本发明属于生物
技术领域：
，具体涉及一种水产养殖用复合益生菌制剂及其制备方法。
背景技术：
：益生菌制剂是指用芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌等为主要原料，添加适量的辅料或饲料添加剂制成的每100克成品水分不高于12％的粉末状、颗粒状或片状等共泼洒或拌料用的固态制品。当今国内用于水体改良的产品众多，但能够将各组分功能有机结合，形成系统性解决方案的却不多。专利号为cn108118015a的发明公开了一种净化水质的微生物菌剂配方由沼泽红假单胞菌、植物乳杆菌、鲁氏酵母菌、纤维化诺卡氏菌、嗜粪红球菌、枯草芽孢杆菌构成。虽然该发明使用了澡泽红假单胞菌等分解亚硝酸盐能力较强的菌株，但却没有将好氧菌、兼性厌氧菌、严格厌氧菌三者很好的结合，使水体达到动态有机物和溶氧平衡的效果，从而很难持续稳定的发挥改良水体的效果，且该发明缺少了能够使菌株进入水体后快速增值的生长因子。专利号为cn105152356a的发明公开了一种用于净化水体的微胶囊复合菌剂及其制备方法，使用的微生物菌株包括：光和细菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、硝化细菌和红螺菌，制备方法包括：发酵、过滤、浓缩、制备微胶囊等，本方法虽然用了较多代谢类型的菌株，但却多是很难在常温条件下储存的菌株，而微胶囊化的成本很高，无法在需要低成本的水产养殖行业中使用。虽然该发明运用了大量的光和细菌，却缺少为光和细菌分解有机质且能够大量繁殖的优势菌种，且缺少能够调节水体ph值的乳酸菌，使得水体蓝藻爆发的几率大大增加。专利号为cn105624064a的发明公开了一株红假单胞菌，保藏编号为：cgmccno.11874，虽然该发明所述单株菌的生长速度快、菌体浓度高、抗菌能力强，也能够分界各类污染物，但是单株菌很难在复杂的水体生态系统中占据优势，一旦水体环境改变，则很容易导致菌体生长受阻，从而很难发挥效用；另外，单独的红假单胞菌生产难度大，难以在常温下储存，限制其经济化、大规模推广的可行性。随着我国经济的飞速发展，人们对水产产品的消费日益增加，尤其是对更为生态环保、绿色健康的水产产品的需求越发迫切，为了满足这种需求，水产养殖行业的养殖范围越来越宽，养殖密度越来越大，养殖周期不断缩短。当前的水产养殖，常会使用到一些传统的方法来解决这些问题，例如池塘换水不仅成本高，而且应用局限性非常强，很难在养殖过程中间实施；使用底改型的化学制剂能短暂的见效，但治标不治本，水体有害物的含量会迅速反弹，有的劣质化学制剂甚至会危害水产动物的健康，轻则造成动物体内残留超标，重则导致塘内品种大面积死亡。所以，亟需找到一种能够在复杂的养殖环境中顺利繁殖且功能组成相互结合，能够快速恢复水体健康的微生物菌剂产品。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供了一种水产养殖用复合益生菌制剂及其制备方法。本发明的复合益生菌制剂包括多种需氧类型和代谢途径的微生物，微生物之间能够相互协同作用，进入水体后能够迅速繁殖，继而能够解决养殖水体中有机物、亚硝酸盐、硫化氢含量过高和ph值过高等问题，且制备方法成本低廉，保质期长，工艺稳定，易于使用，适合规模化工业化生产。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种水产养殖用复合益生菌制剂及其制备方法，其特征在于，该复合益生菌制剂及其制备方法具有以下特征：一种水产养殖用复合益生菌制剂，包括复合益生菌粉、酵母提取物、葡萄糖和二氧化硅；所述复合益生菌粉包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、蜡样芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、酿酒酵母及侧孢短芽孢杆菌。所述复合益生菌制剂按重量份数计，包括以下组分：复合益生菌粉40～80份、酵母提取物1～5份、葡萄糖15～60份和二氧化硅0.1～1.0份。所述水产养殖用复合益生菌制剂，按重量份计，包括以下组分：复合益生菌粉50～70份、酵母提取物2～4份、葡萄糖15～60份和二氧化硅0.1～1.0份。所述水产养殖用复合益生菌制剂，还包含无机盐、维生素、蛋白胨或牛肉浸粉中的一种或几种。所述无机盐为一水硫酸锰、无水氯化钙或七水硫酸镁中的一种或几种；维生素为维生素c和/或维生素b1。所述复合益生菌粉中各组分的菌落总数为：枯草芽孢杆菌1×109～2×109cfu/g、地衣芽孢杆菌1×109～2×109cfu/g、凝结芽孢杆菌2×109～4×109cfu/g、嗜酸乳杆菌2×108～4×108cfu/g、嗜热链球菌3×108～5×108cfu/g、蜡样芽孢杆菌1×108～2×108cfu/g、沼泽红假单胞菌2×109～4×109cfu/g、短小芽孢杆菌2×109～3×109cfu/g、酿酒酵母3×109～6×109cfu/g、侧孢短芽孢杆菌1×109～2×109cfu/g。