一种木耳多糖的提取方法与流程

本发明涉及木耳多糖提取技术领域，尤其涉及一种木耳多糖的提取方法。

背景技术：

木耳在真菌学分类中属担子菌纲，木耳目，木耳科。色泽黑褐，质地柔软，并可防治缺铁性贫血及其他药用功效，其主要分布于黑龙江、吉林、福建、台湾、湖北、广东、广西、四川、贵州、云南等地。木耳多糖是从木耳中提取的多糖成分，具有降血脂降低胆固醇的功效。

传统木耳多糖提取采用水提法，由于木耳细胞粗大、壁厚，多糖难以从胞内扩散出来，因而利用水提法提取木耳多糖时，存在操作时间长、收率低的问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种木耳多糖的提取方法，该方法具有提取效率高，木耳多糖收率高的优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：

1)对木耳进行研磨，粉碎，得到木耳颗粒；

2)将步骤1)所述木耳颗粒浸泡于水中，调节ph为7.0～8.5，进行碱提取，得到碱提液；

3)调节步骤2)所述碱提液的ph值为4.5～5.5，进行酸提取，得到酸提液；

4)在步骤3)所述酸提液中添加纤维素酶制剂，进行酶解，得到酶解液；

5)对步骤4)所述酶解液进行超声，得到超声提取液；

6)对步骤5)所述超声提取液进行灭酶处理，离心，收集上清液，得到木耳多糖提取液。

优选的，步骤1)所述木耳的含水量为12％～20％。

优选的，步骤1)所述木耳颗粒的粒径为80～100目。

优选的，步骤2)所述浸泡的温度为70～90℃。

优选的，步骤2)所述碱提取的时间为5～10min；所述碱提取的温度为80～90℃。

优选的，步骤3)所述酸提取的温度为80～90℃；所述酸提取的次数为2～4次；每次酸提取的时间为3～5h。

优选的，步骤4)所述纤维素酶制剂与木耳的质量比为0.5～1.5:100；所述纤维素酶制剂包括外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。

优选的，步骤4)所述酶解的温度为40～80℃；所述酶解的时间为80～100min。

优选的，步骤5)所述超声的功率为450～550w；所述超声的温度为40～50℃；所述超声的时间为1～2h。

优选的，步骤6)所述灭酶的温度为85～90℃；所述灭酶的时间为1～2h。

本发明的有益效果：本发明提供了一种木耳多糖的提取方法，该方法通过对木耳进行研磨和粉碎处理，从而可得到均匀的木耳颗粒，再通过碱提取、酸提取和酶解处理，可有效的破坏木耳子实体细胞壁，并通过超声波处理，使木耳多糖更好的释放；并且通过超声处理，加速溶剂渗透和扩散速度，有效缩短木耳的多糖提取时间。经过验证，本发明与传统的热水浸提法提取木耳多糖相比，木耳多糖收率提高了12％～15％。

附图说明

图1表示本发明中木耳多糖的提取方法的流程图。

具体实施方式

本发明提供了一种木耳多糖的提取方法，包括以下步骤：

1)对木耳进行研磨，粉碎，得到木耳颗粒；

2)将步骤1)所述木耳颗粒浸泡于水中，调节ph为7.0～8.5，进行碱提取，得到碱提液；

3)调节步骤2)所述碱提液的ph值为4.5～5.5，进行酸提取，得到酸提液；

4)在步骤3)所述酸提液中添加纤维素酶制剂，进行酶解，得到酶解液；

5)对步骤4)所述酶解液进行超声，得到超声提取液；

6)对步骤5)所述超声提取液进行灭酶处理，离心，收集上清液，得到木耳多糖提取液。

本发明所述木耳多糖的提取方法的流程图参见图1。

本发明首先对木耳进行清洗，干燥，研磨，粉碎，得到木耳颗粒。

本发明对所述清洗的时间、方式没有特殊限制，以将木耳清洗干净为准，本发明的具体实施过程中，采用清洗机对木耳进行清洗；所述清洗机优选为购自于深圳市得康科技有限公司的thyd-500机械式小型超声波清洗仪。

本发明所述干燥的温度优选为80～90℃，更优选为85℃；所述干燥的时间优选为30～40min，更优选为35min；所述干燥后木耳的含水量优选为12％～20％，更优选为13％～18％，最优选为14％～15％；所述干燥的方式优选为烘干；所述烘干的设备优选为烘干机，更优选为购自于盛泽兄弟机械制造厂的烘干机，型号为xd-203。

本发明在所述干燥后，优选的还包括对干燥后的木耳进行静置；所述静置的时间优选为15～25min，更优选为20min；所述静置的环境温度优选为50～60℃，更优选为55℃；所述静置的作用是使木耳残留的水分挥发。

