沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法与流程

本发明涉及病原微生物的检测
技术领域：
，尤其涉及沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法。
背景技术：
：性传播疾病(sexuallytransmitteddiseases,std)是指通过性接触可以传染的一组传染病，在中国，人们简称为性病。作为一种社会性疾病，std不仅给患者造成不同程度的身体损伤，同时带来精神痛苦，还给配偶、子女、家庭带来不幸，给社会和国家造成严重的损失。感染std疾病的患者，男性可导致附睾炎，精索炎进而致不育，女性可引起盆腔炎、输卵管炎、子宫内膜炎、异位内膜炎、异位妊娠、流产等。其中沙眼衣原体(ct)、淋病奈瑟氏菌(ng)、脲原体(uu)三种病原体感染已经成为std的主要的致病病原体。因此，沙眼衣原体(ct)、淋病奈瑟氏菌(ng)、脲原体(uu)的及时诊断对防控性传播疾病至关重要。沙眼衣原体chlamydiatrachomatis分为3个生物型，即小鼠生物型(biovarmouse)、沙眼生物型(biovartrachoma)和性病淋巴肉芽肿生物型(biovarlymphogranulomavenereum,lgv)，后二者与人类疾病有关。用间接微量免疫荧光试验，沙眼生物型又分a、b、ba、c、d、da、e、f、g、h、i、ia、j、k14个血清型，lgv生物型又有l1、l2、l2a、l34个血清型。其中a、b、ba及c型的衣原体株能引起沙眼，l1、l2、l3型能引起性病性淋巴肉芽肿，d-k型则引起非淋菌性尿道炎。沙眼衣原体是引起非淋菌性尿道炎的主要病原体，由前述可知，非淋菌性尿道炎的40％～50％是由沙眼衣原体感染引起的。沙眼衣原体感染目前已是西方国家最常见的性传播疾病之一，发病人数增加很快，已超过淋病。在中国，沙眼衣原体感染的患病人数也在迅速增加。人类是淋球菌唯一的自然宿主，淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖，男性发生尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。脲原体经尿道感染后患者可出现尿道炎症状，并可继发慢性前列腺炎。在检查前列腺液时，可见活泼、泳动的微生物群体。脲原体还继续感染精道、精囊和睾丸，影响精子和精液的质量，引起不育。目前，沙眼衣原体(ct)、淋病奈瑟氏菌(ng)、脲原体(uu)(简称为ct/ng/uu)的检测方法主要有细菌的分离培养、免疫学诊断和分子生物学诊断，三种方法具有以下特点：1)病原体的分离培养是ct/ng/uu的金标准，但分离培养法对技术要求较高，费用较昂贵，耗时长，在临床检测中应用不多。2)免疫学诊断诊断还存在滞后性，不能准确反映当前是否感染或携带病原体，难以满足早期诊断的要求。3)病原体核酸检测：具有快速、准确、检测窗口短、高灵敏度等优点，能够对ct/ng/uu作出早期诊断，给疫情的快速分析和控制提供有力的技术支撑。其中实时定量pcr检测平台已成为最简捷和可靠的核酸检测方法，在目前国内外的核酸诊断中应用最为广泛，检测原理为，检测探针为包括5’端报告基团和3’端淬灭基团的寡核苷酸，当探针完整时，由于淬灭基团靠近报告基团而极大降低了报告基团发出的荧光，引物延伸时，与模板结合的探针被taq酶(5’→3’外切核酸酶活性)切断，报告基团与淬灭基团分离，产生荧光信号。在每次pcr循环中，都有新的报告基团被剪切，因此荧光信号强度的增加与扩增产物的数量成正比，可实时监控扩增情况。目前产品大部分采取针对ct/ng/uu单一的荧光定量pcr检测方法，必须对一个临床样本进行多管检测，才能分别得出结论，增加了检测成本和操作繁琐度。本发明针对以上技术缺陷，选择沙眼衣原体crypticplasmid保守区域，淋球菌质粒保守区域、脲原体16srrna保守区域、β-珠蛋白基因(hbb，内标)保守区域，设计特异性引物和探针，利用实时荧光定量pcr技术，制成ct/ng/uu实时荧光定量pcr检测试剂盒，并介绍了其使用方法。技术实现要素：有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法，该引物组所针对的靶基因片段较小，特异性较强，且灵敏度较高。本发明提供的沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针组，其包括：seqidno:1～2所示核苷酸序列的引物对，seqidno:3所示核苷酸序列的探针；seqidno:4～5所示核苷酸序列的引物对，seqidno:6所示核苷酸序列的探针；seqidno:7～8所示核苷酸序列的引物对，seqidno:9所示核苷酸序列的探针。