所述水产养殖用复合益生菌菌剂中沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵4～12天，再在-10℃～-4℃条件下，8000～10000r/min转速下离心5～15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:2～1:1的海藻多糖，100～200r/min转速下，搅拌5～10min，真空冷冻干燥12～24h，粉碎，即成。优选地，所述水产养殖用复合益生菌菌剂中沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵8～10天，再在-8～-6℃条件下，8500～9500r/min转速下，离心8～12min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:1.6～1:1.4的海藻多糖，120～180r/min转速下，搅拌6～8min，真空冷冻干燥16～20h，粉碎，即成。所述水产养殖用复合益生菌菌剂中嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在37～42℃，120～240r/min转速下，加入牛肉膏1～10g/l、蛋白胨1～10g/l、酵母粉1～5g/l、葡萄糖2～20g/l、氯化钠0.5～1g/l、维生素c0.01～0.02g/l，在ph＝6.0～8.0下发酵12～24h，6000～12000r/min转速下，离心5～15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:4～1:1的海藻多糖和/或1:2～2:1的脱脂奶粉，120～240r/min转速下，搅拌10～20min，真空冷冻干燥24～36h，粉碎，即成。优选地，所述水产养殖用复合益生菌菌剂中嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在38～40℃、160～200r/min转速下，加入牛肉膏5～8g/l、蛋白胨4～6g/l、酵母粉2～4g/l、葡萄糖10～15g/l、氯化钠0.6～0.8g/l、维生素c0.01～0.02g/l，在ph6.2～7.8下发酵16～22h，7500～11000r/min转速下，离心7～12min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:3～1:2的海藻多糖和/或1:1～1.5:1的脱脂奶粉，150～200r/min转速下，搅拌12～18min，真空冷冻干燥26～30h，粉碎，即成。所述水产养殖用复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：将复合益生菌粉、酵母提取物、葡萄糖、二氧化硅混合，并加入无机盐、维生素、蛋白胨或牛肉浸粉中的一种或几种，各种原料混合均匀后置于压片机中，并加入10～50重量份的水和5～15重量份的羧甲淀粉钠，在40～80℃下压片，然后在1～10℃，真空度为0.04～0.08mpa的条件下干燥至水分含量≤12％，即得到复合益生菌菌剂。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明复合益生菌制剂包含好氧型、兼性厌氧型和严格厌氧型微生物，配方科学，缺一不可，这些微生物能够很好的相互协同，相互之间提供更好的生存环境，有效的将水体中的有机物迅速分解，形成良性循环的微生态链，从而可持续的降低水体中的有机物、氨态氮、硫化氢和亚硝酸盐含量，水溶后即可泼洒，无需活化，保质期长，是一种应用范围广阔的绿色养殖水质调节产品。(2)本发明复合益生菌制剂中添加的的复合益生菌、酵母提取物、葡萄糖、蛋白胨、牛肉浸粉、无机盐和维生素看似相互独立，实则是以整体的形式发挥功效，相辅相成，同时也确保了益生菌在进入水体后有充足的生长因子，能够迅速繁殖，从劣势菌群迅速增殖成为优势菌群，形成有机结合的、健康的微生态环境，使水产养殖真正达到绿色环保、科学高产、成本低廉的要求，本发明复合益生菌制剂的多个原料之间相互补充、相互促进、有机结合，能够针对性地解决水体中富营养化导致的有机物、氨态氮、硫化氢、亚硝酸盐含量高、ph值高引起的蓝藻易爆发的难题，从而达到保持和修复养殖水体健康的目的。(3)本发明复合益生菌制剂，以益生菌群为功效原料，不添加化学试剂，通过益生菌自身的代谢作用来达到修复养殖水体的目的，不会对水体造成二次污染，从根本上解决和预防养殖水体有机物含量、氨态氮、亚硝酸盐、硫化氢过高的问题，适合全国各地、各类水产品种和养殖阶段的水产养殖场使用。