微生物抗药性的质谱快速检测的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于测定微生物对抗生素的抗药性的方法和仪器，所述微生物特别是产生β?内酰胺酶的微生物。通过在质谱样品载板上培养与一定剂量的合适的抗生素(例如β?内酰胺抗生素亚胺培南)混合的少量微生物，然后以质谱法直接测量微生物酶对抗生素的分解，所述方法在一个小时内即可测定微生物的抗药性。
【专利说明】
微生物抗药性的质谱快速检测
技术领域
[0001] 本发明涉及微生物对抗生素的抗药性的测定，所述微生物特别是产生内酰胺酶 的那些微生物。
【背景技术】
[0002] 出版物冊 2011154517厶1(]\1.1(〇81^26￥&、1(.]\1;[(311611]1&1111和1(.3卩&1'13161')及同族出版 物DE 102010023452B4和US 20130095511A1介绍了一种微生物内酰胺酶抗药性测定方 法，其基于质谱测量微生物内酰胺酶对内酰胺抗生素(或具有相似结构的底物)的酶催 化改变。为此，向含有内酰胺抗生素(或具有相似结构的底物)的溶液中引入细菌，并进行 培养例如大约三小时。然后优选通过离心或过滤分离细菌。之后将一至两微升不含细菌的 溶液施加至质谱样品载板上，干燥并包被基质溶液以进行基质辅助激光解吸电离(MALDI)。 在具有MALDI离子源的飞行时间质谱仪中测量生成质谱，可通过它来确定是否存在经酶催 化改变的抗生素或底物，特别是内酰胺环的水解分裂，这表示微生物具有抗药性。
[0003] 在出版物WO 2012/023845Al(Luider等人）中介绍了一种类似方法，其大体上通过 质谱测定微生物酶导致的抗生素的改变。
[0004] 这些文件所述的方法都有较多的单独步骤，特别是离心或过滤，这既需要很长时 间，通常又涉及人工操作过程。已知方法通常需要三个小时左右。对于工作量更小、更易于 自动化且速度更快、能够以较少样品数量产生高样品通量的微生物抗药性测定方法，始终 存在需求。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的
[0006] 本发明目的是提供这样的方法和仪器，通过该方法和仪器，可以通过质谱，只使用 很少的单独步骤，优选在一个小时内，测定基于抗生素的酶催化改变的微生物抗药性。
[0007] 发明简述
[0008] 本发明提供一种用于测定微生物样品对抗生素的抗药性方法，其中在样品载板的 测试点上在一定体积的液体中将所述微生物样品和所述抗生素混合，并且在所述测试点上 通过质谱测量分析所述抗生素是否经酶催化改变。质谱测量的质量范围优选小于1000道尔 顿，特别是介于250至750道尔顿。
[0009] 抗生素可以是选自青霉素类(苄青霉素、口服青霉素(oral penicillins)、氨基青 霉素、异恶酰基青霉素（18〇13〇丫1?611；[0；[11；[118)、酰氨基青霉素）、头孢菌素类、单环0-内酰 胺类或碳青霉烯类的组中的内酰胺抗生素。微生物样品还可以与包含内酰胺抗生素和 内酰胺酶抑制剂的复方药品混合，所述复方药品例如克拉维酸与阿莫西林的组合、他佐 巴坦与哌拉西林的组合、或舒巴坦与内酰胺抗生素的组合。微生物样品还可以在测试点 上与多于一种抗生素混合。
[0010] 例如可通过由相应的质量信号所显示出的抗生素减少或一种或多种分解产物的 增多，或二者，来测定抗生素的酶催化改变。特别地，可通过与参考物质的质量信号进行比 较来确定抗生素的减少。在这种情况中，在微生物样品与抗生素混合之前，测试点可以已经 包被有参考物质。还可以在它们混合之后或在制备适合质谱测量的样品（例如MALDI样品） 期间添加参考物质。
[0011] 在优选实施方案中，在具有MALDI离子源的质谱仪(特别是飞行时间质谱仪）中进 行质谱测量，其中质谱样品载板是平的并具有多个测试点。