本发明中，seqidno:1～2所示核苷酸序列的引物对，seqidno:3所示核苷酸序列的探针针对沙眼衣原体(ct)的crypticplasmid设计，所述ct特异性靶基因片段长度为104bp；序列为：ggttatcttaaaagggattgcagcttgtagtcctgcttgagagaacgtgcgggcgatttgccttaaccccaccatttttccggagcgagttacgaagacaaaac(seqidno:13)。所述ct特异性靶基因片段。本发明中，seqidno:4～5所示核苷酸序列的引物对，seqidno:6所示核苷酸序列的探针针对淋病奈瑟氏菌(ng)的plasmid设计，所述ng特异性靶基因片段长度为121bp；序列为：tttgctgttctcgactgggcaattttccagtgtcaaacctttggtcttggtttccaacaggtctagggtgcgctctgcttcggctctctgctgtttcaagtcgtccagctcgttcttgacg(seqidno：14)。本发明中，seqidno:7～8所示核苷酸序列的引物对，seqidno:9所示核苷酸序列的探针针对脲原体(uu)的16srrna，所述uu特异性靶基因片段长度为122bp；序列为：gcaggcgggtttgtaagtttggtattaaatctagatgcttaacgtctagctgtatcaaaaactgtaaacctagagtgtagtagggagttggggaactccatgtggagcggtaaaatgcgtag(seqidno.15)。本发明所述的引物和探针具有良好的准确性、灵敏度、特异性，即便在同一个扩增体系中进行检测，也能够良好的区分ct、ng或uu。本试剂盒对ct、ng、uu的最低检出限浓度为1.0×100拷贝/μl，即最低检出限为5拷贝。本发明中，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。具体的，seqidno:3所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团cy5，3’端标记有荧光淬灭基团bhq3；seqidno:6所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团fam，3’端标记有荧光淬灭基团bhq1；seqidno:9所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团rox，3’端标记有荧光淬灭基团mgb。本发明还提供了沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的试剂盒，其包括本发明所述的引物、探针组。本发明提供的试剂盒中，还包括对内参基因hbb检测的引物对和探针；所述针对内参基因hbb检测的引物对的核苷酸序列如seqidno:10～11所示；所述针对内参基因hbb检测的探针的核苷酸序列如seqidno:12所示。所述hbb特异性靶基因片段序列为：tctgactcctgaggagaagtctgccgttactgccctgtggggcaaggtgaacgtggatgaagttggtggtgaggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaactgggcatg(seqidno：12)。本发明提供的试剂盒中，seqidno:12所示核苷酸序列的探针的5’端标记有荧光报告基团joe，3’端标记有荧光淬灭基团bhq2。本发明提供的试剂盒中，还包括荧光定量pcr检测试剂和/或样本提取试剂；所述荧光定量pcr检测试剂包括qpcrmastermix酶混合液、qpcrmastermix反应缓冲液；所述qpcrmastermix酶混合液，包括taq酶和ung酶，所述的taq酶为anstarttaqdna聚合酶，所述的ung酶为尿嘧啶-n-糖基化酶。所述样本提取试剂包括naoh、tritonx-100和te缓冲液。所述样本提取液包括naoh终浓度为0.01％～0.5％，优选为0.1％。所述样本提取液包括tritonx-100终浓度为0.01％～0.5％，优选为0.1％。本发明提供的试剂盒中，还包括阳性对照和/或阴性对照；本发明的阴性对照品为depc水；本发明的阳性对照品为含有沙眼衣原体、淋球菌和脲原体靶基因片段的质粒溶液。本发明还提供了检测并区分沙眼衣原体、淋球菌和脲原体的方法，其包括：以本发明所述的试剂盒，对待测样品dna进行实时荧光定量pcr检测，产生s型扩增曲线则为阳性。本发明所述的方法中，所述实时荧光定量pcr的体系包括：体系中，所述引物浓度为100～1000nm，优选为500nm。所述探针浓度为10～500nm，优选为200nm。本发明所述的方法中，所述实时荧光定量pcr的程序包括：50℃2分钟；95℃5分钟预变性；95℃15秒→60℃35秒，45个循环。