞毒性。显示了ec50值。(b)使用t98g胶质母细胞瘤细胞进行与(a)中所述类似的实验。在存在和不存在1μme64fc26的情况下，每种hdac抑制剂的ec50值。(c)在存在和不存在1μme64fc26的情况下，用一定剂量范围的hdac抑制剂帕比司他(panobinostat)处理所示肿瘤细胞类型的小组。外推ec50值，并计算e64fc26对帕比司他敏感性的相对影响。每个数据点指示针对该特定细胞系的帕比司他ec50的倍数变化。(d)显示了panc-1胰腺癌细胞中完全帕比司他剂量响应曲线的实例。用dmso媒介物对照、1μme64fc26或1μme64fc65共同处理panc-1细胞。dmso处理细胞中的帕比司他ec50为453nm，相比之下，e64fc26存在时为5.3nm，e64fc65存在时为1.1nm，帕比司他敏感性的增加分别为85.5倍和412倍。

e64fc26的体内抗mm活性

参考图4。显示了e64fc26(2mg/kg，i.p.)和btz(0.25mg/kg，i.p.)的每周给药时间表。(b)nsg小鼠静脉内注射1x10⁶个mm.1s亲本细胞。7天后，将小鼠随机分组(n＝8-9)，这些组使用生存数据中概述的给药方案，接收采用媒介物、e64fc26、btz、或e64fc26/btz组合的处理。

本发明的代表性化合物在体外对pdi活性的抑制

参考图5中的数据表。该表提供了针对每个所示衍生物的以下数据：

1.作为单一药剂[列标记(-)btz]，在蛋白酶体抑制剂抗性mm细胞(mm.1sbzr)中的细胞毒性测定的ec50值。

2.联合20nmbtz[列标记(+)20nmbtz]，在蛋白酶体抑制剂抗性mm细胞(mm.1sbzr)中的细胞毒性测定的ec50值。

3.体外pdi测定中的pdi抑制ic50。通过在37摄氏度下孵育1μm重组纯化的pdi1小时来进行pdi生化测定。加入100μm人胰岛素和1mmdtt以启动pdi催化的胰岛素聚集。在45分钟内跟踪650nm处的吸光度变化，并每分钟进行一次测量。取指数范围内的吸光度值，并在不存在抑制剂的情况下将其归一化为pdi活性。

在以下编号的段落中进一步描述了本发明：

1.式(i)化合物：

其中：

r1和r2彼此独立地为氢、羟基、烷基、烷氧基、甲氧基乙酸酯、磷酸酯、缬氨酸、gly-ser、-oc(o)ch2oc(o)ch3、-oc(o)ch2och3、-och2c(o)c(ch3)3、-och2c(o)nh2或–och2c(o)oh；或者r1和r2与它们所连接的碳原子一起形成5至6元环，其中一个或两个环碳独立地被氧或氮取代；

r3为氢、羟基、卤素、氰基、-cooh、-c(o)nh2、-c(o)ch2ch3、-c(o)-烷氧基、烷基、烷氧基、卤代低级烷基、羧基、酰胺、酯或腈；且

r4为烷基或烯基，所述烷基或烯基任选独立地被氢、卤素、羟基、-och2-苯基、环烷基、-och2-卤代苯基或-och2-苯基卤代烷基单取代或双取代，

或其药学上可接受的盐。

2.根据段落1所述的化合物，其中r1和r2彼此独立地为氢、羟基、烷基、烷氧基、甲氧基乙酸酯、磷酸酯、缬氨酸、gly-ser、-oc(o)ch2oc(o)ch3、-oc(o)ch2och3、-och2c(o)c(ch3)3、-och2c(o)nh2或–och2c(o)oh。

3.根据段落1所述的化合物，其中r1和r2与它们所连接的碳原子一起形成5至6元环，其中一个或两个环碳独立地被氧或氮取代。

4.根据段落1所述的化合物，其中r1为羟基。

5.根据段落1所述的化合物，其中r2为羟基。

6.根据段落1所述的化合物，其中r1和r2均为羟基。

7.根据段落1所述的化合物，其中r1为烷氧基。

8.根据段落1所述的化合物，其中r2为烷氧基。

9.根据段落1所述的化合物，其中r1和r2均为烷氧基。

10.根据段落1所述的化合物，其中r3为氢、羟基、卤素、氰基、-cooh、-c(o)nh2、-c(o)ch2ch3、-c(o)-烷氧基、烷基、烷氧基、卤素-低级烷基、羧基、酰胺、酯或腈。

11.根据段落1所述的化合物，其中r3为酰胺。

12.根据段落1所述的化合物，其中r3为-cf3。

13.根据段落1所述的化合物，其中r4为烯基。

14.根据段落1所述的化合物，其中r4为任选地被氢、卤素、羟基、-och2-苯基、环烷基、-och2-卤代苯基或-och2-苯基卤代烷基独立地单取代或双取代的烯基。

15.一种化合物，其中所述化合物为：

或其药学上可接受的盐。

16.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据段落1的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

17.一种用于治疗癌症的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落1的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

18.一种用于治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落1的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

19.一种用于增强蛋白酶体和/或hdac抑制剂的活性的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落1的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

20.一种用于在多发性骨髓瘤的治疗期间增强蛋白酶体和/或hdac抑制剂的活性的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落1的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

21.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据段落15的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

22.一种用于治疗癌症的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落15的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

23.一种用于治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落15的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

24.一种用于增强蛋白酶体和/或hdac抑制剂的活性的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落15的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

25.一种用于在多发性骨髓瘤的治疗期间增强蛋白酶体和/或hdac抑制剂的活性的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者施用治疗有效量的根据段落15的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

*＊*

应当理解，本发明不限于上述本发明的特定实施方式，因为可以对特定实施方式进行变型并且仍落在所附权利要求的范围内。