本发明所述研磨的时间优选为10～15min，更优选为12min；所述研磨的设备优选为研磨机，更优选为购自于盐城市恒利研磨机械制造有限公司，型号为jd-960s；所述研磨的作用是进一步去除木耳内的水分。

本发明中，所述粉碎的温度优选为60～80℃，更优选为70℃；所述粉碎的时间优选为12～20min，更优选为15～18min；所述粉碎的设备优选为超微粉碎机，更优选为购自于灵灵机械制造有限公司的超微粉碎机，型号为csj。本发明在粉碎后，优选的还包括对粉碎后的木耳进行过筛，筛网的孔径优选为80～100目，更优选为90目。

本发明在得到木耳颗粒后，将木耳颗粒浸泡于水中，调节ph为7.0～8.5，进行碱提取，得到碱提液；所述浸泡的温度优选为70～90℃，更优选为80℃，在此温度上可更好得使木耳融于水中，使木耳多糖更好的释放；所述木耳颗粒与水的质量比优选为1:(30～50)，更优选为1:40；所述浸泡的时间优选为8～12min，更优选为10min；所述ph值优选为7.0～8.5，更优选为7.5～8.0；所述调节ph值的溶液优选为naoh水溶液；所述碱提取的时间优选为5～10min，更优选为6～9min，最优选为7～8min；所述碱提取的温度优选为80～90℃，更优选为85℃。

本发明中，所述碱提取的作用是有效的破坏木耳子实体细胞壁，使木耳多糖更好的释放。

本发明在得到碱提液后，调节碱提液的ph值为4.5～5.5，进行酸提取，得到酸提液；所述ph值优选为5；所述酸提取的温度优选为80～90℃，更优选为85℃；所述酸提取的次数优选为2～4次，更优选为3次；每次酸提取的时间优选为3～5h，更优选为4h,对离心后的沉淀重复步骤2)～步骤6)，取上清液。

本发明中，所述酸提取的作用是有效的使木耳多糖更好的释放，加速溶剂渗透和扩散速度。

本发明在得到酸提液后，在酸提液中添加纤维素酶制剂，进行酶解，得到酶解液；所述纤维素酶制剂与木耳的质量比优选为0.5～1.5:100，更优选为1:100；所述纤维素酶制剂包括外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶；纤维素酶在转化不溶性纤维素成葡萄糖以及在木耳中破坏细胞壁从而提高多糖得率等方面具有非常重要的意义；所述纤维素酶制剂优选购自于泰安信得利生物工程有限公司；所述酶解的温度优选为40～80℃，更优选为50～70℃，最优选为60℃；所述酶解的时间优选为80～100min，更优选为90min。

本发明中，所述酶解的作用是有效的破坏木耳子实体细胞壁，使木耳多糖更好的释放。

本发明在得到酶解液后，对酶解液进行超声，得到超声提取液；所述超声的功率优选为450～550w，更优选为500w；所述超声的温度优选为40～50℃，更优选为45℃；所述超声的时间优选为1～2h，更优选为1.5h；所述超声的设备优选为超声处理仪，更优选为购自于上海重逢科学仪器有限公司的超声处理仪，型号为：cf-600y。

本发明在得到超声提取液后，对超声提取液进行灭酶处理，离心，收集上清液，得到木耳多糖提取液；所述灭酶的温度优选为85～90℃，更优选为88℃；所述灭酶的时间优选为1～2h，更优选为1.5h；所述离心的转速优选为1000～2000r/min，更优选为1500r/min；所述离心的时间优选为4～8min，更优选为5～7min；所述离心的温度优选为40～60℃，更优选为50℃；所述离心的次数优选为1～3次，更优选为2次；在40～60℃的条件下离心，可使得上清液和沉淀物更好的分离,使木耳多糖更好的释放。

本发明中，所述超声处理的作用是加速溶剂渗透和扩散速度，有效的提高提取效率，同时缩短提取时间。

下面结合实施例对本发明提供的一种木耳多糖的提取方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1一种木耳多糖的提取方法

1.原料：木耳

2.主要试剂：水、氢氧化钠，纤维素酶

3.主要实验仪器设备

4.al04型电子天平，hh-2型水浴锅、thyd-500机械式小型超声波清洗仪、g80f20cn2l-b8(r0)型微波炉、xd-203烘干机、jd-960s研磨器、csj超微粉碎机、cf-600y超声处理仪和pgz离心机。

