一种饮用水的微生物快速检测方法与流程

本发明涉及一种饮用水的微生物快速检测方法，属于微生物检测
技术领域：
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背景技术：
：水是人类生存与生活必不可少的可再生资源，然而自然界中的水分含有很多微生物及杂质，直接饮用可导致机体受损，引发诸多疾病，因此生活饮用水都是自然界中的水经一定处理后供应的。然而近年来随着社会经济发展导致环境污染日益严重，水污染问题逐渐引起人们的重视，若饮用水中含有的微生物数量超标，可危害居民身体健康，如可引发伤寒、痢疾、病毒性肝炎等疾病，甚至可威胁居民生命安全。现阶段微生物检测是对生活饮用水水质进行衡量的重要指标，一般而言，微生物污染是导致水质状况下降的重要原因，因此加强微生物检测是现阶段卫生检验部门十分重视的问题。目前微生物检测方法为血球计数法、染色计数法、平板菌落计数法等，这些方法存在的一些问题是操作难度较大、对实验者的操作熟练程度具有很高的要求、适合的菌类范围较小等。在饮用水微生物检验中，常用检测微生物为菌落总数、总大肠菌群及耐热大肠菌群，因此需要一种操作简单、灵敏度高的生物检测方法。技术实现要素：本发明的第一个目的是提供一种饮用水的微生物快速检测方法，所述方法是将微生物滤膜在待检测的水中放置30～40min，取出后在经紫胶染色的玉米浆液中静置30～40min，再于530～535nm下检测玉米浆液的颜色变化或吸光度变化。在本发明的一种实施方式中，所述玉米浆液是按照料液比4～7：1的比例，将玉米粒磨为玉米浆，每5～10份玉米浆加入1～3份紫胶进行染色。在本发明的一种实施方式中，所述玉米浆液中还加入过硫酸盐；所述过硫酸盐与紫胶的质量比(0.2～0.5)：1。在本发明的一种实施方式中，为了便于储存和运输，所述玉米浆液经过浓缩，所述浓缩是按照料液比(玉米粒：水)为4～7：1的比例，用磨浆机将玉米粒磨为玉米浆，将磨好的玉米浆液在40-60℃浓缩，得到浓缩量为40-50％的玉米浆浓缩物。在本发明的一种实施方式中，所述方法包括如下步骤：(1)将微生物滤膜在待测水质中放置30-40min；(2)按质量计，在反应釜中加入5～10份所述玉米浆浓缩物，30-50份水，升温至60-80℃，1000-3000rpm搅拌均匀，加入紫胶1～3份，然后缓慢滴加过硫酸盐，滴加速度1～3ml/min，使过硫酸盐：紫胶的质量比＝0.2～0.5:1，滴加完成之后，搅拌1-2h，静置、降温至常温；(3)将步骤(2)的溶液稀释0.5～1倍，向其中加入步骤(1)的微生物滤膜，静置30-40min，观察溶液的颜色变化。在本发明的一种实施方式中，所述微生物滤膜的孔径为0.025-1μm。在本发明的一种实施方式中，所述微生物滤膜为单层或多层。本发明的第二个目的是提供一种检测饮用水微生物含量的方法，所述方法包括：(1)将微生物滤膜在待检测的水中放置30～40min，取出后在经紫胶染色的玉米浆液中静置30～40min，再于530～535nm下检测玉米浆液的吸光度变化；(2)建立微生物数量与经紫胶染色的玉米浆液的吸光度变化的线性方程，计算待检测的水中微生物的数量。本发明还要求保护所述方法在食品或环境领域检测液体微生物含量中的应用。有益效果：本发明的饮用水微生物检测方法检测效果优异、准确率达到90％以上，先通过微生物滤膜将微生物进行过滤，遗留在滤膜上面，在染色玉米浆稀释液中，微生物会吞噬玉米浆，导致颜色淡化，可以根据颜色变化的多少来判断微生物的数量。(1)本发明的饮用水微生物检测方法的原料为玉米、紫胶等天然物质，生态环保不会污染饮用水。(2)本发明的饮用水微生物检测方法使用方便，效率高，完成整个测定过程仅需要2～4h，相比于传统的微生物培养的方式，可以节约培养基培养的时间，在很短的时间内得出结论。(3)本发明的饮用水微生物检测方法采用新鲜的玉米浆，香味浓郁、对微生物的诱惑力更大，效果更为准确明显。(4)本发明的饮用水微生物检测方法中采用紫胶进行染色，由于紫胶含有-oh，与玉米浆的醇羟基发生反应，染色效果好，不易掉色，不会对检测有影响。