本发明涉及分离纯化技术领域，更具体地说，它涉及一种高纯度根皮素的制备方法。
背景技术：
根皮素，别名三羟苯酚丙酮2,4,6-三羟基-3-(4-羟基苯基)苯丙酮。是国外新近研究开发出来的一种新型天然皮肤美白剂，主要分布于苹果、梨等多汁水果的果皮及根皮。根皮素可应用于面膜、护肤膏霜、乳液和精华素中。为珍珠白结晶粉末，能溶于乙醇和丙酮，几乎不溶于水。除此之外，具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、抗癌、抗炎、抗菌和雌激素作用等多种生物活性。近年来，根皮素作为抗氧化功效因子在食品领域应用广泛。
然而，根皮素在植物中的含量较低，目前生产根皮素的方法包括有机化学方法合成，也可以通过天然的根皮苷进行酶解、酸解、碱解等方法来制备。但是这些方法制得的根皮素往往纯度不够高，有一定的色泽，因而限制了其使用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种高纯度根皮素的制备方法，其解决了现有的根皮素纯度低、具有色泽的问题。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种高纯度根皮素的制备方法，包括如下步骤：s1：取待提纯的根皮素原料，所述根皮素原料的纯度为第一预值；s2、将所述根皮素原料溶解于浓度为60％～70％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经层析柱富集纯化；s3、依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱；s4、收集浓度为62％～67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，离心回收固体，得到提纯后的根皮素，所述提纯后的根皮素的纯度高于第一预值。
进一步地，步骤s2中加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍。
进一步地，步骤s2中乙醇水溶液的温度为50℃～60℃。
进一步地，步骤s2中所述层析柱选用型号为d101、ab-8或者hp-20的大孔树脂柱层析。
进一步地，步骤s3中依次用浓度为3％～7％的乙醇水溶液和浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱具体包括：
用浓度为3％～7％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为62～67％的乙醇水溶液洗脱3个柱体积，洗脱速率为50ml/min。
进一步地，步骤s4中离心速度为8000～12000r/min。
进一步地，所述第一预值低于85％。
进一步地，所述提纯后的根皮素的纯度高于98％。
进一步地，所述方法还包括如下步骤：
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
综上所述，本发明具有以下有益效果：本发明通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用62％～67％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本发明优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
具体实施方式
实施例1：
s1：取50g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(hplc检测纯度，检测方法采用gb1886.261—2016的方法)；
s2、将根皮素原料溶解于浓度为60％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经d101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3l，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为250ml，温度为60℃；
s3、用浓度为3％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为67％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50ml/min；
s4、收集浓度为67％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，10000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经hplc检测纯度为98.7％；
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用67％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
实施例2：
s1：取60g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(hplc检测纯度，检测方法采用gb1886.261—2016的方法)；
s2、将根皮素原料溶解于浓度为65％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经ab-8型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3l，柱直径为8cm，柱高为1.2m)进行富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，加入乙醇水溶液和纯水的体积均为300ml，温度为55℃；
s3、用浓度为5％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为64％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50ml/min；
s4、收集浓度为64％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，10000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经hplc检测纯度为98.3％；
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用64％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
实施例3：
s1：取40g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为83％(hplc检测纯度，检测方法采用gb1886.261—2016的方法)；
s2、将根皮素原料溶解于浓度为62％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经hp-20型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3l，柱直径为8cm，柱高为1.2m)进行富集纯化，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，具体地，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为200ml，温度为50℃；
s3、用浓度为7％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为62％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50ml/min；
s4、收集浓度为62％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，12000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经hplc检测纯度为98.5％；
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用62％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
实施例4：
s1：取50g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为85％(hplc检测纯度，检测方法采用gb1886.261—2016的方法)；
s2、将根皮素原料溶解于浓度为63％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经d101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3l，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，具体地，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为250ml，温度为60℃；
s3、用浓度为4％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为63％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50ml/min；
s4、收集浓度为63％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，8000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经hplc检测纯度为98.6％；
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用63％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
实施例5：
s1：取70g待提纯的根皮素原料，根皮素原料的纯度为第一预值，第一预值低于85％，本实施例中为80％(hplc检测纯度，检测方法采用gb1886.261—2016的方法)；
s2、将根皮素原料溶解于浓度为68％的乙醇水溶液中，然后加入与乙醇水溶液同温度体积的纯水，将该溶液作为上样液，并经d101型号的大孔树脂柱层析(柱体积为3l，柱直径为8cm，柱高为1.2m)富集纯化，具体地，加入的乙醇水溶液的重量为所述根皮素原料的重量的4～6倍，本实施例中，乙醇水溶液和纯水的体积均为350ml，温度为60℃；
s3、用浓度为6％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为2个柱体积，洗脱速率为50ml/min，洗脱液弃去；用浓度为66％的乙醇水溶液洗脱s2中的层析柱，洗脱量为3个柱体积，洗脱速率为50ml/min；
s4、收集浓度为66％的乙醇水溶液洗脱层析柱的洗脱液，并减压浓缩至无醇味，冷却至室温，9000r/min离心回收固体，得到提纯后的根皮素，提纯后的根皮素的纯度经hplc检测纯度为98.5％；
s5、用浓度为95％的乙醇水溶液洗脱2个柱体积的层析柱，洗脱液浓缩回收乙醇。
本实施例通过将低含量根皮素原料溶解于乙醇水溶液中，利用低浓度的乙醇水溶液溶解水溶性强、极性大的杂质并去除，并用高浓度的乙醇水溶液洗脱除去层析柱中极性小的化合物，并浓缩去除杂质后可回收乙醇，利用66％的乙醇水溶液溶解根皮素，从而提取高纯度的根皮素，且提取到的根皮素去除了含杂色的杂质，使用范围不受限制。本实施例优化根皮素的提取方法，简便易用，工艺环保，所得根皮苷纯度≥98％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。