对于结果的判断，具体包括：待检样品dna的扩增曲线ct值<38且有典型s型扩增曲线，为阳性结果；待检样品dna的扩增曲线ct值等于45(或显示为undet)或无典型s型扩增曲线，为阴性结果；待检dna样品的扩增曲线38≤ct值<45，为灰色区域，如重测结果仍为ct值<45，且有典型s型扩增曲线，则判定为阳性结果；如ct值仍不显示或无典型s型扩增曲线，则判定为阴性结果。待检样品ct、ng、uu均为阴性的情况下，考察hbb扩增情况，或hbb没有s型扩增曲线，或者ct值大于35，表明取样失败、提取失败或加样错误，需重新试验。对于设置阳性对照的实验，还应满足：阳性对照，fam通道、rox通道均有明显的扩增，具有典型s型扩增曲线，且ct值小于30；对于设置阴性对照的实验，还应满足：阴性对照，fam通道、rox通道ct值＝45(或显示为undet)或无典型s型扩增曲线，进行后续判断，否则应进行问题查找。本发明所述的引物和探针可用于多种来源样品的检测。对生物样品的检测可以判断该样品是否被ct、ng或uu感染，而对非生物样品的检测可以判断该样品是否被ct、ng或uu污染。因此，本发明所述的试剂盒可用于样品的非诊断目的的检测。本发明中，所述检测的样品来自阴道、泌尿道、医疗器械、药品、食品或化妆品。一些具体实施例中，所述的待测样品阴道分泌物或泌尿道分泌物。本发明的有益效果至少包括：(1)发明针对ct/ng/uu/hbb的保守区域，共特异性设计了8条引物和4条taqman探针，与目的基因的保守区域结合，具有很高的特异性，与铜绿假单胞菌菌株cmcc10104、金黄色葡萄球菌菌株cmcc26001、脑膜炎奈瑟菌株cmcc29108、脑膜炎奈瑟菌株cmcc29204、干酪乳杆菌株cmcc34103、大肠埃希氏菌株cmcc44103、变形杆菌株cmcc49102、伤寒沙门氏菌株cmcc50096、福氏志贺氏菌株cmcc51573、白色念珠菌株cmcc98001、人型支原体(mh)、单纯疱疹病毒(hsv)、人乳头瘤病毒(hpv)、人巨细胞病毒(hcmv)、肺炎支原体(mp)、生殖支原体(mg)、加德纳杆菌(gv)、白色念珠菌(cc)、阴道毛滴虫(tv)、人类基因组均没有交叉反应；(2)ct/ng/uu3种病原物的检测在同一管内完成，并通过不同荧光标记探针加以区分，临床上可通过一次样本核酸提取、一次核酸加样，完成3种病原物的同步检测，有效降低以往单管检测带来的检测成本过高问题，并有效改善单管检测的操作繁琐情况；(3)靶标基因片段较短，均在100～150bp之间，若过短会影响ung酶的去污染效果，若过长会造成反应效率下降，因此本发明既能有效避免污染，又能保证反应的高效性和灵敏度，均能检测到低至5个拷贝的ct/ng/uudna；(4)在反应管内加入人类β-珠蛋白基因特异性引物探针，可有效监控样本采样、样本提取、pcr检测全过程，克服提取过程中加入外标，不能有效监控样本采样成功与否的弊端。本发明的试剂盒非常适合临床使用和推广，对我国的性传播疾病中ct/ng/uu的防控工作具有重要的意义。附图说明图1为实施例4特异性实验的荧光检测结果，各检测曲线对应的模板是1：铜绿假单胞菌菌株cmcc10104、2：金黄色葡萄球菌菌株cmcc26001、3：脑膜炎奈瑟菌株cmcc29108、4：干酪乳杆菌株cmcc34103、5：大肠埃希氏菌株cmcc44103、6：变形杆菌株cmcc49102、7：伤寒沙门氏菌株cmcc50096、8：福氏志贺氏菌株cmcc51573、9：白色念珠菌株cmcc98001、10：人型支原体(mh)、11：单纯疱疹病毒(hsv)、12：人乳头瘤病毒(hpv)、13：人巨细胞病毒(hcmv)、14：肺炎支原体(mp)、15：生殖支原体(mg)、16：加德纳杆菌(gv)、17：白色念珠菌(cc)、18：阴道毛滴虫(tv)及19：人正常基因组、20：阳性对照品；图2为实施例5灵敏度实验的ct(cy5通道)荧光检测结果，各检测曲线对应的模板是1～7为含有ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液，浓度依次为1.0×106、1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102、1.0×101、1.0×100拷贝/μl；图3为实施例5灵敏度实验的ng(fam通道)荧光检测结果，各检测曲线对应的模板是1～7为含有ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液，浓度依次为1.0×106、1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102、1.0×101、1.0×100拷贝/μl；图4为实施例5灵敏度实验的uu(rox通道)荧光检测结果，各检测曲线对应的模板是1～7为含有ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液，浓度依次为1.0×106、1.0×105、1.0×104、1.0×103、1.0×102、1.0×101、1.0×100拷贝/μl；图5为实施例6重复性试验的阳性对照100倍稀释品(r1)的荧光检测结果。