附图说明图1为菌落浓度与吸光度的关系曲线；其中，自上向下分别对应紫胶份数为1份、2份、3份的吸光度与菌浓的线性关系。具体实施方式实施例1：(1)将待测水样(100ml)进行灭菌处理，然后加入大肠杆菌活细胞，使得菌落浓度为100～200cfu/ml，将微生物滤膜(孔径为0.025-1μm)在待测水质中放置30min。(2)玉米浆浓缩物的制备：用磨浆机将玉米粒磨为玉米浆，磨浆过程中玉米粒与水的质量比为4:1，将磨好的玉米浆液在60℃进行浓缩，得到浓缩量为50％的玉米浆料。(3)玉米浆浓缩物染色：在反应釜中加入5份步骤(2)的玉米浆浓缩物，30份水，升温60℃，1000rpm，搅拌均匀，然后缓慢滴加过硫酸盐，滴加速度1ml/min，加入紫胶1份，滴加完成之后，搅拌1h，静置、降温至常温。(4)将步骤(1)的微生物滤膜加入至步骤(3)的稀释液中，所述稀释将步骤(3)的溶液稀释一倍，使溶液体积为100ml，在吸光度535nm下检测溶液的颜色变化。实施例2具体实施方式同实施例1，区别在于，调整紫胶份数。如表1所示。理论吸光度为：在30min的时间里面，根据菌体浓度对应菌体可能吞噬的玉米浆的量，计算获得对应的吸光度值。按照实施例1的方法，分别制备不同浓度的玉米浆液，测定在535nm下的吸光度值，建立标准曲线(如图1所示)。表1不同紫胶用量下的溶液颜色变化实施例3具体实施方式同实施例1，区别在于，将紫胶替换为考马斯亮蓝。如表2所示。紫胶比现有的蛋白质类染色剂灵敏度高，检测结果更接近理论值。表2考马斯亮蓝为染色剂对应的检测效果染料吸光度菌浓度理论吸光度理论菌浓紫胶1.2596.11.3100考马斯蓝171.41.4100实施例4应用实施例1的方法对浓度分别为60、80、100cfu/ml的水样的微生物含量进行测定，结果如表3所示，当菌体浓度低于60cfu/ml时，准确度不低于85％；菌体浓度在80cfu/ml以上时，本发明的检测方法准确度不低于90％。(准确度＝实际检测的菌体浓度÷理论菌浓×100％)。表3不同菌浓的饮用水的检测效果菌体浓度吸光度菌浓度理论吸光度理论菌浓600.853.30.960801.0274.21.1801001.2596.11.3100实施例5具体实施方式同实施例1，区别在于，将玉米浆替换为同浓度的淀粉。结果如表4所示。微生物对淀粉的利用能力不及玉米浆，无法达到理想的检测效果。表4以淀粉代替玉米的检测效果基材吸光度菌浓度理论吸光度理论菌浓玉米浆1.2596.11.3100淀粉176.91.3100实施例6具体实施方式同实施例1，区别在于，将大肠杆菌替换为不同的微生物(如表5所示)。结果显示，本发明的检测方法适用于gb19298-2014中要求检测的微生物种类，并具有较为准确的检测结果。单一微生物和混合微生物的检测准确率均达到90％以上。表5不同微生物的检测效果微生物种类吸光度菌浓度理论吸光度理论菌浓大肠杆菌1.2596.11.3100铜绿假单胞菌1.292.31.3100沙门氏菌1.1890.71.3100混合微生物1.2596.11.3100注：混合微生物为大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌按照数量为1:1:1混合。实施例7应用实施例1的方法分别对城市某地区饮用水、农村生活饮用水、桶装水的微生物含量进行检测。结果显示(表6)，本发明的检测方法与传统的微生物培养及菌落计数的方法相比，结果相近，但所需时间控制在2～4h内，极大节省了人力成本和时间成本。表6应用本发明的方法对不同水体进行检测待测水质吸光度菌浓度常规检测菌浓城市某地区饮用水0.861.562.1农村生活饮用水176.977.3桶装水0.393030.1注：常规检测是采用水体采样，在培养基上进行微生物培养，并对培养后的菌落进行计数的方式进行。虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。当前第1页12