综上所述，本发明经济效益高、成本低廉、工艺稳定成熟、安全可靠，合适规模化工业生产。下面通过具体的实施方式对本发明作进一步详细说明。具体实施方式本发明实施例1-4所使用的原料或设备，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。实施例1一种水产养殖用复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：按照表1-3将各种原料混合均匀后置于压片机中，并加入25重量份的水和10重量份的羧甲淀粉钠，在80℃下压片，然后在8℃，真空度为0.04mpa的条件下干燥至水分含量10％，即得到水产养殖用复合益生菌菌剂。其中，沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵8天，再在-8℃条件下，9000r/min转速下，离心8min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:1的海藻多糖，120r/min转速下，搅拌8min，真空冷冻干燥24h，粉碎，即成。嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在40℃、160r/min转速下，加入牛肉膏1g/l、蛋白胨1.5g/l、酵母粉1g/l、葡萄糖5g/l、氯化钠0.5g/l、维生素c0.01g/l，在ph＝7.0下发酵24h，8000r/min转速下，离心10min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:4的海藻多糖和1:2的脱脂奶粉，120r/min转速下，搅拌10min，真空冷冻干燥24h，粉碎，即成。实施例2一种水产养殖用复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：按照表1-3将各种原料混合均匀后置于压片机中，并加入30重量份的水和12重量份的羧甲淀粉钠，在80℃下压片，然后在6℃，真空度为0.04mpa的条件下干燥至水分含量12％，即得到水产养殖用复合益生菌菌剂。其中，沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵4天，再在-10℃条件下，8000r/min转速下，离心15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:2的海藻多糖，200r/min转速下，搅拌10min，真空冷冻干燥20h，粉碎，即成。嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在37℃、120r/min转速下，加入牛肉膏1g/l、蛋白胨1g/l、酵母粉2g/l、葡萄糖10g/l、氯化钠0.6g/l、维生素c0.02g/l，在ph＝8下发酵22h，12000r/min转速下，离心12min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为2:1的脱脂奶粉，120r/min转速下，搅拌20min，真空冷冻干燥22h，粉碎，即成。实施例3一种水产养殖用复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：按照表1-3将各种原料混合均匀后置于压片机中，并加入10重量份的水和5重量份的羧甲淀粉钠，在60℃下压片，然后在1℃，真空度为0.06mpa的条件下干燥至水分含量为11％，即得到水产养殖用复合益生菌菌剂。其中，沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵12天，再在-4℃条件下，10000r/min转速下，离心14min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:1的海藻多糖，200r/min转速下，搅拌5min，真空冷冻干燥24h，粉碎，即成。嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将-80℃冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在40℃、120r/min转速下，加入牛肉膏1g/l、蛋白胨1g/l、酵母粉1g/l、葡萄糖15g/l、氯化钠0.7g/l、维生素c0.01g/l，在ph＝6.0下发酵12h，6000～12000r/min转速下，离心5～15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:4的海藻多糖，120r/min转速下，搅拌20min，真空冷冻干燥36h，粉碎，即成。