[0012] 在另一实施方案中，微生物样品优选具有完整的微生物细胞。在根据本发明的方 法中，微生物细胞在一定体积的液体中的培养期小于一小时，例如优选仅约半小时。在一定 体积的液体中的培养优选在室温下进行。施加至测试点上的微生物细胞的数目优选介于 10 3至107。当使用完整的微生物细胞时，在制备用于质谱测量的样品期间，特别是制备MALDI 样品期间，微生物细胞仍保持完整(即未被消化)是有利的。
[0013] 微生物样品可包括取自平板培养基(例如琼脂平板)的菌落的完整微生物细胞，或 通过离心或过滤从液体培养基分离出的完整微生物细胞。特别地，液体营养基可以是阳性 血液营养基，其中血细胞优选在离心或过滤前被破坏。微生物样品还可以是未经培养的体 液样品，例如血液样品、尿液样品、或脊髓液样品或涂片样品。涂片样品是取自伤口或粘膜 (口、鼻、尿道、阴道、肛门）表面的用于分析的内源物质。
[0014] 在另一实施方案中，微生物样品包括被消化的微生物细胞(细胞裂解产物），在这 种情况中，也可在测试点进行微生物消化。如果通过在测试点制备MALDI样品来消化微生物 样品中的完整微生物细胞，或者如果微生物样品是细胞裂解产物，那么在质谱测量中还可 采集微生物蛋白质的质量信号。这些信号还可用于微生物分类学鉴定和/或在其抗药性方 面对其进行进一步表征。微生物样品还可通过以下方法获得，使用不含任何抗生素的液体 对平板培养基上的菌落进行微生物细胞采样，然后将样品液体(作为微生物样品）与样品载 板上的抗生素混合。
[0015] 在另一实施方案中，测试点上的所述一定体积的液体小于10微升，优选小于5微 升，特别是介于1至3微升。在样品载板的测试点上混合微生物样品和抗生素之后，样品载板 优选保持在潮湿环境中，或向测试点添加额外的液体，以防止所述一定体积的液体在指定 培养期或反应时间内干燥殆尽。
[0016] 此外，本发明还提供了用于微生物样品的抗药性质谱测定的样品载板，其中所述 样品载板具有多个测试点，并且至少一个测试点包被有一定剂量的一种或多种抗生素。不 同的测试点可以包被有不同的抗生素。此外，每个测试点还可包被有一种或多种参考物质。
[0017] 原则上，可以使用任何质谱仪进行质谱测量，例如四极过滤器(特别是三重四极质 谱仪）、正交离子注入飞行时间质谱仪(0T0F)、离子回旋共振质谱仪（ICR-MS)、静电Kingdon 质谱仪或离子阱质谱仪。特别有利的是，使用目前常用于鉴定微生物(特别是细菌）、并且通 常在线性模式下运行且无反射器的相同MALDI飞行时间质谱仪。
[0018] 本发明优点在于，仅使用少量微生物和少量体积的液体，只需要很少的简单的单 独步骤，特别是非常快速。特别地，根据本发明的方法使得不需要通过离心或过滤从一定体 积的液体中分离出微生物细胞，即可实现抗药性质谱测定。
【附图说明】
[0019]图1上方的MALDI质谱显示亚胺培南的质量信号，其在与e-内酰胺酶阴性株系孵育 后尚未分解（由箭头标出）。下方的MALDI质谱示出在样品载板上与内酰胺酶阳性株系孵 育半小时后，亚胺培南的质量信号消失。竖线示出参考物质的位置。
[0020]图2为示出六个e-内酰胺酶阳性株系和两个e-内酰胺酶阴性株系的商logRQ的箱 线图，各阳性株系的l〇gRQ>0.4，各阴性株系的logRQ〈0.2。示出了多次测量的中位数和跨度 (spread)〇
[0021 ]图3示例性示出了微量滴定板大小的具有96个测试点（10)的样品载板，其包被有 一定剂量的抗生素。对于其他类型的质谱仪，也有不同的样品载板(通常更小）。特别有利的 是其测试点（10)具有嵌入疏水环境中的亲水表面的样品载板。所加入的任何液体即会自动 流到测试点边缘。
【具体实施方式】
[0022] 通过以下方法可以快速容易地对许多微生物种类，特别是细菌、古生菌和单细胞 真菌，进行质谱鉴定，所述方法为从以普通方法培养的菌落或营养培养基中的菌落取少量 微生物，将其转移到质谱样品载板上，在其上用基质溶液消化，干燥，通过基质辅助激光解 吸电离进行质谱测量。使用在各情况中包含大约40至80种蛋白质（质量范围通常介于3000 至20000道尔顿)的谱图，通过与数千个参考谱进行近似度分析，来确定微生物种类。这里所 用术语"鉴定"视为表示系统分类，即确定其科、属和种，可能还有亚种。同时还有在医学和 法律上得到许的包含数千种微生物物种的参考谱库，其包括几乎所有的临床相关物种。
