一种非达霉素杂质及其制备方法与流程

本发明属于医药分析技术领域，具体涉及一种非达霉素杂质f及其制备方法和应用。

背景技术：

非达霉素(fidaxomicin，商品名dificid)是optimer公司开发的新型口服窄谱大环抗生素中的第一个是具有18元环结构的大环内酯类抗生素，系德干高原游动放线菌(actinoplansdeccanensis)或桔橙指孢囊菌(dactylosporangiumaurantiacum)发酵产物。分子量1058.04，分子式c52h74c12o18，结构式见如下式(a)。

非达霉素的作用机理新颖，主要是通过抑制细菌的rna聚合酶而产生迅速的抗难治梭状芽孢杆菌感染(cdi)作用。

非达霉素对艰难梭菌的mic50和mic90均明显低于万古霉素或甲硝唑，治疗减少艰难梭菌感染的复发率和综合治愈率显著优于万古霉素和甲硝唑，且产生抗性的倾向低，具有延长的抗生素后效应、治疗方案简单、交叉耐药性低和不良反应少等优点。

非达霉素于2011年5月获美国fda批准上市，用于治疗艰难梭菌(难辨梭状芽孢杆菌，clostridiumdifficile)感染相关性腹泻(cdad)。这是fda近30年来批准的首个治疗cdad的药物。欧盟2011年12月批准上市。

经过研究发现，非达霉素在制备及贮运过程中都容易产生杂质，从而对药品质量产生严重的影响。为提高产品纯化工艺的可控性，保证产品质量，需要对产生的工艺杂质和降解杂质进行研究。现有技术中，大多关注制备过程中所产生的杂质，并做到了较好的质量控制。但对降解杂质的研究很少。

因此，对非达霉素有关杂质进行研究并提供可行的制备/分离纯化方法是非常必要的，对非达霉素的质量提升保证用药安全具有重要意义。

技术实现要素：

在对非达霉素进行有关杂质进行研究时发现有一个杂质是非达霉素对湿热敏感的最重要的降解杂质，它会随温度湿度的变化产生较大的变动，是药物稳定性考察的评价指标之一，因此对贮存运输有较高要求，需要严格控制以符合药品的质量标准。

本发明提供了一种新型的非达霉素降解杂质f，并提供了该杂质的制备方法及其在非达霉素原料和/或制剂质量控制中的用途。

本发明的目的主要通过以下技术方案实现：

首先，本发明提供了一种非达霉素杂质f的制备方法，包括如下步骤：

(1)取非达霉素样品溶解于乙腈-水-乙酸混合溶液中，配制成样品溶液；

(2)将步骤(1)中制得的样品溶液注入制备液相色谱仪；

(3)收集杂质目标馏分；

(4)连续多次进样，收集合并目标组份；

(5)减压旋蒸浓缩干燥，即得。

其中步骤(1)的非达霉素样品溶液浓度为5～30mg/ml，优选为20～30mg/ml。

其中步骤(1)的乙腈-水-乙酸混合溶液，乙腈-水-乙酸的体积比为20～60：80～40：0.5～2。

其中所述的色谱条件为：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

检测波长：230nm；

流速：10～30ml/min，

进样体积：2～10ml

以乙腈-水-乙酸(52：48：1)作为流动相，等度洗脱。

其中收集时间在14-47分钟左右，随着流速、进样体积的不同而有所不同。

按上述色谱条件根据检测信号进行收集杂质目标馏分，并经非达霉素液相色谱分析方法确认该杂质目标馏分。

其次，本发明提供了一种非达霉素杂质f，采用上述制备方法制备而得。

本发明还提供了一种上述非达霉素杂质f的用途，即在非达霉素原料和/或制剂质量控制中的应用。

本发明提供了一种非达霉素重要降解杂质f，为非达霉素杂质检测定量及定性分析提供对照品，可用于非达霉素原料和/或制剂中杂质对照定位、定性或定量使用，这对于提高非达霉素原料和/或制剂的质量可控性具有非常重要的实用价值，有利于非达霉素原料和/或制剂质量的提升。

附图说明

图1非达霉素的hplc图

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。需要指出的是，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

本实施方式使用的非达霉素样品均采用杭州华东医药集团新药研究院有限公司提供的各批原料药。

样品预处理：将适量非达霉素原料药密封于瓶中，放入60℃条件，1个月加速试验后取样。

实施例1杂质f的检测

仪器：安捷伦1260高效液相色谱仪

色谱条件：色谱柱：agilentporoshell120ec-c18(100*4.6mm，2.7μm)；流动相：0.05m磷酸二氢钾溶液-乙腈(50:50)，等度洗脱；柱温：15℃；流速：0.5ml/min；检测波长：230nm。

取非达霉素样品溶解于甲醇溶液中，配制成浓度为0.5mg/ml的样品溶液；将该样品溶液注入液相色谱仪。经hplc检测，相对保留时间(rrt)1.33处杂质峰为杂质f，见附图1。

实施例2杂质f的制备

仪器：吉尔森gx-281制备色谱系统，旋转蒸发仪：申胜旋转蒸发仪laborota4001

色谱条件：

色谱柱：agilentzorbaxrx-c18，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，该色谱柱的柱长250mm、内径21.2mm。

检测波长：230nm；流速：15ml/min，进样体积：8ml

流动相：乙腈-水-乙酸(52：48：1)

将40ml乙腈、60ml水与1ml乙酸配制成乙腈-水-乙酸混合溶液，将60℃预处理的非达霉素样品溶解在的乙腈-水-乙酸混合溶液中，制成浓度为20mg/ml的溶液。按上述色谱条件进行收集28-32分钟的馏分，并经非达霉素液相色谱分析方法确认该杂质目标馏分。连续多次进样，收集合并目标组分，进行旋蒸发浓缩干燥，得白色固体。

经如实施例1所述的方法对所得白色固体进行hplc检测，rrt＝1.33为杂质f。

实施例3杂质f的制备

仪器和试剂与实施例2相同。

检测波长：230nm；流速：10ml/min，进样体积：2ml

流动相：乙腈-水-乙酸(52：48：1)

将20ml乙腈、40ml水与0.5ml乙酸配制成乙腈-水-乙酸混合溶液，将60℃预处理的非达霉素样品溶解在的乙腈-水-乙酸混合溶液中，制成浓度为5mg/ml的溶液。按上述色谱条件进行收集43-47分钟的馏分，并经非达霉素液相色谱分析方法确认该杂质目标馏分。连续多次进样，收集合并目标组分，进行旋蒸发浓缩干燥，得白色固体。

经如实施例1所述的方法对所得白色固体进行hplc检测，rrt＝1.33为杂质f。

实施例4杂质f的制备

仪器和试剂与实施例2相同。

检测波长：230nm；流速：30ml/min，进样体积：10ml

流动相：乙腈-水-乙酸(52：48：1)

将600ml乙腈、80ml水与2ml乙酸配制成乙腈-水-乙酸混合溶液，将60℃预处理的非达霉素样品溶解在的乙腈-水-乙酸混合溶液中，制成浓度为30mg/ml的溶液。按上述色谱条件进行收集14-16分钟的馏分，并经非达霉素液相色谱分析方法确认该杂质目标馏分。连续多次进样，收集合并目标组分，进行旋蒸发浓缩干燥，得白色固体。

经如实施例1所述的方法对所得白色固体进行hplc检测，rrt＝1.33为杂质f。