实施例4一种水产养殖用复合益生菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：按照表1-3将各种原料混合均匀后置于压片机中，并加入50重量份的水和15重量份的羧甲淀粉钠，在80℃下压片，然后在10℃，真空度为0.04mpa的条件下干燥至水分含量为12％，即得到水产养殖用复合益生菌菌剂。其中，沼泽红假单胞菌的制备工艺为：将冷冻储存的沼泽红假单胞菌菌种在透光条件下密封发酵4天，再在-10℃条件下，8000r/min转速下，离心15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:2的海藻多糖，200r/min转速下，搅拌10min，真空冷冻干燥24h，粉碎，即成。嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌的制备工艺为：将冷冻储存的嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌菌种在42℃、120r/min转速下，加入牛肉膏2g/l、蛋白胨1g/l、酵母粉3g/l、葡萄糖20g/l、氯化钠1g/l、维生素c0.02g/l，在ph＝7.0下发酵24h，12000r/min转速下，离心15min，弃上清、取沉淀，再加入与沉淀重量比为1:1的海藻多糖和1:2的脱脂奶粉，240r/min转速下，搅拌20min，真空冷冻干燥36h，粉碎，即成。表1实施例1～4复合益生菌制剂各原料的重量组成注：表中“-”表示未添加。表2实施例1～4复合益生菌粉的成分表成分实施例1实施例2实施例3实施例4枯草芽孢杆1×109cfu/g1.3×109cfu/g1.7×109cfu/g2×109cfu/g地衣芽孢杆菌1×109cfu/g1.2×109cfu/g1.6×109cfu/g2×109cfu/g凝结芽孢杆菌2×109cfu/g2.6×109cfu/g3.4×109cfu/g4×109cfu/g嗜酸乳杆2×108cfu/g2×108cfu/g3×108cfu/g4×108cfu/g嗜热链球菌3×108cfu/g3×108cfu/g5×108cfu/g5×108cfu/g蜡样芽孢杆菌1×108cfu/g1.4×108cfu/g1.6×108cfu/g2×108cfu/g沼泽红假单胞菌2×109cfu/g2.4×109cfu/g3.2×109cfu/g4×109cfu/g短小芽孢杆菌2×109cfu/g2.3×109cfu/g2.7×109cfu/g3×109cfu/g酿酒酵母3×109cfu/g4×109cfu/g5×109cfu/g6×109cfu/g侧孢短芽孢杆菌1×109cfu/g1.3×109cfu/g1.7×109cfu/g2×109cfu/g表3实施例1～4无机盐和维生素的组份表注：表中“-”表示未添加。将实施例1～4制得的复合益生菌制剂各取200g用10l水进行稀释，充分搅拌后有益生菌特有的气味。将所有稀释液分别泼洒至同一养殖场的四个不同对虾养殖池塘中，按照效果打分表进行打分，评价结果如表4所示。表4实施例1～4复合益生菌剂的试用效果评价表实施例降解有机物降解氨态氮降解亚硝酸盐降解硫化氢总分实施例181091037实施例2999936实施例3978835实施例41078833从表4可以看出，实施例1-4制得的复合益生菌剂在降解有机物、氨态氮、亚硝酸盐和硫化氢时均有较好的效果，特别是实施例1和实施例2所得的复合益生菌剂在降解有机物、氨态氮、亚硝酸盐和硫化氢时评分更高，见效更快、持续时间更长、监测指标更稳定。本发明采用透光密封发酵可为沼泽红假单胞菌提供充足的有光厌氧环境，有利于沼泽红假单胞菌的大量繁殖；保持零下摄氏度高转速短时间离心能够最大程度的保持沼泽红假单胞菌的细胞活性；加入海藻多糖能够在细胞外形成包衣，大大延长其在常温下的存活时间；真空冷冻干燥使细胞在超低温环境下完成干燥，确保细胞在干燥过程中不受损；沼泽红假单胞菌也可由现有技术制备或市购。经过发酵工艺优化后得到的温度、转速、发酵原料组分、ph、发酵时间能够确保嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌尽可能地提高发酵密度，从而大大降低生产成本，后处理工艺优化后得到的优化离心转速和温度能够降低后处理造成的损失，嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌也可由现有技术制备或市购。以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的
技术领域：
均包括在本发明的专利保护范围内。当前第1页12