[0023] 然而，在医学领域不仅存在快速鉴定的问题，而且还存在检测出对常用抗生素的 抗药的问题。如不了解抗药性，通常无法对感染进行快速防控。因此，不仅需要快速鉴定微 生物的方法，还需要快速确定并表征其抗药性的方法。
[0024]自从首次使用青霉素(0-内酰胺抗生素）后，细菌已逐渐发展出不同类型的抗药 性。细菌抵抗内酰胺的一种方式是形成酶(0-内酰胺酶），这种酶通过水解作用催化破坏 打开内酰胺环，并因此致使内酰胺失效。这些酶的催化作用意味着少量的内酰胺酶 就足够破坏大量的内酰胺抗生素。目前已知数百种由不同种类的细菌形成的内酰胺酶 变体。最初通过突变而产生的酶合成遗传信息通过染色体或质粒遗传。质粒信息通过不同 的机制也可在细菌之间传递，甚至可在不同种类的细菌之间传递（"水平传递"），因此可以 使抗药性细菌快速蔓延。
[0025]目前有大量内酰胺抗生素的衍生物，其中包括若干种青霉素(节青霉素、口服青 霉素、氨基青霉素、异恶酰基青霉素、酰氨基青霉素）、以及头孢菌素、单环内酰胺类和碳 青霉烯类，在此按照功效范围以升序列出。最有效的内酰胺抗生素通常以具有较大的化 学基团作为衍生物，以便对内酰胺酶产生空间位阻作用。另一方面，新的更有效的内酰 胺酶则通过细菌突变而不断形成。令人生畏的"超广谱内酰胺酶(ESBL)"和"碳青霉烯酶" 可以分解大范围的内酰胺抗生素。ESBL最初由内酰胺酶上的点突变形成。ESBL和碳青 霉烯酶的基因见于可从细菌到细菌水平传递的质粒。
[0026]携带ESBL的细菌对青霉素、头孢菌素（1-4代)及单环内酰胺类有抗药性。主要是 携带ESBL基因的大肠杆菌(E.coli)和克雷伯杆菌属(Klebsiella)(革兰氏阴性菌）。微生物 学家们忧心忡忡，因为这些ESBL抗药性和碳青霉烯抗药性快速蔓延。除了甲氧西林抗药性 金黄色葡萄球菌(MRSA)外，这是感染研究中最令人担心的问题之一，例如可以参见""Rapid Spread of Carbapenem-Re sis tant Klebsiella pneumoniae in New York City，a New Threat to Our Antibiotic Armamentarium"，S.Bratu et al，Arch Intern Med 2005， 165(12)，1430-1435"。
[0027] 内酰胺酶抑制剂是对抗内酰胺酶的一种手段。它们与内酰胺类一起施用， 以减弱存在于细菌中的内酰胺酶的作用。已确立的组合用药为例如克拉维酸+阿莫西林、 舒巴坦+氨苄青霉素、他佐巴坦+哌拉西林。不是所有的组合都有最佳的效果。然而，这些治 疗仅可在仔细鉴定细菌并谨慎确定其抗药性后使用，因为可以预见这种手段也会非常快速 地失效。
[0028] 本发明提供一种方法，其只需少量细菌，并且根据微生物酶对抗生素的催化效果， 可以特别简单快速地测量微生物抗药性。例如，微生物内酰胺酶导致相应抗生素的内 酰胺环水解分裂。本方法在一小时内便可测定微生物抗药性。优选在质谱样品载板上使少 量完整微生物细胞与一定剂量的抗生素混合，并在其上进行培养。借助质谱测量微生物酶 的催化作用所致的抗生素分解。出人意料的是，培育期可以短于一小时，通常半小时左右即 可。出人意料的是，优选只在室温和潮湿环境下进行培养即可，以防样品干燥殆尽。
[0029] 此外，本发明还包括质谱样品支持物(样品载板)及其制造方法。根据本发明的样 品载板如图3所示;其优选是平的并有多个测试点（10)，每个测试点均制备有至少一层按计 量添加的抗生素。样品载板可以包括具有不同抗生素的层的测试点，可用于同时测试微生 物样品的不同抗药性。还可包括具有多层抗生素和抑制剂的测试点，以用于微生物酶反应。 各层还可包含一定剂量的参考物质，其既可用于重新校正质量标度，又可用于测定抗生素 (包括其分解产物)质量信号的量变。