具体实施方式本发明提供了沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1：用于快速检测ct/ng/uu的引物探针对的设计下载ncbi中沙眼衣原体crypticplasmid序列、淋球菌plasmid序列、脲原体16srrna、hbb基因序列，设计引物对和探针，序列如下：表1引物和探针序列实施例2：用于快速检测ct/ng/uu的实时荧光定量pcr试剂盒的建立用于快速检测人ct/ng/uu的实时荧光定量pcr试剂盒，包括反应混合液、样本提取液、阳性对照品、阴性对照品、说明书和盒体。其中反应混合液，含有上下游引物和探针(seqidno：1～12)、anstartqpcrmastermix酶混合液、anstartqpcrmastermix5×反应缓冲液。其中anstartqpcrmastermix酶混合液、anstartqpcrmastermix5×反应缓冲液由菲鹏生物股份有限公司提供，anstartqpcrmastermix酶混合液稀释25倍使用，anstartqpcrmastermix5×反应缓冲液稀释5倍使用。其中引物ct-f、ct-r、ng-f、ng-r、uu-f、uu-r、hbb-f、hbb-r终浓度500nm。其中探针ct-p、ng-p、uu-p、hbb-r浓度为200nm。其中ct-p探针荧光基团为cy5，猝灭基团为bhq3，ng-p探针荧光基团为fam，猝灭基团为bhq1，uu-p探针荧光基团为rox，猝灭基团为mgb，hbb-p探针荧光基团为joe，猝灭基团为bhq2。其中样本提取液为含0.1％naoh、0.1％tritonx-100的te缓冲液。其中阳性对照品，为含有ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液，浓度为10000拷贝/μl，对应的ct值均在在23左右。其中ct特异性靶基因片段序列为：ggttatcttaaaagggattgcagcttgtagtcctgcttgagagaacgtgcgggcgatttgccttaaccccaccatttttccggagcgagttacgaagacaaaac(seqidno.13)。其中ng特异性靶基因片段序列为：tttgctgttctcgactgggcaattttccagtgtcaaacctttggtcttggtttccaacaggtctagggtgcgctctgcttcggctctctgctgtttcaagtcgtccagctcgttcttgacg(seqidno.14)。其中uu特异性靶基因片段序列为：gcaggcgggtttgtaagtttggtattaaatctagatgcttaacgtctagctgtatcaaaaactgtaaacctagagtgtagtagggagttggggaactccatgtggagcggtaaaatgcgtag(seqidno.15)。其中hbb特异性靶基因片段序列为：tctgactcctgaggagaagtctgccgttactgccctgtggggcaaggtgaacgtggatgaagttggtggtgaggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagaccaatagaaactgggcatg(seqidno.16)。其中阴性对照品为depc水。实施例3：ct/ng/uu核酸检测试剂盒的快速检测方法利用实施例2的试剂盒快速检测人阴道分泌物、泌尿道分泌物中的ct/ng/uu，具体步骤如下：(1)核酸提取：向阴道分泌物(5份，编号1-5)、泌尿道分泌物样本(编号6-10)(采用培养法测定是否被ct、ng或uu感染，该方法为目前行业金标准)收集管中加入1ml生理盐水，充分振荡洗涤棉拭子，然后将棉拭子靠壁挤干丢弃，取500μl液体转移至1.5ml的离心管中，13000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀中加入1ml生理盐水，打散沉淀，13000rpm离心5分钟，弃上清，沉淀中加入已振荡混匀的样本提取液50μl，漩涡振荡器上振荡打散沉淀(必要时用枪头轻轻打散沉淀)，100℃干浴或者水浴10分钟，13000rpm离心5分钟，上清液用于pcr反应(吸取时不用触动管子底部的沉淀物)。(2)实时定量荧光pcr：利用上述ct/ng/uu实时荧光定量pcr检测试剂盒进行pcr扩增反应，分别以提取的待检样品dna、阳性对照和阴性对照各5μl为模板，与试剂盒的反应混合液20μl混合，进行实时荧光定量pcr反应，pcr反应条件设置为：50℃2分钟ung酶去污染，95℃5分钟预变性，95℃15秒→60℃35秒，cy5、fam、rox、joe通道用于收集检测荧光信号，共45个循环。