5.制备方法

1)将50g木耳清洗干净，并将洗净后的木耳放入xd-203烘干机中进行烘干处理，温度为80℃，烘干时间为30min，将木耳烘干至含水量15％；并将烘干后的木耳在55℃的条件下放置20min；然后取烘干后的木耳20g放入研磨机中进行研磨，研磨10min，使得木耳呈块状；再将研磨后得到的木耳放入csj超微粉碎机内进行粉碎，温度为60℃，粉碎时间为12min，对粉碎完成后的木耳进行过筛处理，得到粒径为80目的木耳颗粒；

2)选取步骤1)获得的木耳粉颗粒，并按照质量比为1:30浸泡在水溶液中，水溶液温度为70℃，时间为8min；

3)将步骤2)中的溶液中加入适量的naoh水溶液，调节ph为8.5，作为提取剂，在恒温水浴8min后，酸中和原液，ph为5.0，反复浸提3次，恒温温度为80℃，浸提3h；

4)在步骤3)中的溶液中加入纤维素酶制剂，纤维素酶制剂加入量占溶液总体质量百分比为2％，酶解的温度为60℃，酶解时间为90min；

5)将步骤4)中的溶液置于超声波设备内，通过超声波将木耳的实体细胞壁细胞壁，加速溶剂渗透和扩散速度，超声波功率为450w，超声温度为40℃，时间为1h；

6)对步骤5)中的溶液进行灭酶处理，灭酶温度为85℃，时间为1h；

7)将步骤6)中的溶液进行离心(1500r/min，5mim，60℃)，并取上清液，对离心后的沉淀重复上述步骤，即得木耳多糖提取液。

经检测，木耳多糖得率为10.86％。

实施例2一种木耳多糖的提取方法

1.原料：木耳

2.主要试剂：水、氢氧化钠，纤维素酶

3.主要实验仪器设备

4.al04型电子天平，hh-2型水浴锅、thyd-500机械式小型超声波清洗仪、g80f20cn2l-b8(r0)型微波炉、xd-203烘干机、jd-960s研磨器、csj超微粉碎机、cf-600y超声处理仪和pgz离心机。

5.制备方法

1)将50g木耳清洗干净，并将洗净后的木耳放入xd-203烘干机中进行烘干处理，温度为90℃，烘干时间为40min，将木耳烘干至含水量20％；并将烘干后的木耳在55℃的条件下放置30min；取烘干后的木耳20g放入到研磨机中进行研磨，研磨15min，使得木耳呈块状；再将研磨后得到的木耳放入csj超微粉碎机内进行粉碎，温度为80℃，粉碎时间为20min，对粉碎完成后的木耳进行过筛处理，得到粒径为100目的木耳颗粒；

2)选取步骤1)获得的木耳粉颗粒，并按照质量比为1：50浸泡在水溶液中，水溶液温度为90℃，时间为12min；

3)将步骤2)中的溶液中加入适量的naoh水溶液，调节ph为7.0～8.5，作为提取剂，在恒温水浴10min后，酸中和原液，ph为5.0，反复浸提3次，恒温温度为90℃，浸提4h；

4)在步骤3)中的溶液中加入纤维素酶制剂，纤维素酶制剂加入量占溶液总体的质量百分比为2％，酶解温度为60℃，酶解时间为90min；

5)将步骤4)中的溶液置于超声波设备内，通过超声波将木耳的实体细胞壁细胞壁，加速溶剂渗透和扩散速度，超声波功率为550w，超声温度为50℃，时间为2h；

6)对步骤5)中的溶液进行灭酶处理，灭酶温度为95℃，时间为2h；

7)将步骤6)中的溶液进行离心(2000r/min，5mim，60℃)，并取上清液，对离心后的沉淀重复上述步骤，即得木耳多糖提取液。

经检测木耳的多糖提取效率为10.96％。

对比例1传统的热水浸提法提取木耳多糖

取50g木耳清洗干净,并将洗净后的木耳放入xd-203烘干机中进行烘干处理，温度为90℃，烘干时间为40min，将木耳烘干至含水量20％；并将烘干后的木耳在55℃的条件下放置30min；并按照木耳和水得质量比为1；40，提取温度为80℃，提取时间为4h。

经检测木耳多糖得率为8.41％。

对比例2传统的热水浸提法提取木耳多糖

取60g木耳清洗干净,并将洗净后的木耳放入xd-203烘干机中进行烘干处理，温度为90℃，烘干时间为40min，将木耳烘干至含水量20％；并将烘干后的木耳在55℃的条件下放置30min；并按照木耳和水得质量比为1；40，提取温度为90℃，提取时间为5h。

经检测木耳多糖得率为8.56％。

由以上实施例可知，本发明提供了一种木耳多糖的提取方法，该方法具有提取效率高，木耳多糖收率高的优点。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。