[0030] 在根据本发明的方法中，优选直接在质谱样品载板上混合少量微生物和定量的合 适的抗生素并在短时间内进行培养，以此方式测定微生物抗药性。在此方面出人意料的是， 在室温下只经过半小时的培养期，然后干燥并制备MALDI样品后，即可检测微生物酶对抗生 素的分解，如果在具有MALDI离子源的质谱仪中直接检测MALDI样品，则不需要从样品载板 移除微生物。
[0031]最优选的方法如下所述(详细地分解成单独的方法步骤）：
[0032] (a)提供样品载板，所述样品载板至少在一个测试点上具有包含一定剂量的抗生 素的层；
[0033] (b)将微生物施加至所述抗生素的层上，然后将液体施加在此测试点上；
[0034] (c)在测试点上进行培养，特别是在潮湿环境及室温条件下；
[0035] (d)干燥；
[0036] (e)制备用于基质辅助激光解吸电离(MALDI)的样品；
[0037] (f)在具有MALDI离子源的质谱仪(特别是飞行时间质谱仪)中进行质谱的测量;和
[0038] (g)评估质谱以鉴定抗药性。
[0039] 测试点上的层包含例如大约0.1至2微克（优选0.5微克）的抗生素。还可包含已知 量的参考物质。与分类学鉴定类似，只将大约1〇3至1〇7个微生物涂到各测试点上。将一至三 微升(优选约两微升)液体施加到各测试点上以进行培养。同一样品载板的不同测试点可以 包含具有不同抗生素的层。各层不仅可含抗生素，还可含其他抑制剂以降低微生物酶的效 力。
[0040] 微生物细胞既可人工涂抹，也可自动化施加（例如通过接种系统）。对营养培养基 表面上的微生物进行质谱分析的方法已在文件DE 102012011647A1中披露，其中通过直接 接触将微生物细胞从平板营养培养基的表面转移到样品载板的接触表面上。本文所述样品 载板既可以是表面积大的平板，也可以是端面与菌落的微生物细胞接触的针状样品载板。 针状样品载板的接触表面很小，只有单个菌落的微生物才能转移到针状样品载板上。微生 物细胞转移后，使针状样品载板的端面基本与转接板的表面平齐，从而可将针状样品载板 插入转接板。在本发明中，针状样品载板的末端可以包被一种或多种抗生素。
[0041] 下文以广谱亚胺培南的一个例子(碳青霉烯），介绍根据本发明的方法：
[0042]质谱MALDI样品载板通常有很多（48-386)明确标记的测试点（直径两至四毫米）。 疏水环境下的亲水测试点是特别有利的。图3举例说明有96个测试点（10)的此类样品载板； 它为微量滴定板的大小，但更小型号的样品载板也是市售可得的。为了制备根据本发明的 样品载板，样本载板的至少一些测试点可各自包被有两微升的亚胺培南溶液(或相当的抗 生素)并干燥，以使样本载板在各情况中每个测试点含有〇. 5微克的亚胺培南。干燥后，采取 防潮措施存放样本载板，例如使用收缩包装或提供干燥剂。以此方式制备的样品载板市售 可得，所以不需要在实验室完成这一制备步骤。
[0043]使用适当的工具（例如卫生清洁牙签），以与微生物鉴定涂片制备相同的方式，将 在琼脂板上以菌落方式生长的细菌人工涂到干亚胺培南层上。这可在同一步骤中完成，并 且可以使用用于制备微生物鉴定样品的相同牙签。用于鉴定测的试点没有抗生素。当所研 究的所有细菌都施加到样品载板的测试点后，将2微升10毫摩尔的碳酸氢铵缓冲液(pH 8) 移液到各测试点，由此亚胺培南与细菌彼此混合，并且细菌细胞大多未被消化。随后在保持 潮湿的箱中在室温下培养样品载板30分钟，以防测试点上的样品过早干燥殆尽。培养期过 后，在样品载板上干燥样品，然后包被只含极少量三氟乙酸的基质溶液，以使细菌细胞不被 消化。使用的基质是在水的混合物中浓度为10毫克/毫升的氰基-4-羟基肉桂酸(HCCA)、 50%乙腈和0.2%三氟乙酸。再次干燥后，以普通的方法使用MALDI飞行时间质谱仪获得该 制备样品的质谱。
[0044]通常求出差异值LogRQn以评估质谱：
[0045]
对于内酰胺酶阳性微生物，结果通常为大 于零的值，对于内酰胺酶阴性微生物，则为小于零的值。