(3)结果判断：①应满足：阳性对照，fam通道、cy5通道、rox通道均有明显的扩增，具有典型s型扩增曲线，且ct值小于30；阴性对照，fam通道、cy5通道、rox通道ct值＝45(或显示为undet)或无典型s型扩增曲线，进行后续判断，否则应进行问题查找；②待检样品dna的扩增曲线ct值<38且有典型s型扩增曲线，为阳性结果；③待检样品dna的扩增曲线ct值等于45(或显示为undet)或无典型s型扩增曲线，为阴性结果；④待检dna样品的扩增曲线38≤ct值<45，为灰色区域，如重测结果仍为ct值<45，且有典型s型扩增曲线，则判定为阳性结果；如ct值仍不显示或无典型s型扩增曲线，则判定为阴性结果；⑤待检样品ct、ng、uu均为阴性的情况下，考察hbb扩增情况，或hbb没有s型扩增曲线，或者ct值大于35，表明取样失败、提取失败或加样错误，需重新试验。判定结果如表2：表2样品检测结果结果显示，ct阳性样品4份，ng阳性样品4份，uu阳性样品5份，双阳样品3份，全阳性样品1份，阴性样品2份。结果与现有技术鉴定一致，准确率可达100％。实施例4：特异性实验利用实施例2中的试剂盒、实施例3的方法分别对铜绿假单胞菌菌株cmcc10104、金黄色葡萄球菌菌株cmcc26001、脑膜炎奈瑟菌株cmcc29108、脑膜炎奈瑟菌株cmcc29204、干酪乳杆菌株cmcc34103、大肠埃希氏菌株cmcc44103、变形杆菌株cmcc49102、伤寒沙门氏菌株cmcc50096、福氏志贺氏菌株cmcc51573、白色念珠菌株cmcc98001、人型支原体(mh)、单纯疱疹病毒(hsv)、人乳头瘤病毒(hpv)、人巨细胞病毒(hcmv)、肺炎支原体(mp)、生殖支原体(mg)、加德纳杆菌(gv)、白色念珠菌(cc)、阴道毛滴虫(tv)及人正常基因组、阳性对照品进行pcr检测，结果见图1，结果表明，仅含ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液，即阳性对照品为阳性，其余管均为阴性。结果表明，本发明的检测试剂盒特异性高，能准确地、特异地将ct/ng/uu检测出来。实施例5：灵敏度实验取阳性对照品(即含ct/ng/uu/hbb靶基因片段的质粒溶液)，测定其浓度并计算拷贝数，按照10倍的浓度梯度稀释，选取1.0×100～1.0×106拷贝/μl的浓度作为样品，用本发明的试剂盒和检测方法进行检测。检测结果如图2-图5所示，结果表明，本试剂盒对ct的最低检出限浓度为1.0×100拷贝/μl(相当于浓度100个/ml)，即最低检出限为5拷贝。对ng的最低检出限浓度为1.0×100拷贝/μl(相当于浓度100个菌/ml)，即最低检出限为5拷贝。对uu的最低检出限浓度为1.0×100拷贝/μl(相当于浓度100cfu/ml)，即最低检出限为5拷贝。实施例6：重复性试验取试剂盒中阳性对照的100倍稀释品，命名为r1，用本发明的试剂盒和检测方法，连续重复10次试验，检测结果见图5、表3所示，结果显示阳性对照的100倍稀释品ct值变异系数均小于5％。表3ct值及变异系数(cv值)。模板ct(cy5)ng(fam)uu(rox)r130.5830.9729.77r130.5631.1429.98r130.4030.9929.92r130.3131.0929.84r130.5231.2229.89r129.5730.4729.42r130.3530.8929.69r130.2830.9329.64r130.2730.8829.97r130.5231.0229.94平均值30.3430.9629.81标准差0.290.200.18cv值1.0％0.7％0.6％以上实施例表明，本发明的试剂盒具有准确性好、灵敏度高、重复性强、使用方便的特点，适合临床使用。对比例1表4引物和探针序列取阳性对照品(即含ct/ng/uu靶基因片段的质粒溶液)，测定其浓度并计算拷贝数，按照10倍的浓度梯度稀释，选取1.0×100～1.0×106拷贝/μl的浓度作为样品，用对比例1所述的引物和探针进行检测。结果表明，对比例1的引物和探针对ct的最低检出限浓度为10拷贝/μl(相当于浓度1000个/ml)，即最低检出限为50拷贝。对ng的最低检出限浓度为100拷贝/μl(相当于浓度10000个菌/ml)，即最低检出限为500拷贝。对uu的最低检出限浓度为10拷贝/μl(相当于浓度1000cfu/ml)，即最低检出限为50拷贝。结果显示，对比例1的引物和探针反应效率偏低，灵敏度不足。实施例7：妇科用药对样本检测影响选择市面上常见的妇科用药及清洁品，包括消糜栓、硝呋太尔制霉素阴道软胶囊、美妇康卡波姆凝胶、宫炎洁卡波姆凝胶、氧氟沙星凝胶、氧氟沙星凝胶、甲硝唑呋喃酮栓、洁尔阴洗液，进行试验，验证其对试剂盒检测的影响。