[0046] 图1上方示出使用根据本发明的方法和样品载板，由对亚胺培南易感的微生物测 得的MALDI质谱。图中箭头示出尚未分解的亚胺培南的质量信号。图1下方示出测得的抗药 性微生物的MALDI质谱，其酶在半小时内便将亚胺培南定量水解，所以箭头所示的亚胺培南 质量信号已消失。酶的分解反应非常迅速，提是其未受到底物逐渐减少的影响，每个分子反 应的时间大约是1到100毫秒，不同e-内酰胺酶的特征差异也有所不同。
[0047]所示出的亚胺培南的例子的不同寻常之处在于，酶水解的亚胺培南在MALDI质谱 中没有质量信号，这使得在这种情况中需要检测亚胺培南分子的分解。这需要内部参考物 质，其最好已被添加到样品载板上的亚胺培南制备物中。例如，硫胺可用作内部参考物质。 图1所示两个质谱中的竖线示出参考物质的位置。在此应该注意，也可随后将参考物质添加 到例如基质溶液中。
[0048] 在评估质谱时，内部参考物质的质量信号一方面可用于重新校准质谱的质量轴； 另一方面(特别是对亚胺培南来说），还可用于计算分解率(水解率）。如上所述，亚胺培南是 一种特殊情况，因为即使它们存在，在MALDI质谱中也检测不到水解产物(对于例如电喷雾 电离(ESI)等其他类型的电离，可以检测到水解产物）。为了至少检测到非水解的亚胺培南
峰的降低，使用内部参考物质计算水解率： 在将水解率归 〇 一化至合适的负控和正控后，归一化的水解率norm. logRQ>0.4表示抗药性微生物，而对易 感微生物测得norm. logRQ的值〈0.2。图2显示两种易感和六种抗药性微生物的结果，其使用 包被在根据上述制备方法的样品载板上的亚胺培南测得。
[0049] 原则上，在根据本发明的方法中，使用任何质谱仪均可进行质谱测量，但使用目前 常用于鉴定微生物(特别是细菌），并且通常在线性模式下运行的MALDI飞行时间质谱仪特 别有利。图1所示的质谱是使用MALDI飞行时间质谱仪在线性模式下获得的。
[0050]通常，先以琼脂营养培养基培养待分析的样品微生物直至其形成菌落，以便随后 使用工具将其施加到样品载板的测试点，以供鉴定和测定抗药性。对于鉴定，通常需要注 意，只对单一菌落的微生物取样。然而，对于测定抗药性，通常有利的是混合多个菌落的微 生物(至少五个左右），以便同时获得混合抗药性的有用结果。
[0051]另一种重要的培养基类型是血液培养基，其用于诊断的或疑似的脓毒血症。通常 使用非常广谱的亚胺培南立即治疗患者，因为脓毒血症极其危险，死亡率很高。培养数小时 后，血细胞通过适当方法破坏，并且脓毒血症微生物可通过小心的离心或过滤进行沉淀，以 不破坏微生物。一些微生物细胞可用于分类学鉴定，另一些可根据本发明检测对亚胺培南 的抗药性。如果存在对亚胺培南的抗药性，则可通过组合用药继续治疗，药物选择可以更加 明确，因为通过同时进行的鉴定已经知道微生物种类。
[0052] 一般来说，不只关注对单一抗生素的抗药性。通过引入多种不同类型的抗生素(其 可沉积到同一样品载板的不同测试点上，也可沉积到一个单一的测试点上），根据本发明的 方法还可开发出多重抗药性测试。可制备含一系列不同抗生素的样品载板，如果需要则使 用参考物质。还可在其他测试点与抑制剂一起施加抗生素(组合用药）。在在不同测试点采 用不同抗生素的抗药性测试中，可使用相同的工具将待测微生物分布到各个测试点上。缓 冲液的移液操作、培养、制备和质谱测量如在上例中说明的那样进行。可使用这样的程序完 成评估，该程序还控制质谱仪的测量，并了解对于不同测试点的质谱评估的略微不同的参 数。由此一次性测得对不同抗生素的抗药性，所需时间只比测定对一种抗生素的抗药性略 长。
[0053]还存在混合样品的情况，其中关注点较少专注于鉴定，而是更多地专注于立即测 定抗药性。例如，了解鼻粘膜拭子或鼻分泌物中是否存在抗药性细菌是至关重要的。通常的 程序是，使用鼻或口腔黏膜拭子研究住院患者或医院员工是否为微生物抗药性的载体。此 类拭子或鼻分泌物可以作为微生物样品直接施加在样品载板的经适当预制的测试点上，对 于此目的，鉴于医院中此类抗药性测定的数量大，测试点优选有多于一种抗生素。对于其他 类型的感染(例如伤口化脓），情况与此类似。
[0054]本发明不限于此处所述实施方案或例子。例如，可由平的样品载板借助DESI(解吸 电喷雾电离)进行电离，或者还可从平板培养基的表面（用作样品载板，并且其上施加有含 有抗生素的液体)直接进行。除MALDI电离外，例如，还可由平的样品载板进行激光解吸，然 后进行化学电离。
【主权项】
1. 一种用于测定微生物样品对抗生素的抗药性的方法，其中在样品载板的测试点上在 一定体积的液体中将所述微生物样品和所述抗生素混合，并且在所述测试点上通过质谱测 量进行分析，从而确定所述抗生素是否经酶催化改变。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述微生物样品含有完整的微生物细胞。3. 根据权利要求2所述的方法，其中在所述一定体积的液体中的培养期小于一个小时。4. 根据权利要求2或3所述的方法，其中在室温下进行在所述一定体积的液体中的培 养。5. 根据权利要求2至4所述的方法，其中对每个测试点施加103个至107个微生物细胞。6. 根据权利要求2至5所述的方法，其中在所述微生物不被消化的条件下，在所述测试 点上制备用于基质辅助激光解吸电离的测量样品。7. 根据权利要求2至6之一所述的方法，包括以下步骤： (a) 提供样品载板，所述样品载板至少在一个测试点上具有包含一定剂量的所述抗生 素的层； (b) 将所述完整的微生物细胞施加至所述抗生素的层上，并且施加所述液体； (c) 在所述测试点上进行培养； (d) 干燥； (e) 制备用于基质辅助激光解吸电离(MALDI)的测量样品； (f) 在具有MALDI离子源的质谱仪中进行质谱的测量;和 (g) 评估所述质谱以鉴定抗药性。8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述测试点上的所述层包含大约0.1微克至2微克 的抗生素，优选0.5微克的抗生素。9. 根据权利要求1所述的方法，其中在所述测试点上制备用于基质辅助激光解吸电离 的测量样品，其中所述微生物样品中的微生物被消化，在质谱测量中同时采集微生物蛋白 质的质量信号，所述质量信号使得可对微生物进行分类学鉴定和/或在其抗药性方面进行 进一步表征。10. 根据权利要求1所述的方法，其中所述微生物样品包含被消化的微生物。11. 根据权利要求1至10之一所述的方法，其中在所述混合之后将所述样品载板保持在 潮湿环境中，或者在所述混合之后向所述测试点上的所述一定体积的液体中添加额外的液 体，从而防止所述一定体积的液体在指定的反应时间内干燥殆尽。12. 根据权利要求1至11之一所述的方法，其中所述一定体积的液体小于10微升。13. 根据权利要求1至12之一所述的方法，其中在所述测试点上在所述一定体积的液体 中，将所述微生物样品与多于一种抗生素混合。14. 用于微生物样品的抗药性质谱测定的样品载板，其中所述样品载板具有多个测试 点，并且至少一个测试点包被有一定剂量的一种或多种抗生素。15. 根据权利要求14所述的样品载板，其中不同的测试点包被有不同的抗生素。16. 根据权利要求14或15所述的样品载板，其中所述至少一个测试点还包被有一种或 多种参考物质。
【文档编号】G01N27/62GK106053586SQ201610216917
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年4月8日 公开号201610216917.4, CN 106053586 A, CN 106053586A, CN 201610216917, CN-A-106053586, CN106053586 A, CN106053586A, CN201610216917, CN201610216917.4
【发明人】卡特里·斯帕比尔, 贝娅特丽克丝·韦格曼
【申请人】布鲁克道尔顿有限公司