结果表明，0.1mg/ml消糜栓、10mg/ml硝呋太尔制霉素阴道软胶囊、10mg/ml美妇康卡波姆凝胶、10mg/ml宫炎洁卡波姆凝胶、10mg/ml氧氟沙星凝胶、10mg/ml甲硝唑呋喃酮栓、0.1％洁尔阴洗液，对检测不存在干扰，且能够实现对药品中是否存在ct、ng或uu感染。以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。序列表<110>中生方政生物技术股份有限公司<120>沙眼衣原体、淋球菌和脲原体多重检测的引物、探针、试剂盒及检测方法<130>mp1829942<160>16<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1ggttatcttaaaagggattgcagc24<210>2<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>2gttttgtcttcgtaactcgctcc23<210>3<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>3cgcccgcacgttctctcaagc21<210>4<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>4tttgctgttctcgactgggcaat23<210>5<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>5cgtcaagaacgagctggacgact23<210>6<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>6cgaagcagagcgcaccctagac22<210>7<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>7gcaggcgggtttgtaagtttggta24<210>8<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>8ctacgcattttaccgctccacatg24<210>9<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>9cccaactccctactacactctagg24<210>10<211>25<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>10tctgactcctgaggagaagtctgcc25<210>11<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>11catgcccagtttctattggtctcctt26<210>12<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>12ccttgccccacagggcagtaacgg24<210>13<211>104<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>13ggttatcttaaaagggattgcagcttgtagtcctgcttgagagaacgtgcgggcgatttg60ccttaaccccaccatttttccggagcgagttacgaagacaaaac104<210>14<211>121<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>14tttgctgttctcgactgggcaattttccagtgtcaaacctttggtcttggtttccaacag60gtctagggtgcgctctgcttcggctctctgctgtttcaagtcgtccagctcgttcttgac120g121<210>15<211>122<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>15gcaggcgggtttgtaagtttggtattaaatctagatgcttaacgtctagctgtatcaaaa60actgtaaacctagagtgtagtagggagttggggaactccatgtggagcggtaaaatgcgt120ag122<210>16<211>138<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>16tctgactcctgaggagaagtctgccgttactgccctgtggggcaaggtgaacgtggatga60agttggtggtgaggccctgggcaggttggtatcaaggttacaagacaggtttaaggagac120caatagaaactgggcatg138当前第1页12